本發明涉及一種糞便菌群移植技術及其在仔豬養殖中的應用。
背景技術：
：仔豬消化系統和免疫系統發育不完善，容易因營養因素、環境應激、感染細菌病毒等引發腹瀉。仔豬腹瀉無論在散養戶，還是規模化、集約化養豬場均普遍存在。腹瀉可導致仔豬生長緩慢、體質變弱，甚至死亡，給豬場造成嚴重的經濟損失。目前針對仔豬腹瀉的治療方法主要是使用抗生素，但長期使用抗生素容易產生耐藥性，造成病程延長，治療費用增加，導致其他并發癥等。動物的胃腸道中棲居著大量微生物，其數量高達10萬億個，1000多種。在長期進化過程中，腸道菌群與宿主形成了互惠共生的關系，它不僅隨宿主生長而變化，還影響宿主健康。腸道菌群憑借其強大的代謝和調控能力，又被稱為“超級生物體”。當腸道菌群紊亂時，不僅會使胃腸道機能受損，也會影響動物機體各方面功能。作為機體不可或缺的一部分，腸道菌群被認為更像是宿主的一個重要器官。大量研究表明，動物腹瀉時，腸道菌群失調，有益菌急劇降低，有害菌急劇增多。且抗生素可造成腸道菌群嚴重失調，導致腹瀉治愈率降低。糞便菌群移植是將健康個體糞便中的功能菌群，移植到受體胃腸道內，重建具有正常功能的菌群，達到治療疾病的目的。國內外研究表明糞便菌群移植對難辨梭狀芽孢桿菌感染、潰瘍性結腸炎、克羅恩病等，有明顯療效。糞菌移植在治療人類患者腸道疾病時，糞便主要采集于健康親屬或無血緣關系的健康者，是在同種人不同個體之間進行糞菌移植。目前，還未見運用糞便菌群移植方法用于仔豬養殖的報道。技術實現要素：本發明要解決的技術問題是提供一種糞便菌群移植技術及其在仔豬養殖中的應用。為了解決上述技術問題，本發明提供一種糞便菌群移植方法，包括以下步驟：1)、糞便的采集及篩選條件：采集豬的新鮮糞便(備用)，被采集新鮮糞便的豬需同時滿足以下兩個條件：a)、至采集日為止的2-3個月內沒有發生腹瀉且沒有使用抗生素；b)、采集日經糞便檢測無以下疾病的病原：豬瘟、豬圓環病毒2型感染、藍耳病、偽狂犬、豬丹毒、豬支原體肺炎、口蹄疫等；2)、糞菌懸液的制備：先將無菌生理鹽水與甘油混合，得甘油水混液；所述甘油水混液中甘油的體積濃度為8％～15％；然后按照1g:10～50ml的料液比，將所采集的新鮮糞便加入甘油水混液中，均勻攪拌后形成懸浮液，所述懸浮液靜置0.5～5min，取上清，所述上清為糞菌懸液；將糞菌懸液直接用于下述步驟3)，或者將糞菌懸液分裝于無菌離心管，-80℃保存；3)、糞便菌群移植：將新鮮配制的糞菌懸液或者解凍后的凍存糞菌懸液對三元或二元雜交受體仔豬進行糞便菌群移植；所述糞便菌群移植方式為：口灌服、灌腸、或者借助鼻胃管、內窺鏡等插入上消化道。灌服時，一般為新生仔豬于1～20天(例如為1～12d、1～15d、7～20d)隔天灌服1～3ml的糞菌懸液。生理鹽水即0.85％(質量％)的氯化鈉水溶液。凍存時間至少為1個月，一般為半年。作為本發明的糞便菌群移植方法的改進：豬的品種為金華豬、藏豬、香豬、梅山豬。本發明還同時提供了上述糞便菌群移植方法的用途：用于仔豬養殖，改善仔豬腸道形態，降低腹瀉，緩解斷奶應激，從而提高其生長性能。本發明可通過調節和恢復受體仔豬腸道菌群結構和多樣性，改善腸道形態，提高仔豬對疾病的抵抗力，減少仔豬腹瀉，降低斷奶、氣候變化等應激，從而提高其生長性能。在本發明中，供體糞菌是采集于我國的本地豬種，而受體則是不同品種的外三元仔豬，用于改善其腸道功能，提高抵抗各種應激能力(尤其是抗斷奶應激)和抗病力，從而提高生長性能，養殖過程中可減少抗生素等藥物使用，提高畜產品安全性。本發明具有如下技術優勢：1.本發明使用的糞菌來源于我國地方豬種，容易取得，成本低，且制備后可凍存于超低溫冰箱長期使用。2.糞菌移植操作簡便，可在仔豬階段多次使用，從而減少飼用或治療用抗生素的使用。3.糞菌移植無毒副作用，使用后可使仔豬皮毛光滑，生長狀況改善。4.金華豬、梅山豬、藏豬、香豬等為我國優良地方豬種，具有抗病力強、耐粗飼、適應性強、肉品質好、繁殖率高等特點，是糞菌移植的優選供體。5.受體豬可以為任何品種的仔豬或生長豬。綜上所述，本發明主要采用經嚴格篩選的我國健康地方豬種的新鮮糞便，經分離、制備，得到糞菌懸液，進行菌群移植，可調節和恢復受體仔豬腸道菌群結構和多樣性，改善腸道形態，提高仔豬對疾病的抵抗力，減少仔豬腹瀉，降低斷奶、氣候變化等應激，從而提高其生長性能。附圖說明下面結合附圖對本發明的具體實施方式作進一步詳細說明。圖1是實施例2對照組(未接受糞菌移植仔豬)空腸絨毛掃描電鏡圖。圖2是實施例2試驗組(接受糞菌移植仔豬)空腸絨毛掃描電鏡圖。具體實施方式下面結合具體實施例對本發明進行進一步描述。實施例1、一種糞便菌群移植方法，依次進行以下步驟：1)、糞便的采集與篩選條件：采集我國地方豬種金華豬的新鮮糞便備用，對供體豬的篩選條件為：(1)至采集日為止的2-3個月內未發生腹瀉且未使用抗生素(任何抗生素)。(2)采集日經糞便檢測無豬瘟、豬圓環病毒2型感染、藍耳病、偽狂犬、豬丹毒、豬支原體肺炎、口蹄疫等疾病的病原。2)、糞菌懸液的制備(1)先將無菌生理鹽水與甘油混合，得甘油水混液；該甘油水混液中甘油的體積濃度為8％；取步驟1)所得的新鮮糞便，以1g:10ml加入甘油水混液均勻攪拌后形成懸浮液，懸浮液靜置0.5min，取上清，該上清為糞菌懸液；(2)取糞菌懸液分裝于無菌離心管。3)、糞便菌群的移植將新鮮制備的糞菌懸液，通過經口灌服方法，對受體仔豬進行糞便菌群移植。選擇胎次相同且同日出生的“長×大”二元雜交新生仔豬12窩，隨機分成2組(每組6窩)。試驗組新生仔豬分別于1～12d隔天灌服1ml的金華豬糞便菌懸液，對照組灌服等量無菌生理鹽水，飼養管理按常規進行，試驗期20天(斷奶前一天)。試驗結束后，分別從各組隨機選取6頭(每窩1頭)，共12頭豬進行屠宰試驗。屠宰前自由飲水，禁食12h，宰前稱重。飼養試驗結果表明：與對照組相比，試驗組仔豬平均日增重提高11.9％(p<0.05)，腹瀉率降低46.9％(p<0.05)，絨毛高度/隱窩深度比值提高8.2％(p<0.05)。實施例2、一種糞便菌群移植方法，依次進行以下步驟：1)、糞便的采集與篩選條件：采集我國地方豬種廣西香豬新鮮糞便備用，對供體豬的篩選條件為：(1)至采集日為止的2-3個月內未發生腹瀉且未使用抗生素(任何抗生素)。(2)采集日經糞便檢測無豬瘟、豬圓環病毒2型感染、藍耳病、偽狂犬、豬丹毒、豬支原體肺炎、口蹄疫等疾病的病原。2)、糞菌懸液的制備(1)先將無菌生理鹽水與甘油混合，得甘油水混液；該甘油水混液中甘油的體積濃度為10％；取步驟1)所得的新鮮糞便，以1g:30ml加入甘油水混液均勻攪拌后形成懸浮液，懸浮液靜置3min，取上清，該上清為糞菌懸液；(2)取糞菌懸液分裝于無菌離心管，-80℃保存。3.糞便菌群的移植將凍存1月的糞菌懸液經解凍至常溫，通過經口灌服方法，對受體仔豬進行糞便菌群移植。相同且同日出生的“杜×長×加”三元雜交新生仔豬12窩，隨機分成2組(每組6個重復)。試驗組新生仔豬分別于1～15d隔天灌服2ml的廣西香豬糞便菌懸液，對照組灌服等量無菌生理鹽水，飼養管理按常規進行，試驗期27天(斷奶前一天)。試驗結束后，分別從各組隨機選取6頭(每個重復1頭)，共12頭豬進行屠宰試驗。屠宰前自由飲水，禁食12h，宰前稱重。飼養試驗結果表明：與對照組相比，試驗組仔豬日增重均提高14.5％(p<0.05)，腹瀉率降低56.2％(p<0.05)，絨毛高度/隱窩深度比值提高12.0％(p<0.05)，從圖1、圖2掃描電鏡圖可看出，糞菌移植顯著改善了受體仔豬腸絨毛形態。實施例3、一種糞便菌群移植方法，依次進行以下步驟：1)、糞便的采集與篩選條件：采集我國地方豬種西藏藏豬新鮮糞便備用，對供體豬的篩選條件為：(1)至采集日為止的2-3個月內未發生腹瀉且未使用抗生素(任何抗生素)。(2)采集日經糞便檢測無豬瘟、豬圓環病毒2型感染、藍耳病、偽狂犬、豬丹毒、豬支原體肺炎、口蹄疫等疾病的病原。2)、糞菌懸液的制備(1)先將無菌生理鹽水與甘油混合，得甘油水混液；該甘油水混液中甘油的體積濃度為15％；取步驟1)所得的新鮮糞便，以1g:50ml加入甘油水混液均勻攪拌后形成懸浮液，懸浮液靜置5min，取上清，該上清為糞菌懸液；(2)取糞菌懸液分裝于無菌離心管，-80℃保存。3)、糞便菌群的移植：將凍存半年的糞菌懸液經解凍至常溫，通過經口灌服方法，對受體仔豬進行糞便菌群移植。選擇胎次相同且同日出生的“杜×長×大”三元雜交新生仔豬12窩，隨機分成2組(每組6個重復)。試驗組新生仔豬分別于7～20d隔天灌服3ml的西藏藏豬糞便菌懸液，對照組灌服等量無菌生理鹽水，飼養管理按常規進行，試驗期27天(斷奶前一天)。糞菌移植結束后，分別從各組隨機選取6頭(每個重復1頭)，共12頭豬進行屠宰試驗。屠宰前自由飲水，禁食12h，宰前稱重。飼養試驗結果表明：與對照組相比，試驗組仔豬日增重均提高9.9％(p<0.05)，腹瀉率降低34.4％(p<0.05)，絨毛高度/隱窩深度比值提高8.5％(p<0.05)。對比例1-1，將實施例1中的“甘油體積濃度為8％的甘油水混液”改成“無菌生理鹽水”，即取消10％甘油的使用；其余等同于實施例1。對比例1-2，將實施例1中的“甘油體積濃度為8％的甘油水混液”改成“甘油體積濃度為20％的甘油水混液”，其余等同于實施例1。對比例1-3，將實施例1中的“甘油水混液”改成“人類糞菌提取制備時用的磷酸鹽緩沖液”，其余等同于實施例1。對比例1-1～對比例1-3相對于對照組的實驗結果如下表1所示：表1對比例2，將實施例2中的“無菌生理鹽水”改成“蒸餾水”，其余等同于實施例2。其相對于對照組的實驗結果如下表2所示：表2日增重增加腹瀉率下降絨毛高度/隱窩深度比值提高實施例214.5％56.2％12.0％對比例22.2％3.9％4.6％對比例3，將實施例3中的“懸浮液靜置5min”改成“懸浮液靜置10min”，其余等同于實施例3。其相對于對照組的實驗結果如下表3所示：表3日增重增加腹瀉率下降絨毛高度/隱窩深度比值提高實施例39.9％34.4％8.5％對比例34.5％3.2％4.9％對比例4，將實施例2中的“以1g:30ml加入甘油水混液均勻攪拌后形成懸浮液”改成“以1g:100ml加入甘油水混液均勻攪拌后形成懸浮液”，其余等同于實施例2。其相對于對照組的實驗結果如下表4所示：表4日增重增加腹瀉率下降絨毛高度/隱窩深度比值提高實施例214.5％56.2％12.0％對比例45.1％4.3％3.9％最后，還需要注意的是，以上列舉的僅是本發明的若干個具體實施例。顯然，本發明不限于以上實施例，還可以有許多變形。本領域的普通技術人員能從本發明公開的內容直接導出或聯想到的所有變形，均應認為是本發明的保護范圍。當前第1頁12