本發明涉及植物栽培技術領域，具體說是一種黑斑觀音蓮原種制作方法。
背景技術：
黑斑觀音蓮(alocasialaut.'black')屬天南星科海芋屬。引自丹麥，葉羽狀淺裂，葉表面深綠色，背面淺紫紅色彩，葉柄有深紫色斑紋。喜溫暖、潮潤環境，生長適溫30℃左右，在15～20℃的條件下，生長停頓，進入休眠。休眠期間應控制水分，停止施肥。生長季節要求土壤和空氣有較大的濕度，要求非直射光的明亮環境。可用分株、分球繁殖和組織培養(組培)。分株和分球繁殖春季至夏季為適期。
目前，黑斑觀音蓮的組培工藝通常包括：母本——原種制作——初代培養——初代切割與細菌檢測——增殖切割——過渡培養——生根培養——出貨。其中，原種制作是組培工藝中非常關鍵的一步。現有的原種制作方法，芽萌動時間長，真、細菌污染率及死亡率高，成活率低。
技術實現要素：
為了克服上述現有技術的缺陷，本發明所要解決的技術問題是提供一種無真、細菌污染和死亡現象的黑斑觀音蓮原種制作方法。
為了解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為：
一種黑斑觀音蓮原種制作方法，包括：
預處理：將母株置于干燥、通風的環境中，停止澆水、施肥，讓其自然干燥至基質表面以下20～50mm處的土層干燥；
采種：選取長勢壯的母株，將母株整株取出，去除根系及多余葉片，采用頂芽和莖段作為外植體，剝除外植體外面的包片，露出頂芽的芽點，切除莖段基部的雜質；
消毒：用洗潔精對外植體進行表面消毒，然后用無菌水清洗干凈，根據外植體的大小進行分瓶；
再消毒：依外植體的大小用升汞水溶液消毒10～25min，消毒后用無菌水清洗干凈，然后切除外植體兩端變色部分以及四周被腐蝕的部分，使外植體露出新鮮組織再接種到培養基上；
培養：控制培養時的溫度為26±1℃，光照度為300～500lx。
本發明的有益效果在于：區別于現有技術，本發明通過對母本進行預處理后再進行采種，采用頂芽和莖段作為外植體，對外植體進行兩次消毒后再用培養基培養，并優化培養工藝，使芽萌動時間大大縮短至8～13天，徹底消除了真、細菌污染和死亡現象，種苗成活率可達100％。
具體實施方式
為詳細說明本發明的技術內容、所實現目的及效果，以下結合實施方式予以說明。
本發明最關鍵的構思在于：對母本進行預處理后再進行采種，采用頂芽和莖段作為外植體，對外植體進行兩次消毒后再用培養基培養，并優化培養工藝。
具體的，本發明提供的黑斑觀音蓮原種制作方法，包括：
預處理：將母株置于干燥、通風的環境中，停止澆水、施肥，讓其自然干燥至基質表面以下20～50mm處的土層干燥；
采種：選取長勢壯的母株，將母株整株取出，去除根系及多余葉片，采用頂芽和莖段作為外植體，剝除外植體外面的包片，露出頂芽的芽點，切除莖段基部的雜質；
消毒：用洗潔精對外植體進行表面消毒，然后用無菌水清洗干凈，根據外植體的大小進行分瓶；
再消毒：依外植體的大小用升汞水溶液消毒10～25min，消毒后用無菌水清洗干凈，然后切除外植體兩端變色部分以及四周被腐蝕的部分，使外植體露出新鮮組織再接種到培養基上；
培養：控制培養時的溫度為26±1℃，光照度為300～500lx。
其中，所述升汞水溶液的濃度為0.1wt％。
其中，用升汞水溶液消毒10～25min后，用無菌水清洗3次，每次3～5min。
其中，所述培養基中包含有6ba和iaa，6ba的含量為2.0mg/l，iaa的含量為0.3mg/l。
其中，所述培養基中還包含有ams、蔗糖和卡拉膠。
其中，所述培養基的ph值為6.0。
從上述描述可知，本發明的有益效果在于：區別于現有技術，本發明通過對母本進行預處理后再進行采種，采用頂芽和莖段作為外植體，對外植體進行兩次消毒后再用培養基培養，并優化培養工藝，使芽萌動時間大大縮短至8～13天，徹底消除了真、細菌污染和死亡現象，種苗成活率可達100％。
實施例1
1、材料與方法
1.1試驗材料
采用引自丹麥的黑斑觀音蓮作為母本，數量為1盆；經預處理后，選取母株上具有母本特性的輕度萎焉的頂芽和莖段作為外植體。其中，莖段4個，頂芽2個，外植體總數量為6個。
1.2試驗方法
1.2.1試驗步驟
制種前20～30天，將母本搬至母本預處理區，停止澆水、施肥，放置于干凈、干燥、通風的環境(苗床上)，讓其自然干燥。待其基質表面以下20～50mm處的土層干燥、均勻一致(用手捏成散沙狀，不粘手)，植株葉片呈現輕度萎蔫時便可進行采種。選取長勢壯的母株，把母株從盆中整株取出，去除根系及多余葉片再帶回處理，剝除外植體外面的包片，使頂芽露出芽點，芽點四周平滑，切除莖段基部的雜質，讓基部光滑，不出現凹凸不平的現象，外植體呈方形狀。用洗潔精對外植體進行表面消毒，后用無菌水清洗干凈，根據植物的大小進行分瓶，在杯蓋上注明植物代碼及消毒時間；依外植體的大小用濃度為0.1wt％的升汞水溶液消毒10-25min，消毒后用無菌水洗3次(每次3～5min)，然后用刀切除外植體兩端變色部分以及四周被腐蝕的部分，使其露出新鮮組織再接種到培養基上(1個/瓶)。
1.2.2培養基
ph6.0
1.2.3培養條件
26±1℃300～500lx4～5w
1.2.4調查指標
頂芽和莖段側芽萌動時間；真、細菌污染率及死亡率；成活率
2、結果與分析
2.1結果
該品種原種制作采用頂芽和莖段，一共6個外植體，消毒時間為18min的全部為莖段一共4個，成活4個；消毒時間為12min的為頂芽一共2個，成活2個；(其它見下表1)。
表1黑斑觀音蓮原種制作試驗結果數據表
從表1的記載可知，采用本發明的黑斑觀音蓮原種制作方法，芽萌動時間僅需8～13天，總成活率為100％，無真、細菌污染和死亡現象。
以上所述僅為本發明的實施例，并非因此限制本發明的專利范圍，凡是利用本發明說明書內容所作的等同變換，或直接或間接運用在相關的技術領域，均同理包括在本發明的專利保護范圍內。