本發明涉及治療或預防真菌的藥物中的應用，具體地指一種石蒜花提取物在制備治療或預防真菌病的藥物中的應用。

背景技術：

瑪咖(Lepidium meyenii)是原產于南美洲安第斯山脈的十字花科獨行菜屬的草本植物，瑪咖根營養及生物活性成分豐富，具有抗壓力、抗疲勞、抗抑郁、提高生育力等多種保健功效，請見(余龍江，金文聞，吳元喜，等.瑪咖的植物學及其藥理作用研究概況[J].天然產物研究與開發，2002(5)：71-74.)。近年來，國內加大了對瑪咖藥用成分挖掘，被被廣泛應用于食品和藥保健品領域，有著廣闊的國內外市場需求。

然而，瑪咖根腐病在我國瑪咖種植區普遍發生，每年因病害造成了巨大的經濟損失，引起當地瑪咖種植技術人員及相關研究人員的高度重視，請見(余龍江，金文聞.瑪咖的種植加工與營養保健[M].北京：化學工業出版社，2015：68-69.)。目前對瑪咖根腐病的防治普遍通過化學防治來控制，過多使用化學殺菌劑有危害人類身體健康、藥物殘留破壞生態環境、引發病原物產生抗藥性等諸多缺點，不利于瑪咖產業可持續發展。因此，尋求安全、高效和經濟的生物源農藥尤為重要。

國內外已有植物提取物抑制植物病害的相關報道，如汪曉娟等研究了百部堿等5種植物提取物對水霉菌的抑制作用，結果表明苦楝提取物對水霉菌抑制作用最為明顯，請見(汪曉娟，胡青，林崗.百部堿等5種植物提取物對水霉菌的抑制作用[J].安徽農學通報(上半月刊)，2012(23)：38-42.)；周建宏等采用生長速率法初步篩選了20種植物的水提取物對油茶軟腐病菌、炭疽病菌的生物活性，不同植物提取物的林間防治效果表明：當丁香、黃芩提取物及茶皂素的質量比為1:1:1時，對油茶主要病害的防治效果最好，可達80％，同時可以將油茶的病果率降低約60％，請見(周建宏，劉君昂，鄧小軍，等.植物提取物對油茶主要病害的抑菌作用[J].中南林業科技大學學報，2011(04)：42-45.)。鄭培偉等報道了利用石蒜鱗莖提取物和農藥助劑組合而成的殺蟲劑對朱砂葉螨、小菜蛾，菜蚜蟲等防治效果，請見(鄭培偉，陳安良，匡君根，石蒜鱗莖提取物殺蟲劑及提取物制備方法，201210054345.6)；葛喜珍等公開了一種防治馬鈴薯干腐病的可濕性粉劑及其制備方法，該可濕性粉劑的有效成分為青皮、枳實、穿心蓮、白頭翁和驅蟲斑鳩菊的藥材乙醇提取物與小檗堿的混合物，對馬鈴薯干腐病的防治效果達到80％以上，請見(葛喜珍，裴慶慧，李可意，等.一種防治馬鈴薯干腐病的可濕性粉劑及其制備方法，20151079627.7)。

目前還未見利用石蒜植物的花這一部位作為原料提取有效成分防治瑪咖根腐病、馬鈴薯干腐病及睡蓮黑斑病的相關報道。石蒜花現人工種植越來越多，花期過后，花瓣枯萎凋謝，不被人們利用。

技術實現要素：

本發明目的是在于提供了一種石蒜花提取物在制備治療或預防真菌病的藥物中的應用。該石蒜花提取物作為高效、安全、制備簡便的生物源殺菌劑，其原料來自于凋謝的石蒜花瓣，生產成本極低，變廢為寶。石蒜花提取物在制備治療或預防瑪咖根腐病、馬鈴薯干腐病及睡蓮黑斑病藥物中的應用，提取物抑菌率實驗表明，該石蒜花提取物對瑪咖根腐病的抑菌率達到80％以上，對馬鈴薯干腐病和睡蓮黑斑病原菌的抑菌率達到70％以上。

為實現上述目的，本發明提供的一種石蒜花提取物在制備治療或預防真菌病的藥物中的應用，所述真菌病為瑪咖根腐病、馬鈴薯干腐病或睡蓮黑斑病。

進一步地，所述石蒜花提取物的制備方法，包括以下步驟：

1)采集已經枯萎或者凋謝的石蒜花瓣，清洗干凈后晾干，

2)將清洗晾干后的花瓣樣品勻漿粉碎，

3)將花瓣與乙醇溶液按質量體積比1:10～30g/L混合，浸提24～72h，過濾花瓣雜質后即可得到石蒜花提取物，其中，乙醇溶液質量分數為60～90％。

再進一步地，所述步驟3)中，乙醇溶液的質量分數為70～85％。

再進一步地，所述花瓣與乙醇質量體積比1:15～25g/L。

上述石蒜花提取物在制備治療或預防真菌病的藥物中的應用，其應用基本過程是：

A.采用濾紙片平板對峙培養法研究石蒜花提取物對油茶主要病害的拮抗作用。準備好直徑為7mm的濾紙片并滅菌處理，并在石蒜花提取物中浸潤2min；將打好的直徑為7mm的病原菌餅和浸潤后的濾紙片放置在平板中心線上，病原菌餅置于平板中央，浸潤有石蒜花提取物的濾紙片分別距離平板中心1.5cm，置于28℃恒溫培養箱培養，并每隔24h在超凈工作臺中無菌吸取5μL石蒜花提取物浸潤1個濾紙片，5-7天后觀察抑菌帶有無及大小，每個處理重復3次。

抑菌率＝(對照菌落直徑-處理菌落直徑)/(對照菌落直徑-7)×100％。

B.采用培養法研究石蒜花提取物對油茶主要病害的拮抗作用。將石蒜花提取物與約50℃的PDA固體培養基按照1:19混勻后倒入培養皿，冷卻后在平板中央放入直徑為7mm的油茶主要病原菌菌餅，以無菌水為對照，每個處理重復3次。5天后測量病原菌菌落直徑。

抑菌率＝(對照菌落直徑-處理菌落直徑)/(對照菌落直徑-7)×100％。

本發明的有益效果在于：

1)首次發現了石蒜花提取物對瑪咖根腐病，馬鈴薯干腐病及睡蓮黑斑病均具有較強的抑制和滅殺活性。抗菌譜廣泛，可有效降低防治成本。

2)培養法實驗抑菌率表明：該石蒜花提取物對瑪咖根腐病的抑菌率達到80％以上，對馬鈴薯干腐病和睡蓮黑斑病原菌的抑菌率達到70％以上。

附圖說明

圖1為石蒜花提取物對瑪咖根腐病原菌的拮抗效果示意圖；

圖2為石蒜花提取物對馬鈴薯干腐病原菌的拮抗效果示意圖；

圖3為石蒜花提取物對睡蓮黑斑病原菌的拮抗效果示意圖；

附圖說明：其中圖1-3中A分別為瑪咖根腐病原菌，馬鈴薯干腐病原菌及睡蓮黑斑病原菌在未添加石蒜花提取物的培養基上的生長狀態，B為以上三種病原菌在添加了石蒜花提取物的培養基上的生長狀態，結果顯示該石蒜花提取物對這三種病原真菌均有很好的拮抗作用，尤其是對瑪咖根腐病抑菌效果顯著。

具體實施方式

為了更好地解釋本發明，以下結合具體實施例進一步闡明本發明的主要內容，但本發明的內容不僅僅局限于以下實施例。

菌株來源：瑪咖根腐病Fusarium avenaceum同文獻報道菌株(Logrieco A,Rizzo A,Ferracane R,et al.Occurrence ofbeauvericin and enniatins in wheat affected by Fusariumavenaceumhead blight[J].Applied and EnvironmentalMicrobiology,2002,68(1):82-85.)；馬鈴薯干腐病Fusarium equiseti同文獻報道菌株(牛秀群,李金花,張俊蓮,等.甘肅省干旱灌區連作馬鈴薯根際土壤中鐮刀菌的變化[J].草業學報,2011,20(4):236-243.)；睡蓮黑斑病Phoma herbarum，同文獻報道菌株(趙丹丹,王云,付曉萍,等.臺灣青棗致腐微生物的分離鑒定及其抑制研究[J].西南農業學報,2016,29(2):379-384.)。

實施例1

石蒜花提取物1的制備方法，其步驟是：

1)采集已經枯萎或者凋謝的石蒜花瓣，自來水清洗干凈后晾干，

2)利用勻漿機將清洗晾干后的花瓣樣品勻漿粉碎，按照質量體積比1：10g/L將花瓣和質量分數為90％的乙醇混合，浸提24h，過濾花瓣雜質后即得到石蒜花提取物1，4℃短期保藏。

實施例2

石蒜花提取物2的制備方法，其步驟是：

1)采集已經枯萎或者凋謝的石蒜花瓣，自來水清洗干凈后晾干，

2)利用勻漿機將清洗晾干后的花瓣樣品粉碎，按照質量體積比1：20g/L將花瓣和質量分數為60％的乙醇混合，浸提72h，過濾花瓣雜質后即得到石蒜花提取物2，4℃短期保藏。

實施例3

石蒜花提取物3的制備方法，其步驟是：

1)采集已經枯萎或者凋謝的石蒜花瓣，自來水清洗干凈后晾干，

2)利用勻漿機將清洗晾干后的花瓣樣品粉碎，按照質量體積比1：15g/L將花瓣和質量分數為80％的乙醇混合，浸提48h，過濾花瓣雜質后即得到石蒜花提取物3，4℃短期保藏。

實施例4

上述石蒜花提取物在制備治療或預防瑪咖根腐病、馬鈴薯干腐病及睡蓮黑斑病病原菌藥物中的應用，其平板對峙培養法步驟是：

準備好直徑為7mm的濾紙片并滅菌處理，并在石蒜花提取物中浸潤2min；將打好的直徑為7mm的病原菌餅和浸潤后的濾紙片放置在平板中心線上，病原菌餅置于平板中央，浸潤有石蒜花提取物的濾紙片分別距離平板中心1.5cm，置于28℃恒溫培養箱培養，并每隔24h在超凈工作臺中無菌吸取5μL石蒜花提取物浸潤1個濾紙片，5-7天后觀察抑菌帶有無及大小，每個處理重復3次。結果見表1。結果表明石蒜花提取物對瑪咖根腐病，馬鈴薯干腐病及睡蓮黑斑病均有很好的拮抗作用，其中對瑪咖根腐病的抑菌率最佳，達到80％以上。

表1石蒜花提取物對幾種真菌病害的抑菌率

表中數據為平均值±標準差(下同)，

抑菌率＝(對照菌落直徑-處理菌落直徑)/(對照菌落直徑-7)×100％。

實施例5

上述石蒜花提取物在制備治療或預防瑪咖根腐病、馬鈴薯干腐病及睡蓮黑斑病病原菌藥物中的應用，其培養法步驟是：

將石蒜花提取物與約50℃的PDA固體培養基按照1:19混勻后倒入培養皿，冷卻后在平板中央分別放入直徑為7mm的瑪咖根腐病、馬鈴薯干腐病及睡蓮黑斑病菌餅，以無菌水為對照，每個處理重復3次。7天后測量病原菌菌落直徑。

抑菌率＝(對照菌落直徑-處理菌落直徑)/(對照菌落直徑-7)×100％。

表2顯示石蒜花提取物對瑪咖根腐病的抑菌率達到80％以上，對馬鈴薯干腐病和睡蓮黑斑病原菌的抑菌率達到70％以上，說明該提取物的抑菌譜較廣。

表2石蒜花提取物對幾種真菌病原菌的抑菌率

其它未詳細說明的部分均為現有技術。盡管上述實施例對本發明做出了詳盡的描述，但它僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部實施例，人們還可以根據本實施例在不經創造性前提下獲得其他實施例，這些實施例都屬于本發明保護范圍。