本發明屬于苗木無性繁殖技術領域，特別涉及一種黃花風鈴木組織培養快速繁殖方法。
背景技術：
黃花風鈴木(Tabebuia chrysantha)為紫葳科風鈴木屬落葉喬木，原產于墨西哥、中美洲、南美洲。其色彩多樣，是一種會隨著季節變化而更換風貌的樹，具有春花、夏實、秋綠、冬枯的獨特風韻。花期春季，花先葉開放，花冠風鈴狀，盛開時滿樹金黃，頗為壯觀，具有極佳的觀賞價值，引種十幾年來，已被廣泛應用于華南地區園林、庭院綠化，是優良的園林綠化與行道樹種。另外，黃花風鈴木適應性強，管理粗放，種植利潤高，很受市場歡迎。
黃花風鈴木的常規繁殖方式為播種育苗，但其種子壽命極短，很容易喪失活力，需要即采即播，其種子成熟期在4-5月，因此，繁殖受季節性限制，難以滿足市場的需求。而通過組織培養的方式進行繁殖，其繁殖速度快，苗木質量好，可達到規?；a的目的。國內利用組織培養技術繁殖黃花風鈴木的研究尚未見有報道。
技術實現要素：
本發明的目的是建立一種黃花風鈴木組織培養快速繁殖方法，提高苗木繁殖速度，縮短繁殖周期，并解決苗木繁殖受季節性限制問題。
本發明的目的可以通過以下技術方案實現：
一種黃花風鈴木組織培養快速繁殖方法，包括外植體的處理和消毒、初始培養、芽的分化和增殖、生根培養、生根苗移栽的步驟，具體包括如下步驟：
步驟1，外植體的處理和消毒：以黃花風鈴木種子為外植體，剝去外層種殼，取種仁，在超凈工作臺上消毒，再用無菌水清洗，瀝干后待用；
步驟2，初始培養：將消毒好的外植體接種至初代培養基上，暗培養，再移至自然光照條件下培養；
步驟3，芽的分化和增殖：將步驟2中獲得的無菌苗剪切成帶腋芽節段，接種到芽分化和增殖培養基上，接種時將帶芽節段斜插在培養基上，放在培養室內弱光條件下培養，在腋芽處分化出小芽，將芽叢切下，轉接至新鮮的芽分化和增殖培養基上進行芽的增殖培養，定時轉接；
步驟4，生根培養：剪取生長健壯的無菌芽接種至生根培養基上，放在培養室內弱光條件下培養，待小苗的基部切口處開始膨大長出愈傷組織，繼續培養后從愈傷組織處長出細根；
步驟5，生根苗移栽：生根培養待小苗的根系基本長齊，將生根瓶苗移至煉苗棚進行煉苗，經過煉苗的生根苗進行移栽，移栽時將生根苗從培養瓶中取出，用清水洗去小苗根系的培養基，然后將小苗移栽至裝有基質的育苗袋內，移栽在育苗棚內進行，移栽后要澆透水，用薄膜覆蓋保溫保濕，逐步通風，最后移除薄膜；
本發明所使用的培養基配方如下：
初始培養培養基：MS+6-BA0.4mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L，瓊脂粉4.2g/L，pH＝5.8；
芽分化和增殖培養基：MS+6-BA1.2-1.6mg/L+IAA0.3-0.5mg/L+L-半胱氨酸25mg/L+蔗糖30g/L，瓊脂粉4.2g/L，pH＝5.8；
生根培養基：1/2MS+IBA0.8-1.0mg/L+活性炭0.2g/L+蔗糖20g/L，瓊脂粉4.5g/L，pH＝5.8。
本發明步驟1所述的在超凈工作臺上消毒，再用無菌水清洗，優選在超凈工作臺上以0.1％HgCl2溶液消毒8-10min，再用無菌水清洗4-5次。
步驟2所述的暗培養，再移至自然光照條件下培養，優選暗培養5天，再移至自然光照條件下培養20d，培養溫度為25±2℃，暗培養5天后種子開始萌動，在自然光照條件下繼續培養5天即可長出小苗，20天無菌苗可長至約4cm高。
步驟3所述的芽的分化和增殖，優選將步驟2中獲得的無菌苗剪切成長約2cm的帶腋芽節段，接種到芽分化和增殖培養基上，接種時將帶芽節段斜插在培養基上，放在培養室內弱光條件下培養，培養溫度25±2℃，光照強度1000-1500lx，每天光照12-14h，培養20d左右在腋芽處可分化出小芽；待分化出的小芽長到1cm以上時，再將芽叢切下，轉接至新鮮的芽分化和增殖培養基上進行芽的增殖培養，培養溫度25±2℃，光照強度2000-3000lx，每天光照12-14h，每隔30d左右轉接一次。
步驟4所述的生根培養，優選剪取生長健壯，長3cm以上的無菌芽接種至生根培養基上，放在培養室內弱光條件下培養，培養溫度25±2℃，光照強度1000-1500lx，每天光照12-14h，12d后小苗的基部切口處開始膨大長出愈傷組織，繼續培養5d后從愈傷組織處長出細根。
步驟5所述的生根苗移栽，優選生根培養25d后，待小苗的根系基本長齊，將生根瓶苗移至煉苗棚進行煉苗，煉苗時間為10d，經過煉苗的生根苗就可以進行移栽，移栽時將生根苗從培養瓶中取出，用清水洗去小苗根系的培養基，然后將小苗移栽至裝有基質的育苗袋內，移栽基質選用黃心土50％+泥炭土50％，移栽在育苗棚內進行，移栽后要澆透水，用薄膜覆蓋保溫保濕，20d后逐步通風，25d移除薄膜。
與現有技術相比，本發明具有如下優點：
1、本發明首次采用組織培養的方法對黃花風鈴木進行苗木繁殖，該方法比通過播種育苗繁殖更快，可達到規?；a的要求，而且能有效保持母本的優良遺傳性狀，保證了種苗的品質和質量，為黃花風鈴木苗木繁殖提供了新的有效途徑，解決了用播種育苗受種子活力以及季節限制影響的問題。
2、本發明中所用的外植體材料為種子，材料方便易得，容易消毒，萌芽快，只需少量材料就可以快速地獲得無菌材料，應用成本較低。
3、本發明的方法，種仁在初始培養基上可直接誘導獲得無菌苗，用種子誘導的無菌苗經過以芽繁芽增殖培養，無菌芽年繁殖系數達3.012，無菌苗生根率達97.0％，培養10天左右可出根，根系發達，平均出根量有4條，30天可移栽，移栽成活率達95.0％，可達到規?；a的要求。
具體實施方式
下面以實施例對本發明作進一步說明，但本發明并不局限于這些實施例。
實施例1：
(一)培養基的配制：包括基本培養基和各培養階段培養基的組成成分及其每升所含的重量，其中：
1、基本培養基：MS培養基；
2、初始培養培養基：MS+6-BA0.4mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L，瓊脂粉4.2g/L，pH＝5.8；
3、芽分化和增殖培養基：MS+6-BA1.2mg/L+IAA0.3-0.5mg/L+L-半胱氨酸25mg/L+蔗糖30g/L，瓊脂粉4.2g/L，pH＝5.8；
4、生根培養基：1/2MS+IBA0.8mg/L+活性炭0.2g/L+蔗糖20g/L，瓊脂粉4.5g/L，pH＝5.8；
(二)外植體的處理和消毒：以黃花風鈴木種子為外植體，剝去外層種殼，取種仁，在超凈工作臺上以0.1％HgCl2溶液消毒8min，再用無菌水清洗4-5次，瀝干后待用；
(三)初始培養：將消毒好的外植體接種至初代培養基上，暗培養5天，再移至自然光照條件下培養20d，培養溫度為25±2℃，暗培養5天后種子開始萌動，在自然光照條件下繼續培養5天即可長出小苗，20天無菌苗可長至約4cm；
(四)芽的分化和增殖：將步驟2中獲得的無菌苗剪切成長約2cm的帶腋芽節段，接種到芽分化和增殖培養基上，接種時將帶芽節段斜插在培養基上，放在培養室內弱光條件下培養，培養溫度25±2℃，光照強度1000-1500lx，每天光照12-14h，培養20d左右在腋芽處可分化出小芽；待分化出的小芽長到1cm以上時，再將芽叢切下，轉接至新鮮的芽分化和增殖培養基上進行芽的增殖培養，培養溫度25±2℃，光照強度2000-3000lx，每天光照12-14h，每隔30d左右轉接一次；
(五)生根培養：剪取生長健壯，長3cm以上的無菌芽接種至生根培養基上，放在培養室內弱光條件下培養，培養溫度25±2℃，光照強度1000-1500lx，每天光照12-14h，12d后小苗的基部切口處開始膨大長出愈傷組織，繼續培養5d后從愈傷組織處長出細根；
(六)生根苗移栽：生根培養25d后，待小苗的根系基本長齊，將生根瓶苗移至煉苗棚進行煉苗，煉苗時間為10d；經過煉苗的生根苗就可以進行移栽，移栽時將生根苗從培養瓶中取出，用清水洗去小苗根系的培養基，然后將小苗移栽至裝有基質的育苗袋內，移栽基質選用黃心土50％+泥炭土50％，移栽在育苗棚內進行，移栽后要澆透水，用薄膜覆蓋保溫保濕，20d后逐步通風，25d移除薄膜。
實施例2：
(一)培養基的配制：包括基本培養基和各培養階段培養基的組成成分及其每升所含的重量，其中：
1、基本培養基：MS培養基；
2、初始培養培養基：MS+6-BA0.4mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L，瓊脂粉4.2g/L，pH＝5.8；
3、芽分化和增殖培養基：MS+6-BA1.6mg/L+IAA0.3-0.5mg/L+L-半胱氨酸25mg/L+蔗糖30g/L，瓊脂粉4.2g/L，pH＝5.8；
4、生根培養基：1/2MS+IBA1.0mg/L+活性炭0.2g/L+蔗糖20g/L，瓊脂粉4.5g/L，pH＝5.8；
(二)外植體的處理和消毒：以黃花風鈴木種子為外植體，剝去外層種殼，取種仁，在超凈工作臺上以0.1％HgCl2溶液消毒10min，再用無菌水清洗4-5次，瀝干后待用；
(三)初始培養：將消毒好的外植體接種至初代培養基上，暗培養5天，再移至自然光照條件下培養20d，培養溫度為25±2℃，暗培養5天后種子開始萌動，在自然光照條件下繼續培養5天即可長出小苗，20天無菌苗可長至約4cm；
(四)芽的分化和增殖：將步驟2中獲得的無菌苗剪切成長約2cm的帶腋芽節段，接種到芽分化和增殖培養基上，接種時將帶芽節段斜插在培養基上，放在培養室內弱光條件下培養，培養溫度25±2℃，光照強度1000-1500lx，每天光照12-14h，培養20d左右在腋芽處可分化出小芽；待分化出的小芽長到1cm以上時，再將芽叢切下，轉接至新鮮的芽分化和增殖培養基上進行芽的增殖培養，培養溫度25±2℃，光照強度2000-3000lx，每天光照12-14h，每隔30d左右轉接一次；
(五)生根培養：剪取生長健壯，長3cm以上的無菌芽接種至生根培養基上，放在培養室內弱光條件下培養，培養溫度25±2℃，光照強度1000-1500lx，每天光照12-14h，12d后小苗的基部切口處開始膨大長出愈傷組織，繼續培養5d后從愈傷組織處長出細根；
(六)生根苗移栽：生根培養25d后，待小苗的根系基本長齊，將生根瓶苗移至煉苗棚進行煉苗，煉苗時間為10d；經過煉苗的生根苗就可以進行移栽，移栽時將生根苗從培養瓶中取出，用清水洗去小苗根系的培養基，然后將小苗移栽至裝有基質的育苗袋內，移栽基質選用黃心土50％+泥炭土50％，移栽在育苗棚內進行，移栽后要澆透水，用薄膜覆蓋保溫保濕，20d后逐步通風，25d移除薄膜。
通過以上實施例對黃花風鈴木進行組培培養，均能成功地培育出組培苗，無菌繼代苗年繁殖系數達3.012，繼代苗分化芽多，芽健壯，生長整齊，葉色濃綠；無菌苗生根率達97.0％，培養10天左右可出根，根系發達，平均出根量有4條，30天可移栽，移栽成活率達95.0％。該技術比通過播種育苗繁殖更快，可達到規?；a的要求，而且能有效保持母本原有的優良遺傳性狀，保證了種苗的品質和質量。