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一種華南錐無性繁殖的方法與流程

文檔序號:12667178閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種華南錐無性繁殖的方法,其特征在于:包括外植體選擇、外植體處理、初始芽誘導培養、增殖培養、壯芽培養和生根培養工序,采集半木質化、生長健壯的當年生黃檀嫩枝作為外植體,對外植體進行修剪、滅菌消毒處理后接種于初始芽誘導培養基中獲取初始芽,再將初始芽接種于增殖培養基中經過3-4個周期增殖培養,形成叢生芽,將叢生芽接入壯芽培養基中培養,最后將高≥2cm的單芽插入生根培養基中誘導生根,具體操作步驟如下:

(1)外植體選擇:采集半木質化、生長健壯的當年生黃檀嫩枝作為外植體;

(2)外植體處理:將外植體置于自來水下沖洗10-15 min,然后去除外植體葉片,再將外植體浸泡在體積濃度 0.1%的升汞溶液中,控制浸泡時間15-20 min,最后用純凈水洗凈藥物,將外植體裁成帶至少1個腋芽,1.5-3cm長的莖段,視莖段木質化程度分類置放容器內,備用;

(3)初始芽誘導培養:將步驟(2)得到的外植體接種于初始芽誘導培養基中培養,培養30-35 d,初始芽萌發、生長;

(4)增殖培養:將高≥1cm的初始芽接入增殖培養基中進行增殖培養,35-40 d轉接一次,循環往復,經3-4個周期的培養,形成叢生芽;

(5)壯芽培養:將步驟(4)得到的叢生芽進行切割,4-5顆芽/叢,插入壯芽培養基中,培養35-40 d,形成壯芽;

(6)生根培養:將步驟(5)得到的高≥2cm的單芽插入生根培養基中誘導生根;余下小芽叢再次接種于步驟(4)的增殖培養基中繼續增殖,然后再重復步驟(5),循環往復,獲得大量壯芽。

2.根據權利要求1所述的一種華南錐無性繁殖的方法,其特征在于:所述的初始芽誘導培養基的配方為:1/2改良MS培養基+TDZ 4.0-6.0 mg/L+NAA 2.0-3.0 mg/L+KT 1.0-2.0 mg/L+ZT 1.5-2.0 mg/L+ VC 15 mg/L+葉酸10mg/L+VB2 15 mg/+瓊脂3.0 g/L+葡萄糖25 g/L。

3.根據權利要求1所述的一種華南錐無性繁殖的方法,其特征在于:所述的增殖培養基的配方為:1/2改良MS培養基+TDZ 6.0-8.0 mg/L+NAA 2.0-3.0 mg/L+ZT 0.5-1.0 mg/L+VC 15 mg/L+VB2 15 mg+L-半胱氨酸 20 mg/L+瓊脂 3.6 g/L+葡萄糖 30 g/L。

4.根據權利要求1所述的一種華南錐無性繁殖的方法,其特征在于:所述的壯芽培養基的配方為:改良MS培養基+TDZ 3.0-4.0 mg/L+NAA 1.0-1.5 mg/L+VC 15 mg/L+VB2 15 mg+L-半胱氨酸 20 mg/L+瓊脂 3.5 g/L+葡萄糖 25 g/L。

5.根據權利要求1所述的一種華南錐無性繁殖的方法,其特征在于:所述的生根培養基的配方為:1/2改良MS培養基+TDZ 1.5-2.5 mg/L+NAA 1.0-1.5 mg/L+瓊脂 3.5 g/L+葡萄糖 30 g/L。

6.根據權利要求2-5任一所述的一種華南錐無性繁殖的方法,其特征在于:所述的改良MS培養基的配方為: KNO3 874 mg·L-1;NH4NO3 850 mg·L-1;CaCl2·2H2O 295 mg·L-1;MgSO4·7H2O 318 mg·L-1;Ca(NO3)2·4H2O 600 mg·L-1;KH2PO4 340 mg·L-1;MnSO4·H2O 22.3 mg·L-1;ZnSO4·7H2O 8.6 mg·L-1;CuSO4·5H2O 0.025 mg·L-1;H3BO3 6.2 mg·L-1;Na2MoO4·2H2O 0.025 mg·L-1;KI 0.83 mg·L-1;CoCl2·6H2O 0.025 mg·L-1;維生素B11.0 mg·L-1;維生素B6 0.5 mg·L-1;煙酸 0.5 mg·L-1;甘氨酸 2.0 mg·L-1;肌醇 70 mg·L-1

7.根據權利要求1所述的一種華南錐無性繁殖的方法,其特征在于:步驟(3)所述的初始芽誘導培養的培育控制條件為:光培養、光照500-1000 lx,培養溫度20±1℃;步驟(4)所述的增殖培養、步驟(5)所述的壯芽培養、步驟(6)所述的生根培養的培育控制條件均為:光培養,光照2500-4000 lx,每日光照16 h,培養溫度25-28℃。

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