本申請是申請日為2012年1月5日的題為“包含加強抗真菌活性的精油的控制植物病害的組合物”的中國專利申請no.201280010641.4的分案申請。本發明涉及具有殺真菌特性的控制植物病害(phytosanitary)的組合物，該組合物包含從植物中獲得的精油和具有已知的殺真菌特性的藥劑，如堿金屬或碳酸氫銨、或基于銅或銅鹽的化合物的混合物，主要用于在栽培植物和收獲后的抗真菌感染的接觸保護中、以及在其它抗真菌中的應用。在這些組合物中由所提及的精油來協同地增強了具有已知的殺真菌特性的藥劑的效果。本發明還涉及將這些精油用作具有已知的殺真菌特性的藥劑的增強劑。
背景技術：
：精油是天然分子的復雜的混合物，其基本是從植物中獲得。它們是次級代謝產物，通常通過使用有機溶劑提取和隨后的濃縮、或通過使用蒸汽隨后通過分離水-不溶解相的物理處理來獲得它們。通常它們是可溶于有機溶劑的揮發性液體并且具有低于水的密度。在自然界中它們可以在不同的植物器官尤其是如種子、葉片、花、表皮細胞和果實中合成，并且它們在保護植物抗細菌、病毒或真菌感染中起重要作用。已知許多植物精油的殺真菌和殺細菌作用，在某些情況下已經達到市場商業化。在這些之中是荷荷巴油(希蒙德木油，jojobaoil)(希蒙德木(simmondsiacalifornica))、迷迭香油(迷迭香(rosemarinusofficianalis))、百里香油(百里香(t.vulgaris))、印度楝樹油(印度楝(a.indica))的澄清的疏水提取物、棉籽油(陸地棉(gossypiumhirsutum))以及大蒜提取物(dayan,f.e.etal."naturalproductsincropprotection".bioorg.andmed.chem.17(2009),4022-4034)。在提取的物質中，精油的化學成分不僅在數量方面不同而且在質量和分子的立體化學類型方面也不同。提取產品可以根據氣候、土壤的成分、用于提取的植物器官、和植物的年齡及生長階段變化。提取產品也取決于所使用的提取方法。此外，從現有技術中(美國專利us5346704)也已知將無機鹽如堿金屬主要是鋰、鈉或鉀的碳酸氫鹽、以及碳酸氫銨用作殺真菌藥劑。使用這些無機鹽，尤其是包含碳酸氫根陰離子的那些，對人類健康或對環境并不引起任何風險?；阢~或其鹽的產品的殺真菌性質也是已知的，并且在農業中已經廣泛應用了這些性質。在1761年發現了這些溶液抑制真菌在種子上的生長。此后在熟知的制劑如波爾多液中已經使用了銅基殺真菌劑(copperasabiocidaltool.gadiborkowandjeffreygavia.currentmedicinalchemistry,volume12:2163-2175)。由于它們的天然來源，植物精油對于在農業中的應用(為了獲得健康和無害的產品)是非常吸引人的，因此對于精油，消費者和規章制定者的要求均越來越嚴格。因此需要找到具有抗真菌特性的新的控制植物病害(phytosanitary)組合物來保護農作物，包括在收獲后期間，其具有最小的次級毒性效應(二級毒性效應，secondarytoxiceffects)并且對人類和環境是無害的。技術實現要素：本申請人出乎意料地發現當從植物中獲得的一些精油與具有已知的抗真菌特性的其它產品(如無機鹽，例如堿金屬或者碳酸氫銨，和基于銅或其鹽的抗真菌的產品)混合時增強了這些化合物的抗真菌特性。因此本發明的一個目標是提供具有抗真菌特性的控制植物病害的(phytosanitary)組合物，包含：1)從植物中獲得一種或多種精油，以及2)具有已知的殺真菌特性的一種或多種藥劑。該組合物協同地提高具有已知的抗真菌活性的藥劑的抗真菌特性，并且該組合物具有最小的次級毒性效應并且對人類和環境無害?？梢栽谵r業中應用根據本發明的組合物以保護從萌芽至收獲階段的農作物，并且可以在這些農作物、種子、花卉或谷物的存儲和運輸中使用。同樣地另一種可能的應用是在消除攻擊涂漆表面的真菌方面以及在屋內和在任何其它應用中保護地毯和織物抵御真菌通過接觸來感染。具體實施方式在精油類之中，可以在根據本發明的控制植物病害的組合物中使用的精油是百里香油(百里香(thymusvulgaris))、牛至油(牛至(origanumvulgaris))、丁香油(丁香(syzygiumaromaticum))、肉豆蔻油(肉豆蔻(myristicafragrans))、肉桂油(錫蘭肉桂(cinnamomumzeylanicum))、月桂油(月桂(laurusnobilis))、橙油(甜橙(citrusxsinensis))、薄荷油(胡椒薄荷(menthaxpiperita))、纈草油(歐纈草(valerianaofficinalis))、香茅油(亞香茅(cymbopogonnardos))、薰衣草油(狹葉薰衣草(lavandaangustifolia))、荷荷巴油(希蒙德木(simmondsiacalifornica))、迷迭香油(迷迭香(rosemarinusofficianalis))、印度楝樹油(印度楝(azadirachtaindica))、棉籽油(陸地棉(gossypiumhirsutum))、或它們的混合物。尤其是在沒有受限于任何理論的情況下，從植物中獲得的精油在增強抗真菌活性方面的特性可能是由于這些精油中存在的一些化合物具有已知的活性。因此在本發明的一個實施方式中該控制植物病害的組合物可以包含從根據本發明的精油中分離的活性化合物的混合物，如苯酚的單萜類如香芹酚和百里香酚、烯丙基苯類如丁香酚、單取代的苯酚類如反式-肉桂醛、環狀單萜類如檸檬烯、雙環單萜類如樟腦萜和直鏈萜類如橙花醇、任一它們的家族成員和它們的混合物，以及具有已知的殺真菌特性的藥劑。由于它們包含的不同活性成分的復雜的混合物，精油的作用機制是多重作用機制。然而已經描述了在這些油類的某些中主要成分的作用特性。在文獻中描述最好的是香芹酚在細菌與酵母細胞的生長上的作用特性(thephenolichydroxylgroupofcarvacrolisessentialforactionagainstthefood-bornepathogenbacilluscereus.a.ulteeetal.,appliedandenvironmentalmicrobiology,april2002,1561-1568)。根據這些研究，當香芹酚被質子化(在酸性介質中)后它能夠穿過細胞膜并且在到達細胞質時釋放質子，導致細胞的酸化。這種作用方式并不排除作用的其它可能的模式如增加細胞膜的滲透性或在催化過程時的特異性抑制效應。在具有已知的殺真菌特性的藥劑之中，在根據本發明組合物中可以使用的藥劑是堿金屬(優選地是鋰、鈉或鉀)的碳酸鹽或碳酸氫鹽、碳酸銨或碳酸氫銨和基于銅或其鹽的殺真菌藥劑或它們的混合物。具有已知殺真菌特性的藥劑更優選的是碳酸氫鉀。存在于根據本發明的組合物中的精油的量在總組合物的按重量計從0.01％至99.99％的范圍內。同樣，在根據本發明的組合物中具有已知的殺真菌特性的藥劑的量可以在總組合物的按重量計99.99％至0.01％之間變化。通過本領域中已知的任何混合方法通過將一種或多種精油與具有殺真菌特性的藥劑混合來制備根據本發明的組合物。在室溫下通常精油是液體，因此該組合物將通常為液體的形式。然而，組合物也可以為液體形式或固體形式，如懸浮液、分散液、乳液、噴霧劑、微膠囊或任何其它類型的混合物，其隨著時間推移而保持穩定或者可以將其合并入聚合物、蠟或任何其它類似的載體中。此外，可以使用根據本發明的控制植物病害的組合物其自身，或者可以用于與本領域中使用的不同的添加劑一起配制控制植物病害的產品，該添加劑提供不同的特性，如表面活化劑、聚合物、堿化劑和ph-控制劑、尤其是配制在農業生產中使用產品中使用的許多其它添加劑。根據本發明的控制植物病害的組合物落入接觸式控制植物病害的藥劑的組中，即抗真菌疾病的保護形式是通過接觸，組合物殘留在植物或水果的不同部位的表面上，外部地保護它抵抗真菌的外部侵襲。作為液體、粉末或微膠囊，可以通過本領域中已知的任何應用方法，如噴霧法應用根據本發明的控制植物病害的組合物。根據本發明的殺真菌組合物可以進一步包含肥料，其可以選自包括含有氮和/或磷的化合物如尿素、三聚氰胺、六亞甲基四胺(hexamine)、二氰二胺、三聚氰酸二酰胺(ameline)、三聚氰酸(cyanuricacid)、三聚氰胺硝酸鹽、亞磷酸三乙酯等或它們的混合物的組。根據本發明的組合物還可以包含在農業中使用的具有化學活性和/或生物學活性的任何化合物或產品，如除草劑、殺蟲劑、植物生長調節劑等、或它們的混合物。參考各種實施例在下文中更加詳細的描述本發明。然而，這些實施例并不意在限制本發明的技術范圍。實施例實施例1(比較性的)。僅由khco3抑制真菌灰葡萄孢菌(葡萄灰霉菌，botrytiscinerea)的生長。在具有不同濃度的khco3的pdb(馬鈴薯右旋糖肉湯)培養基中培養真菌灰葡萄孢菌(botrytiscinerea)并且％抑制表示與在測試中沒有化合物的對照相比其生長被阻止的程度，在本案例中確定的是khco3。以下列方式計算％抑制：％抑制＝[(od對照–odx)/od對照]x100其中od對照是對照培養物(沒有檢測化合物)的吸光度而odx是具有檢測物質的培養物的吸光度。在開始培養的24小時后測量液體培養物的吸光度。獲得了以下結果(表i)：表i.由khco3抑制真菌灰葡萄孢菌(b.cinerea)的生長khco3濃度(mm)01015202530抑制(％)±sd034.2±6.737.0±11.338.8±6.839.7±0.746.9±2.7如從上表將會看出的，關于灰葡萄孢菌(b.cinerea)培養物的抑制，使用10mm至25mm之間的khco3濃度獲得了相似的結果。然而，在30mm時獲得了較大的抑制。實施例2.(比較性的)。僅由香芹酚來抑制真菌灰葡萄孢菌(botrytiscinerea)的生長。以與實施例1相似的方式培養真菌灰葡萄孢菌(b.cinerea)，區別是不同濃度的香芹酚，在培養基中使用從牛至的精油中分離的化合物。測量培養物的24小時吸光度并且在表ii中示出結果。表ii.由香芹酚抑制灰葡萄孢菌(b.cinerea)的生長香芹酚濃度(ppm)0.10.3113.11031100抑制(％)±sd010.5±7.713.7±4.122.4±3.421.3±5.051.4±5.574.4±1.1實施例3.由根據本發明的組合物(香芹酚+khco3)來抑制真菌灰葡萄孢菌(botrytiscinerea)的生長。以與實施例1相似的方式培養真菌灰葡萄孢菌(b.cinerea)，區別是在培養基中使用了不同濃度的香芹酚，并且對于所有的培養物使用固定含量的khco3(30mm)。在24小時時測量培養物的吸光度并且在表iii中示出結果。表iii.由根據本發明的組合物(香芹酚+khco3)抑制灰葡萄孢菌(b.cinerea)的生長khco3濃度(mm)30303030303030香芹酚濃度(ppm)0.10.3113.11031100抑制(％)±sd86.1±2.284.2±3.648.9±3.052.7±2.682.5±3.786.5±1.391.1±1.1如將會看出的，低至0.1ppm的香芹酚濃度(其單獨抑制效果是零(參見實施例2))有效地加倍了khco3的抑制能力，達到了甚至使用對植物有毒的khco3濃度水平所不能獲得的抑制。實施例4.氧氯化銅單獨對真菌鏈格孢菌(alternariaalternata)的抑制效應。與實施例1相似的方式培養鏈格孢菌(alternariaalternata)，區別是在培養基中使用了不同濃度的在農業中廣泛使用的銅基殺真菌劑氧氯化銅。測量培養物的24小時吸光度并且在表iv中示出結果。表iv.由氧氯化銅抑制鏈格孢菌(a.alternata)氧氯化銅濃度(ppm)0.10.515101520抑制(％)±sd3.1±6.40.0±6.79.9±0.910.0±8.423.1±4.737.4±3.661.3±6.7實施例5.僅由香芹酚抑制真菌鏈格孢菌(alternariaalternata)。以與實施例2相似的方式培養鏈格孢菌(alternariaalternata)。測量培養物的24小時吸光度并且在表v中示出結果。表v.通過香芹酚抑制鏈格孢菌香芹酚濃度(ppm)10311003101000抑制(％±sd)17.7±1127.2±1474.6±897.2±793.0±6.0實施例6.由根據本發明的組合物(香芹酚+氧氯化銅)抑制真菌鏈格孢菌(alternariaalternata)。以與實施例4相似的方式培養真菌鏈格孢菌(alternariaalternata)，區別是在培養基中使用不同濃度的香芹酚，并且始終使用固定含量的氧氯化銅(5ppm)。測量培養物的24小時吸光度并且在表vi中示出結果。表vi.由根據本發明的組合物(香芹酚+氧氯化銅)抑制鏈格孢菌(a.alternata)氧氯化銅濃度(ppm)55555香芹酚濃度(ppm)13.11031100抑制(％)±sd1.4±1326.0±1234.7±1453.2±1285.7±3.6如將會看出的，35ppm的香芹酚濃度和5ppm的氧氯化銅抑制鏈格孢菌(a.alternata)的生長高于50％，然而在那個濃度下單獨的香芹酚提供27％的抑制而氧氯化銅僅提供10％。實施例7.僅由khco3抑制真菌指狀青霉菌(penicilliumdigitatum)。以與實施例1相似的方式培養真菌指狀青霉菌(penicilliumdigitatum)。測量培養物的24小時吸光度并且在表vii中示出結果。表vii.由khco3抑制指狀青霉菌(p.digitatum)khco3濃度(mm)1020304050抑制(％±sd)19.4±2.919.1±1019.6±8.919.8±2.221.9±6.6如將會看出的，對于不同的khco3濃度獲得了相同的抑制程度。實施例8.僅由百里香酚來抑制真菌指狀青霉菌(penicilliumdigitatum)。以與實施例1相似的方式培養真菌指狀青霉菌(p.digitatum)，區別是在培養基中使用了不同濃度的從百里香油中分離的化合物百里香酚。測量培養物的24小時吸光度并且在表viii中示出結果。表viii.僅由百里香酚來抑制指狀青霉菌(p.digitatum)實施例9.由根據本發明的組合物(khco3+百里香酚)來抑制真菌指狀青霉菌(penicilliumdigitatum)。以與實施例7相似的方式培養真菌指狀青霉菌(p.digitatum)，區別是在培養基中使用不同濃度的百里香酚，并且始終使用固定濃度的khco3(30mm)。測量培養物的24小時吸光度并且在表ix中示出結果。表ix.由根據本發明的組合物(khco3+百里香酚)來抑制指狀青霉菌(p.digitatum)khco3濃度(mm)303030303030百里香酚濃度(ppm)0.3113.11031100抑制(％)±sd58.0±2.162.9±8.447.1±3.756.4±3.775.5±1.992.6±1.6將會看出通過將百里香酚添加至khco3如何改善結果。使用31ppm的百里香酚僅實現50％的抑制，并且使用30mm的khco3實現了20％的抑制。然而，當兩種化合物組合時，真菌指狀青霉菌(p.digitatum)的生長抑制提高至約75％。當前第1頁12