本發明屬于植物病理學領域，具體涉及紅黃兩色植物病害標本原色保存方法。

背景技術：

紅黃兩色植物病害標本是植物病害標本中的重要組成部分之一。紅黃兩色植物病害標本與綠色標本在保存上有很多的不同，綠色標本是純色，占比例重，研究力度較大，目前技術比較成熟。紅色黃色病害標本基本是果實型標本，完整的一份紅、黃植物病害標本，往往是帶有綠色部分的葉片、果柄、果蒂、果枝等的果實，要做到完整標本的原色保存必須做到多種顏色的同時保存。目前專做紅黃兩色植物病害標本的保存技術研究不多，普遍采用一種保存液直接保存，保色效果不佳，標本色澤與新鮮標本差異過大，容易裂果。有些保色效果稍好的方法，配方里含有甲醛成分，眾所周知，甲醛為有毒有害物質，不利于制作使用者的身體健康。

針對目前植物病理學教學科研領域植物病害標本保存的現實問題，如何設計一種紅黃兩色植物病害標本原色保存方法，可以保存兩種顏色標本，而且簡單易行、安全環保，具有積極的現實意義。

技術實現要素：

本發明的目的旨在提供一種紅黃兩色植物病害標本原色保存方法，保存方法操作簡單、安全環保、紅黃兩色病害標本原形原色保存。

為實現上述目的，本發明紅黃兩色植物病害標本原色保存方法，步驟如下：

1）植物病害標本采集整理滅菌：采集7-8成熟具有單一、典型癥狀，帶有葉片、果柄、果蒂、果枝的紅色黃色果實病害標本，修剪整理好后將完整標本用清水洗凈，放入70%的酒精中浸泡消毒3-4分鐘，用蒸餾水洗凈3-4遍；

2）顏色固定：把消毒清洗好的標本放入固定液中，標本占固定液的空間不超過80%，標本要完全浸沒在固定液中，5-10天后標本綠色部分由綠變黃，逐漸由黃變綠1～2天后，取出用清水漂洗；

3）顏色修復：漂洗好的標本放入70%酒精中浸泡2-3分鐘，取出用蒸餾水洗凈晾干，把標本放入復色液中保存12-15天；

4）原色保存：把標本從復色液中取出，放入滅菌消毒好的標本瓶中，標本按自然狀態排放好，對于中空的標本在果柄處用解剖剪剪開1-2個小洞，然后往標本瓶中注入保存液，液面距瓶口2cm處，保存液浸泡標本過程中進行排氣，排氣1天后再次添加保存液以保持液面距瓶口2cm處，1-2天后在空氣濕度為70%以內的環境條件下用封口液進行封口，把標本放到空氣濕度為70%-80%避光的干凈條件中長期保存。

進一步地，所述固定液由以下原料制成：15～25克硫酸銅、40～60ml乙酸、50～80ml丙三醇、15～20ml亞硫酸，制備方法為將15～25克硫酸銅放入800ml蒸餾水中，攪拌至硫酸銅完全溶解，再加入乙酸、丙三醇和亞硫酸，最后加蒸餾水定容至1000ml即得固定液。

進一步地，所述復色液由以下原料制成：13～16ml亞硫酸、80～100ml丙三醇、4～5克硼酸，制備方法為將4～5克硼酸放入150ml蒸餾水中，攪拌至硼酸完全溶解，再加入亞硫酸和丙三醇，最后加蒸餾水定容至1000ml即得復色液。

進一步地，所述復色液由以下原料制成：13～16ml亞硫酸、80～100ml丙三醇、80～100ml95%酒精，制備方法為將亞硫酸、丙三醇、酒精混合后，最后加蒸餾水定容至1000ml即得復色液。

進一步地，所述保存液由以下原料制成：10～12ml亞硫酸、50～70ml丙三醇ml、4～5克硼酸，制備方法為將4～5克硼酸放入150ml蒸餾水中，攪拌至硼酸完全溶解，再加入亞硫酸和丙三醇，最后加蒸餾水定容至1000ml即得保存液。

進一步地，所述保存液由以下原料制成：10～12ml亞硫酸、50～70ml丙三醇、50～80ml95%酒精，制備方法為：將亞硫酸、丙三醇、酒精混合后，最后加蒸餾水定容至1000ml即得保存液。

本發明的實質性特點和顯著進步是：

本發明的紅黃兩色植物病害標本原色保存方法，獨創顏色固定、顏色修復、原色保存的三個顏色處理步驟，采用一種方法就可以保存兩種顏色標本。原料安全環保，制作方法簡單易行、省時省力、隨采隨制、可批量制作，用于完整標本原形原色保存，保存液清晰透明，在植物病理學教學科研領域的應用具有積極的現實意義。

具體實施方式

下面結合具體實施方式對本發明進行詳細說明。

實施例一：

本發明紅黃兩色植物病害標本原色保存方法，用于黃色枇杷炭疽病的保存，具體步驟為：

1）枇杷炭疽病標本采集整理滅菌。采集成串7-8成熟具單一、典型癥狀的枇杷炭疽標本，除去多余的老葉、其他病果，留下典型癥狀的病果和健康正常的果實。帶有果枝、果柄、果蒂、病果、健康果實的完整標本。修剪整理好后將完整標本用清水清洗干凈，放入70%的酒精中浸泡消毒3-4分鐘，用蒸餾水洗凈3-4遍。

2）顏色固定。把消毒清洗好的枇杷炭疽病標本放入固定液中，標本占固定液的空間不超過80%，標本要完全浸入固定液中。5天后標本綠色部分由綠變黃，逐漸由黃變綠2天后，取出用清水漂洗。

固定液的制備：將15克硫酸銅放入800ml蒸餾水中，攪拌至硫酸銅完全溶解，再加入40ml乙酸、50ml丙三醇和15ml亞硫酸，最后加蒸餾水定容至1000ml即得固定液。

3）顏色修復。漂洗好的標本放入70%酒精中浸泡2-3分鐘，用蒸餾水洗凈取出晾干，把標本放入復色液中保存15天。

復色液的制備：將15ml亞硫酸、100ml丙三醇、95%酒精100ml加入300ml蒸餾水中混合，最后加蒸餾水定容至1000ml攪拌均勻即得復色液。

4）原色保存。把枇杷炭疽病標本從復色液中取出，放入滅菌消毒好的標本瓶中，標本按自然狀態排放好，在果柄附近用解剖剪開1到2個小洞，然后往標本瓶中注入保存液，液面距瓶口2cm處，標本中不可避免含有氣體，在保存液浸泡標本過程中進行排氣，排氣1天后再次添加保存液以保持液面距瓶口2cm處。2天后在空氣濕度為70%以內的環境條件下用封口劑進行封口，封口劑的配方為蜂蠟、凡士林各1份。最后，把標本放到濕度為70%至80%避光的干凈條件中長期保存。

保存液的制備：將10ml亞硫酸、70ml丙三醇、95%酒精60ml加入300ml蒸餾水中混合，最后加蒸餾水定容至1000ml攪拌均勻即得保存液。

實施例二：

本發明紅黃兩色植物病害標本原色保存方法，用于紅色番茄晚疫病的保存，具體步驟為：

1）番茄晚疫病標本采集整理滅菌。采集成串7-8成熟具單一、典型癥狀的番茄晚疫病，除去多余的老葉、其他病果，留下典型癥狀的病果和健康正常的果實。帶有葉片、果枝、果柄、果蒂、病果、健康果實的完整標本。修剪整理好后將完整標本用清水清洗干凈，放入70%的酒精中浸泡消毒3-4分鐘，用蒸餾水洗凈3-4遍。

2）顏色固定。把消毒清洗好的番茄晚疫病標本放入固定液中，標本占固定液的空間不超過80%，標本要完全浸入固定液中。6天后標本綠色部分由綠變黃，逐漸由黃變綠2天后，取出用清水漂洗。

固定液的制備：將20克硫酸銅放入800ml蒸餾水中，攪拌至硫酸銅完全溶解，再加入50ml乙酸、65ml丙三醇和15ml亞硫酸，最后加蒸餾水定容至1000ml即得固定液。

3）顏色修復。漂洗好的標本放入70%酒精中浸泡2-3分鐘，用蒸餾水洗凈取出晾干，把標本放入復色液中保存15天。

復色液的制備：將15ml亞硫酸、100ml丙三醇、95%酒精100ml加入300ml蒸餾水中混合，最后加蒸餾水定容至1000ml攪拌均勻即得復色液。

4）原色保存。把番茄晚疫病標本從復色液中取出，放入滅菌消毒好的標本瓶中，標本按自然狀態排放好，然后往標本瓶中注入保存液，液面距瓶口2cm處，標本中不可避免含有氣體，在保存液浸泡標本過程中進行排氣，排氣1天后再次添加保存液以保持液面距瓶口2cm處。2天后在空氣濕度為70%以內的環境條件下用封口劑進行封口，封口劑的配方為蜂蠟、凡士林各1份。最后，把標本放到濕度為70%至80%避光的干凈條件中長期保存。

保存液的制備：將10ml亞硫酸、70ml丙三醇、95%酒精60ml加入300ml蒸餾水中混合，最后加蒸餾水定容至1000ml攪拌均勻即得保存液。

實施例三：

本發明紅黃兩色植物病害標本原色保存方法，用于紅色和黃色甜椒炭疽病的保存，具體步驟為：

1）甜椒炭疽病標本采集整理滅菌。分別采集7-8成熟具單一、典型癥狀的紅色和黃色甜椒炭疽病病果，選出典型癥狀的病果和健康正常的果實，帶有葉片、果柄、果蒂、病果、健康果實的完整標本。修剪整理好后將完整標本用清水清洗干凈，放入70%的酒精中浸泡消毒3-4分鐘，用蒸餾水洗凈3-4遍。

2）顏色固定。把消毒清洗好的甜椒炭疽病標本放入固定液中，標本占固定液的空間不超過80%，標本要完全浸入固定液中。5天后標本綠色部分由綠變黃，逐漸由黃變綠2天后，取出用清水漂洗。

固定液的制備：將25克硫酸銅放入800ml蒸餾水中，攪拌至硫酸銅完全溶解，再加入60ml乙酸、80ml丙三醇和20ml亞硫酸，最后加蒸餾水定容至1000ml即得固定液。

3）顏色修復。漂洗好的標本放入70%酒精中浸泡2-3分鐘，用蒸餾水洗凈取出晾干，把標本放入復色液中保存15天。

復色液的制備：將5克硼酸放入150ml蒸餾水中，攪拌至硼酸完全溶解，再加入15ml亞硫酸和100ml丙三醇，最后加蒸餾水定容至1000ml即得復色液。

4）原色保存。把紅色和黃色甜椒炭疽病標本從復色液中取出，同時放入滅菌消毒好的標本瓶中，標本按自然狀態排放好，然后往標本瓶中注入保存液，液面距瓶口2cm處，標本中不可避免含有氣體，在保存液浸泡標本過程中進行排氣，排氣1天后再次添加保存液以保持液面距瓶口2cm處。2天后在空氣濕度為70%以內的環境條件下用封口劑進行封口，封口劑的配方為蜂蠟、凡士林各1份。最后，把標本放到濕度為70%至80%避光的干凈條件中長期保存。

保存液的制備：將4克硼酸放入150ml蒸餾水中，攪拌至硼酸完全溶解，再加入10ml亞硫酸和70ml丙三醇，最后加蒸餾水定容至1000ml即得保存液。

以上詳細描述了本發明的較佳具體實施例。應當理解，本領域的普通技術無需創造性勞動就可以根據本發明的構思做出諸多修改和變化。因此，凡本技術領域中技術人員依本發明的構思在現有技術的基礎上通過邏輯分析、推理或者有限的實驗可以得到的技術方案，皆應在由權利要求書所確定的保護范圍內。