本發明屬于植物育種技術領域，尤其涉及一種促進路易斯安娜鳶尾種子萌發成苗的方法。

背景技術：

路易斯安娜鳶尾(Louisianna iris)為鳶尾科鳶尾屬多年生宿根花卉，主要由分布在美國東南部的六角果鳶尾(I.hexagona)、高大鳶尾(I.giganticaerulea)、短莖鳶尾(I.brevicaulis)、暗黃鳶尾(I.fulva)和內耳森鳶尾(I.nelsonii)等野生種作親本雜交而成的品種群。目前已培育的品種可能近1000個，主要表現為花大、花色豐富艷麗、花型多、水陸都適宜生長、在冬季-8℃能保持葉片翠綠，土壤適應性強等特性。國內已選出部分適合種植和綠化的品種，冬季在杭州及周邊地區可保持常綠狀態，群體花期從4月底到6月初，可在全光照或半陰條件下生長。庭院綠化、池邊布置美觀大方，也可作盆栽、陸地栽培和切葉切花生產，深受人們喜愛，具有極高的推廣價值。

路易斯安娜鳶尾常用的繁殖方法包括：分株繁殖、組織培養、種子繁殖等，其中以分株繁殖為主，但僅靠營養繁殖繁殖系數低，速度慢，且至今尚未形成規模化生產。有些品種組培難度較大，目前國內數量仍然很少，這些因素限制了其在園林綠化中的應用。

路易斯安娜鳶尾自然條件下結實率很低，且部分品種果實無籽率高達84.2％。通過人工輔助授粉，能不同程度提高其結實率，有些品種可達80％以上。種子繁殖是觀賞植物花色、花型等觀賞性狀變異形成的重要途徑，因此主要用于雜交育種。另外路易斯安娜鳶尾每個果實內含種子30粒左右，采用種子繁殖繁殖系數較大，可在短期內獲得大量實生苗，且實生苗較無性繁殖得到的幼苗具有生長旺盛、根系發達、壽命較長等特點。

然而路易斯安娜鳶尾完全成熟的種子，種皮堅硬，種皮內有氣腔，育苗時種子不容易吸水，自然發芽率低，種子1年不能完全萌長，嚴重影響雜交及育苗效率。為提高其種子的發芽率，科研工作者們展開了大量研究。通過利用高濃度高錳酸鉀溶液對種子進行預處理，如1g/L浸泡20分鐘，可顯著提高當年出苗率與總出苗率。

我國路易斯安娜鳶尾育種工作起步晚，目前培育出的新品種較少。種子自然發芽率低、1年內不能完全萌長的特性嚴重制約著路易斯安娜鳶尾新觀賞類型的形成與篩選。對雜交種子實施離體胚培養可克服以上問題，但工作量大，而且培養時間長，過程中易污染。

技術實現要素：

本發明要解決的技術問題是，克服現有技術中的不足，提供一種促進路易斯安娜鳶尾種子萌發成苗的方法。該方法能解決了路易斯安娜鳶尾種子發芽時間長、發芽率及成苗率低的問題。

為解決技術問題，本發明的解決方案是：

提供一種促進路易斯安娜鳶尾種子萌發成苗的方法，包括下述步驟：

(1)將路易斯安娜鳶尾種子進行消毒處理；

(2)消毒后置于30～37℃的180～220mg/L赤霉素溶液中浸泡40～50小時；

(3)取出后剝除外種皮，再浸入清水中催芽；

(4)出芽后取出，置于玻璃柱形瓶中培養；

(5)待長出3-4片真葉時，移入基質中繼續培養；

所述路易斯安娜鳶尾種子的品種是下述的任意一種：

以品種名稱‘Angel Mist’為母本與品種名稱‘Heather stream’為父本的雜交組合的品種間雜交種子；或者是，以品種名稱‘Arabian Bayou’為母本與品種名稱‘Blue mountain mist’為父本的雜交組合的品種間雜交種子；或者是，以品種名稱‘Velvet Memory’為自交組合的自交種子；或者是，以品種名稱‘Bryced Leigh’為自交組合的自交種子。

本發明中，所述路易斯安娜鳶尾種子的獲取方法為：

(1)在5～6月間對親本進行人工授粉，110～115天后采集成熟飽滿、縱向2/3開裂、無蟲蛀的雜交果實或自交果實；

(2)將上述雜交果實或自交果實置于報紙上，室溫下晾置一周后剝去果皮，獲得雜交種子或自交種子。

本發明中，步驟(1)中所述消毒處理是指：將種子置于百菌靈溶液中浸種1.5～2小時后，以流水沖洗1～3小時；所述百菌靈溶液是將百菌靈原液以純水稀釋1000～2000倍后得到的稀釋液。

本發明中，步驟(2)中所述赤霉素溶液的濃度為180～220mg/L，浸泡溫度為30～37℃，浸泡時間為40～50小時，針對不同的路易斯安娜鳶尾品種，最佳的赤霉素濃度不同。

本發明中，步驟(3)中所述催芽過程中，浸泡時容器敞口且每日添加清水，使種子始終浸于清水中但不沒過種子。

本發明中，所述步驟(3)中，將浸泡在清水中的路易斯安娜鳶尾種子置于人工氣候箱中催芽；催芽時控制溫度為20～28℃，環境濕度為70～80％，時間為10～50天。

更優選地，所述步驟(3)中，催芽時避光，控制溫度為25℃，環境濕度為75％。

本發明中，所述步驟(4)具體是：觀察路易斯安娜鳶尾種子萌發情況，將胚突破內種皮的路易斯安娜種子移入鋪有濾紙的玻璃柱形瓶中，放于溫度為20～28℃，環境濕度為70～80％，光照度為30～35％，光照時間為5～12小時/天的恒溫培養箱中培養8～30天，保持濾紙濕潤。

更優選地，所述步驟(4)中，培養溫度為25℃，環境濕度為75％，光照度為33％，光照時間為8小時/天。

本發明中，所述步驟(5)中的基質是含水量為40％～60％的泥炭。

發明原理描述：

由于百菌靈原液濃度太大，為減少對路易斯安娜鳶尾種子的刺激，所述百菌靈溶液為百菌靈原液的1000～2000倍稀釋液，浸種后采用流水洗去種子表面的百菌靈殘留。

路易斯安娜鳶尾種子外種皮較厚、高度木栓化，溫水浸泡的作用在于充分軟化種皮，一方面便于剝除外種皮，另一方面使種子充分吸水。

剝除所述路易斯安娜鳶尾種子外種皮，可顯著縮短種子萌發所需時間，提高育種成苗效率。

為保證所述路易斯安娜鳶尾種子所需的空氣量，不影響種子的呼吸作用，浸泡時容器敞口，且每日添加清水，使種子始終浸于清水中，但不宜沒過種子。

泥炭排水通氣性能好，保水性能強，而且泥炭的pH值較穩定，含有適合苗木生長的多種營養成分，顆粒粗細適中，有利于苗木的生長。

與現有技術相比，本發明的有益效果為：

(1)本發明利用溫熱的赤霉素溶液浸泡、剝除外種皮減小機械阻力、遮光處理等催芽手段，大大縮短了路易斯安娜鳶尾種子的發芽時間，顯著提高了發芽率、成苗率，提高了路易斯安娜鳶尾雜交育種的效率，對路易斯安娜鳶尾育種工作具有重要的現實意義；

(2)本發明的方法操作簡便，不需具備過多專業知識和實驗技能即可完成，實用性和操作性強；

(3)采用本發明方法對路易斯安娜鳶尾種子最快培養3天即可發芽，50天內發芽率達到52.0～73.33％，50天內平均發芽率較露地播種提高約53.51％，發芽種子成苗率達到95％～100％。

具體實施方式

下面結合具體實施方式作對本發明做進一步詳細說明。

本發明實施例中所述路易斯安娜鳶尾種子的品種包括：以品種名稱‘Angel Mist’為母本與品種名稱‘Heather stream’為父本的雜交組合的品種間雜交種子；或者是，以品種名稱‘Arabian Bayou’為母本與品種名稱‘Blue mountain mist’為父本的雜交組合的品種間雜交種子；或者是，以品種名稱‘Velvet Memory’為自交組合的自交種子；或者是，以品種名稱‘Bryced Leigh’為自交組合的自交種子。

以上品種均購自杭州嘉泰園藝有限公司，種子通過人工輔助育種獲得：于5～6月間進行對路易斯安娜鳶尾的親本進行人工輔助授粉，110～115天后采集成熟飽滿、縱向2/3開裂、無蟲蛀的品種間雜交果實或自交果實。

實施例1

(1)將采收的路易斯安娜鳶尾品種‘Angel Mist’為母本與‘Heather stream’為父本的雜交果實整理后，置于報紙上于室溫下晾置一周，剝去果皮，雜交種子用百菌靈1000倍稀釋液浸泡1.5小時之后流水沖洗1小時；

(2)將經過消毒處理的雜交種子放在網袋中，置于30℃的恒溫水浴鍋中，燒杯中加濃度為200mg/L的赤霉素溶液沒過種子，浸種50個小時；

(3)將雜交種子從網袋中取出，剝除外種皮后置于清水中洗凈種皮殘留物，擦干水分，放于鋪有濾紙的玻璃培養皿中，每皿每日添加適量清水，使雜交種子始終浸泡在清水中，但不沒過；

(4)將上述培養皿放于溫度20℃、濕度70％的恒溫培養箱中避光催芽，第7天雜交種子開始發芽，50天內發芽率達到61.33％；

(5)胚突破內種皮后繼續伸長，隨后分化成根和芽；

(6)將發芽種子置于鋪有濾紙的玻璃柱形瓶中，放于溫度20℃、濕度70％、光照度30％、光照時間5小時/天的恒溫培養箱中培養，保持濾紙濕潤，一周后雜交種子胚根長度達1.85cm，葉長達1.65cm；兩周后雜交種子胚根長度達2.30cm，葉長達5.60cm；

(7)將長出3-4片真葉的雜交種子移植入泥炭含水量40％的穴盤中。

(8)移栽一周后，雜交種子的胚根長度達2.65cm，葉片長度達6.40cm；

(9)移栽8個月后，雜交苗高度可達1.00m左右。

實施例2

(1)將采收的路易斯安娜鳶尾品種‘Arabian Bayou’為母本與‘Blue mountain mist’為父本的雜交果實整理后，置于報紙上于室溫下晾置一周，剝去果皮，自交種子用百菌靈1500倍稀釋液浸泡100分鐘之后流水沖洗2小時；

(2)將經過消毒處理的自交種子放在網袋中，置于35℃的恒溫水浴鍋中，燒杯中加濃度為200mg/L的赤霉素溶液沒過種子，浸種48個小時；

(3)將自交種子從網袋中取出，剝除外種皮后置于清水中洗凈種皮殘留物，擦干水分，放于鋪有濾紙的玻璃培養皿中，每皿每日添加適量清水，使雜交種子始終浸泡在清水中，但不沒過；

(4)將上述培養皿放于溫度25℃、濕度75％的恒溫培養箱中避光催芽，第10天雜交種子開始發芽，50天內發芽率達到52.0％；

(5)胚突破內種皮后繼續伸長，隨后分化成根和芽；

(6)將發芽種子置于鋪有濾紙的玻璃柱形瓶中，放于溫度25℃、濕度75％、光照度33％、光照時間8小時/天的恒溫培養箱中培養，保持濾紙濕潤，一周后雜交種子胚根長度達1.35cm，葉長達1.20cm；兩周后雜交種子胚根長度達1.85cm，葉長達4.55cm；

(7)將長出3-4片真葉的自交種子移植入泥炭含水量50％的穴盤中。

(8)移栽一周后，自交種子的胚根長度達2.25cm，葉片長度達5.70cm；

(9)移栽8個月后，自交苗高度可達0.90m左右。

實施例3

(1)將采收的路易斯安娜鳶尾品種‘Velvet Memory’自交果實整理后，置于報紙上于室溫下晾置一周，剝去果皮，自交種子用百菌靈2000倍稀釋液浸泡100分鐘之后流水沖洗2小時；

(2)將經過消毒處理的自交種子放在網袋中，置于35℃的恒溫水浴鍋中，燒杯中加濃度為180mg/L的赤霉素溶液沒過種子，浸種45個小時；

(3)將自交種子從網袋中取出，剝除外種皮后置于清水中洗凈種皮殘留物，擦干水分，放于鋪有濾紙的玻璃培養皿中，每皿每日添加適量清水，使雜交種子始終浸泡在清水中，但不沒過；

(4)將上述培養皿放于溫度25℃、濕度75％的恒溫培養箱中避光催芽，第3天雜交種子開始發芽，50天內發芽率達到73.33％；

(5)胚突破內種皮后繼續伸長，隨后分化成根和芽；

(6)將發芽種子置于鋪有濾紙的玻璃柱形瓶中，放于溫度25℃、濕度75％、光照度33％、光照時間8小時/天的恒溫培養箱中培養，保持濾紙濕潤，一周后雜交種子胚根長度達2.00cm，葉長達1.80cm；兩周后雜交種子胚根長度達2.50cm，葉長達6.25cm；

(7)將長出3-4片真葉的自交種子移植入泥炭含水量40％的穴盤中。

(8)移栽一周后，自交種子的胚根長度達2.85cm，葉片長度達7.40cm；

(9)移栽8個月后，自交苗高度可達1.15m左右。

實施例4

(1)將采收的路易斯安娜鳶尾品種‘Bryced Leigh’自交果實整理后，置于報紙上于室溫下晾置一周，剝去果皮，自交種子用百菌靈2000倍稀釋液浸泡2小時之后流水沖洗3小時；

(2)將經過消毒處理的自交種子放在網袋中，置于37℃的恒溫水浴鍋中，燒杯中加濃度為220mg/L的赤霉素溶液沒過種子，浸種40個小時；

(3)將自交種子從網袋中取出，剝除外種皮后置于清水中洗凈種皮殘留物，擦干水分，放于鋪有濾紙的玻璃培養皿中，每皿每日添加適量清水，使雜交種子始終浸泡在清水中，但不沒過；

(4)將上述培養皿放于溫度28℃、濕度80％的恒溫培養箱中避光催芽，第5天雜交種子開始發芽，50天內發芽率達到69.33％；；

(5)胚突破內種皮后繼續伸長，隨后分化成根和芽；

(6)將發芽種子置于鋪有濾紙的玻璃柱形瓶中，放于溫度28℃、濕度80％、光照度35％、光照時間12小時/天的恒溫培養箱中培養，保持濾紙濕潤，一周后雜交種子胚根長度達1.80cm，葉長達1.55cm；兩周后雜交種子胚根長度達2.05cm，葉長達5.20cm；

(7)將長出3-4片真葉的自交種子移植入泥炭含水量60％的穴盤中。

(8)移栽一周后，自交種子的胚根長度達2.45cm，葉片長度達6.20cm；

(9)移栽8個月后，自交苗高度可達0.95m左右。

最后，需要注意的是，以上列舉的僅是本發明的具體實施例。顯然，本發明不限于以上實施例，還可以有很多變形。本領域的普通技術人員能從本發明公開的內容中直接導出或聯想出的變形，均應認為是本發明的保護范圍。