專利名稱：富集轉化桑葉的雞腿菇及其栽培方法和用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種雞腿菇及其栽培方法和用途。
背景技術：
糖尿病是目前中老年人的常見病和多發病，由糖尿病引起的并 發癥嚴重危及人們的生命健康。現有西藥類降糖藥物作用效果好，靴 點清楚，但長期服用易引起副作用。而中藥毒副作用小，且來源廣泛， 成本較低，是用于治療糖尿病的一個主要藥物來源。
桑葉是桑科植物桑Morus alba葉子的干燥物。桑葉作為中藥，早 已在民間廣泛應用。自古以來中醫就用桑葉來治療消渴證(相當于現代 醫學的糖尿病)。《木草綱日》記載:桑葉"汁煎代茗，能止消渴"。近代 醫家也常將桑葉配伍于中藥復方中應用于臨床，收效甚好。現代藥理研 究證明桑葉具有抑制血糖上升之功效，可預防和治療糖尿病。近年來， 各國研究人員對桑葉的組成、功能和作用機理進行了系統地研究，結果 發現桑葉中含有豐富的氨基酸、纖維素、維生素、礦物質以及多種生理 活性物質，具有降血糖、降血壓、降血脂、延緩衰老等多種保健功效。 1996年，陳福君等用桑葉總多糖(TPM)對四氧嘧啶糖尿病小鼠進行腹腔 汁射給藥，結果表明TPM有顯著的降血糖作用。但TPM的結構尚不清楚， 有待進一步研究。2002年，陳金顯等曾經對一種以桑葉為主要原料的保健品功效成分進行研究，結果表明桑葉多糖和生物堿均能明顯降低四氧
嘧啶糖尿病小鼠的空腹血糖，并有明顯預防小鼠血糖升高的作用。2005 年，吳志平等對桑樹不同藥用部位的降血糖效果進行了比較，發現桑葉、 桑白皮、桑枝、桑皮這四中中藥材都有明顯的降血糖作用。盡管桑葉具 有這些功效，但是桑葉也存在著見效慢，質量不穩定等中藥的共同缺點。 克服桑葉缺點提高桑葉療效可采用生物轉化的方法。用于生物轉化的菌 種有多種，但藥食用真菌轉化桑葉具有安全無毒等特點，更受到科研工 作者的青睞。
雞腿菇(Coprinuscomatus)是藥用真菌的一種，學名毛頭鬼傘，隸 屬于真菌門(Eu考cota),擔子菌亞門(Basidiomycotina)，層菌綱 (Hymenomycetes)， 傘菌目 (Agaricales )， 鬼傘禾斗(Coprinaceae )， 鬼 傘屬(Coprinus)。雞腿菇肉質細嫩、鮮美可口、營養豐富。目前，該品 種已被定為符合聯合國糧農組織(FAO)和世界衛生組織(WHO)要求 的集"天然、營養、保健"三種功能為一體的16種珍稀食用菌之一。近 年來國內外對雞腿菇的研究主要集中于它的馴化栽培、營養成分分 析、液體培養以及菌絲體內多糖及藥效等方面。1984年，英國阿斯頓 大學Bailey C.J報道雞腿菇含有降血糖的有效成分。1993年，黃年來用 雞腿菇水提物濃縮液飼養小鼠，1.5h有明顯降低血糖濃度的效果。2000 年，王玉萍等利用深層發酵方法獲得獲得富鉻雞腿菇發酵液，進行急性 毒性試驗，并對四氧嘧啶誘發的小鼠糖尿病模型做了降血糖試驗。2002 年，韓舂超等研究了雞腿菇發酵液與釩酸鈉協同抑制小鼠血糖升高的作用。

發明內容
本發明的目的在于提供一種可以用于糖尿病病人和糖耐量異常病 人的的血糖控制和治療的富集轉化桑葉的雞腿燕及其栽培方法和用 途。
本發明的技術解決方案是
一種富集轉化桑葉的雞腿菇，其特征是通過下列步驟得到
(1) 將雞腿菇試管斜面菌種接入新配制的麩皮、麥粒或棉籽殼培養
基，其培養基水分含量50 80%，培養溫度15 35'C，培養時0.5 4 月；
(2) 將用于栽培的培養基麥草100 200重量份、廢酵母5 100 重量份、硫酸銨1 20重量份、桑葉粉5 30重量份、石灰2 20 重量份、水130 280重量份混合均勻，堆置發酵；要求堆高0.5 3 米，寬度0.5 3米，共堆置21天，其中在第7、 13和18天，各翻 堆一次；
(3) 堆置發酵后將步驟(1)的菌種采用撒播或穴播接入，保溫保 濕培養20 40天，覆土3 10cm，調節水分50 80%，得到子實體；
(4) 子實體采摘后烘干，得干子實體。
一種富集轉化桑葉的雞腿菇的栽培方法，其特征是包括下列步
驟
(l)將雞腿菇試管斜面菌種接入新配制的麩皮、麥粒或棉籽殼培養
基，其培養基水分含量50 80%，培養溫度15 35。C，培養時0.5 4月；
(2) 將用于栽培的培養基麥草100 200重量份、廢酵母5 100 重量份、硫酸銨1 20重量份、桑葉粉5 30重量份、石灰2 20 重量份、水130 280重量份混合均勻，堆置發酵；要求堆高0.5~3 米，寬度0.5 3米，共堆置21天，其中在第7、 13和18天，各翻 堆一次；
(3) 堆置發酵后將步驟(1)的菌種采用撒播或穴播接入，保溫保 濕培養20 40天，覆土3 10cm，調節水分50 80%，得到子實體；
(4) 子實體采摘后烘干，得干子實體。
一種富集轉化桑葉的雞腿燕在制備治療糖尿病的藥物中的應用。 本發明得到的雞腿菇具有多種藥物功能，可用于糖尿病病人和糖 耐量異常病人的的血糖控制和治療，也可用于提高正常人群的肌體免疫 功能制備預防和/或治療糖尿病患者、糖耐量異常患者及糖尿病并發 癥的藥物或功能性食品，特別是其具有降低糖尿病人血糖功效，使其 成為降低血糖提供理想藥物或保健食品。
功能的檢測方法為選取空腹血糖水平在3.5 6.3mmol/L范圍的 正常雄性昆明小鼠，正常小鼠在禁食24小時后，給予腹腔注射四氧嘧 啶180mg/Kg體重，96小時后禁食，尾部靜脈取血測血糖值，并選用血 糖值在10mmol/L以上者再按血糖水平隨即分成1個正常組，1個陽性對 照組和4個樣品組(每組10只，分別以桑葉、雞腿菇、雞腿菇與桑葉 的混合組和富集轉化桑葉的雞腿菇，按體重500mg/kg體重的拌入基礎飼料給藥，其中正常組和陽性對照組給以基礎飼料)，每天自由取食飲 水，連續給藥7天后，禁食4小時，眼眶靜脈取血測定血糖值，比較了 桑葉、雞腿菇和雞腿菇與桑葉的物理混合組和富集轉化桑葉的雞腿菇的 降血糖作用。
上述試驗給藥7d后，富集轉化桑葉的雞腿菇與對照組相比，治 療組血糖均極顯著降低(p<0.01),可見雞腿菇轉化桑葉7 d即能顯 著降低高血糖小鼠血糖。
本發明經試驗研究發現應用本發明的生物轉化的方法，通過雞腿 菇菌絲和桑葉相互作用，生產的富集轉化桑葉的雞腿菇經口服途徑給 予高血糖小鼠其降低血糖和果糖胺功能與未轉化的雞腿菇，純的桑葉 以及純雞腿菇和桑葉的混合相比顯著增強，因此證實了富集轉化桑葉 的雞腿菇具有用于制備具有更強降血糖功能的保健食品和/或藥品的 用途。應用本發明的富集轉化桑葉的雞腿菇，可以大規模或工業化生 產雞腿菇子實體。由于該藥物組合物中所含的雞腿菇轉化桑葉發酵液 來源于天然菌種的發酵，因此沒有任何毒副作用，從而為糖尿病患者 提供了理想的藥物，并為雞腿燕的應用開創了廣闊的前景。
下面結合實施例對本發明作進一步說明。
具體實施例方式
實施例1雞腿菇菌種的組織分離 取河北野生雞腿燕新鮮未開傘的子實體，削去菌柄基部和菌柄外
表皮，用75%乙醇進行子實體表面消毒后，移入超凈工作臺，紫外燈照射20min。將解剖刀在酒精燈火焰上灼燒后放人無菌水中降溫， 確保解剖刀溫度不會損傷子實體組織。將子實體一分為二，在菌柄內 (柄中)、菌柄與菌蓋交界處(交界)、菌蓋和菌褶處切割表皮內組織， 黃豆大小的小塊，切割時不能切透子實體表面組織。用無菌鑷子接人 試管斜面培養基(即為PDA培養基)，每種組織各接IO支，25 28°C 暗培養，每天定時觀測菌絲生長污染情況，當長至4-10天時，用PDA 培養基試管斜面轉接。
實施例2富集轉化桑葉的雞腿菇子實體的制備
1、 在新配制的土豆培養基(諸葛健，王正祥，工業微生物實驗 技術手冊，1994: P 367)中接入實施例l得到的雞腿菇菌種，培養 溫度2(TC，待菌絲體長滿斜面后，將斜面菌種接入裝有含水量為50 %麩皮培養基的種子瓶中，于2(TC培養溫度，培養120天；
2、 麥草300Kg，廢酵母15Kg，硫酸銨3Kg，桑葉粉15Kg，石 灰6Kg，水3卯Kg混合均勻堆成高度為0.8米，寬度1米，長度4 米的草堆發酵，最高溫度6(TC，發酵21天，其中在第7、 13、 18天 各翻堆一次。21天后；料鋪成長度為10米寬度1米厚度0. 10米的 發酵床，將步驟l培養的菌種采用撒播法播入其中，室溫發菌20天 后，覆厚度為0.05米的土，調節土含水量50%，使其出菇，80。C烘 干。共收集干菇24.5kg。
轉化桑葉的雞腿菇黃褐色呈花斑狀，見圖片，多糖含量25%， 多酚類化合物含量2.5%，黃酮類化合物含量3.4%。實施例3富集轉化桑葉的雞腿菇子實體的制備
1、 在新配制的土豆培養基(諸葛健，王正祥，工業微生物實驗
技術手冊，1994: P 367)中接入實施例l得到的雞腿菇菌種，培養 溫度25'C，待菌絲體長滿斜面后，將斜面菌種接入裝有含水量為65 0/^麩皮培養基的種子瓶中，于27。C培養溫度，培養90天；
2、 麥草300Kg，廢酵母120Kg，硫酸銨15Kg，桑葉粉30Kg， 石灰15Kg，水600Kg混合均勻堆成高度為1.5米，寬度1.5米，長 度6米的草堆發酵，最高溫度7(TC，發酵21天，其中在第7、 13、 18天各翻堆一次。21天后；料鋪成長度為20米寬度1. 5米厚度0. 20 米的發酵床，將步驟1培養的菌種采用穴播法播入其中，室溫發菌 25天后，覆厚度為O. IO米的土，調節土含水量60%，使其出菇，80 。C烘干。共收集干菇45kg。
轉化桑葉的雞腿菇黃褐色呈花斑狀，見圖片，多糖含量19%, 多酚類化合物含量5.3%，黃酮類化合物含量8.1%。
實施例4富集轉化桑葉的雞腿燕子實體的制備
1、 在新配制的土豆培養基(諸葛健，王正祥，工業微生物實驗 技術手冊，1994: P 367)中接入實施例l得到的雞腿菇菌種，培養 溫度25"C，待菌絲體長滿斜面后，將斜面菌種接入裝有含水量為65 %麩皮培養基的種子瓶中，于33'C培養溫度，培養45天；
2、 麥草200Kg，廢酵母100Kg，硫酸銨25Kg，桑葉粉40Kg， 石灰30Kg，水560Kg混合均勻堆成高度為3.0米，寬度2.8米，長度3.0米的草堆發酵，最高溫度75"C，發酵21天，其中在第7、 13、 18天各翻堆一次。21天后；料鋪成長度為15米、寬度1. 2米、厚度 0.30米的發酵床，將步驟1培養的菌種采用穴播法播入其中，室溫 發菌40天后，覆厚度為0.07米的土，調節土含水量80%，使其出 菇，8(TC烘干。共收集干菇30kg。
轉化桑葉的雞腿菇黃褐色呈花斑狀，見圖片，多糖含量13%， 多酚類化合物含量7.1%，黃酮類化合物含量12.8%。
實施例5、富集轉化桑葉雞腿菇子實體降低四氧嘧啶誘導的糖尿 病小鼠血糖試驗。
實驗動物昆明小白鼠，雄性，體重為21 26g，由中科院上海 實驗動物中心提供。糖尿病小鼠模型制備正常小鼠在禁食24小時后， 給予腹腔注射四氧嘧啶180mg/Kg體重，96小時后禁食，尾部靜脈取血 測血糖值，并選用血糖值在1Ommol/L以上者再按血糖水平隨即分成1 個正常組，l個陽性未處理組，4個樣品組(每組10只，分別以桑葉、 純雞腿菇、純雞腿菇和桑葉混合物、富集轉化桑葉的子實體粉末按每天 500mg/Kg體重拌入飼料，其中正常組給以等量的生理鹽水)，連續灌胃 給藥7天后，禁食4小時，眼眶靜脈取血測定血糖值，結果給藥富集轉 化桑葉的雞腿菇小鼠血糖值不僅低于糖尿病未處理小鼠血糖值，而且顯 著低于分別給藥桑葉、純雞腿菇和雞腿恭和桑葉的混合小鼠血糖值。驗 證比較轉化后的雞腿菇的降血糖作用。
不同劑量桑葉轉化雞腿菇子實體對四氧嘧啶高血糖小鼠調節血糖作用的比較(ramol/L)
血糖值
實驗分組---
給藥前給藥后
正常組6. 12±0. 216. 67±0. 23
糖尿病未處理22. 14±1.8324. 65±2. 18
桑葉22. 25±1.9617. 88±2. 34*-
純雞腿菇22. 37±1. 7418. 25±2. 67*"
純雞腿菇與桑葉混合組22. 18±1.9717. 53±2. 86*"
實施例一22. 07±1. 8814. 36±2. 64*
富集轉化桑 實施例二 葉的雞腿燕22. 32±1.6913. 54±2. 77*
實施例三22. 19±1.9813. 79±2. 86*
注*:與糖尿病未處理組相比，P<0.05;、與富集轉化桑葉的雞 腿菇比較，p<0.05。
實施例6、富集轉化桑葉雞腿菇粗提物制備。
雞腿菇子實體10g加200mL水，80 9(TC提取5小時，離心， 收集清夜，殘渣再用400mL水提取2次，水提液合并，真空濃縮得到 雞腿菇粗提物。或者，雞腿菇子實體10g，用600mL有機溶劑(乙醇、 丙酮、乙酸乙酯、氯仿中任意一種)提取3次，合并有機溶劑相，真 空濃縮得到雞腿菇粗提物。試驗證明用水或有機溶劑得到雞腿菇粗提 物具有血糖調節功能。
權利要求
1、一種富集轉化桑葉的雞腿菇，其特征是通過下列步驟得到(1)將雞腿菇試管斜面菌種接入新配制的麩皮、麥粒或棉籽殼培養基，其培養基水分含量50～80％，培養溫度15～35℃，培養時0.5～4月；(2)將用于栽培的培養基麥草100～200重量份、廢酵母5～100重量份、硫酸銨1～20重量份、桑葉粉5～30重量份、石灰2～20重量份、水130～280重量份混合均勻，堆置發酵；要求堆高0.5～3米，寬度0.5～3米，共堆置21天，其中在第7、13和18天，各翻堆一次；(3)堆置發酵后將步驟(1)的菌種采用撒播或穴播接入，保溫保濕培養20～40天，覆土3～10cm，調節水分50～80％，得到子實體；(4)子實體采摘后烘干，得干子實體。
2、 一種富集轉化桑葉的雞腿菇的栽培方法，其特征是包括下 列步驟 .a)將雞腿菇試管斜面菌種接入新配制的麩皮、麥粒或棉籽殼培養基，其培養基水分含量50 80%，培養溫度15 35"C，培養時0.5 4 月；(2)將用于栽培的培養基麥草100 200重量份、廢酵母5 100 重量份、硫酸銨1 20重量份、桑葉粉5 30重量份、石灰2 20 重量份、水130 280重量份混合均勻，堆置發酵；要求堆高0.5~3 米，寬度0.5 3米，共堆置21天，其中在第7、 13和18天，各翻堆一次；(3) 堆置發酵后將步驟(1)的菌種采用撒播或穴播接入，保溫保 濕培養20 40天，覆土3 10cm，調節水分50 80%，得到子實體；(4) 子實體采摘后烘干，得干子實體。
3、 一種富集轉化桑葉的雞腿菇在制備治療糖尿病的藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種富集轉化桑葉的雞腿菇及其生產方法和用途，通過將雞腿菇試管斜面菌種接入新配制的麩皮、麥粒或棉籽殼培養基培養、將用于栽培的培養基堆置發酵、堆置發酵后將菌種采用撒播或穴播接入，保溫保濕培養得到子實體。得的雞腿菇子實體可制成具有調節血糖作用的藥物或保健食品。本發明得到的雞腿菇具有多種藥物功能，可用于糖尿病病人和糖耐量異常病人的的血糖控制和治療，也可用于提高正常人群的肌體免疫功能制備預防和/或治療糖尿病患者、糖耐量異常患者及糖尿病并發癥的藥物或功能性食品，特別是其具有降低糖尿病人血糖功效，使其成為降低血糖提供理想藥物或保健食品。
文檔編號A23L1/212GK101611854SQ20091018235
公開日2009年12月30日 申請日期2009年7月10日 優先權日2009年7月10日
發明者張志才, 鄭惠華, 陸漢萍, 惠 陳 申請人:江蘇安惠生物科技有限公司;江蘇大學