具有抑菌能力的益生菌及其應用的制作方法
【專利摘要】本發明涉及屬于微生物病害控制領域，具體的說是一種具有抑菌能力的益生菌。益生菌為路德維希腸桿菌Enterobacter?ludwigii-PC88，已于2013年6月24日在中國微生物保存中心保藏，保藏編號為CGMCC?No:7814。本發明益生菌均從健康牙鲆的腸道內分離獲得。益生菌的純培養物對水產病原菌如燦爛弧菌、哈氏弧菌、副溶血弧菌、銅綠假單胞菌、鰻弧菌具有較強的抑制效果。亦可抑制已知為人類病原菌的白色念球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌的生長。對氨芐青霉素具有抗性。其純培養物或組合物可用于水產養殖類病害的防控及新型抗菌物質的開發，具有良好的應用前景。
【專利說明】具有抑菌能力的益生菌及其應用
【技術領域】[0001]本發明涉及屬于微生物病害控制領域，具體的說是一種具有抑菌能力的益生菌。【背景技術】
[0002]益生菌(Probiotics)是一類對宿主有益的活性微生物，是定植于人體或動物腸道、生殖系統內，能產生確切健康功效從而改善宿主微生態平衡、發揮有益作用的活性有益微生物的總稱。其主要通過改善宿主腸道微生物菌群的平衡而發揮作用。它具有改善腸道菌群結構，抑制病原菌，生成營養物質，提高機體免疫力，消除致癌因子，降低膽固醇和血壓，改善乳糖消化性等功能。Fuller于1989年首次給益生菌下定義:“益生菌是通過改善腸道菌群平衡而對宿主健康產生有益作用的活菌添加劑”。
[0003]人類生活中早已廣泛應用的益生菌包括醋酸梭菌、乳酸菌、雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、放線菌、酵母菌等。隨著微生物防害的方法的發展，特別是益生菌在取代傳統抗生素的使用的前景，使得益生菌及其制劑越來越多的被應用于水產養殖業。目前水產養殖類的益生菌及其制劑主要分為共兩類:①單一制劑，如酵母菌、光合細菌、乳酸菌、乳酸桿菌、乳酸乳球菌、熒光假單胞菌、芽孢桿菌等。②復合制劑，如美菌方、復合型活性生物凈水劑等，主要有硝化細菌和反硝化細菌、枯草桿菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌、假單胞菌、糞鏈球菌、酵母菌等菌株組成。該類益生菌群由定向篩選的有益菌株配合而成，能夠改善水產動物體內的微生態平衡，刺激機體的免疫系統，拮抗致病微生物，降解有機廢物，從而減少疾病發生，促進水產動物生長發育，改善養殖生態環境。大量研究與實踐證明，益生菌在水產養殖的應用中起到了良好的效果，如從蝦、牙鲆等動物體內分離得到的多株益生菌，從而制成的微生物復合菌液可以改良底質，穩定水質，是保證養殖成功的重要技術。由于沒有再施用化學藥劑，因而生產出來的水產品是比較完全和無污染的綠色食品，并可避免水產品產生所謂的抗藥性。多年連續使用菌液的水體必定能形成有效微生物菌群的生態優勢，達到水環境的良性循環，保證對水產品養殖的持續發展。
[0004]益生菌的分離一般是通過采集大量不同的菌株，在體外進行選擇性培養或抗菌實驗獲得。Gatesoupe的綜述中詳細地列出了乳酸菌選擇性培養基的原則和方法。Sugita等人在7種近海魚類腸道中分離出10055株菌株進行抗菌實驗，并選擇出優良的益生菌株芽孢桿菌。后來也出現了分離鑒定的新技術，例如，Vandenberghe等人對在凡納濱對奸養殖中常見的菌株Vibro harveyi進行了全序列的AFLP指紋圖譜分析,從而對其遺傳特征進行分析。Spanggard等人同時采用了傳統的平板培養分離與16s rDNA序列測定法對虹鱒腸道菌群進行鑒別。
[0005]隨著我國水產養殖業的不斷發展。工廠化、高密度養殖造成的病害問題日益突出。每年因水產病害造成的損失多大數百億元。而治療水產動物的疾病，常規仍廣泛采用化學治療法，抗生素的濫用使水體細菌產生抗藥性及藥物殘留，間接危害了人類的健康。因此，越來越多的專家開始關注于利用自然環境中有益微生物對水產養殖環境的生物修復，以此來取代抗生素的使用，這樣不僅節約了費用，還不會產生二次污染，而且還能將剩余餌料、排泄物及其他有害物質分解轉化，使水質保持良好的狀態，使養殖生物處于健康水平。因此，有益微生物對水產養殖環境的生物修復技術的研究和開發具有極其廣闊的前景，在水產養殖領域的應用也會越來越廣泛，同時帶來更大的經濟效益和社會效益。
【發明內容】

[0006]本發明目的在于提供一種具有抑菌能力的益生菌及其應用。
[0007]為實現上述目的，本發明采用的技術方案為:
[0008]一種具有抑菌能力的益生菌，益生菌為路德維希腸桿菌Enterobacterludwigi1-PC88，已于2013年6月24日在中國微生物保存中心保藏，保藏編號為CGMCCNo:7814 ;保藏單位地址為北京市朝陽區北辰西路I號院3號。
[0009]所述益生菌可用于制備水產病原菌或人類細菌的抗菌藥物。
[0010]所述水產病原菌為燦爛弧菌、哈氏弧菌、副溶血弧菌、銅綠假單胞菌或鰻弧菌；人類細菌為人類病原菌如白色念球菌、金黃色葡萄球菌或肺炎克雷伯氏菌。
[0011]一種抑制有害治病細菌生長組合物，抑制有害治病細菌生長組合物為權利要求1所述的益生菌或是益生菌的培養物。
[0012]所述組合物可用于制備水產病原菌或人類細菌的抗菌藥物。
[0013]本發明所具有的優點:
[0014]本發明益生菌均從健康牙鲆的腸道內分離獲得。益生菌的純培養物對水產病原菌如燦爛弧菌、哈氏弧菌、副溶血弧菌、銅綠假單胞菌、鰻弧菌具有較強的抑制效果。亦可抑制已知為人類病原菌的白色念球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌的生長。對氨芐青霉素具有抗性。其純培養物或組合物可用于水產養殖類病害的防控及新型抗菌物質的開發，具有良好的應用前景。
[0015]路德維希腸桿菌(Enterobacter ludwigii)PC88,在TSB固體平板上,單菌落直徑為1.5_左右，圓形，淺黃色，半透明，凸出培養基表面，有光澤。其主要抑菌活性參見表1。抗生素抗性參見表2。
[0016]表1抑菌活性分析
【權利要求】
1.一種具有抑菌能力的益生菌，其特征在于:益生菌為路德維希腸桿菌Enterobacterludwigi1-PC88，已于2013年6月24日在中國微生物保存中心保藏，保藏編號為CGMCCNo:7814。
2.按權利要求1所述的具有抑菌能力的益生菌，其特征在于:所述益生菌可用于制備水產病原菌或人類細菌的抗菌藥物。
3.按權利要求2所述的具有抑菌能力的益生菌，其特征在于:所述水產病原菌為燦爛弧菌、哈氏弧菌、副溶血弧菌、銅綠假單胞菌或鰻弧菌；人類細菌為人類病原菌如白色念球菌、金黃色葡萄球菌或肺炎克雷伯氏菌。
4.一種抑制有害治病細菌生長組合物，其特征在于:抑制有害治病細菌生長組合物為權利要求1所述的益生菌或是益生菌的培養物。
5.按權利要求4所述的抑制有害治病細菌生長組合物的應用，其特征在于:所述組合物可用于制備水產病原菌或人`類細菌的抗菌藥物。
【文檔編號】A61P31/10GK103525721SQ201310404743
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2013年9月6日 優先權日:2013年9月6日
【發明者】焦緒棟, 楊少麗, 秦松 申請人:中國科學院煙臺海岸帶研究所