專利名稱：由林蛙肌肉制備氨基酸多肽復合液的方法
技術領域：
本發明涉及在特定酶解條件下生物酶水解林蛙肌肉蛋白的生物化學方法。
背景技術：
林蛙是集食、藥、補為一體的珍品，林蛙油具有明顯的潤肺滋陰、補腎益精、補腦益智等功能，是男女皆宜的保健品，在國內外市場一直走俏。但由于技術條件等原因，除了林蛙油以外的林蛙部分一直沒有被利用，特別是占林蛙體重60％的軀干及四肢肌肉和骨骼是非常有價值的深加工的原料。干林蛙肌肉種含蛋白質43％左右，極具有開發前景。目前生產中多采用酸、堿水解動物蛋白，反應中需加入強酸(硫酸、鹽酸)和強堿(氫氧化鈉)，又采用陽離子交換樹脂及活性炭脫色等工藝，不僅生產過程復雜，而且設備必須耐酸、堿的腐蝕。同時在與酸、堿的反應過程中，部分有效成分(如色氨酸)被破壞。由于采用強酸、強堿，必須進行三廢處理，這不僅給工藝上也給經濟上帶來不利的因素。
本發明的目的在于提供一種由林蛙肌肉獲得氨基酸多肽復合液的方法。它采用東北林蛙肌肉(含骨)為材料，經過特定條件下的生物酶酶解而成。其生產方法簡單，工藝穩定，生產周期短，成本低、沒有三廢產生，適合于工業規模生產。制得的產品既含有豐富的氨基酸多肽成分和鈣，極易于人體吸收，并可促進人體生長發育。
發明內容
本發明是以酶解林蛙肌肉蛋白制取氨基酸多肽復合液的方法，其特征在于采用動物蛋白水解酶在下述條件下酶解a.酶量∶林蛙肌肉量＝1∶100～400(重量比)(酶的活力以60萬單位/克計)b.林蛙肌肉量∶水量＝1∶2.0～6.0(重量比)c.酶解溫度40～80℃d.酶解時間1～5小時e.酶解時反應液pH＝5～9其酶解的最佳條件是a.酶量∶林蛙肌肉量＝1∶100(重量比)(酶的活力以60萬單位/克計)b.林蛙肌肉量∶水量＝1∶3.00(重量比)c.酶解溫度60℃d.酶解時間3小時e.酶解時反應液pH＝5.0在反應過程中，動物蛋白水解酶酶解林蛙肌肉蛋白是主要反應部分，所以必須注意控制酶解反應的條件1.酶的用量加入的酶的數量直接影響酶解的效果，在林蛙肌肉量一定時，動物蛋白水解酶用量增加，產物中氨基酸和多肽的含量也隨之增加，但不成正比關系。如圖1所示，當酶的用量達到一定數量時，即使增加酶的用量，產物中氨基酸的含量增加的幅度也不大。那么從經濟角度考慮選擇適當的酶的用量即酶量∶林蛙肌肉量＝1∶100～400(重量比)較為適宜，而其中又以酶量∶林蛙肌肉量＝1∶100(重量比)為佳。(動物蛋白水解酶的活力單位以60萬單位/克計)。酶的活力每批不一樣，即使同一批酶，隨著貯存期的延長，酶的活力亦隨之下降。因此使用前必須測定酶的活力，根據測得的酶的活力按下式換算出實際所需酶的用量酶的實際用量＝酶的標準活力×酶的用量/測得的酶的活力2.反應物的濃度當反應物的濃度較低，即加入的水量較多時，不僅產物中氨基酸的總量較低，而且降低了設備的利用率，而反應物的濃度較高時，雖然設備利用率高，但由于體系粘稠，混合，傳熱都出現困難，所以產物中氨基酸的總量也不高。表1中林蛙肌肉量都是20克，除反應物的濃度不同外，其他條件都相同時所得產物中氨基酸總量情況的對比表1 底物濃度對酶解的影響
從表中可以看出當水量∶鮮用量＝3～6∶1時效果較好，而當水量∶鮮用量＝4∶1時效果最佳。
3.酶解的時間動物蛋白水解酶與林蛙肌肉蛋白之間的反應需要一定的時間，隨著反應時間增加，產物中氨基酸的含量也隨之增加。當反應時間在3-5小時時，產物中氨基酸的含量較高。當超過5小時時，雖然增加反應時間，但產物中氨基酸的含量增加的幅度也不大，故不可取。取3-5小時較為適宜，而其中酶解時間采用3小時較為佳。這樣不僅產物中氨基酸含量較高，而且反應周期短能耗低。
4.酶解的溫度動物蛋白水解酶酶解林蛙肌肉蛋白時，要在一定溫度下進行，溫度過低酶的活性沒有充分發揮，而溫度過高部分酶會喪失活性。在其他反應條件相同時，二者都會導致產物中氨基酸的含量降低。如表2所示，同是20克林蛙肌肉在其他條件相同時，在不同溫度下產物中氨基酸含量情況對比表2 溫度對酶解的影響
由上表可得反應溫度一般應在40～70℃較為合理，而動物蛋白水解酶在60℃是效果最佳的。
5.酶解的pH值林蛙肌肉在酶解時要在合適的pH值下進行，當其他反應條件相同時，反應液呈酸性或堿性都會影響酶的活性，使產物中氨基酸的含量降低，如下表所示表3 pH值對酶解的影響
從表中可以看出當pH＝5-7時，對酶解反應是比較有利的，尤其當pH＝5.0時是最適宜的。林蛙肌肉的勻漿液加水后的pH值為6.5～7.0之間，這樣可用0.1N HCI溶液將反應液的pH值調到5.0。
本發明采用動物蛋白水解酶直接作用于林蛙肌肉蛋白液，工藝簡單，酶解效率高，生產周期短，不產生三廢，對設備沒有耐腐蝕要求。動物蛋白水解酶來源充足，價格低，制得的氨基酸復合液不僅必需的氨基酸種類齊全而且含量高，沒有異味口感好。
下面是以動物蛋白水解酶酶解蛋白制取氨基酸多肽復合液的生產流程
具體實施例方式
實施例1取20公斤鮮林蛙肌肉，用自來水沖洗三遍，控凈水分，然后加入60公斤水(林蛙肌肉量∶水重＝1∶3.0)，使之在絞肉機中絞成勻漿后打入反應釜內，向反應釜的保溫夾套通入蒸汽，同時開動攪拌器，使漿液升溫至60℃，并用0.1N HCI溶液將漿液的PH值調到5.0，此時加入200克動物蛋白水解酶(測得酶活力為60萬單位/克)，在此條件下維持反應3小時(在這段時間內用間歇攪拌即可)然后冷卻至室溫，用離心機(4000轉/分)過濾兩遍(濾布第一遍用滌綸布，第二遍用雙層柞蠶絲綢布)。濾液通過紫外線消毒器，即得到氨基酸復合液成品74公斤，氨基酸的含量為28.67克/升。
實施例2重復實施例1的操作和條件，其中測的動物蛋白水解酶的活力為55萬單位/克，則加入動物蛋白水解酶的量即為74×60/55＝80.7克得到的氨基酸復合液成品76公斤，氨基酸的含量為34.48克/升。
實施例3取干林蛙肌肉10公斤(一公斤干林蛙肌肉相當于2.5～2.8公斤鮮林蛙肌肉)，用自來水沖洗三遍，開水洗一遍，通蒸汽至沸騰浸泡24小時，然后加入90公斤水，使之在絞肉機中絞成勻漿后打入反應釜內，向反應釜的保溫夾套通入蒸汽，同時開動攪拌器，使漿液升溫至60℃，并用0.1N HCI溶液將漿液的PH值調到5.0，此時加入300克動物蛋白水解酶(測得酶活力為60萬單位/克)，在此條件下維持反應3小時(在這段時間內用間歇攪拌即可)然后冷卻至室溫，用離心機(4000轉/分)過濾兩遍(濾布第一遍用滌綸布，第二遍用雙層柞蠶絲綢布)。濾液通過紫外線消毒器，即得到氨基酸復合液成品74公斤，氨基酸的含量為28.13克/升。
權利要求
1.一種由酶解林蛙肌肉蛋白制取氨基酸多肽復合液的方法，其特征在于采用動物蛋白水解酶在下述條件下進行酶解a.酶量∶林蛙肌肉量＝1∶100～400(重量比)(酶的活力以60萬單位/克計)b.林蛙肌肉量∶水量＝1∶2.0～6.0(重量比)c.酶解溫度40～80℃d.酶解時間1～5小時e.酶解時反應液pH＝5～9
2.根據權利要求1所述的由林蛙肌肉制備氨基酸多肽復合液的方法，其特征在于，采用動物蛋白水解酶酶解的條件是a.酶量∶林蛙肌肉量＝1∶100(重量比)(酶的活力以60萬單位/克計)b.林蛙肌肉量∶水量＝1∶3.00(重量比)c.酶解溫度60℃d.酶解時間3小時e.酶解時反應液pH＝5.0
全文摘要
本發明涉及一種由林蛙肌肉(含骨)制備氨基酸多肽復合液的方法。以林蛙肌肉(含骨)為原料，將動物蛋白水解酶直接作用于肌肉蛋白液，在弱酸性，常壓下于60℃反應3小時，所得之物即為氨基酸多肽復合液。本法工藝簡單，設備無需耐腐蝕，生產中不產生三廢，制得的氨基酸多肽復合液中含有人體必需的氨基酸種類齊全，數量多，并含有豐富的鈣、鐵和鋅等人體必需的微量元素。林蛙氨基酸多肽復合液為淡黃色透明的略有肉香的液體，可直接飲用，也可用于制備保健食品及藥品。
文檔編號C12P21/00GK1680577SQ20041003313
公開日2005年10月12日 申請日期2004年4月6日 優先權日2004年4月6日
發明者尚德靜, 李慶偉 申請人:遼寧師范大學