專利名稱：：微量臨床樣本中核酸的快速提取方法及其試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及各種臨床樣本中核酸的快速提取方法。更具體地，本發(fā)明涉及應(yīng)用微量臨床樣本核酸快速提取裝置從各種微量臨床樣本中快速處理和提取核酸的方法，包括細(xì)胞裂解、濾膜吸附和洗脫提取核酸(DNA和RNA)步驟。本發(fā)明還涉及用于臨床樣本核酸快速提取的試劑盒及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：(一)臨床樣本的前處理臨床常常需要從各種生物組織或細(xì)胞中抽提基因組DNA或RNA，應(yīng)用核酸擴(kuò)增技術(shù)測(cè)定其成分，這是用于病癥的輔助性分析和診斷的一種高度敏感，且最為直接的檢測(cè)手段。由于臨床標(biāo)本中含有蛋白質(zhì)、脂類等物質(zhì)，會(huì)干擾其下游擴(kuò)增反應(yīng)，故在進(jìn)行檢測(cè)反應(yīng)前必須進(jìn)行生物樣本的處理和核酸提取。由于樣本的處理及保存對(duì)DNA和RNA(尤其是RNA)的影響較大，因此在核酸標(biāo)本的適當(dāng)?shù)念A(yù)處理及保存對(duì)核酸模板的成功提取具有決定性作用。臨床常見(jiàn)的標(biāo)本有全血、分泌物、棉拭子、膿液、體液等，這些臨床標(biāo)本的處理和保存方法各有不同。以下是不同臨床標(biāo)本的處理方法及步驟-1.痰標(biāo)本痰屬于分泌物，臨床上常用作結(jié)核桿菌DNA測(cè)定樣本，由于痰標(biāo)本中含大量粘蛋白和雜質(zhì)，故在核酸提取時(shí)，一定要對(duì)標(biāo)本進(jìn)行前處理，即用液化液去除粘蛋白，然后用煮沸或蛋白酶、酚/氯仿等經(jīng)典法提取核酸。2.棉拭子用核酸擴(kuò)增方法檢測(cè)性病病原體時(shí)(衣原體、支原體、淋球菌、梅毒螺旋體、單純性皰疹病毒、人乳頭狀瘤病毒等)，臨床標(biāo)本一般為棉拭子?，F(xiàn)在應(yīng)用的處理棉拭子具體方法為，用棉拭子取分泌物，置無(wú)菌試管或EP管內(nèi)，在樣本管中加無(wú)菌生理鹽水，充分震蕩混勻后離心，棄上清，沉淀加無(wú)菌生理鹽水lml，打勻的離心，重復(fù)洗滌一次，棄上清，沉淀即可用于核酸提取。3.體液體液標(biāo)本，包括胸水、腹水、腦脊液、尿液等，可直接離心5分鐘，取沉淀物提取核酸。血性胸腹水，可加等體積紅細(xì)胞裂解液，震蕩混勻后離心，可根據(jù)情況重復(fù)2-3次，沉淀物用于核酸提取。4.膿液粘稠膿液同痰標(biāo)本處理，先將其液化，再離心取沉淀提取核酸。水樣膿液直接離心，沉淀用生理鹽水洗2-3次后用于核酸提取。5.全血標(biāo)本通常用來(lái)提取外周血單個(gè)核細(xì)胞核酸如基因組DNA、線粒體DNA、總RNA等。需要采用前處理，即加適量的紅細(xì)胞裂解液(破膜液)，裂解全血中的紅細(xì)胞；隨后再加適量的細(xì)胞核裂液(破核液)，裂解白細(xì)胞中的細(xì)胞核，使核內(nèi)核酸釋放出來(lái)；最后再加SDS(十二烷基硫酸鈉)等去污劑，溶解脂蛋白，解聚核蛋白。(二)核酸提取核酸提取已經(jīng)成為了分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)中的最重要、最基本的操作，但是目前核酸的提取方案紛繁浩渺。分子診斷市場(chǎng)的發(fā)展和測(cè)序市場(chǎng)、功能基因組計(jì)劃的啟動(dòng)已經(jīng)為核酸提取市場(chǎng)加足了油，傳統(tǒng)的操作流程已經(jīng)被更為簡(jiǎn)便和自動(dòng)化的化學(xué)溶液代替，現(xiàn)在前市場(chǎng)上大部分核酸提取系統(tǒng)包括一個(gè)固體的純化支持物，如離心柱里的薄膜，或者磁珠。有一些則設(shè)計(jì)成方便使用的微孔板的形式。核酸在細(xì)胞中都是以與蛋白質(zhì)結(jié)合的狀態(tài)存在，在核酸提取過(guò)程中應(yīng)根據(jù)不同研究需要，保證核酸結(jié)構(gòu)的相應(yīng)完整性；盡量排除其它大分子成分(蛋白質(zhì)、多糖等)的污染；和保證提取樣本中不含對(duì)酶有抑制作用的有機(jī)溶劑及高濃度的金屬離子。表1是對(duì)幾種DNA提取方法比較表l:各利<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>基因診斷試劑的發(fā)展可有兩個(gè)方向，一是高通量、自動(dòng)化、精密而復(fù)雜的儀器設(shè)備，滿足高層次醫(yī)院的需求；二是快速、低價(jià)、使用簡(jiǎn)單儀器或無(wú)儀器的診斷試劑，用于床邊快速診斷和基層醫(yī)療單位，直接服務(wù)于廣大人民大眾。大多數(shù)歐美國(guó)家的生物公司選擇開發(fā)利潤(rùn)豐厚的高級(jí)儀器，在大醫(yī)院中形成激烈競(jìng)爭(zhēng)。本申請(qǐng)人選擇不同的發(fā)展方向，致力于開發(fā)滿足快速核酸診斷和基層醫(yī)療單位的系列產(chǎn)品。微量臨床樣本核酸快速提取裝置就是以此為出發(fā)點(diǎn)，建立一種無(wú)需儀器的快速簡(jiǎn)單的微量核酸臨床樣本的提取辦法，為快速核酸診斷提供了一個(gè)良好的基礎(chǔ)，同時(shí)在真正意義上體現(xiàn)了申請(qǐng)人致力于完成的使命作為溝通先進(jìn)生物技術(shù)和人民大眾間的橋梁，重點(diǎn)是開發(fā)快速、低價(jià)、使用簡(jiǎn)單儀器的診斷試劑。結(jié)合細(xì)胞裂解技術(shù)，用無(wú)儀器濾膜吸附核酸的樣本提取裝置對(duì)已裂解的臨床樣本中的核酸進(jìn)行提取，用于病癥的輔助性分析和診斷。具體地說(shuō)，本發(fā)明提供一種從各種微量臨床樣本中快速提取核酸的方法，其包括以下步驟-(a)將臨床樣本加入裂解液，混勻；(b)抽吸臨床樣本，流經(jīng)過(guò)濾膜，樣本中的核酸成分因膜的特異性吸附而吸附在過(guò)濾膜上，濾液為有細(xì)胞碎屑和蛋白質(zhì)的廢液；(C)抽吸清洗液，流經(jīng)過(guò)濾膜，清洗過(guò)濾膜上殘留的蛋白質(zhì)或其它有形成分，棄濾液；(d)抽吸洗脫液，流經(jīng)過(guò)濾膜，將吸附在膜上的核酸成分洗脫，而得到不含有其他雜質(zhì)的核酸水溶液，用于核酸擴(kuò)增。本發(fā)明還提供應(yīng)用本發(fā)明上述方法的微量臨床樣本核酸快速提取試劑盒，其包括微量臨床樣本核酸快速提取裝置、細(xì)胞裂解液、清洗液及洗脫液，其中提取裝置由尖口吸管、過(guò)濾器、抽吸裝置組成。本發(fā)明還提供上述試劑盒在傳染病病原體、宿主或病原體基因突變和單核苷酸多態(tài)性檢測(cè)中的用途。更具體地說(shuō)，本發(fā)明提供一種從各種微量臨床樣本中快速提取核酸的方法，其包括以下步驟(a)將臨床樣本加入裂解液，混勻，使細(xì)胞破碎，釋放核酸成分；6(b)抽吸臨床樣本，流經(jīng)過(guò)濾膜，樣本中的核酸成分因膜的特異性吸附而吸附在過(guò)濾膜上，濾液為有細(xì)胞碎屑和蛋白質(zhì)的廢液，達(dá)到核酸與其它成分和細(xì)胞碎屑分離的作用；(C)抽吸清洗液，流經(jīng)過(guò)濾膜，清洗過(guò)濾膜上殘留的蛋白質(zhì)或其它有形成分，棄濾液，完成了吸附在濾膜上的核酸成分的清洗；(d)抽吸洗脫液，流經(jīng)過(guò)濾膜，將吸附在膜上的核酸成分洗脫，而得到不含有其他雜質(zhì)的核酸水溶液，用于核酸擴(kuò)增。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述核酸為DNA或RNA。用于本發(fā)明方法的裂解液是臨床上常用的異硫氰酸胍溶液，可使細(xì)胞裂解。同樣適用于本發(fā)明的其他裂解液可以是鹽酸胍或肌酸胍。裂解液的使用量與臨床樣本體積的比率通常為1-2:1，優(yōu)選l:1，即等量。用于本發(fā)明方法的清洗液是PH〈7的清洗液。用于本方明方法的洗脫液是lOmM的Tris-HCL。用于本發(fā)明方法的過(guò)濾膜是硅膠膜，是市場(chǎng)銷售的產(chǎn)品。為實(shí)施本發(fā)明的方法，本發(fā)明人設(shè)計(jì)了一種微量臨床樣本核酸快速提取裝置，其中由尖口吸管、過(guò)濾器、抽吸裝置組成。用于本發(fā)明的尖口吸管是市場(chǎng)銷售的通用產(chǎn)品。用于本發(fā)明的帶有上述的硅膠過(guò)濾膜的過(guò)濾器，是市場(chǎng)銷售的產(chǎn)品。外殼材質(zhì)為聚丙烯，不含粘合劑，因而不會(huì)污染樣本。上、下部由超聲波焊接成一體，耐高壓，不存在樣本的泄露問(wèn)題用于實(shí)施本發(fā)明方法的抽吸操作的抽吸裝置是注射器或塑料泡，尤其是一次性注射器。本發(fā)明的突出的有益效果是在處理生物樣本的過(guò)程中取代了高轉(zhuǎn)速離心機(jī)，利用微量臨床樣本核酸快速提取裝置就可以在液相非均勻體系中達(dá)到分離的效果。本發(fā)明可以作為核酸擴(kuò)增前對(duì)生物樣本進(jìn)行核酸提取的一種簡(jiǎn)捷手段，提取出的樣本純度足夠符合下一步核酸擴(kuò)增的要求，同時(shí)不需要任何儀器、操作安全和簡(jiǎn)單、一次性使用，因而可以被廣泛地應(yīng)用于病原體或宿主核酸提取，用于臨床檢測(cè)和診斷。微量臨床樣本核酸快速提取裝置成本低廉，操作簡(jiǎn)單同時(shí)又不需要任何特殊儀器，操作時(shí)間(不包括樣本預(yù)處理和裂解時(shí)間)極短，大約只需要l-2分鐘，因而本發(fā)明可以被廣泛地應(yīng)用于一些實(shí)驗(yàn)條件相對(duì)較差的基層醫(yī)院和經(jīng)濟(jì)不發(fā)達(dá)地區(qū)或國(guó)家；同時(shí)，也可以很好地滿足高層次醫(yī)院的需求，特別是急診室和床邊的核酸快速診斷。下表是微量臨床樣本核酸快速提取裝置與離心機(jī)處理技術(shù)對(duì)生物樣本處理時(shí)各種性能的比較表2:離心機(jī)與微量臨床樣本核酸快速提取裝置性能比較<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>圖1是用于本發(fā)明的微量臨床樣本核酸快速提取裝置-I的結(jié)構(gòu)示意圖，它由尖口吸管、針頭式過(guò)濾器和抽吸裝置(注射器)三部分組成；圖2是用于本發(fā)明的微量臨床樣本核酸快速提取裝置-n的結(jié)構(gòu)示意圖，它由尖口吸管、硅膠膜過(guò)濾器和抽吸裝置(塑料泡)三部分組成；圖3是用于本發(fā)明的微量臨床樣本核酸快速提取裝置-in的結(jié)構(gòu)示意圖，它由塑料尖口吸管、塑料保護(hù)夾層中的濾膜(硅膠膜)和抽吸裝置(塑料泡)三部分組成；圖4是本發(fā)明實(shí)施例1得到的結(jié)核桿菌(TB)DNA擴(kuò)增核酸試紙條檢測(cè)結(jié)果；8圖5是本發(fā)明的實(shí)施例2得到的沙眼衣原體(CT)DNA擴(kuò)增核酸試紙條檢測(cè)結(jié)果；圖6是本發(fā)明的實(shí)施例3得到的丙型肝炎病毒(HCV)RNA擴(kuò)增核酸試紙條檢測(cè)結(jié)果；圖7是本發(fā)明的實(shí)施例4得到的犬細(xì)小病毒(CPV)DNA擴(kuò)增核酸試紙條檢測(cè)結(jié)果。具體實(shí)施例方式以下結(jié)合附圖l、圖2和圖3裝置結(jié)構(gòu)示意圖，簡(jiǎn)要說(shuō)明本發(fā)明的一項(xiàng)具體實(shí)施方案的操作方式。在本發(fā)明方法中使用的裝置結(jié)構(gòu)如附圖1、圖2和圖3所示，微量臨床樣本核酸快速提取裝置由三部分組成尖口吸管l、過(guò)濾器2和抽吸裝置3。利用微量生物樣本提取核酸，以微量臨床樣本核酸快速提取裝置的吸附核酸作用達(dá)到核酸分離的目的。本發(fā)明就是在臨床樣本進(jìn)行裂解后，利用微量臨床樣本核酸快速提取裝置對(duì)臨床樣本過(guò)濾吸附、清洗，以及洗脫，提取DNA和RNA。首先用微量臨床樣本核酸快速提取裝置抽吸已裂解的微量臨床核酸生物樣本，樣本流經(jīng)過(guò)濾器2過(guò)濾后，核酸由于特異性的吸附作用而被吸附在過(guò)濾膜上，進(jìn)入抽吸裝置3的濾液則為不含有核酸成分的廢液，從而達(dá)到分離核酸的作用；然后將廢液推出丟棄，接著用微量臨床樣本核酸快速提取裝置抽吸清洗液，清洗過(guò)濾膜上的雜質(zhì)，將清洗液推出棄掉，這樣核酸成分由于濾器中濾膜的吸附作用而被留在了濾膜上，液體成分被濾過(guò)，從而完成了樣本中核酸成分的富集和清洗；用微量臨床樣本核酸快速提取裝置抽取一定量的洗脫液，沖洗吸附在濾膜上的核酸成分，然后將液體推出，得到核酸溶液，從而用于核酸擴(kuò)增。在使用微量臨床樣本核酸快速提取裝置提取樣本的整個(gè)過(guò)程中起到最關(guān)鍵作用的是過(guò)濾器，其中的濾膜對(duì)核酸有特異的吸附作用，然后洗脫，以達(dá)到分離，凈化，提純的目的，因而保證少量或高價(jià)值樣本的最大回收量。通常情況下，裂解后的核酸提取需要在液相非均勻體系中，利用離心力來(lái)達(dá)到液液分離，液固分離的效果，含有目的核酸的水溶液就會(huì)被分離出來(lái)。而采用本發(fā)明的微量臨床樣本核酸快速提取裝置進(jìn)行核酸抽提時(shí)只要簡(jiǎn)單的"三步抽吸"就可以完成所有操作"一抽"用微量臨床樣本核酸快速提取裝置抽吸上述裂解后的生物樣本液體，抽吸裝置里的濾液是不含核酸成分的廢液；"二抽"繼續(xù)抽吸清洗液，從而完成清洗雜質(zhì)的目的；"三抽"將吸附在濾膜上的核酸成分洗脫，從而完成了生物樣本中核酸成分的提取。本發(fā)明還提供應(yīng)用本發(fā)明上述方法的微量臨床樣本核酸快速提取試劑盒，其包括微量臨床樣本核酸快速提取裝置、細(xì)胞裂解液、清洗液及洗脫液，其中提取裝置由尖口吸管、過(guò)濾器、抽吸裝置組成。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述的微量臨床樣本核酸快速提取裝置-I由所購(gòu)的市售部件組成，抽吸裝置為普通臨床用的一次性塑料注射器一次性醫(yī)用注射器，濾器為一次性硅膠膜針頭式過(guò)濾器，尖口吸管為圓鈍的金屬吸管，如附圖1。在本發(fā)明的另一具體實(shí)施方案中，所述的自行設(shè)計(jì)的微量臨床樣本核酸快速提取裝置-n與微量臨床樣本核酸快速提取裝置-1，不同的地方為抽吸裝置，采用積壓后可以抽吸液體的塑料泡，以及前端可以進(jìn)入樣本管中的一次性成型的塑料尖嘴吸管，如附圖2。在本發(fā)明的又一具體實(shí)施方案中，所述的自行設(shè)計(jì)的微量臨床樣本核酸快速提取裝置-III同樣由三個(gè)部分組成1為前端可以進(jìn)入樣本管中的一次性成型的塑料尖嘴吸管，2為注塑在塑料保護(hù)夾層中的濾膜，3為可以積壓后抽吸液體的塑料泡，如附圖3。另外，本發(fā)明還提供所述的試劑盒在傳染病病原體、宿主或病原體基因突變和單核苷酸多態(tài)性檢測(cè)中的用途。下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步詳細(xì)地闡述本發(fā)明實(shí)施例1:痰液處理及TBDNA的提取1.痰液液化取結(jié)核桿菌(TB)待檢者的痰液，將其轉(zhuǎn)移至離心管中，加入1倍體積的痰液液化液充分震蕩混勻，95。C-10(TC加熱IO分鐘，冷卻至室溫；2.裂解取lml液化后的痰液，加入等量的裂解液；混勻后室溫靜置5分鐘；利用微量臨床樣本核酸快速提取裝置吸取上述混合液，將抽吸裝置中的濾液經(jīng)尖口吸管推出棄掉；3.清洗利用微量臨床樣本核酸快速提取裝置在裝有清洗液的離心管里抽吸后，將抽吸裝置中的濾液經(jīng)尖口吸管推出棄掉；4.DNA洗脫繼續(xù)使用微量臨床樣本核酸快速提取裝置抽吸100ul洗脫液，把抽吸裝置中的液體經(jīng)經(jīng)尖口吸管推出至一新的離心管中，備用。5.核酸擴(kuò)增應(yīng)用TB恒溫?cái)U(kuò)增試劑，擴(kuò)增提取出的TBDNA，具體反應(yīng)如下TB擴(kuò)增反應(yīng)液10微升提取DNA溶液5微升ddH20_5微升總體積為20微升反應(yīng)溫度及時(shí)間63°C，60分鐘6.結(jié)果檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物應(yīng)用核酸檢測(cè)試紙條進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如附圖4。從附圖4的結(jié)果可以看出，結(jié)核桿菌鏡檢結(jié)果陽(yáng)性樣本經(jīng)擴(kuò)增后核酸試紙條檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性。注4+、3+、2+、1+分別為結(jié)核桿菌鏡檢結(jié)果陽(yáng)性樣本。實(shí)施例2:DNA的提取1.洗脫取沙眼衣原體(CT)待檢患者的棉拭子樣本，在其樣本采集管中加入lml生理鹽水，振蕩混勻，確保棉拭子上分泌物被充分洗脫；2.裂解在上述洗脫液中加入等量的裂解液；混勻后室溫靜置5分鐘；利用微量臨床樣本核酸快速提取裝置吸取上述混合液，將抽吸裝置中的濾液經(jīng)尖口吸管推出棄掉；3.清洗利用微量臨床樣本核酸快速提取裝置在裝有清洗液的離心管里抽吸后，將抽吸裝置中的濾液經(jīng)尖口吸管推出棄掉；4.DNA洗脫繼續(xù)使用微量臨床樣本核酸快速提取裝置抽吸100ul洗脫液，把抽吸裝置中的液體經(jīng)經(jīng)尖口吸管推出至一新的離心管中，備用。5.核酸擴(kuò)增應(yīng)用CTPCR擴(kuò)增試劑，分別擴(kuò)增提取出的DNA,具體反應(yīng)如下CT擴(kuò)增反應(yīng)液10微升提取DNA溶液4微升ddH20_6微升總體積為20微升反應(yīng)程序95°C,5分鐘94。C,10秒、58°C,10秒72°C,20秒》X60循環(huán)72°C,5分鐘95°C,5分鐘」6.結(jié)果檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物應(yīng)用核酸檢測(cè)試紙條進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如附圖5。從附圖5的結(jié)果可以看出，不同病原體拷貝數(shù)的樣本經(jīng)過(guò)微量臨床樣本核酸快速提取裝置處理后，檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性。注106、105、104分別為處理樣本的病原體的實(shí)際拷貝數(shù)(/ml)實(shí)施例3:血清樣本處理及丙型肝炎病毒(HCV)RNA的提取1.裂解取HCV血清樣本200ul(凍存血清使用前在室溫融解，振蕩混勻10秒鐘)，加入等量裂解液，充分混勻，室溫靜置5分鐘；利用微量臨床樣本核酸快速提取裝置吸取上述混合液，將抽吸裝置中的濾液經(jīng)尖口吸管推出棄掉；2.清洗利用微量臨床樣本核酸快速提取裝置在裝有清洗液的離心管里抽吸后，將抽吸裝置中的濾液經(jīng)尖口吸管推出棄掉；3.RNA洗脫繼續(xù)使用微量臨床樣本核酸快速提取裝置抽吸100ul洗脫液，把抽吸裝置中的液體經(jīng)經(jīng)尖口吸管推出至一新的離心管中，備用4.核酸擴(kuò)增應(yīng)用RT-HCV恒溫?cái)U(kuò)增試劑，擴(kuò)增提取出的HCVRNA,具體反應(yīng)如下RT-HCV擴(kuò)增反應(yīng)液14微升提取RNA溶液6微升總體積為20微升反應(yīng)溫度及時(shí)間60°C，120分鐘5.結(jié)果檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物應(yīng)用核酸檢測(cè)試紙條進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如附圖6。從附圖6的結(jié)果可以看出，不同病原體拷貝數(shù)的樣本經(jīng)過(guò)微量臨床樣本核酸快速提取裝置處理后，檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性。注107、106、105、104分別為處理血清樣本中病毒顆粒的實(shí)際拷貝數(shù)(/ml)，同時(shí)采用體液病毒RNA提取試劑盒處理同樣的血清標(biāo)本，進(jìn)行對(duì)照。實(shí)施例4:犬糞便樣本處理及犬細(xì)小病毒(CPV)DNA的提取1.洗脫取待檢犬(CPV)的肛拭子，在其樣本采集管中加入lml生理鹽水，振蕩混勻，確保棉拭子上糞便被充分洗脫；2.裂解在上述洗脫液中加入等量的裂解液；混勻后室溫靜置5分鐘；利用微量臨床樣本核酸快速提取裝置吸取上述混合液，將抽吸裝置中的濾液經(jīng)尖口吸管推出棄掉；3.清洗利用微量臨床樣本核酸快速提取裝置在裝有清洗液的離心管里抽吸后，將抽吸裝置中的濾液經(jīng)尖口吸管推出棄掉；4.DNA洗脫繼續(xù)使用微量臨床樣本核酸快速提取裝置抽吸100ul洗脫液，把抽吸裝置中的液體經(jīng)尖口吸管推出至一新的離心管中，備用。5.核酸擴(kuò)增應(yīng)用CPV擴(kuò)增試劑，擴(kuò)增提取出的DNA,具體反應(yīng)如下CPV擴(kuò)增反應(yīng)液10微升提取DNA溶液2微升ddH208微升總體積為20微升反應(yīng)程序63°C，30分鐘6.結(jié)果檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物應(yīng)用核酸檢測(cè)試紙條進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如附圖7。從附圖7結(jié)果可以看出，經(jīng)犬細(xì)小病毒抗體免疫試劑盒檢測(cè)陽(yáng)性的樣本經(jīng)擴(kuò)增后核酸試紙條檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性。注4+、3+分別為犬細(xì)小病毒抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)的陽(yáng)性結(jié)果。權(quán)利要求1、一種從各種微量臨床樣本中快速提取核酸的方法，其包括以下步驟(a)將臨床樣本加入裂解液，混勻；(b)抽吸臨床樣本，流經(jīng)過(guò)濾膜，樣本中的核酸成分因膜的特異性吸附而吸附在過(guò)濾膜上，濾液為有細(xì)胞碎屑和蛋白質(zhì)的廢液；(c)抽吸清洗液，流經(jīng)過(guò)濾膜，清洗過(guò)濾膜上殘留的蛋白質(zhì)或其它成分，棄濾液；(d)抽吸洗脫液，流經(jīng)過(guò)濾膜，將吸附在膜上的核酸成分洗脫，而得到不含有其他雜質(zhì)的核酸水溶液，用于核酸擴(kuò)增。2、根據(jù)權(quán)利要求l的方法，其中所述核酸為DNA或RNA。3、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中采用抽吸裝置完成抽吸操作。4、根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中所述的抽吸裝置為一次性注射器或塑料泡。5、根據(jù)權(quán)利要求1-4的任何一種的方法，其中裂解液是異硫氰酸胍溶液，裂解液與臨床樣本的體積比為1-2:1，洗脫液是10mM的Tris-HCLo6、根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中裂解液與臨床樣本的體積比為1:1。7、根據(jù)權(quán)利要求1-4的任何一種的方法，其中所述過(guò)濾膜選自硅膠膜。8、實(shí)施權(quán)利要求1-7的任何一種方法的微量臨床樣本核酸快速提取試劑盒，其包括微量臨床樣本核酸快速提取裝置、細(xì)胞裂解液、清洗液及洗脫液，其中提取裝置由尖口吸管(l)、過(guò)濾器(2)、抽吸裝置(3)組成。9、根據(jù)權(quán)利要求8的試劑盒，其中所述抽吸裝置(3)是一次性注射器或塑料泡。10、根據(jù)權(quán)利要求8或9的試劑盒，其中所述過(guò)濾器(2)選自硝硅膠膜過(guò)濾器。11、權(quán)利要求8-10中任何一項(xiàng)所述的試劑盒在傳染病病原體、宿主或病原體基因突變和單核苷酸多態(tài)性檢測(cè)中的用途。全文摘要本發(fā)明涉及從各種微量臨床樣本中快速處理和提取核酸的方法，包括細(xì)胞裂解、濾膜吸附和洗脫提取核酸(DNA和RNA)步驟。本發(fā)明還涉及用于臨床樣本核酸快速提取的試劑盒及其用途。文檔編號(hào)C12N15/10GK101684463SQ20081016695公開日2010年3月31日申請(qǐng)日期2008年9月28日優(yōu)先權(quán)日2008年9月28日發(fā)明者尤其敏,王宏瑩,堅(jiān)石,英羅,林胡,鐘華燕申請(qǐng)人:杭州優(yōu)思達(dá)生物技術(shù)有限公司