專利名稱：一種amacr基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應用的制作方法
一種AMACR基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應用技術領域：
本發明涉及一種試劑盒，具體地說關于一種AMACR基因的原位雜交檢測試 劑盒及其檢測方法和應用。
背景技術：
根據國內外權威機構提供的資料，我國每年癌癥的新增人數170萬，死亡 人數近160萬，患者600萬，全球每年新增癌癥患者800萬，死亡人數接近800 萬，患者約有8400萬人，到2020年以上人數將翻一番，這是一組可怕的數字。
2005年美國衛生研究院、癌癥研究院、疾控中心等多家單位做了一個年度 報告，"認為人類在抗癌大戰中是失敗"，也就是說癌癥死亡率沒有降低，其列 舉出造成抗癌大戰失敗的幾個因素是l.腫瘤細胞異質性；2.腫瘤細胞耐藥性； 3.抗癌藥物設計思路不完善等。同時，該報告中亦提出應重新審視現有診治癌 癥的措施。
本發明人在研究中發現，導致癌癥死亡率不降的另兩個重要原因是:l.不能 做到真正的早期診斷;2.轉移的病理機制不清楚。依照傳統的醫學影像及和其它 生化(如蛋白標記物)指標來診斷癌癥，認為占位性癌塊在2公分下是屬于早 期癌癥的診斷(更小些有時無癥狀體征)，這一概念值得認真討論。影像醫學 的2公分以下癌塊屬早期這一界定科學性是不夠嚴謹的，從細胞學角度，l公 分的腫塊約有一億個腫瘤細胞，2公分的腫塊其三維空間的細胞疊加數遠不止 2億個腫瘤細胞，從癌變前期到單克隆癌細胞產生及形成2公分的癌塊，其病 理演變過程相當長，可能是一年或兩年、甚至三年以上，很難證實的是在這個
過程中，腫塊是癌癥唯一的發生地和單獨的病灶。臨床上已證實 一旦形成腫 塊的同時，其他癌細胞通過不同途徑遷移到其他部位克隆生長； 一旦切除原發 灶后，其他器官復發灶或多發癌塊灶先后形成或轉移。因此，在臨床上以2公 分以下的腫塊大小來界定早期與否，不夠嚴謹(有些病例，在發現原發病灶時， 同時發現轉移病灶，不在我們表述的內容中)，這時己經是晚期了，這是導致 癌癥死亡率不降的真正原因。
隨著分子生物技術日益完善，功能基因組學，癌癥基因組學等研究的深入 展開，至今，我們已有可能在基因水平上做更精確的早期診斷，在癌變前期或 癌細胞形成(單克隆時)或突破血管壁早期轉移時，就能做到早期預測診斷。
幾十年來,PSA在前列腺癌的診斷和治療中具有劃時代的意義。然而，近 些年來越來越多低豐度PSA前列腺癌被診斷，PSA對前列腺癌診斷的敏感性 和特異性越來越受到質疑。Stamey等對1317例前列腺癌根治患者分析發現， 1983-1988年間與1999-2003間相比:直腸指診陽性率由91°/。降到17%;患者 平均年齡由64歲降至59歲；腫瘤的體積由5.3cm降至2.4cm;平均PSA水平 由25ng/ml降至8nh/ml;前列腺體積由44g增至53g。研究者認為，1983-1988 年間PSA列腺癌密切相關，而1999-2003年間PSA僅與前列腺增生(體積)
- 、
相關。Bader等報告U93例前列腺癌根治術患者中，有相當部分的前列腺癌患 者PSA水平低(8ng/ml)，而且這部分病人與前列腺增生難以鑒別,特別是檢測 前列腺特異性抗原(PSA)血濃度來篩査前列腺癌,但非前列腺癌疾病患者 PSA血濃度也可以升高。研究發現，前列腺癌過度表達a-甲基酰基輔酶A消旋 酶(AMACR)。為了確定前列腺癌組織表達AMACR的情況和臨床實用價值， 美國密歇根大學Rubin等對獨立完成的4組DNA微陣列基因表達資料(128 份標本)進行了分析。并采用前列腺癌組織微陣列測定了 342份前列腺組織(代
表前列腺癌不同發展階段)的AMACR水平，蛋白質表達水平分為陰性(1 分)、弱陽性(2分)、中度陽性(3分)和強陽性(4分)。結果顯示，在4組 獨立完成的DNA微陣列分析中，有3組發現前列腺癌顯著過度表達AMACR (P< 0.001)。在轉錄物水平(逆轉錄聚合酶鏈反應，RT—PCR)和蛋白質水 平(免疫印跡及免疫組化)都證實前列腺癌AMACR表達上調。免疫組化檢査 證實，惡性前列腺上皮的AMACR表達比良性上皮增高。組織微陣列測定顯示， 良性前列腺(108份標本)、萎縮前列腺(26份標本)、前列腺上皮內瘤形成(75 份標本)、局限性前列腺癌(116份標本)、轉移前列腺癌(17份標本)的平均 AMACR蛋白染色強度分別為1.31、 2.33、 2.67、 3.20和2.50(P< 0.001)。成 對比較顯示，局限性前列腺癌和良性前列腺組織染色強度有顯著差異，平均表 達評分分別為3.2分和1.3分(平均相差1.9， P< 0.001)。將中度或高度染色強 度(3或4分)作為陽性標準，Rubin等評估了 94份前列腺針吸活檢標本的 AMACR蛋白表達。結果證明，AMACR檢測診斷前列腺癌的敏感性為97X， 特異性為100%。 AMACR的優點在于它是癌癥特異性，只存在于癌癥組織。 Rubin稱，AMACR亦可用作其他癌癥的診斷標志物。對各種癌癥細胞進行檢 查后發現，結腸直腸癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、淋巴瘤和黑素瘤都 過度表達AMACR,以結腸直腸癌和前列腺癌表達最高。研究者認為，AMACR 是對現有前列腺癌診斷方法的重要補充，AMACR可大大提高前列腺癌的診斷 準確性。診斷有困難的前列腺針吸活檢標本，可進一步檢査AMACR獲得確診。 目前對AMACR基因的研究都采用高通量基因芯片技術，而這些方法多用 于科研方面，不適應臨床推廣應用，特別是個性化的應用在國內外現階段尚未 見介紹。根據現有的文獻資料AMACR基因的檢測技術及基因診斷試劑盒未見 報道。

發明內容
本發明的目的是，提供一種AMACR基因的原位雜交檢測試劑盒在制備 檢測前列腺和其它癌癥疾病藥物中的應用。
本發明的再一的目的是，提供一種AMACR基因的原位雜交檢測試劑盒。 本發明的再一的目的是，提供一種AMACR的基因原位雜交檢測方法。 為實現上述目的，本發明采取的技術方案是 一種AMACR基因的原位雜 交檢測試劑盒在制備檢測前列腺和其它癌癥疾病藥物中的應用，所述的 試劑盒包括雜交探針、標記物，所述的雜交探針序列如SEQ ID NO. 1 所示的AMACR基因序列，AMACR基因的核苷酸序列長度是1299bp， CDS 是20…1168bp。所述的其它癌癥是結腸直腸癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、 肺癌、淋巴瘤和黑素瘤。
所述的雜交探針序列如SEQ ID NO. 1所示的RNA序列。 所述的標記物選自放射性核素或非放射性標記物。 所述的放射性核素選自3H、 35S、 1251或32P中的一種。 所述的非放射性標記物選自生物素、地高辛、堿性磷酸酶、辣根過氧 化酶或熒光素中的一種。
所述的非放射性標記物優選自地高辛。
所述的試劑盒還包括增效劑，所述的增效劑是堿性磷酸酶抗體。 為實現上述第二個目的，本發明采取的技術方案是 一種AMACR基因的 原位雜交檢測試劑盒，包括雜交探針、標記物，所述的雜交探針序列如 SEQ ID NO. 1所示，所述的標記物選自放射性核素或非放射性標記物。 為實現上述第三個目的，本發明采取的技術方案是 一種AMACR的基 因原位雜交檢測方法，該方法包括以下步驟
a、 、將試劑盒中的雜交探針與底物中待測RNA接觸，形成雜交復 合體；
b、 檢測a步驟得到的雜交復合體。
所述的a步驟中形成雜交復合體的條件為核酸雜交的溫度為 42°C;核酸雜交的時間為16—24小時，所述的底物選用血液細胞標 本或組織細胞標本。
本發明的檢測試劑盒是采用核酸雜交技術和組化免疫方法相結合，以 AMACR基因為檢測對象，合成探針是AMACR基因的DNA或RNA序列， 檢測的底物是人體血液標本白細胞或組織細胞的RNA的表達量。原位雜交技 術的顯示方法能提供AMACR基因的半定量或定量表達程度判定。根據雜交后 免疫組化顯色判定以上基因的表達量，正常人AMACR基因不表達，即不顯色， AMACR基因在前列腺癌病人高表達。
本發明的診斷試劑盒的組份是由雜交探針，雜交液，顯色劑，增效劑等組 成。本試劑盒的核酸雜交原理是分子生物學業內人士均熟知，具體操作歩驟是 標本處理、預雜交、雜交、免疫組化染色、鏡下進行定量分析、結果報告，其 中雜交的具體步驟包括-儀器操作
1) .將待測標本放入反應槽中；
2) .儀器自動棄去液體，自動加消化液；
3) .儀器自動棄去液體，自動后固定；
4) .儀器自動棄去液體，自動預雜交(42°C);
5) .儀器自動棄去液體，自動清洗；
6) .儀器自動棄去液體，自動雜交(42'C);
7) .儀器自動棄去液體，自動清洗；
8) .儀器自動棄去液體，自動與DIG抗體培養(室溫)；
9) .儀器自動棄去液體，自動清洗，顯色；
10) .取出封片鏡檢。
本發明優點在于
1、 本發明提供的試劑盒具有靈敏度高、特異性強的特點。
2、 本發明的檢測方法操作方便、簡單，能在區級以上醫院普遍使用和推
廣。克服了目前對AMACR基因的研究都采用高通量基因芯片方法，而這些方 法多用于科研方面，不適應臨床應用的缺陷。
3、 本發明的臨床意義是更早期檢測前列腺癌癥發生，本發明的診斷試劑 盒與臨床上其它檢測癌胚蛋白標志物，以及影像醫學檢査有顯著不同。本發明 可以在基因水平上(癌變前期或癌細胞增殖)檢測AMACR基因異常表達，在 影像醫學檢査未發現占位性癌病灶之前，及早于PSA前列腺癌癥生化指標未 產生異常之前，亦未形成腫瘤之前，能及早做到以上基因表達異常的信息采集， 給臨床前列腺和其它癌癥病患一個真正的早期診斷以及治療后轉移復發及早 預測。這樣才有可能實施前列腺和其它癌的早期診斷、早期預防、早期治療，
'有可能從源頭上徹底根治癌癥惡疾。
4、 用AMACR基因試劑盒檢測前列腺和其它癌癥比用其它試劑盒(PSA 蛋白標記物)檢測前列腺癌癥更早期、敏感性更好。本發明采用核酸原位雜交 技術檢測AMACR的mRNA或DNA要比尿液的AMACR的蛋白更早期、敏 感性更好。


圖1是本發明實施2例中正常人AMACR圖2是本發明實施例2中前列腺癌癥病人AMACR過量表達圖3是本發明實施例2中肺癌AMACR表達圖4是本發明實施例2中乳腺癌AMACR表達圖5是本發明實施例3中AMACR和PSA基因平衡試驗比較圖。
具體實施方式
下面結合附圖對本發明提供的一種AMACR基因的原位雜交檢測試劑盒及其 檢測方法和應用的具體實施方式
做詳細說明。 實施例1
一種AMACR基因的原位雜交檢測試劑盒，包括雜交探針、標記物、增效劑， 其中，所述的雜交探針序列如SEQ IDNO. 1所示，所示。雜交探針用地高辛 標記。試劑盒中的其它液體和標本組成如下
消化液100 u 1/管l管/盒無色透明液體
保護液100ul/管l管/盒無色透明液體
預雜交液1300 ul/管2管/盒無色透明液體
正義雜交液10ul/管'l管/盒無色透明液體
反義雜交液10ul/管l管/盒無色透明液體
封閉液1000 tU/管1管/盒無色透明液體
堿性磷酸酶抗體lul/管l管/盒無色透明液體
顯色劑A175 n 1/管l管/盒黃色液體
顯色劑B320 li 1/管l管/盒無色透明液體
緩沖液I 10x90ml/瓶1瓶/盒淺黃色或無色透明液體
緩沖液n iox80ml/瓶l瓶/盒淺黃色或無色透明液體
緩沖液m iox20m/瓶3瓶/盒淺黃色或無色透明液體
緩沖液IV 10x90ml/瓶1瓶/盒淺黃色或無色透明液體
固定液卯ml/瓶l瓶/盒無色透明液體
陽性對照標本6片/盒
上述試劑成分說明(所有試劑購自SIGMA)
1 、 消化液20mg/ml蛋白酶K, 1 OOmg蛋白酶K，力卩DEPC- H20 5ml;
2、 保護液0.2g的glycine加入lml的1 X緩沖液I ;
3、 預雜交液lX緩沖液II7.5ml 50XD3ml
10mg/ml yest t-RNA 750ul
1 lmg/ml SALMON TESTES DNA 682ul
0.04MEDTA3ml
50% formamide 15ml
4、 封閉液0.03g的bloking (購買自羅氏公司)加入lmllX緩沖液III;
5、 lOx緩沖液I: (PH7.1-7.4) NaCl 80g
Na2HPO/12H20 360g KC1 2g KH2P042g
加三蒸水至ll,并高壓滅菌；
6、 lOx緩沖液II: (PH7.0)
NaCl 175,3g 檸檬酸鈉88.2g HCl幾滴
加三蒸水至11,并高壓滅菌；
7、 緩沖液III: (PH7.9) Tris 12Ug
NaCl 87.66g HCl60ml左右 加三蒸水至ll，并高壓滅菌；
8、 緩沖液IV:
1M Tris-HC1(PH9.5): Tirs 121.1g力P HCl 3ml左右，加水900ml，調PH至
9.5，加水至ll，并高壓滅菌;
1MNaCl: NaCl 58.44加水至11，并高壓滅菌； 0.5MMgCl2: 101.65gMgCl2.6H20加水至11，并高壓滅菌；
9、 固定液多聚甲醛40g加1 X緩沖液I至ll，稍加熱(約50-60度)攪拌至溶 解；
10、 顯色劑A: NBT lg加70%DMF11.44ml; 11 、 顯色劑B: BCIP lg力B 1000/oDMF30ml。
本發明的試劑盒可以多人份使用或一人份使用。 實施例2
一種AMACR基因的原位雜交檢測方法 一、標本處理
1、用10ml的離心管，裝4.5ml淋巴細胞分離液，再將3 ml抗凝血緩慢加入含
有淋巴細胞分離液(血淋巴細胞分離液^:1.5)的離心管中，2000r/min離心10 min;
2、 吸取中間層白細胞至另一離心管中,再在此管中加入約兩倍的1X緩沖液I， 混勻，1500g/min離心10min;
3、 棄上清.沉淀加入約兩倍的lX緩沖液I,混勻,1500g/min離心10min;
4、 棄上清,并把試管口多余的液體用擦手紙吸去。再將沉淀制成懸液，滴在玻 片上推片,自然干燥。(有條件的醫院可以用制片機制片。)3 ml血，可以做4 張片子；
5、 用40ml 4%固定液在玻璃缸中，固定30min，再用lX緩沖液I洗5min。每 缸可以放16片；
6、 標本可保存在-2(TC，或繼續做實驗。
二、 將試劑盒中試劑配制成使用濃度
1、將10X緩沖液I用三蒸水按1:10稀釋成1X緩沖液I;
2 、將20 X緩沖液II用三蒸水按1:10稀釋成2 X緩沖液II;
按1:100稀釋成0.2X緩沖液II;按1:200稀釋成0.1 X緩沖液II;
3、 將IOX緩沖液III用三蒸水按1:10稀釋成lX緩沖液m;
4、 IOX緩沖液IV用H蒸水按1:10稀釋成X緩沖液IV (取1#， 2#， 3#各10ml, 加水至100ml既可)。
三、 實驗步驟
1、 取每位待檢者標本兩張，(另外兩張留作復査用)及陽性對照標本兩張(每 次實驗做一對陽性對照)；
2、 在玻璃缸里加消化液(消化液100ul加1X緩沖液199.9ml，即為使用濃度)20 ml。 37i:水浴預熱10分鐘。放進16張玻片，37t處理12 min，再用1 X緩沖 液I洗5min;
3、 用0.2%的保護液(保護液lml加1 X緩沖液I99ml即為使用濃度)洗10min,三 蒸水洗5min,以上過程都在玻璃缸進行。玻片自然干燥；
4、 將玻片放入保濕盒內,加預雜交液20ul/片.蓋上蓋玻片,蓋緊保濕盒，放在42 。C恒溫水浴箱中3h以上；
5、 取出玻片,棄去蓋玻片,將玻片放入玻璃缸內，用70%,90%,95%的乙醇各洗 2min，自然干燥；
6、 將玻片放入保濕盒內,每位病人標本兩張， 一張加正義雜交液20ul/片，另一 張加反義雜交液20ul/片.蓋上蓋玻片，蓋緊保濕盒，放在42C恒溫水浴箱中 16-24h;
7、 取出玻片，棄去蓋玻片，將玻片放入玻璃缸內
在42'C恒溫水浴箱中用2 X緩沖液II洗兩次,每次15min 在42'C恒溫水浴箱中用0.2X緩沖液II洗一次,每次15min 在42'C恒溫水浴箱中用0.1 X緩沖液II洗兩次，每次15min;
8、 用IX緩沖液III洗30s,取出玻片,自然干燥；
9、 將玻片放入保濕盒內,加0.5%1封閉液(lml封閉液加5mll X緩沖液HI)100u1/ 片，蓋緊保濕盒，在室溫下作用30min;
10、 取出玻片,用IX緩沖液III洗30s,自然干燥；
11、 將玻片放入保濕盒內，加堿性磷酸酶抗體(加入1.8mllX緩沖液III)100ul/片, 蓋緊保濕盒在室溫下作用30min;
12、 取出玻片，用lX緩沖液m洗3次，每次15min;
13、 1X緩沖液IV洗2min,加顯色劑(顯色劑A73.3ul,顯色劑B157.5ul加到30mll X緩沖液IV中,混勻)，室溫避光12h以上；
14、用三蒸水洗5min,自然干燥，(用甘油加10%的1X緩沖液I混勻)封片鏡檢。
四、結果判斷
在光鏡下計數100-300個細胞，計算染上紫色細胞的百分比。 陽性對照標本加反義雜交液的應該80%以上染上紫色。 所有加正義雜交液的陰性內對照應無色。
正常人AMACR基因表達圖見圖1;前列腺癌癥病人AMACR過量表達圖 見圖2;肺癌AMACR表達圖見圖3;乳腺癌AMACR表達圖見圖4。
地高辛標記的cDNA、 RNA和寡核苷酸探針，不但探針的具有生物素標記 優點，還克服了生物素標記的探針在原位雜交過程中受組織內源性生物素干憂 等缺點)，將該雜交探針與人體血液白細胞的待測RNA核酸進行雜交，再用免 疫組化的方法顯色，在光鏡下觀察mRNA的存在和定位,根據染色的細胞數， 判斷目的基因的表達量。
本發明方法是目前常用的核酸原位雜交技術，該方法通過檢測底物細胞中 的AMACR基因表達量，用來確定前列腺和其它癌是否發生，臨床研究表明， AMACR基因是前列腺癌的特異性基因，AMACR基因在正常人中不表達，唯 獨在前列腺和其它癌病人中表達， 一旦AMACR基因表達，說明前列腺和其它 癌己經發生，從而獲得前列腺和其它癌的診斷信息。
實施例3
用AMACR基因試劑盒檢測前列腺癌癥與用PSA、 AMACR基因試劑盒檢 測前列腺癌癥之間對比實驗。
近些年來臨床上越來越多PSA蛋白低表達的前列腺癌被診斷出來，臨床 上對PSA標記物診斷前列腺癌的敏感性和特異性越來越受到質疑。AMACR
是近來發現的前列腺癌相關診斷標記物1。 AMACR只在前列腺癌組織表達， 在BPH、高分級前列腺上皮內瘤和精囊組織無表達，在其它腫瘤均無表達，而 且AMACR表達的強度隨著Gleasson評分增加而增強(+1——h5)。為了科學 評價PSA、 AMACR基因和AMACR基因各自在前列腺癌早期診斷的特異性、 敏感性、準確性。我們用平行試驗的方法，同時檢測PSA、 AMACR和AMACR 的mRNA，檢測技術采用核酸原位雜交技術，用同一例前列腺癌患者的外周血 或前列腺組織標本，同時檢測AMACR基因和PSA、 AMACR基因的mRNA (進行核酸原位雜交、免疫組化染色、鏡下記數、結果報告等均采用AMACR 基因原位雜交技術的相同方法和步驟及試劑)。發現AMACR基因在前列腺癌 病人中表達量比PSA、 AMACR基因在同一前列腺癌病人的表達量要高。 AMACR基因對前列腺癌早期診斷的特異性、敏感性、準確性比PSA、 AMACR 基因更好，原位雜交基因表達圖5顯示，AMACR基因的表達量是65M， PSA 基因的表達量是40%， AMACR基因唯獨在前列腺和其它癌癥中表達，在正常 健康人不表達，它作于前列腺和其它癌診斷的早期指標有非常重要的臨床意 義。在前列腺癌的臨床診斷中，有可能替代PSA標記物的診斷技術。
以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對于本技術領域的普通 技術人員，在不脫離本發明方法的前提下，還可以做出若干改進和補充，這些 改進和補充也應視為本發明的保護范圍。
SEQUENCE LISTING 〈110〉芮屈生物技術(上海)有限公司
〈120〉 一種AMACR基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應用 〈130〉 / 〈160〉 1
<170〉 Patentln version 3. 1
〈210〉 1
〈211〉 1299
〈212〉 DNA
〈213〉人工序列
〈400〉 1
gggggcactg ggaagcgcca tggcactgca gggcatctcg gtcgtggagc tgtccggcct 60 ggccccgggc ccgttctgtg ctatggtcct ggctgacttc ggggcgcgtg tggtacgcgt 120 ggaccggccc ggctcccgct acgacgtgag ccgcttgggc cggggcaagc gctcgctagt 180 gctggacctg aBgcagccgc gggg,cgc cgtgctgcgg cgtctgtgca agcggtcgga 譜 tgtgctgctg gagcccttcc gccgcggtgt catggagaaa ctccagctgg gcccagagat 300 tctgcagcgg gaaaatccaa ggcttattta tgccaggctg agtggatttg gccagtcagg 3G0 aagcttctgc cggttagctg gccacgatat caactatttg actttgtcag gcgttctctc 420 aaaaattggc agaagtggtg agaatccgta tgccccgctg aatctcctgg ctgactttgc 480 tggtggtggc cttatgtgtg cactgggcat tataatggct ctttttgacc gcacacgcac 540 tggcaagggt caggtcattg atgcaaatat ggtggaagga acagcatatt taagttcttt 600 tctgtggaaa actcagaaat tgagtctgtg ggaagcacct cgaggacaga acatgttgga 660 tggtggagca cctttctata cgacttacag gacagcagat ggggaattca tggctgttgg 了20 agcaatagaa ccccagttct acgagctgct gatcaaagga cttggactaa agtctgatga 780 acttcccaat cagatgagca tggatgattg gccagaaatg aagaagaagt ttgcagatgt 840 atttgcagag aagacgaagg cagagtggtg tcaaatcttt gacggcacag atgcctgtgt 900 gactccggtt ctgacttttg aggaggttgt tcatcatgat cacaacaagg aacggggctc %0 gtttatcacc agtgaggagc aggacgtgag cccccgccct gcacctctgc tgttaaacac 1020cccagccatc ccttctttca aaagggatcc tttcatagga gaacacactg aggagatact 1080
tgaagaattt ggattcagcc gcgaagagat ttatcagctt aactcagata aaatcattga 1140
aagtaataag gtaaaagcta gtctctaact tccaggccca cggctcaagt gaatttgaat 1200
actgcattta cagtgtagag taacacataa cattgtatgc atggaaacat ggagg犯cag 1260
tattacagtg tcctaccact ctaatcaaga a犯gaatta 1299
權利要求
1. 一種AMACR基因的原位雜交檢測試劑盒在制備檢測前列腺和其它癌癥疾病藥物中的應用，所述的試劑盒包括雜交探針、標記物，所述的雜交探針序列如SEQ ID NO.1所示，所述的其它癌癥是結腸直腸癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、淋巴瘤和黑素瘤。
2. 根據權利要求1所述的應用，其特征在于所述的雜交探針 序列如SEQ ID NO. 1所示的RNA序列。
3. 根據權利要求1或2所述的應用，其特征在于所述的標記 物選自放射性核素或非放射性標記物。
4. 根據權利要求3所述的應用，其特征在于所述的放射性核 素選自3H、 35S、 1251或32P中的一種。
5. 根據權利要求3所述的應用，其特征在于所述的非放射性標記物選自生物素、地高辛、堿性磷酸酶、辣根過氧化酶或熒光素中的 一種。
6. 根據權利要求5所述的應用，其特征在于所述的非放射性標記物優選自地高辛。
7. 根據權利要求1或2所述的應用，其特征在于所述的試劑盒還包括增效劑，所述的增效劑是堿性磷酸酶抗體。
8. —種AMACR基因的原位雜交檢測試劑盒，包括雜交探針、標記物，其特征在于，所述的雜交探針序列如SEQ IDNO. 1所示，所述的 標記物選自放射性核素或非放射性標記物。
9. 一種AMACR的基因原位雜交檢測方法，其特征在于，該方法包括以下步驟a、將權利要求8所述試劑盒中的雜交探針與底物中待測RNA接觸，形成雜交復合體；b、檢測a步驟得到的雜交復合體。
10.根據權利要求9所述的檢測方法，其特征在于a步驟中形 成雜交復合體的條件為核酸雜交的溫度為42°C;核酸雜交的時間 為16 — 24小時，所述的底物選用血液細胞標本或組織細胞標本。
全文摘要
本發明涉及一種AMACR基因的原位雜交檢測試劑盒，包括雜交探針、標記物，所述的雜交探針序列如SEQ ID NO.1所示。本發明還提供了一種AMACR基因原位雜交檢測方法。另外，本發明還提供了試劑盒在制備檢測前列腺和其它癌癥疾病藥物中的應用。本發明優點在于本發明提供的試劑盒具有靈敏度高、特異性強的特點。本發明的檢測方法操作方便、簡單，能在區級以上醫院普遍使用和推廣。
文檔編號C12Q1/68GK101386889SQ20081020208
公開日2009年3月18日 申請日期2008年10月31日 優先權日2008年10月31日 公開號200810202081.8
發明者張云福, 裘建英 申請人:芮屈生物技術(上海)有限公司