本發明涉及家禽遺傳育種技術領域，尤其涉及清遠麻雞無內源性禽白血病ev21病毒的抗病系的培育方法。

背景技術：

清遠麻雞是廣東省第一優質名雞，具有優美外觀和優良肉質特性，在清遠麻雞繁育過程中，出現了白色變異的隱性白羽個體，除羽毛顏色為白色外，其余均保持了清遠麻雞原有的特性，可將其擴群得到隱性白羽系。而在慢羽系中，慢羽基因K被認為與內源性病毒21(ev21)存在緊密連鎖關系，但其中也存在一些無ev21插入的個體(ev21缺失體)，ev21的存在將降低雞對禽白血病病毒(ALV)的免疫應答，同時攜帶有ev21的慢羽雞感染外源性白血病毒后病毒血癥的發生率升高，并引起產蛋量的下降和死亡率升高。

由于禽白血病凈化是一個長期的工作，因此從遺傳的角度有效解決無內源性禽白血病內源性病毒21(ev21缺失體)對疾病的凈化具有重要的意義，實現根除假陽性的誤判，優化種源。目前在清遠麻雞慢羽品系中出現的白羽個體，我們已經組建了白羽系，但如何更高效構建白羽的抗性品系，保持其產蛋性能高產和肉質的優良、屠宰品質的美觀，成為生產中急需解決的問題。

目前國內隱性白羽品系的培育都以快大型的隱性白羽雞或是地方雞分離出的隱性白羽雞為親本，通過雜交與測交，輔助分子選育的方法得到新隱性白羽品系，但經資料查詢，目前尚未開展白羽抗病新品系的選育報道；雖國內已有一種通過異嗜性粒細胞/淋巴細胞的比值表型選擇與SNP標記基因型輔助選擇相結合構建雞抗病品系的方法，但在選育操作上復雜繁瑣，實用性低、經濟效益低；基于此，本專利利用現代分子數量遺傳育種的有關原理，以清遠麻雞慢羽系中的隱性白羽雞為例，提出了慢羽白新抗病品系的構建方法，對加大地方雞種的選育具有重要參考應用價值。

技術實現要素：

本發明的目的在于提出一種清遠麻雞無內源性禽白血病ev21病毒的抗病系的培育方法，選育操作更為簡單、實用，獲得的新品系具有高產的性能、優質肉的風味、外貌體型特征好且抗病能力高的特點。

為達此目的，本發明采用以下技術方案：

清遠麻雞無內源性禽白血病ev21病毒的抗病系的培育方法，將麻雞品種中由隱性突變得到的隱性白羽群B與攜帶有酪氨酸(tyr)基因突變的清遠麻雞慢羽系中的麻雞雜合子進行測交、自交擴繁，得到純慢羽白羽群體；再通過分子檢測對所述純慢羽白羽群體中篩選出無內源性禽白血病ev21病毒的個體(ev21缺失體)，進行橫交、擴繁，得到無內源性禽白血病ev21病毒慢羽白新品系。

進一步說明，清遠麻雞無內源性禽白血病ev21病毒的抗病系的培育方法，包括如下步驟：

(1)親本P₀的選育：由麻雞品種內產生隱性突變，得到隱性白羽群B；通過分子手段，甄別攜帶有酪氨酸(tyr)基因突變的清遠麻雞慢羽系中的麻雞雜合子，得到麻雞雜合子組群M1；將所述隱性白羽群B和麻雞雜合子組群M1作為親本；

(2)測交：將所述麻雞雜合子M1與所述隱性白羽群中的個體B進行測交，得到具有慢羽后代的白羽雞系，即F1代；

(3)自交擴繁：將步驟(2)獲得的F1代進行自交擴繁，選留慢羽表型特征為等長型和倒長型的個體，并通過測交和分子選育組建得到純慢羽白羽群體，即F2代；

(4)ev21檢測：通過分子檢測F2代，篩選出無內源性禽白血病ev21病毒的個體(ev21缺失體)，并進一步選留慢羽表型特征為等長型和倒長型的個體，組建得到ev21缺失體抗病群體；

(5)將所述步驟(4)中得到的ev21缺失體抗病群進行橫交固定，使之穩定遺傳，并通過擴繁組建，得到無內源性禽白血病ev21病毒慢羽白新品系。

進一步說明，所述步驟(2)與步驟(3)之間還包括對F1代中的雜合麻羽個體的淘汰，選擇具有慢羽后代的隱性白羽雞F1代進入下一步驟。

進一步說明，所述步驟(4)中所述分子檢測是通過PCR進行基因分型。

進一步說明，所述PCR基因分型是采用PCR擴增，PCR擴增后使用HaeⅢ進行酶切，檢測選留無內源性禽白血病ev21病毒的個體(ev21缺失體)，所用引物為，上游引物F：5′-ATTGGTACTACAGAGAAGGTAGGATATC-3′；下游引物R：5′-GTAAGACTAACACAGTATTCTCGAGT-3′。

本發明的有益效果：(1)既能保持清遠麻雞慢羽品系高產的性能和隱性白羽雞的體型和外貌特征，又能保持清遠麻雞肉質的優質性，其屠宰品質特別是通管性能好，可用于優質肉雞的產業化生產；(2)與傳統的清遠慢羽麻雞和隱性白羽雞相比，構建了抗病品系，從種源上有效根除內源性病毒的傳播，提高了機體對禽白血病的免疫應答能力，可為其他新配套系的開發提供親本，新品系的構建，為進一步開展科學研究具有重要的研究價值；(3)可廣泛應用于地方優質肉雞、快大型肉雞以及蛋雞的選育中，具有廣闊的市場應用前景，特別對優質肉用雞產業化的生產及抗病新品系的開發具有重要的參考價值。

附圖說明

圖1是本發明一個實施例的清遠麻雞無內源性禽白血病ev21病毒慢羽白新品系的培育模式圖；

其中：W為常染色體上控制白羽的基因，P為控制麻羽的基因，ev21⁺為含有ev21插入的個體，ev21^－為無ev21插入的個體；a為未出型，b為等長型，c為倒長型，d為微長型。

具體實施方式

下面結合附圖并通過具體實施方式來進一步說明本發明的技術方案。

清遠麻雞無內源性禽白血病ev21病毒的抗病系的培育方法，將麻雞品種中由隱性突變得到的隱性白羽群B與攜帶有酪氨酸(tyr)基因突變的清遠麻雞慢羽系中的麻雞雜合子進行測交、自交擴繁，得到純慢羽白羽群體；再通過分子檢測對所述純慢羽白羽群體中篩選出無內源性禽白血病ev21病毒的個體(ev21缺失體)，進行橫交、擴繁，得到清遠麻雞無內源性禽白血病ev21病毒的抗病系，即無內源性禽白血病ev21病毒慢羽白新品系。

本發明主要針對清遠麻雞的慢羽抗病品系的研究，即無內源性禽白血病ev21病毒的抗病系(ev21缺失體)，是利用清遠麻雞慢羽系和麻雞中的突變白羽個體作為育種素材，并通過分子生物學的方法，快速構建了無內源性禽白血病ev21病毒的慢羽白品系(ev21缺失體)；該方法在選育操作上，簡單、實用、經濟有效；通過本發明的方法所培育出的新品系，具有以下優點：

(1)既能保持清遠麻雞慢羽品系高產的性能和隱性白羽雞的體型和外貌特征，又能保持清遠麻雞肉質的優質性，其屠宰品質特別是通管性能好，可用于優質肉雞的產業化生產，增加經濟效益；

(2)與傳統的清遠慢羽麻雞和隱性白羽雞相比，構建了抗病品系，從種源上有效根除內源性病毒的傳播，提高了機體對禽白血病的免疫應答能力，可為其他新配套系的開發提供親本，新品系的構建，具有重要的研究價值；

(3)可廣泛應用于地方優質肉雞、快大型肉雞以及蛋雞的選育中，具有廣闊的市場應用前景，特別對優質肉用雞產業化的生產及抗病新品系的開發具有重要的參考價值。

進一步說明，清遠麻雞無內源性禽白血病ev21病毒的抗病系的培育方法，包括如下步驟：

(1)親本P₀的選育：由麻雞品種內產生隱性突變，得到隱性白羽群B；通過分子手段，甄別攜帶有酪氨酸(tyr)基因突變的清遠麻雞慢羽系中的麻雞雜合子，得到麻雞雜合子組群M1；將所述隱性白羽群B和麻雞雜合子組群M1作為親本；

(2)測交：將所述麻雞雜合子M1與所述隱性白羽群中的個體B進行測交，得到具有慢羽后代的白羽雞系，即F1代；

(3)自交擴繁：將步驟(2)獲得的F1代進行自交擴繁，選留慢羽表型特征為等長型和倒長型的個體，并通過測交和分子選育組建得到純慢羽白羽群體，即F2代；

(4)ev21檢測：通過分子檢測F2代，篩選出無內源性禽白血病ev21病毒的個體(ev21缺失體)，并進一步選留慢羽表型特征為等長型和倒長型的個體，組建得到ev21缺失體抗病群體；

(5)將所述步驟(4)中得到的ev21缺失體抗病群進行橫交固定，使之穩定遺傳，并通過擴繁組建，得到無內源性禽白血病ev21病毒慢羽白新品系。

通過本發明的培育方法所培育出的新品系，有效保持了原有清遠麻雞所具有的體型和肉質優點，并通過分子育種手段，達到了抗病品系的構建目的；使所述無內源性禽白血病ev21病毒慢羽白新品系既保留了清遠麻雞慢羽品系的優質肉質和產蛋量高的特點，又提高了其抗病能力，大大提高了經濟效益，促進經濟增收。

進一步說明，所述步驟(2)與步驟(3)之間還包括對F1代中的雜合麻羽個體的淘汰，選擇具有慢羽后代的隱性白羽雞F1代進入下一步驟。

由于親本進行測交獲得的F1代包含了雜合麻羽個體和慢羽白羽個體，因此將獲得的F1代進行自交擴繁之前需要將雜合麻羽個體進行淘汰，只對慢羽白羽個體進行自交擴繁，保證所得到的F2代為純慢羽白羽群體。

進一步說明，所述步驟(4)中所述分子檢測是通過PCR進行基因分型。

通過采用PCR進行基因分型，可有效篩選出無內源性禽白血病ev21病毒的個體(ev21缺失體)，淘汰含有ev21插入的個體，具有分子鑒別高效、快速的特點，從而獲得ev21缺失體抗病群體。

進一步說明，所述PCR基因分型是采用PCR擴增，PCR擴增后使用HaeⅢ進行酶切，檢測選留無內源性禽白血病ev21病毒的個體(ev21缺失體)，所用引物為，上游引物F：5′-ATTGGTACTACAGAGAAGGTAGGATATC-3′；下游引物R：5′-GTAAGACTAACACAGTATTCTCGAGT-3′。

實施例-清遠麻雞無內源性禽白血病ev21病毒的抗病系的培育方法，如圖1所示，包括如下步驟：

(1)親本P₀的選育：由麻雞品種內產生隱性突變，得到隱性白羽群B；通過分子手段，甄別攜帶有酪氨酸(tyr)基因突變的清遠麻雞慢羽系中的麻雞雜合子，得到麻雞雜合子組群M1；將所述隱性白羽群B和麻雞雜合子組群M1作為親本；其中，B群為：隱性白羽，慢羽；M1群為：麻雞雜合子，慢羽；

(2)測交：將所述麻雞雜合子M1與所述隱性白羽群中的個體B進行測交，得到具有慢羽后代的白羽雞系，即F1代將雜合麻羽雞淘汰；

(3)自交擴繁：將步驟(2)獲得的F1代進行自交擴繁，選留慢羽表型特征為等長型和倒長型的個體，并通過測交和分子選育組建得到純慢羽白羽群體，即F2代；

(4)ev21檢測：通過分子檢測F2代，利用PCR擴增，擴增后使用HaeⅢ進行酶切，檢測選留無內源性禽白血病ev21病毒的個體(ev21缺失體)，所用引物為，上游引物F：5′-ATTGGTACTACAGAGAAGGTAGGATATC-3′；下游引物R：5′-GTAAGACTAACACAGTATTCTCGAGT-3′；篩選出無內源性禽白血病ev21病毒的個體(ev21缺失體)，淘汰含有ev21插入的個體，并進一步選留慢羽表型特征為等長型和倒長型的個體(ev21－b/ev21－c)，組建得到ev21缺失體抗病群體；

(5)將所述步驟(4)中得到的ev21缺失體抗病群進行橫交固定，使之穩定遺傳，并通過擴繁組建，得到無內源性禽白血病ev21病毒慢羽白新品系。

以上結合具體實施例描述了本發明的技術原理。這些描述只是為了解釋本發明的原理，而不能以任何方式解釋為對本發明保護范圍的限制。基于此處的解釋，本領域的技術人員不需要付出創造性的勞動即可聯想到本發明的其它具體實施方式，這些方式都將落入本發明的保護范圍之內。