本發明屬于農藥應用技術領域，尤其涉及一種用于防治洋蔥根腐病的農藥復配劑及其篩選方法。

背景技術：

洋蔥屬百合科蔥屬二年生草本植物，其營養豐富。我國洋蔥種植面積、產量均居世界首位，洋蔥已成為重要的蔬菜之一。但是，洋蔥根系易被病原菌侵染，洋蔥根腐病發生普遍、危害嚴重，病原菌侵染性強，蔓延速度快，防治困難，洋蔥根腐病成為危害特別嚴重的洋蔥病害之一。

目前，國內對洋蔥根腐病的防治主要是對洋蔥基盤腐爛病、干腐病、鱗莖軟腐病病原菌分離鑒定，采用單一的殺菌劑福美雙或多菌靈進行根腐病的防治。這種防治方法沒有專門分離、鑒定出洋蔥根腐病病原菌，而且通常是采用內吸性殺菌劑福美雙和多菌靈來達到根腐病的防治，但是該方法具有毒性大、持效期短、易產生抗性、蓄積性、環境污染的特點。對于通過分離、鑒定出洋蔥根腐病病原菌，篩選出防治洋蔥根腐病的農藥新品種(組合)并沒有專門研究。

哈茨木霉菌是木霉菌中應用的一個菌種，可預防由腐霉菌、立枯絲核菌、鐮刀菌、黑根霉、柱孢霉等病原菌引起的植物病害的仿生菌。哈茨木霉菌具有抗生素作用、植物生長調節作用、誘導植物抗性及啟動植物的局部反應等優點，其抗生素作用主要體現在可分泌一部分抗生素，抑制病原菌的生長定植，減輕病原菌的危害。由于哈茨木霉菌無抗性，菌類在土壤繁殖持效期長，改善土壤環境，對作物安全，無污染環境，可與其他化學農藥混用，因此采用以菌治菌、菌與殺菌劑相結合的方式，將生防菌哈茨木霉菌和殺菌劑相結合進行洋蔥根腐病的防治方法具有突出的優點。

技術實現要素：

本發明的目的在于提供一種用于防治洋蔥根腐病的農藥復配劑及其篩選方法，旨在解決洋蔥根腐病過程中沒有專門分離、鑒定出洋蔥根腐病病原菌，僅采用單一的內吸性殺菌劑福美雙和多菌靈來達到根腐病的防治，防治過程農藥具有毒性大、持效期短、易產生抗性、蓄積性、環境污染的問題。

本發明是這樣實現的：一種用于防治洋蔥根腐病的農藥復配劑，該農藥復配劑中的有效成分為哈茨木霉菌和殺菌劑，所述殺菌劑為福美雙和多菌靈中的一種，所述哈茨木霉菌和福美雙組成第一種復配劑，哈茨木霉菌和多菌靈組成第二種復配劑。

進一步地，所述第一種復配劑中，哈茨木霉菌含量為3億CFU/g，有效菌為800-900億CFU/畝，50％福美雙有效菌含量為1000-1020g/畝。

進一步地，所述第二種復配劑中，哈茨木霉菌含量為3億CFU/g，有效菌為800-900億CFU/畝，15％多菌靈有效菌含量為400-480g/畝。

本發明還提供用于防治洋蔥根腐病的農藥復配劑的篩選方法，包括以下步驟：

步驟一，菌種分離鑒定及生物學測定

從發病洋蔥植株上分離菌株，在PDA培養基上培養菌落，菌落為圓形、氣生菌絲棉絮狀，顏色開始為純白色，后漸變為桃紅色；顯微鏡鏡檢可見典型的鐮刀狀、非鏈狀著生的分生小孢子，小型分生孢子自單出瓶狀小分生孢子梗產生，橢圓至卵圓形，大型分生孢子鐮刀型；

步驟二，篩選藥劑

配制10種不同的參試藥液，清水作對照，采用抑菌圈法，將直徑為5mm的濾紙片(濾紙事先經高壓滅菌)在參試藥液中浸泡2h，取出后移入60℃烘箱烘干備用；

先將菌絲懸浮液按每皿2mL接入無菌培養皿內，然后將冷卻至40～45℃的PDA培養基按定量倒入盛有菌絲懸浮液的培養皿制成帶菌培養基，待培養基凝固后，再把用藥液處理過的濾紙片接入帶菌培養基上，每皿接濾紙片3片，然后將培養皿放入恒溫25℃培養箱中培養，48h后測量抑菌圈大小，篩選抑菌效果好的藥劑；

步驟三，篩選復配劑

根據抑菌試驗結果，配制8種不同藥劑，分別對洋蔥根進行處理，定植時，用藥劑進行洋蔥蘸根，在洋蔥膨大期灌根，統計處理后洋蔥根腐病的發病率，篩選出對洋蔥根腐病防治效果顯著的藥劑。

進一步地，所述步驟一中，分生孢子大小有3個隔膜與5個隔膜兩種，33～44um×3.8～4um；生長適宜溫度24-28℃，27℃生長速率10mm/天，致死溫度55～60℃。

進一步地，所述步驟二中，10種不同的參試藥液分別為：

1號WP：有效成分為(3億CFU/g)哈茨木霉菌WP500倍液；

2號WP：有效成分為50％福美雙WP500倍液；

3號WP：有效成分為15％多菌靈WP500倍液；

4號WP：有效成分為(1000億個/g)枯草芽孢桿菌WP500倍液；

5號WP：有效成分為55％敵克松WP500倍液；

6號WP：有效成分為(有效活菌數≥5億)健立寶500倍液；

7號WP：有效成分為高錳酸鉀500倍液；

8號WP：有效成分為(3億CFU/g)哈茨木霉菌WP1000倍液+15％多菌靈WP1000倍液；

9號WP：有效成分為(1000億個/g)枯草芽孢桿菌WP1000倍液+50％多菌靈WP1000倍液；

10號WP：有效成分為(3億CFU/g)哈茨木霉菌WP1000倍液+50％福美雙WP1000倍液。

進一步地，所述步驟三中，8種不同藥劑處理分別為：

處理1：(3億CFU/g)哈茨木霉菌40g/畝，稀釋100倍蘸根，(3億CFU/g)哈茨木霉菌250g/畝，稀釋1500倍洋蔥膨大期灌根；

處理2：(3億CFU/g)哈茨木霉菌40g/畝稀釋100倍，加50％福美雙20g/畝稀釋100倍洋蔥蘸根；(3億CFU/g)哈茨木霉菌250g/畝稀釋1500倍，加50％福美雙2000g/畝稀釋800倍洋蔥膨大期灌根；

處理3：(3億CFU/g)哈茨木霉菌40g/畝稀釋100倍，加15％多菌靈30g/畝稀釋100倍蘸根；(3億CFU/g)哈茨木霉菌250g/畝稀釋1500倍，加15％多菌靈3000g/畝稀釋800倍灌根；

處理4：29％石硫合劑2000g/畝，稀釋800倍洋蔥膨大期灌根；

處理5：55％敵克松30g/畝，稀釋100倍蘸根；55％敵克松3000g/畝，稀釋800倍(CK1)洋蔥膨大期灌根；

處理6：清水CK2；

處理7：(1000億個/g)枯草芽孢桿菌40g/畝，稀釋100倍蘸根；(1000億個/g)枯草芽孢桿菌250g/畝，稀釋1500倍液洋蔥膨大期灌根；

處理8：(有效活菌數≥5億/g)健立寶40g/畝，稀釋100倍蘸根，洋蔥膨大期拌沙子撒施(有效活菌數≥5億/g)健立寶250g/畝。

進一步地，所述步驟三中，篩選出對洋蔥根腐病防治效果顯著的是處理2和處理3所用藥劑，分別稱作第一種復配劑和第二種復配劑。

本發明的有益效果：本發明提供的用于防治洋蔥根腐病的農藥復配劑及其篩選方法，對洋蔥根腐病病原菌進行分離、生物學測定，將生防菌哈茨木霉菌和殺菌劑相結合形成農藥復配劑，哈茨木霉菌和福美雙復配劑的相對防治效果達92.41％，哈茨木霉菌和多菌靈復配劑的相對防治效果達76.74％，本發明采用以菌治菌、菌與殺菌劑相結合的洋蔥根腐病防治方法，防治過程農藥毒性小、持效期長、能有效防治洋蔥根腐病，并且降低環境污染。

本發明取得的經濟效益：利用本發明的農藥復配劑進行基地試驗，試驗結果表明，示范基地洋蔥平均產量8.02噸/畝，較對照畝增產1736kg,增產27.7％，畝新增純收益868元，已獲得經濟效益3095.5萬元，科研投資年經濟效益1884.2萬元，科研投資年均收益率9.25元/元。

具體實施方式

為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合實施例，對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。

下面結合具體實施例對本發明的應用原理作進一步描述。

用于防治洋蔥根腐病的農藥復配劑及其篩選方法，具體實施方法如下：

一、菌種分離鑒定及生物學測定

供試菌種為2016年酒泉市農科院植保實驗室從發病洋蔥植株上分離培養的菌株，在PDA培養基上培養菌落，菌落為圓形、氣生菌絲棉絮狀，顏色開始為純白色，后漸變為桃紅色；顯微鏡鏡檢可見典型的鐮刀狀、非鏈狀著生的分生小孢子，小型分生孢子自單出瓶狀小分生孢子梗產生，橢圓至卵圓形，大型分生孢子鐮刀型；分生孢子大小有3個隔膜與5個隔膜兩種，33～44um×3.8～4um，生長適宜溫度24-28℃，27℃生長速率10mm/天，致死溫度55-60℃。

二、篩選藥劑

1、試驗藥劑

1號WP：有效成分為(3億CFU/g)哈茨木霉菌WP500倍液(美國拜沃股份有限公司)；

2號WP：有效成分為50％福美雙WP500倍液(威海韓孚生化藥業有限公司)；

3號WP：有效成分為15％多菌靈WP500倍液(威海韓孚生化藥業有限公司)；

4號WP：有效成分為(1000億個/g)枯草芽孢桿菌WP500倍液(中國農科院植保所廊坊農藥中試廠)；

5號WP：有效成分為55％敵克松WP500倍液(遼寧省丹東市農藥總廠)；

6號WP：有效成分為(有效活菌數≥5億)健立寶500倍液(北京正農農業科技有限公司)；

7號WP：有效成分為高錳酸鉀500倍液(山東奧凱農業發展有限公司)；

8號WP：有效成分為(3億CFU/g)哈茨木霉菌WP1000倍液+15％多菌靈WP1000倍液(美國拜沃股份有限公司的哈茨木霉菌、威海韓孚生化藥業有限公司的多菌靈)；

9號WP：有效成分為(1000億個/g)枯草芽孢桿菌WP1000倍液+50％多菌靈WP1000倍液(中國農科院植保所廊坊農藥中試廠的枯草芽孢桿菌、威海韓孚生化藥業有限公司的多菌靈)；

10號WP：有效成分為(3億CFU/g)哈茨木霉菌WP1000倍液+50％福美雙WP1000倍液(美國拜沃股份有限公司的哈茨木霉菌、威海韓孚生化藥業有限公司的福美雙)；

清水作對照，標記為CK(清水)。

2、抑菌試驗

采用抑菌圈法(新農藥)先將上述參試農藥按處理要求的濃度配成藥液，然后將直徑為5mm的濾紙片(濾紙事先經高壓滅菌)在藥液中浸泡2h，取出后移入60℃烘箱烘干備用，其中1號、4號不需烘干浸泡后備用，8號、9號及10號先用農藥處理烘干再接種菌劑。

先將菌絲懸浮液按每皿2ml接入無菌培養皿內，然后將冷卻至40～45℃的PDA培養基按定量倒入盛有菌絲懸浮液的培養皿制成帶菌培養基，待培養基凝固后，再把用藥液處理過的濾紙片接入帶菌培養基上，每皿接濾紙片3片，然后將培養皿放入恒溫25℃培養箱中培養，48h后測量抑菌圈大小。

3、抑菌結果與分析

表1為室內抑菌測定3天不同藥劑對洋蔥根腐病的影響，由表1可看出，抑菌測定3天不同殺菌劑(除1、6號WP)的相同稀釋濃度對洋蔥根腐病菌絲生長均有抑制效果，但抑制效果不同。殺菌劑處理抑菌圈平均直徑0-20.8mm，其中抑菌圈平均直徑最大為10號WP為20.8mm，其次為9號WP為20mm，8號WP的抑菌圈直徑為18.8mm，1號WP和6號WP沒有抑菌效果。殺菌劑處理平均抑菌率為0-69.3％，其中抑菌率最高為10號WP69.3％，其次是9號WP66.7％，第三是8號WP62.7％。

表1室內抑菌測定3天不同藥劑對洋蔥根腐病的影響

表2為室內抑菌測定7天不同藥劑對洋蔥根腐病的影響，由表2可看出，抑菌測定7天殺菌劑1號WP、5號WP、6號WP、7號WP相同稀釋濃度對洋蔥根腐病菌絲生長均沒有抑制效果，殺菌劑2號WP、3號WP、4號WP、8號WP、9號WP、10號WP的相同稀釋濃度對洋蔥根腐病菌絲生長均有抑制效果。其中抑菌圈平均直徑最大為10號WP為20mm，其次為9號WP為17.5mm，8號WP的抑菌圈直徑為16.5mm。殺菌劑處理平均抑菌率為0-69.3％，其中抑菌率最高為10號WP66.7％，其次是9號WP58.3％，第三是8號WP55％，1號WP、5號WP、6號WP、7號WP抑菌率為0。

表2室內抑菌測定7天不同藥劑對洋蔥根腐病的影響

綜合分析，殺菌劑10號WP藥后7天較藥后3天抑菌圈和抑菌率分別減少0.8mm和2.6％，9號WP藥后7天較藥后3天抑菌圈和抑菌率分別減少2.5mm和8.4％，8號WP藥后7天較藥后3天抑菌圈和抑菌率分別減少2.3mm和7.7％,殺菌劑10號WP、9號WP、8號WP對洋蔥根腐病病原菌有較好抑制作用，持效期較長，是防治洋蔥根腐病適宜殺菌劑。殺菌劑2號WP藥后7天較藥后3天抑菌圈和抑菌率分別減少7.7mm和25.7％，3號WP藥后7天較藥后3天抑菌圈和抑菌率分別減少7.5mm和25％，4號WP藥后7天較藥后3天抑菌圈和抑菌率分別減少0.8mm和2.7％,5號WP藥后7天沒有抑菌效果，2號WP、3號WP、4號WP、5號WP對洋蔥根腐病也有較好防效，但持效期短。

室內抑菌試驗結果表明，10號WP、9號WP及8號WP對洋蔥根腐病有較好的抑菌效果，藥后3天抑菌圈直徑和抑菌率分別為20.8mm和69.3％、20mm和66.7％、18.8mm和62.7％，藥后7天抑菌圈直徑和抑菌率分別為20mm和66.7％、17.5mm和58.3％、16.5mm和55％，且持效期長，可以用于洋蔥根腐病田間防效篩選試驗。

三、篩選復配劑

根據抑菌試驗結果，配制8種不同藥劑，分別對洋蔥根進行下列處理：

處理1：(3億CFU/g)哈茨木霉菌40g/畝，稀釋100倍蘸根，(3億CFU/g)哈茨木霉菌250g/畝，稀釋1500倍洋蔥膨大期灌根；

處理2：(3億CFU/g)哈茨木霉菌40g/畝，稀釋100倍，加50％福美雙20g/畝，稀釋100倍洋蔥蘸根；(3億CFU/g)哈茨木霉菌250g/畝，稀釋1500倍，加50％福美雙2000g/畝，稀釋800倍洋蔥膨大期灌根；

處理3：(3億CFU/g)哈茨木霉菌40g/畝稀釋100倍，加15％多菌靈30g/畝稀釋100倍蘸根；(3億CFU/g)哈茨木霉菌250g/畝稀釋1500倍，加15％多菌靈3000g/畝稀釋800倍灌根；

處理4：29％石硫合劑2000g/畝，稀釋800倍洋蔥膨大期灌根；

處理5：55％敵克松30g/畝，稀釋100倍蘸根；55％敵克松3000g/畝，稀釋800倍(CK1)洋蔥膨大期灌根；

處理6：清水CK2；

處理7：(1000億個/g)枯草芽孢桿菌40g/畝，稀釋100倍蘸根；(1000億個/g)枯草芽孢桿菌250g/畝，稀釋1500倍液洋蔥膨大期灌根；

處理8：(有效活菌數≥5億/g)健立寶40g/畝，稀釋100倍蘸根，洋蔥膨大期拌沙子撒施(有效活菌數≥5億/g)健立寶250g/畝。

表3試驗處理發病率

(表中，處理2：哈茨木霉菌和福美雙復配劑，處理3：哈茨木霉菌和多菌靈復配劑。)

表3所示為不同試驗處理洋蔥根腐病發病率，從表3中可以看出，處理2和處理3對洋蔥根腐病防治效果顯著，相對防效分別為92.41％和76.74％。

選擇處理2所用藥劑為第一種復配劑，該復配劑中，哈茨木霉菌含量為3億CFU/g，有效菌為800-900億CFU/畝，50％福美雙有效菌含量為1000-1020g/畝；選擇處理3所用藥劑為第二種復配劑，該復配劑中，哈茨木霉菌含量為3億CFU/g，有效菌為800-900億CFU/畝，15％多菌靈有效菌含量為400-480g/畝。

以上所述僅為本發明的較佳實施例而已，并不用以限制本發明，凡在本發明的精神和原則之內所作的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。