專利名稱：一種甘蔗抗黑穗病鑒定方法
技術領域：
本發明屬于植物抗病性鑒定技術領域，具體涉及一種甘蔗抗黑穗病鑒定方法。
背景技術：
甘蔗黑穗病是世界性的主要甘蔗病害之一，培育抗黑穗病的新品種是防治和控制 該病最經濟、環保而有效的措施，抗黑穗病作為甘蔗品種選育中一個不可缺少的目標，在育 種過程中需要進行抗黑穗病鑒定篩選。抗黑穗病鑒定的方法影響著抗病育種的成效，迄今 為止，國內的甘蔗品種對黑穗病的抗性鑒定采用人工接種和田間種植鑒定法，根據最終累 積的叢感病率和莖感病率，采用固定的1 9級分類法進行抗性分級，收獲后繼續留宿根觀 察，最后進行評價和定級，目前采用的方法受環境互作影響較大，不易控制，試驗操作復雜， 分級標準不易掌握，鑒定的結果與田間抗性差異大，不能準確反映品種的抗病性。

發明內容
本發明的目的是提出一種克服上述不足的甘蔗抗黑穗病鑒定方法，該方法能夠更 客觀地反映甘蔗鑒定材料的固有抗性水平，可以把環境的互作影響減少到最小，使鑒定結 果更準確。 本發明采用標準品種回歸分析鑒定法，即在供試品種中包含一套已知抗性的品 種，作為標準對照品種，通過回歸分析把待測無性系的抗性表現與標準對照品種相比較，進 行評價和定級。 本發明包括以下步驟 1、通過至少3次試驗，篩選出一套標準對照品種，其中包含至少兩個高抗，兩個中 抗和兩個感病標準對照品種。 2、將標準對照品種與參與試驗鑒定材料同時進行人工浸漬接種鑒定試驗，參試材 料放入懸浮液中浸漬接種10min，取出后置25t:左右的溫室內24小時后種植于大田，在試 驗中包含至少兩個高抗，兩個中抗和兩個感病標準對照品種。 3、甘蔗出苗后記錄出苗數，在5-6月后收獲時進行評價，計數每行上總叢數和感 染叢數；留宿根，同樣記錄出苗數和計數每行上總叢數和感染叢數，根據總叢數和感染叢數 進行叢感病率評價，計算感病率。 4、通過感染百分率進行變異分析通過感染標準百分率(X)及它們的標準分級 (Y)的回歸方程來計算測定無性系從而進行分級。
本發明的優點和有益效果 1、本發明能夠更客觀地反映甘蔗鑒定材料的固有抗性水平，可以把環境的互作影 響減少到最小，使鑒定結果更準確，所確定的抗性等級或類型就能夠更客觀地反映所鑒定 品種固有的抗性水平。 2、試驗中包含至少兩個高抗，兩個中抗和兩個感病標準對照品種，多個標準對照 品種可使鑒定結果更準確。
3、本發明隨著越來越多的標準品種的獲得，標準分級通過多次試驗結果的均值， 不斷精確化，從而可以把環境互作的影響降低到最小，且分級值為精確到小數點后1位的 連續數值，使分級更加精細，參試材料感染百分率(X)及它們的分級(Y)回歸曲線圖為連續 的對數函數曲線。
具體實施例方式
本發明的方法步驟是
—、篩選標準對照品種 1、通過至少3次試驗，篩選出一套標準對照品種。 2、在試驗中包含至少兩個高抗，兩個中抗和兩個感病標準對照品種。 二、人工浸漬接種鑒定試驗 1 、采集甘蔗黑穗病病菌孢子。 a、收集帶病的部分，從帶病位置以下10-20cm剪下，除去綠葉，放在包里，只收集 帶有很多孢子的部分。 b、把收集回來的帶病部分放在相應較低溫、干燥、但不結冰的地方，用塑料或者蠟
紙墊著。 c、讓它們充分干燥1-2周直到徹底干燥為止，這對維持孢子的成活是很必要的。
孢子必須在濕度很低的環境下保存。 d、通過篩網篩帶病部分從而收集孢子。 e、稱量收集孢子的重量，然后放入一個大廣口瓶中的紙包內，大廣口瓶中放有硅 膠干燥劑，用凡士林給廣口瓶封口 。 f 、在種植試驗的前幾個星期，對孢子進行存活試驗。取2-3克的少量孢子，并數孢 子數-100毫升消過毒的蒸餾水放入最少0. 1克孢子(加0. 05%的Tween 20來使孢子分 散，為了方便準確計數，稀釋液可能需要調節到和孢子數量相當的水平)，數血球計中的孢 子，計算每克中的孢子數。成活情況——在瓊脂液中放0. 5ml孢子懸浮液，以28-3(TC過夜 并計數萌發孢子的百分比。 2、每個供試材料取80個均為雙芽莖段的健康芽，分成四捆，檢測接種黑穗病病菌 孢子萌芽率，并配制黑穗病病菌濃度為5X 106孢子/ml的懸浮液，將參試材料放入懸浮液 中浸漬接種10min，取出后用塑料袋保濕，置25t:左右的溫室內24小時后播種于大田，試驗 采用隨機區組設計，設4個重復，單行區，行長5. 0米，行距1. 0米，每小區每品種20個芽， 接種后種植大田。 3、在鑒定試驗中將標準對照品種與參試鑒定材料同時進行人工浸漬接種鑒定，在 試驗中包含至少兩個高抗，兩個中抗和兩個感病標準對照品種。
三、感病百分率調查 1、甘蔗出苗后記錄出苗數，在5-6個月后進行評價，計數每行上總叢數和感染叢 數。留宿根，5-6個月后進行評價，計數每行上總叢數和感染叢數。
2、根據總叢數和感染叢數進行叢感病率評價，計算感病率。
四、結果分析 1、將抗黑穗病標準品種各次試驗的平均感病百分率(X)和標準分級(Y)用SPSS或SAS統計軟件進行回歸分析，回歸分析采用對數函數模型(Logarithmic)，推出回歸方程 和回歸曲線圖。 隨著越來越多的標準品種的獲得，標準分級通過多次試驗結果的均值，不斷精確 化，從而可以把環境互作的影響降低到最小。 2、將試驗材料的平均感病百分率通過對數函數回歸方程式及回歸曲線圖來計算 試驗無性系的分級值，從而進行分級，最后確定抗病類型。 權利要求
一種甘蔗抗黑穗病鑒定方法，其特征在于包括以下步驟1)、通過至少3次試驗，篩選出一套標準對照品種，其中包含至少兩個高抗，兩個中抗和兩個感病標準對照品種；2)、將標準對照品種與參與試驗鑒定材料同時進行人工浸漬接種鑒定試驗，參試材料放入懸浮液中浸漬接種10min，取出后置25℃左右的溫室內24小時后種植于大田，在試驗中包含至少兩個高抗，兩個中抗和兩個感病標準對照品種；3)、甘蔗出苗后記錄出苗數，在5-6月后收獲時進行評價，計數每行上總叢數和感染叢數；留宿根，同樣記錄出苗數和計數每行上總叢數和感染叢數，根據總叢數和感染叢數進行叢感病率評價，計算感病率；4)、通過感染百分率進行變異分析通過感染標準百分率(X)及它們的標準分級(Y)的回歸方程來計算測定無性系從而進行分級。
全文摘要
一種甘蔗抗黑穗病鑒定方法，通過至少3次試驗，其中包含至少兩個高抗，兩個中抗和兩個感病標準對照品種；篩選出一套標準對照品種，將標準對照品種與參與試驗鑒定材料同時進行人工浸漬接種鑒定試驗，甘蔗出苗后記錄出苗數，收獲時計數每行上總叢數和感染叢數；留宿根，同樣記錄出苗數和計數每行上總叢數和感染叢數，根據總叢數和感染叢數進行叢感病率評價，計算感病率；通過感染標準百分率(X)及它們的標準分級(Y)的回歸方程來計算測定無性系從而進行分級；該方法能夠更客觀地反映甘蔗鑒定材料的固有抗性水平，可以把環境的互作影響減少到最小，使鑒定結果更準確。
文檔編號C12Q1/18GK101696446SQ20091009508
公開日2010年4月21日 申請日期2009年10月26日 優先權日2009年10月26日
發明者盧文杰, 吳才文, 夏紅明, 尹興祥, 崔杰, 羅志明, 范源洪, 趙培方, 黃應昆 申請人:云南省農業科學院甘蔗研究所;