本發明涉及農藥技術領域，尤其涉及一種成綠肉座菌懸浮劑及其制備方法。
背景技術：
21世紀是農業發展的重要階段，農業的發展直接影響著國民經濟的全局發展。但在農業生產過程中，往往發生一系列蟲害，使農作物減產，給種植著帶來巨大的經濟損失。
在溫室栽培中，除少數借助氣流或人們的農事活動從溫室外傳入的病害外，絕大多數栽培病害都屬于土傳病害，土傳病害對溫室栽培起著巨大的影響作用。成綠肉座菌在對土傳植物病原真菌有良好的抑制作用。其非揮發性代謝產物能完全抑制立枯絲核菌、鐮刀菌、腐霉菌三種病原菌的生長。但現有技術中并沒有一種利用成綠肉座菌的高效、穩定的防治制劑，這對成綠肉座菌的應用具有很大的限制。
技術實現要素：
本發明的目的在于提供一種成綠肉座菌懸浮劑，本發明的成綠肉座菌懸浮劑穩定性好，成綠肉座菌在油懸浮劑中孢子萌發率高，入水分散優，呈云霧狀分散，性質穩定，貯存過程中不會出現分層及沉淀問題，熱貯分解率低，成本低，藥液容易滲透到靶標，藥效高。
本發明提供了一種成綠肉座菌懸浮劑，包括以下重量份數的組分：
藥物活性組分5～12份，所述藥物活性組分為成綠肉座菌；
助劑15～24份；
油基65～80份。
優選的是，所述的成綠肉座菌選自生物保藏編號為CGMCC No.7995的菌種。
優選的是，所述的成綠肉座菌懸浮劑的有效孢子量為1.5～2.8×109cfu/g。
優選的是，所述的成綠肉座菌懸浮劑的雜菌率≤0.1％。
優選的是，所述成綠肉座菌懸浮劑的懸浮率≥95％。
優選的是，所述成綠肉座菌懸浮劑的成綠肉座菌的活孢率≥90％。
優選的是，所述助劑包括聚醚磷酸酯類表面活性劑、硅酸鋁鎂和脂肪醇聚氧乙烯醚。
優選的是，以助劑的重量份數為基準，所述助劑包括12.5～23.5％的聚醚磷酸酯類表面活性劑、41～65％的硅酸鋁鎂、22～41％的脂肪醇聚氧乙烯醚。
優選的是，所述油基包括礦物油或植物油。
本發明還提供了上述技術方案所述的成綠肉座菌懸浮劑的制備方法，包括以下步驟：
a)將油基、成綠肉座菌和助劑混合、剪切，得到剪切料；
b)將所述步驟a)得到的剪切料進行砂磨，得到砂磨料；
c)將所述步驟b)得到砂磨料攪拌，得到成綠肉座菌懸浮劑。
本發明提供了本發明提供了一種成綠肉座菌懸浮劑，包括以下重量份數的組分：藥物活性組分5～12份，所述藥物活性組分為成綠肉座菌；助劑15～24份；油基65～80份。在本發明中，所述成綠肉座菌懸浮劑入水分散優，呈云霧狀分散，性質穩定，貯存過程中不會出現分層及沉淀問題，熱貯分解率低，成本低；藥液容易滲透到靶標，藥效高；且本申請提供的成綠肉座菌懸浮劑低毒，殺蟲效果穩定，且對人畜和作物安全，安全性高。實驗結果表明，成綠肉座菌防治土傳病害的效果最高可達89.5％。
生物保藏說明
成綠肉座菌(Hypocrea virens)。本菌種保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，保藏編號為CGMCC No.7995，保藏時間為2013年8月13日。
具體實施方式
本發明提供了一種成綠肉座菌懸浮劑，包括以下重量份數的組分：藥物活性組分5～12份，所述藥物活性組分為成綠肉座菌；助劑15～24份；油基65～80份。
本發明提供的成綠肉座菌懸浮劑優選包括5～12份的成綠肉座菌，更優選為8～10份，最優選為9份。
在本發明中，所述的成綠肉座菌選自生物保藏編號為CGMCC No.7995的菌種。
在本發明中，所述成綠肉座菌的制備方法優選包括：將成綠肉座菌接種于液體培養基中，進行液體發酵，得到成綠肉座菌發酵液。
本發明優選將成綠肉座菌接種于液體培養基中，進行液體發酵，得到成綠肉座菌發酵液。在本發明中，所述成綠肉座菌使用的液體培養基優選包括以下重量份的組分：馬鈴薯粉10～50份，葡萄糖10～60份，水120～500份。在本發明中，所述成綠肉座菌使用的液體培養基優選包括10～50份馬鈴薯粉，更優選為12～35份，最優選為15份；所述成綠肉座菌使用的液體培養基優選包括10～60份葡萄糖，更優選為40～55份，最優選為35份；所述成綠肉座菌使用的液體培養基優選包括120～500份的水，更優選為200～400份，最優選為350份。
在本發明中，所述成綠肉座菌的接種量優選為2～8％，，更優選為5％。
在本發明中，所述成綠肉座菌的液體發酵在通氣條件下進行，所述通氣過程包括順次的第一通氣階段、第二通氣階段和第三通氣階段：第一通氣階段的時間優選占整個發酵過程的1/6～1/3，通氣速度優選為8～12m3/h；第二通氣階段的時間占整個發酵過程的1/3～2/3，通氣速度優選為14～16m3/h；第三通氣階段的時間占整個發酵過程的1/6～2/3，通氣速度優選為18～25m3/h。在本發明中，所述第一階段的通氣速度更優選為10m3/h；所述第二階段的通氣速度更優選為15m3/h，所述第三階段的通氣速度更優選為20m3/h。
在本發明中，所述成綠肉座菌液體發酵的時間為48～96h，更優選為72h；發酵溫度為25～30℃，更優選為28℃。
在本發明中，所述成綠肉座菌液體發酵時的壓力為0.1±0.02MPa。
在本發明中，所述成綠肉座菌在發酵過程中優選進行光照，所述光照條件為：功率為15W～100W，更優選為40W的白熾燈。
本發明優選在成綠肉座菌發酵活菌總數為2～6×1010cfu/g，更優選為3×1010cfu/g時，停止發酵。
完成所述成綠肉座菌的發酵后，本發明優選對成綠肉座菌發酵液進行固液分離，得到成綠肉座菌菌體；對成綠肉座菌菌體進行烘干、粉碎和過篩，得到固體粉狀成綠肉座菌。所述固液分離優選采用離心的方法，離心轉速優選為1500～3000rpm，更優選為2000rpm；所述離心時間優選為15～30min，更優選為20min。在本發明中，所述烘干的溫度優選為30～50℃，更優選為35～45℃，最優選為40℃；所述烘干的時間優選為20～45h，更優選為30～40h，最優選為35h；本發明將成綠肉座菌菌體烘干至水分含量優選在25～35％之間，更優選為27～32％，最優選為30％。
本發明對所述固體發酵培養基粉碎的方法沒有特殊的限定，采用本領域技術人員熟知的粉碎方法即可。在本發明中，所述固體粉狀成綠肉座菌過篩優選采用80～100目，更優選為85～95目，最優選為90目。
在本發明中，所述的成綠肉座菌懸浮劑的有效孢子量為1.5～2.8×109cfu/g，更優選為2.0×109cfu/g。所述的成綠肉座菌懸浮劑的雜菌率≤0.1％。所述成綠肉座菌懸浮劑的懸浮率≥95％，更優選為≥98％。所述成綠肉座菌懸浮劑的成綠肉座菌的活孢率≥90％。
在本發明中，所述成綠肉座菌懸浮劑優選包括15～24份的助劑，更優選為16～20份，最優選為18份。在本發明中，所述助劑包括聚醚磷酸酯類表面活性劑、硅酸鋁鎂和脂肪醇聚氧乙烯醚。本發明對所述聚醚磷酸酯類表面活性劑、硅酸鋁鎂和脂肪醇聚氧乙烯醚的來源沒有特殊的限定，采用常規的聚醚磷酸酯類表面活性劑、硅酸鋁鎂和脂肪醇聚氧乙烯醚的市售產品即可。
以助劑的重量份數為基準，本發明所述助劑優選包括12.5～23.5％的聚醚磷酸酯類表面活性劑，更優選為15～21％；所述助劑優選包括41～65％的硅酸鋁鎂，更優選為44～56％；所述助劑優選包括22～41％的脂肪醇聚氧乙烯醚，更優選為25～36％。
本發明提供的成綠肉座菌懸浮劑優選包括65～80份的油基，更優選為70～76份，最優選為72份。在本發明中，所述油基包括礦物油或植物油，本發明對所述礦物油或植物油的種類和來源沒有特殊限定，采用本領域技術人員熟知的農藥油懸浮劑的礦物油或植物油的市售商品即可。具體的礦物油優選為油酸甲酯，硬脂酸甲酯，植物油優選為大豆油，菜籽油，玉米油。本發明所述的油基具有良好的藥物穩定性，亦可提高藥物的藥效。
本發明還提供了上述技術方案所述的成綠肉座菌懸浮劑的制備方法，包括以下步驟：
a)將油基、成綠肉座菌和助劑混合、剪切，得到剪切料；
b)將所述步驟a)得到的剪切料進行砂磨，得到砂磨料；
c)將所述步驟b)得到砂磨料攪拌，得到成綠肉座菌懸浮劑。
在本發明中，所述油基、成綠肉座菌和助劑的混合、剪切優選為將油基平均分成2份，將第1份油基進行第一剪切，然后與成綠肉座菌混合、第二剪切，再與助劑混合、第三剪切，再與第2份油基混合、第四剪切，添加完所有原料后，再繼續剪切20～40min，更優選為25～35min，最優選為30min。本發明對混合、剪切的設備沒有特殊的限定，采用本領域技術人員熟知的混合、剪切設備即可，如剪切釜。在本發明中，所述第一剪切、第二剪切、第三剪切和第四剪切的轉速獨立優選為5000rpm～20000rpm，更優選為10000rpm～15000rpm。
得到剪切料后，本發明將所述剪切料砂磨，得到砂磨料。在本發明中，所述砂磨后得到的物料的粒度優選為2～8μm，更優選為3～7μm，最優選為4～6μm。本發明對所述砂磨的設備沒有特殊限定，采用本領域技術人員熟知的砂磨設備即可，如砂磨機。
得到砂磨料后，本發明將所述砂磨料攪拌，得到成綠肉座菌懸浮劑。在本發明中，所述砂磨料的攪拌時間優選為10～30min，更優選為15～25min，最優選為20min。本發明對所述攪拌的設備沒有特殊的限定，采用本領域技術人員熟知的攪拌設備即可，如攪拌機。
下面結合具體實施例對本發明提供的成綠肉座菌懸浮劑及其制備方法做進一步詳細的介紹，本發明的技術方案包括但不限于以下實施例。
實施例1
成綠肉座菌的制備
將成綠肉座菌擴大培養后以5％的接種量接種在液體培養中，所述液體培養基包括馬鈴薯粉25份，葡萄糖50份，水300份。發酵條件為：溫度為28℃、罐內壓力0.1MPa，時間為90小時；發酵過程中通氣分為三個階段：第一階段時間為20小時，通氣量為10m3/h，第二階段時間為40小時，通氣量為14m3/h，第三階段時間為30小時，通氣量為25m3/h；發酵過程中的光照條件為：36V60W白熾燈；當活菌總數達3×1010cfu/g停止發酵得到成綠肉座菌發酵液。對成綠肉座菌發酵液進行固液分離，得到成綠肉座菌菌體，對成綠肉座菌菌體進行烘干、粉碎和過篩：在45℃條件下烘干24h，烘干至成綠肉座菌菌體的水分含量為30％，粉碎過85目篩，得到成綠肉座菌。
實施例2
成綠肉座菌懸浮劑的制備：以重量份數計，將70份的油酸甲酯平均分成2份，將第1份的油酸甲酯進行剪切，再與8份實施例1制備的成綠肉座菌混合、剪切，再與3份硅酸鋁鎂混合、剪切，再與9份脂肪醇聚氧乙烯醚混合、剪切，再與5份聚醚磷酸酯類表面活性劑混合、剪切，再與第2份油酸甲酯混合、剪切，待所有原料全部混合、剪切完，再繼續剪切30min，得到剪切料，上述剪切的轉速均為12000rpm；將剪切料進行砂磨，得到4μm的砂磨料，將砂磨料攪拌20min后，得到成綠肉座菌懸浮劑。得到的成綠肉座菌懸浮劑的質量控制指標如表1所示。
表1 實施例2制備的成綠肉座菌懸浮劑的質量控制指標
實施例3
成綠肉座菌懸浮劑的制備：以重量份數計，將80份的油酸甲酯平均分成2份，將第1份的油酸甲酯進行剪切，再與12份實施例1制備的成綠肉座菌混合、剪切，再與4份硅酸鋁鎂混合、剪切，再與10份脂肪醇聚氧乙烯醚混合、剪切，再與6份聚醚磷酸酯類表面活性劑混合、剪切，再與第2份油酸甲酯混合、剪切，待所有原料全部混合、剪切完，再繼續剪切35min，得到剪切料，上述剪切的轉速均為18000rpm；將剪切料進行砂磨，得到5μm的砂磨料，將砂磨料攪拌30min后，得到成綠肉座菌懸浮劑。
實施例4
成綠肉座菌懸浮劑的制備：以重量份數計，將75份的油酸甲酯平均分成2份，將第1份的油酸甲酯進行剪切，再與5份實施例1制備的成綠肉座菌混合、剪切，再與3份硅酸鋁鎂混合、剪切，再與9份脂肪醇聚氧乙烯醚混合、剪切，再與5份聚醚磷酸酯類表面活性劑混合、剪切，再與第2份油酸甲酯混合、剪切，待所有原料全部混合、剪切完，再繼續剪切40min，得到剪切料，上述剪切的轉速均為12000rpm；將剪切料進行砂磨，得到6μm的砂磨料，將砂磨料攪拌25min后，得到成綠肉座菌懸浮劑。
實施例5
藥效試驗：本次試驗在江西省進行，防治品種為黃瓜，管理良好，白粉病中等偏重。本次試驗將實驗田均分為四個區域，區域1為對照組，只順壟噴施清水；區域2順壟噴施實施例3中制備的成綠肉座菌懸浮劑1000倍稀釋液；區域3順壟噴施成綠肉座菌可濕性粉劑1000倍稀釋液，藥物活性組分的濃度與區域2相同；區域4順壟噴施成綠肉座菌水懸浮劑1000倍稀釋液，藥物活性組分的濃度與區域2和3相同；四個區域的用藥量相同，每7天噴施一次，共噴施4次，施藥后調查黃瓜白粉病防治情況。具體結果如表2所示，由表2的數據可以得出，區域2的黃瓜白粉病防治效果最高，其藥效均高于同濃度的可濕性粉劑和水懸浮劑。
表2 成綠肉座菌懸浮劑的防治效果
由以上實施例可知，本發明制備的成綠肉座菌懸浮劑穩定性高，活菌數高，防治效果高達89.5％，其藥效均高于同濃度的可濕性粉劑和水懸浮劑。
以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對于本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發明的保護范圍。