專利名稱：：具有益生菌的嬰兒配方食品的制作方法具有益生菌的嬰兒配方食品本發明涉及具有益生菌的嬰兒配方食品。推薦對所有嬰兒使用母乳。然而，在一些情況下，因為醫學原因或母親選擇不母乳喂養，母乳喂養不足夠或不成功。已開發了針對這些情況的嬰兒配方食品。近來，細菌的某些菌林已引起了人們相當大的注意，因為已發現如果攝入，其對人表現為有價值的性質。特別地，已發現乳桿菌屬(Lactobacilli)和雙歧桿菌屬(Bifidobacteria)的特定菌林能夠在腸粘膜建群，以減少病原菌附著腸上皮的能力，從而具有免疫調節效應并有助于保持健康。此類細菌有時纟皮稱為益生菌。已進行了更深入的研究以鑒定新的益生菌菌林。例如，EP0199535、EP0768375、WO97/00078、EP0577卯3和WO00/53200公開了乳桿菌屬和雙歧桿菌屬的特定菌林和其有益效應。具體地，對于即將出生的嬰兒，認為孩子的胃腸道是無菌的。在出生的過程中，其遇到來自母親消化道和皮膚的細菌并且開始建群。根據嬰兒的喂養，消化道小型生物群的組成存在巨大的差異。母乳喂養的嬰兒的糞便菌群包括可觀的雙歧桿菌屬菌群和一些乳桿菌屬物種，但是配方食品喂養的嬰兒具有更復雜的小型生物群，通常存在雙岐桿菌屬、擬桿菌屬(5actefwVifes)、梭菌屬(C7o^nVf/fl)和鏈球菌屬(^S^印,oocc/)。在大約2歲斷奶后，開始建立與成人模式相似的消化道小型生物群模式。為此，已提出給嬰兒配方食品加入益生菌，以促進消化道建群的發生，并且促進"有益"細菌——雙歧桿菌屬和乳桿菌屬物種——而非有害的細菌畫病原體例如梭菌屬等的建群。通常，最少加入10cfu/g配方食品，雖然更大量例如多至1012cfu/g配方食品是優選的。最近，對于旨在生命最初6個月中作為嬰兒的唯一營養來源的嬰兒配方食品中加入益生菌已產生了一些關注。這些關注總結在ESPGHANCommitteeonNutrition(歐洲小兒胃腸、肝臟和營養學會)的標題為"ProbioticBacteriainDieteticProductsforInfants,，(JournalofPaediatricGastroenterologyandNutrition,38:365-374)的醫學論文中。同時，人乳成分的研究正快速發展。以前總是假定人母乳是無菌的。然而，最近以來例i口Martin等人在其論文"Humanmilkisasourceoflacticacidbacteriafortheinfantgut，，(J.Pediatr.2003;143:754-8)中所描述的，已從人母乳中分離出許多細菌菌林。現在不可能確定地聲稱這些細菌能夠繁殖或至少所有鑒定的菌林有此能力。然而，認為這些細菌和細菌碎片(bacterialfragment)因一個或多個特定的目的必須存在于人乳中。為了有益于非完全母乳喂養的嬰兒，需要持續開發盡可能在其營養和生物活性特性方面和人乳相同的嬰兒配方食品。發明概述本發明人已吃驚地發現，當繼續進行對人初乳和人乳中的細菌和細菌碎片的存在的研究時，共同特征開始顯現，即發現無論什么特定的菌林，其濃度表現為比先前提到的加入嬰兒配方食品的濃度要低得多。因此，本發明提供了包含蛋白質來源(不超過2.0g/100千卡的量)、脂質來源、糖類來源和益生菌的嬰兒配方食品，其中該益生菌存在的量等于102至105cfu/g干配方食品。本發明也涵蓋益生菌在制備嬰兒配方食品中的用途，其用于在該嬰兒生命的最初幾周內促進新生兒免疫系統的成熟，其中該益生菌存在的量等于102至105cfu/g干配方食品。本發明還涵蓋益生菌在制備嬰兒配方食品中的用途，其用于調節新生兒的免疫系統以在該嬰兒生命的最初幾周中促進與在母乳喂養嬰兒中發現的有益腸道小型生物群相當的有益腸道小型生物群的發展，其中該益生菌存在的量等于102至105cfu/g干配方食品。在另一方面中，本發明涵蓋用于在嬰兒生命的最初幾周中促進需要免疫系統的新生兒的免疫系統成熟的方法，其包括給予嬰兒治療量的嬰兒配方食品，其中該益生菌存在的量等于102至105cfu/g干配方食品。在后一方面中，本發明涵蓋這樣的方法，其用于調節需要免疫系統的新生兒的免疫系統，以在嬰兒生命的最初幾周中促進與在母乳喂養的嬰兒中發現的有益腸道小型生物群相當的有益腸道小型生物群的產生，該方法包括給予嬰兒治療量的嬰兒配方食品，其中包含的益生菌的量等于102至105cfu/g干配方食品。不希望受理論束縛，本發明A^目信以一些方式向新生兒的消化道導入相對低水平的益生菌可能促進嬰兒免疫系統的成熟，并且使嬰兒的免疫系統準備或預備阻抑任何產生針對有益生物建群的炎癥應答的傾向，從而在生命的接下來幾周和幾個月內有利于有益的消化道小型生物群的發展，同時保持針對病原體建群的有效免疫防御。該效應(雖然仍為免疫調節效應)可能在生理學上與更大量的益生菌對免疫系統的效應不同，該益生菌被常規加入嬰兒配方食品，并且甚至加入用于人食用的其他食品中。本發明甚至可能提供"再訓練"年長的兒童和成人的免疫系統的可能性，所述兒童和成人患有與免疫系統不能識別有益的共生細菌例如雙歧桿菌屬(因此免疫系統以與其攻擊病原菌相同的方式攻擊這些細菌)相關的病癥。發明詳述在本說明書中，當閱讀和解釋說明書、實施例和權利要求時必須考慮下列詞語的定義。下列定義出現在1991年5月14日的關于嬰兒配方食品和第二階段配方食品(follow-onformulae)的EuropeanCommissionDirective(歐盟委員會指令)91/321/EEC的第1.2條中，并且為本說明書所采用。"嬰兒，，小于12個月的兒童；"嬰兒配方食品，，用于在生命的最初6個月內作為嬰兒全部營養的食口口o表達"與在母乳喂養的嬰兒中發現的有益腸道小型生物群相當的有益腸道小型生物群"指由可觀的雙岐桿菌屬和乳桿菌屬物種群體占主體的腸道小型生物群，從而排除可觀的這類物種如擬桿菌屬、梭菌屬和鏈球菌屬的群體。"益生菌"將益生菌定義為對宿主的健康或康樂具有有益效果的^L生物細胞制品或微生物細胞成分。(SalminenS，OuwehandA.BennoY.等人"Probiotics:howshouldtheybedefined"TrendFoodSci.Technol.1999:10107-10)。表達"嬰兒生命的最初幾周，，是指生命的最初兩個月。益生菌在配方食品中存在的量等于102至105cfu/g干配方食品。該表達包括該細菌是活的、失活的或死亡的或甚至以碎片例如DNA或細胞壁材料存在的可能性。換句話說，配方食品包含的細菌的量是通過該量的細菌的集落形成能力來表示的，就好象所有細菌是活的，無論事實上其是否是活的、失活的或死亡的、碎片的，或任意或所有這些狀態的混合物。該益生菌存在的量優選等于102至104cfu/g干配方食品，甚至存在的量更優選等于103至104cfu/g干配方食品。本發明的嬰兒配方食品包含不超過2.0g/100千卡，優選1.8至2.0g/100千卡量的蛋白質來源。認為蛋白質的種類對于本發明不是至關重要的，只要達到必需氨基酸含量的最小需要并且確保良好的生長即可，但是優選蛋白質來源的超過50wt。/。是乳清。因此，可使用基于乳清、酪蛋白及其混合物的蛋白質來源，以M于大豆的蛋白質來源。當涉及乳清蛋白時，該蛋白質來源可基于酸性乳清或甜乳清或其混合物，并且可以以任何期望的比例包含a-乳清蛋白和P-乳球蛋白。但是優選該蛋白質來源基于改性的甜乳清。甜乳清是干酪生產的容易獲得的副產品，且經常用于制備基于牛奶的嬰兒配方食品。然而，甜乳清包含凈皮稱為酪蛋白糖巨肽(caseinoglyco-macropeptide)(CGMP)的成分，該成分令人不希望地富含蘇氨酸并且色氨酸含量很低。從甜乳清除去CGMP以產生具有與人乳的蘇氨酸含量更接近的蘇氨酸含量的蛋白質。然后該改性的甜乳清可補充甜乳清中含量較低的那些氨基酸(主要是組氨酸和色氨酸)。用于從甜乳清中除去CGMP的方法描述于EP880卯2，基于該改性的甜乳清的嬰兒配方食品描述于WO01/11990中。通過^f吏用改性的甜乳清作為蛋白質來源中的主要蛋白質使得能夠以1.8至2.0g/100千卡的蛋白質含量提供所有必需氨基酸。在動物和人研究中已顯示，除了其減少的蛋白質含量外，此類蛋白質來源與每100千卡具有更大蛋白質含量的標準乳清適應性蛋白質來源相比，具有相當的蛋白質功效比、氮消化率、生物值和凈蛋白利用率，并且產生良好的生長。如果將改性的甜乳清用作蛋白質來源，優選以按蛋白質來源的重量計算的0.1至1.5%的量補充游離組氨酸。該蛋白質可以是完整的蛋白質或經水解的蛋白質，或完整的和經水解的蛋白質的混合物。可能希望提供部分水解的蛋白質(水解程度在2和20%之間)，例如為了有發生牛奶變態反應危險的嬰兒。如果需要經水解的蛋白質，根據需要進行水解過程，這是本領域已知的。例如，可通過在一個或多個步驟中酶促水解乳清級分來制備乳清蛋白水解物。為了高度水解的蛋白質，可將乳清蛋白進行三重水解，使用Alcalase2.4L(EC940459)，然后使用Neutrase0.5L(可從NovoNordiskFermentAG獲得)，然后在55°C下使用胰酶制劑。備選地，對于較少水解的蛋白質，可將乳清進行雙重水解，使用NOVOZYMES，然后為胰酶制劑。如果用作起始材料的乳清級分基本上不含乳糖，那么發現該蛋白質在水解過程中受到少得多的賴氨酸阻斷。這使得賴氨酸阻斷的程度能夠從按總賴氨酸的重量計算的大約15%減少至按賴氨酸重量計算的少于大約10%;例如按賴氨酸重量計算為大約7%，這極大地提高了蛋白質來源的營養價值。本發明的嬰兒配方食品包含糖類來源。盡管優選糖類來源是乳糖，但是可以使用在嬰兒配方食品中常規發現的任何糖類來源例如乳糖、蔗糖、麥芽糊精、淀粉及其混合物。優選該糖類來源提供了配方食品總能量的35至65%。本發明的嬰兒配方食品包含脂質來源。脂質來源可以是適合用于嬰兒配方食品的任何脂質或脂肪。優選脂肪來源包括棕櫚油精、高油酸向日葵油和高油酸紅花油。也可加入必需脂肪酸亞油酸和a-亞麻酸，以及少量的包含大量預制的花生四烯酸和二十二碳六烯酸的油，例如魚油或孩吏生物油。總之，脂肪含量優選貢獻配方食品總能量的(例如)30至55%。脂肪來源優選具有大約5:1至大約15:1的n-6對n-3脂肪酸的比，例如大約8:1至大約10:1。嬰兒配方食品也可包含認為在日常飲食中是必需的所有維生素和礦物質，并且以營養顯著的量包含之。已確定了某些維生素和礦物質的最小需要量。任選存在于嬰兒配方食品中的礦物質、維生素和其他營養物的實例包括維生素A、維生素B"維生素82、維生素B。維生素Bu、維生素E、維生素K、維生素C、維生素D、葉酸、肌醇、煙酸、生物素、泛酸、膽堿、鋦、磷、碘、鐵、鎂、銅、鋅、錳、氯化物、鉀、鈉、硒、鉻、鉬、牛磺酸和L-肉堿。通常以鹽的形式加入礦物質。特定礦物質和其他維生素的存在和量將4艮據所用嬰兒群體而變化。根據需要，嬰兒配方食品可包含乳化劑和穩定劑，例如大豆磷脂酰膽堿、甘油單酯和甘油二酯的檸檬酸酯等。如果以液體形式提供配方食品，情況尤其如此。嬰兒配方食品可任選包含具有有益效果的其他物質，例如纖維、乳鐵蛋白、核普酸、核苷等。益生菌可選自滿足上面給出的益生菌定義的任何菌抹。其可以是例如乳桿菌屬、雙岐桿菌屬、鏈球菌屬、乳球菌屬(Z^ctococc附)、明串珠菌屬(丄ewcow(Wtoc)、腸桿菌科(J5"wten6crctenVicefle)或腸球菌屬(五"teWC0CCMS)。優選乳桿菌屬物種的實例是鼠李糖乳桿菌(丄tfCto6fl"7/附f/rfl/miasw51)和富'J干酪乳桿菌(丄"cto6fla7/ws1p"mcas^i')。特另'J優選的菌林是可從芬蘭的ValioOy獲得的商標為LGG的鼠李糖乳桿菌ATCC53103、鼠李糖乳桿菌CGMCC1.3724和副干酪乳桿菌CNCM1-2116。優選的雙岐桿菌屬物種的實例是乳雙歧桿菌(丑折AMcteW"柳/fl"/s)、短雙歧桿菌(5zyf/o6"cteWM附6reve)、長雙歧桿菌(5ly^to6flcteWw附/owg"附)和動物雙歧桿菌(必折《fo6flCte/7'"WIfl"f7Mflf/&)。特別優選的菌林是由丹麥的ChristianHansen公司銷售的商標為BB12的乳雙歧桿菌、乳雙歧桿菌CNCM1-3446、可從日本的MorinagaMilkIndustryCo.Ltd.獲得的商標為BB536的長雙歧桿菌ATCCBAA-999和可從Rhodia商購獲得的商標為Bb-03的短雙歧桿菌的菌抹。優選的鏈球菌屬物種的實例是嗜熱鏈球菌(iS^ptoCOCC附幼e/7W印/^/llS1)和唾液鏈球菌(5^印toCOCCM515^//VW."S)。特別優選的菌林是由ChristianHansen公司銷售的商標為TH4的嗜熱鏈球菌菌林。優選的乳球菌屬物種的實例是乳酸乳球菌(/flC泡)。優選明串珠菌屬物種的實例是乳明串珠菌(Z^wam^toc/flc船)。優選腸球菌屬物種的實例是屎腸球菌(五"teracocc附/aed"附)。優選存在至少兩種不同的益生菌，條件是符合105cfu/g干配方食品的上限。一個特別優選的組合是乳桿菌屬例如鼠李糖乳桿菌或副干酪乳桿菌物種和雙岐桿菌屬例如乳雙歧桿菌、長雙歧桿菌、短雙歧桿菌或動物雙歧桿菌物種。這類菌林組合的實例是長雙歧桿菌ATCCBAA-999和鼠李糖乳桿菌ATCC53103、副干酪乳桿菌CNCM1-2116或鼠李糖乳桿菌CGMCC1.3724。另一個特別優選的組合是兩種雙岐桿菌屬菌林。該組合的一個實例是長雙歧桿茵ATCCBAA-999和乳雙歧桿菌CNCM1-3446。如上面所指出的，使用的一種或多種益生菌的量不應當超過105cfu/g干產品且優選為103和104cfu/g之間。當加入至配方食品或混合物中時，該菌林可以是活的或失活的或死亡的或碎片的。備選地，可使用任意或所有這些不同狀態的細菌混合物。可以以任何合適的方式制備嬰兒配方食品。例如，可通過將蛋白質來源、糖類來源和脂肪來源以適當的比例混合在一起來制備嬰兒配方食品。如果使用，可將乳化劑包含在該混合物中。可在此時加入維生素和礦物質，但通常隨后加入以避免熱降解。可在混合之前將任何親脂性維生素、乳化劑等溶解入脂肪來源。然后可混入水(優選已進行反滲透的水)，從而形成液體混合物。然后可熱處理液體混合物以減少細菌的量(load)。例如，可將該液體混合物快速加熱至大約80'C至大約ll(TC范圍內的溫度，進行大約5秒至大約5分鐘。這可通過蒸汽注射或通過熱交換器例如盤狀熱交換器(plateheatexchanger)進行。然后可通過例如瞬時冷卻將液體混合物冷卻至大約60'C至大約85。C。然后可在例如兩個階段(在第一階段中大約7MPa至大約40MPa以及在第二階段中大約2MPa至大約14MPa)均化該液體混合物。然后進一步冷卻均化的混合物以加入任何熱敏成分例如維生素和礦物質。此時方便地標準化均化混合物的pH和固體含量。將均化的混合物轉移至合適的干燥裝置例如噴霧干燥器或冷凍干燥器并，將其轉變為粉末。粉末應當具有低于大約5wt。/。的含濕量。選擇的一種或多種益生菌可按照任何合適的方法進行培養，并通過例如冷凍干燥或噴霧干燥制備以用于加入至嬰兒配方食品。備選地，可從專業供應商例如ChristianHansen和Morinaga購買已經以適合用于力口入至食品例如嬰兒配方食品的形式制備的細菌制品。實施例1下面提供本發明的嬰兒配方食品組成的實例。該組成只是以舉例說明的方式給出。<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>實施例2下面的動物研究描述了評價施用本發明的益生菌對新生小鼠幼崽的免疫系統成熟的作用的研究。將30只懷孕的無菌小鼠隨機分成5組。將幼患分配至5組中的一組(11=每組24至28只幼患)。來自同一母親的所有幼崽進入相同的組。其中4個組如下接受單獨的或與來自正常鼠類小型生物群(腸細菌)的細菌組合的益生菌組1:對照(安慰劑)組2:益生菌(l()4cfu)組3:益生菌+鼠類菌群(104cfu益生菌和103cfu腸細菌)組4:益生菌(l()Scfu)組5:益生菌+鼠類菌群(108cfu益生菌和103cfu腸細菌)本實驗裝置用于檢測下列益生菌鼠李糖乳桿菌ATCC53103、長雙歧桿菌ATCCBAA-999、副千酪乳桿菌CNCM1-2116，以及鼠李糖乳桿菌ATCC53103、長雙歧桿菌ATCCBAA-999、副干酪乳桿菌CNCMI-2116與長雙歧桿菌ATCCBAA-999的組合。母親和幼崽接受典型的無菌飲食。將其置于隔離器中直至出生后10天，并使其自由進食和飲水。組2至5中的幼崽接受濃縮在一滴PBS(相當于大約10nl)中的細菌，同時對照組中的幼崽接受單獨的PBS。在出生后7天直至斷奶，基于日常基礎，根據組給幼崽口服施用具有和不具有細菌的PBS。在出生后10天將幼崽和其母親轉移至常規環境中。將各組中的幼崽分成4個亞組。在出生后7天處死來自每組的一個亞組的幼患以確定基線上的不同標記。分別在第10和14日齡時處死來自每組的另外兩個亞組的幼崽。在斷奶時(21日齡)用系統疫苗免疫(皮下施用在氫氧化鋁中的破傷風類毒素疫苗0.125Lf/小鼠)每組中剩余亞組中的幼崽。三周內每周跟蹤對疫苗的免疫應答，然后處死剩余的幼崽。在21日齡、28日齡和35日齡時從所有幼崽釆集血液(用于檢測IgG抗體)和排泄物(用于評估小型生物群和檢測IgA抗體)。在無菌條件下采集死后的血液和組織樣品(脾、腸、肝、腸系膜淋巴結和乳腺)。測量下列輸出變量通過腸組織的組織學和免疫組織化學評估，以及免疫細胞的比例和表型以及朝夂泄物IgA的亞型和水平的確定來評估免疫的成熟；通過使用ELISA技術確定血液中基于特異性IgG和細胞因子水平的對接種疫苗的免疫應答；內源小型生物群的分析，排泄物中的細菌的計數和確定。權利要求1.嬰兒配方食品，其包含不超過2.0g/100千卡量的蛋白質來源、脂質來源、糖類來源和益生菌，其中所述益生菌存在的量等于102至105cfu/g干配方食品。2.根據權利要求l的嬰兒配方食品，其中所述蛋白質來源存在的量等于1.8至2.0g/100千卡。3.根據權利要求1或2的嬰兒配方食品，其中蛋白質來源的超過50wt。/。為乳清蛋白。4.根據前述任一權利要求的嬰兒配方食品，其中所述益生菌是乳桿菌屬菌林、雙岐桿菌屬菌林、鏈球菌屬菌林、乳球菌屬菌林、明串珠菌屬菌林、腸桿菌科菌林或腸球菌屬菌抹。5.根據權利要求4的嬰兒配方食品，其中所述乳桿菌屬是鼠李糖乳桿菌物種或副干酪乳桿菌物種。6.根據權利要求5的嬰兒配方食品，其中所述乳桿菌屬菌林是鼠李糖乳桿菌ATCC53103、副干酪乳桿菌CNCM1-2116或鼠李糖乳桿菌CGMCC1.3724。7.根據權利要求4的嬰兒配方食品，其中所述雙歧桿菌屬菌林是乳雙歧桿菌物種、長雙歧桿菌物種、短雙歧桿菌物種或動物雙歧桿菌物種。8.根據權利要求7的嬰兒配方食品，其中所述雙歧桿菌屬菌抹是長雙歧桿菌ATCCBAA-999或乳雙歧桿菌CNCM1-3446。9.根據前述任一權利要求的嬰兒配方食品，其包含至少兩種不同的益生菌。10.根據權利要求9的嬰兒配方食品，其包含乳桿菌屬菌抹和雙歧桿菌屬菌林。11.根據權利要求10的嬰兒配方食品，其中所述乳桿菌屬菌抹是鼠李糖乳桿菌ATCC53103或副干酪乳桿菌CNCM1-2116，并且所述雙歧桿菌屬菌林是長雙歧桿菌ATCCBAA-999或乳雙歧桿菌CNCM1-3446。12.才艮據前述任一權利要求的嬰兒配方食品，其中所述一種或多種菌林存在的總量等于103至104cfu/g干配方食品。13.益生菌在制備嬰兒配方食品中的用途，其用于調節新生兒的免疫系統，以在所述嬰兒生命的最初幾周中促進與在母乳喂養的嬰兒中發現的有益腸道小型生物群相當的有益腸道小型生物群的發展，其中所述益生菌在配方食品中存在的量等于102至105cfu/g干配方食品。14.益生菌在制備嬰兒配方食品中的用途，其用于在所述嬰兒生命的最初幾周中促進新生兒免疫系統的成熟，其中所述益生菌在配方食品中存在的量等于102至105cfu/g干配方食品。全文摘要本發明涉及嬰兒配方食品，其包括不超過2.0g/100千卡量的蛋白質來源、脂質來源、糖類來源和益生菌，其中該益生菌存在的量等于10²至10⁵cfu/g干配方食品。本發明還涵蓋此類嬰兒配方食品的用途，即其用于調節新生兒的免疫系統，以在該嬰兒生命的最初幾周內促進與在母乳喂養的嬰兒中發現的有益腸道小型生物群相當的有益腸道小型生物群的發展，并且在生命的最初幾周內促進新生兒免疫系統的成熟。文檔編號A23L1/29GK101193559SQ200680020793公開日2008年6月4日申請日期2006年4月10日優先權日2005年4月13日發明者A·多內圖格斯,E·席夫林,F·哈施克,K-J·胡貝爾-哈格,M-C·菲紹申請人:雀巢技術公司