專利名稱：一種利用納豆芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌制備復合飼料添加劑的工藝的制作方法
技術領域：
本發明涉及飼用飼料添加劑領域，具體涉及利用納豆芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌制備飼料添加劑的培養基配方和制備工藝。
背景技術：
養殖戶在養殖家禽家畜時為了達到預防疾病的目的，往往在飼料中添加大量抗生素，其結果是不可避免的造成抗生素濫用，在動物體內產生藥物殘留，最終通過食物鏈在人類身體中蓄積，嚴重威脅人類健康。研究表明納豆芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌均是一類益生菌，利用其制成的制劑添加到飼料中可起到如下作用①抑制致病菌的生長，替代抗菌素起防病抗病作用；②促進消化和提高飼料利用率，降低飼養成本；③提高抗感染能力，增強免疫功能；④能顯著降低養殖動物糞便中氨等臭氣排放及降低糞便中磷的排泄，有益于改善養殖環境和環境保護。由于芽孢桿菌制劑具有上述重要優良特征，因此吸引了眾多國內外學者對其進行深入研究，研究內容主要集中于芽孢桿菌的篩選(楊曉斌，謝擁葵，韋燕鵬等，益生菌納豆芽孢桿菌的篩選.廣州食品工業科技.2003年增刊)、制備纖溶酶(余功保， 郭愛玲，秦巧玲等.一株高產納豆激酶菌株的篩選及其發酵條件的優化，食品科學，2007年第4期)、液體深層發酵工藝(朱健輝，杜連祥，路福平.納豆激酶液態發酵工藝優化。食品與發酵工業，05年第8期)和粉劑制備工藝(鐘青萍，王發祥，劉家暢等。納豆菌活菌干燥制劑的研制.食品工業科技，2005年第8期)等方面。而固體發酵工藝尤其是雙菌聯合固體發酵尚未見報道。目前的芽孢桿菌制劑的生產工藝和發酵培養基配方所生產的制劑活菌含量不高，制劑有效期短，使得產品難以達到理想的疾病預防和生長促進效果。

發明內容
本發明的內容在于，針對現有發酵培養基和發酵工藝的不足，提供一種利用納豆芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌制備飼料添加劑的固體發酵培養基和工藝方法。本發明的技術方案如下一種利用納豆芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌制備復合飼料添加劑的工藝，其特征在于，包括以下步驟(1)先利用搖床培養瓶分別培養納豆芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的一級菌種；(2)將兩種一級菌種分別接種到種子罐里，發酵生產二級納豆芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌菌種；(3)固體培養基的制備按配方要求配置固體發酵培養基，固體發酵培養基的各組份重量份為麩皮 26-38，秸稈10-20，豆餅粉22-30，尿素0. 1-0. 3，硫酸鎂0. 2-0. 4，氯化鈷0. 01-0. 05，氯化鋅 0. 01-0. 05，氯化硒 0. 01-0. 05，CaC03 0. 3-0. 9，草碳 7. 5-14, K2HP04 0. 1-0. 6，蔗糖 1-5 ；將各組份混合并攪拌均勻，送入固體發酵池進行滅菌，將固體發酵池密封后，加熱
3到120-123°C并保溫15分鐘，自然冷至35-38°C得到固體發酵培養基；(4)將步驟( 制得的二級納豆芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌菌種分別接種到固體發酵池內，然后加水，用自動翻料機翻拌使固體培養基與菌種子充分混合，其中納豆芽孢桿菌接種量為總重量的為11-13%，地衣芽孢桿菌接種量總重量的為7-9%，攪拌使得固體培養基和菌種充分混勻；(5)加水到固體發酵池，翻拌均勻后密封固體發酵池，保溫保濕發酵生長48-5 后制得成品。所述的利用納豆芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌制備復合飼料添加劑的工藝，其特征在于步驟( 所述的固體發酵條件為，發酵前期在30-40小時以內，發酵溫度為觀-361，通風量為0. 6-0. 8m7min，此后的生長后期溫度提升至40°C，通風量為0. 2-0. 4m3/min，再發酵 16-26小時，制得成品飼料添加劑。所述的利用納豆芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌制備復合飼料添加劑的工藝，其特征在于固體發酵培養基的各組份重量份為麩皮沈-38，秸稈10-20，豆餅粉22-30，尿素 0. 1-0. 3，硫酸鎂 0. 2-0. 4，氯化鈷 0. 01-0. 05，氯化鋅 0. 01-0. 05，氯化硒 0. 01-0. 05，CaC03 0. 3-0. 9，草碳7. 5-14，K2HP04 0. 1-0. 6，蔗糖1-5。本發明利用了新型的固體發酵培養基配方并采用了雙菌聯合固體發酵制備技術，由于采用了雙菌聯合固態發酵，能保證納豆芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌制進行聯合固體發酵，與現有物理攪拌方式相比具有明顯的技術優勢第一，加快了菌種繁殖速度，縮短了發酵周期，使菌種發酵周期縮短到48-54小時，既減小了菌種生長期長易被雜菌污染的概率，又降低了生產成本。而同類菌種的發酵周期普遍需要72-100小時。第二，本發明利用了獨特的培養基配方，基本培養基原材料成本低、普遍易得，其中所含的氯化鈷、氯化硒、氯化鋅和硫酸鎂提供了芽孢桿菌生長所必須的微量元素，具有促進芽抱菌形成芽抱的作用，提高了產品的芽孢形成率。根據檢測，納豆芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌菌種聯合固態發酵生長平臺期芽胞形成率高達90 %，而同類菌種僅為50 %，最高不超過 70%。第三，雙菌聯合固體發酵設備投資少，工藝簡單，生產成本低。
具體實施例方式下面通過實施例作進一步描述。實施例1制備二級納豆芽孢桿菌種子1.通過搖床搖瓶培養制備納豆芽孢桿菌一級種子。出發菌株為納豆芽孢桿菌(菌種從中科院北京微生物研究所菌種保藏中心購買)一級液體種子培養基配方中各組份的重量百分含量為蛋白胨10%，牛肉膏5%， 氯化鈉5 %，蔗糖0.15%，余量為水，pH7. 0-7. 2。培養條件將納豆芽孢桿菌接種于肉湯培養基斜面，37°C培養M小時；挑取一杯斜面種子接種于液體種子培養基，于旋轉式搖床200rpm，37°C培養16h， 得到-級種子液。2.在20-60L的種子罐內放置種子培養基并進行滅菌處理，種子罐液滅菌溫度為121°C滅菌15分鐘，冷卻至37°C ；然后將一級種子接種到種子罐中，使種子罐內溫度控制在 32-380C，罐壓為0. 5kg/cm2，種子罐轉速180-220轉/分，通風量10m7h，生產周期10-18小時，得到二級種子液。本實施例所述制備過程和所用材料與現有技術大致相同，其中一級培養基配方和二級培養基配方中的各組份均由市場購得。(采用的化工產品為工業級)實施例2制備二級地衣芽孢桿菌種子制備方法同上述納豆芽孢桿菌實施例3利用納豆芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌聯合固態發酵工藝生產復合飼料添加劑(1)按配方要求配置固體發酵培養基，計100公斤，其中麩皮33公斤，秸稈20公斤，豆餅粉觀公斤，草碳12公斤，蔗糖5公斤，尿素和硫酸鎂各0. 3公斤，氯化鈷、氯化鋅和氯化硒各0.03公斤，CaC03 0. 8公斤，K2HP04 0. 5公斤，秸稈為粉碎后過20目篩，其余各組份為粉末狀。(2)將各組份混合并攪拌均勻，送入固體發酵池進行滅菌，將固體發酵池密封后， 加熱到121°C并保溫，自然冷至37°C得到固體發酵培養基；(3)將實施例1和實施例2種子罐內二級納豆芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌種子分別接種到固體發酵池內，然后加水，用自動翻料機翻拌使固體培養基與菌種子充分混合，其中二級納豆芽孢桿菌種子的用量為12公斤，二級地衣芽胞桿菌菌種子的用量為8公斤，加水量為18公斤；(4)密封固體發酵池，并控制其內溫度在^_35°C，通風量0. 7m3/min,40小時后使池內溫度提升至40°C，通風量0. 3m3/min,50小時得成品。經過上述步驟生產復合飼料添加劑活菌含量高，經鑒定活菌總數為 1. 2X 101(l-2. OX 101(lcef/g。該復合飼料添加劑具有耐高溫、耐酸堿、耐膽汁的特點，并具有較好的貯存穩定性。將雙菌聯合固態發酵制得的復合飼料添加劑以0，的量添加于飼料中，用于肉雞飼養，對肉雞的日增重相對于普通飼料提高大于6%，飼料系數和存活率均有顯著改善。將本發明方法制備的復合飼料添加劑以4-5%的比例添加到畜禽、水產業飼料中， 采用添加有本發明的復合飼料添加劑的飼料來喂養畜禽類、水產類動物，結果如下表10. 02%復合飼料添加劑對斷奶仔豬增重的影響(單位kg/頭)
權利要求
1.一種利用納豆芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌制備復合飼料添加劑的工藝，其特征在于， 包括以下步驟(1)先利用搖床培養瓶分別培養納豆芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的一級菌種；(2)將兩種一級菌種分別接種到種子罐里，發酵生產二級納豆芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌菌種；(3)固體培養基的制備按配方要求配置固體發酵培養基，固體發酵培養基的各組份重量份為麩皮沈-38， 秸稈10-20，豆餅粉22-30，尿素0. 1-0. 3，硫酸鎂0. 2-0. 4，氯化鈷0. 01-0. 05，氯化鋅 0. 01-0. 05，氯化硒 0. 01-0. 05，CaC03 0. 3-0. 9，草碳 7. 5-14, K2HP04 0. 1-0. 6，蔗糖 1-5 ；將各組份混合并攪拌均勻，送入固體發酵池進行滅菌，將固體發酵池密封后，加熱到 120-123 并保溫15分鐘，自然冷至35-38°C得到固體發酵培養基；(4)將步驟(2)制得的二級納豆芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌菌種分別接種到固體發酵池內，然后加水，用自動翻料機翻拌使固體培養基與菌種子充分混合，其中納豆芽孢桿菌接種量為總重量的為11-13%，地衣芽孢桿菌接種量為總重量的7-9%，攪拌使得固體培養基和菌種充分混勻；(5)加水到固體發酵池，翻拌均勻后密封固體發酵池，保溫保濕發酵生長48-5 !后制得成品。
2.根據權利要求1所述的利用納豆芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌制備復合飼料添加劑的工藝，其特征在于步驟(5)所述的固體發酵條件為，發酵前期在30-40小時以內，發酵溫度為28-36°C，通風量為0. 6-0. 8m7min，此后的生長后期溫度提升至40°C，通風量為 0. 2-0. 4m7min，再發酵1616小時，制得成品飼料添加劑。
3.根據權利要求1所述的利用納豆芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌制備復合飼料添加劑的工藝，其特征在于固體發酵培養基的各組份重量份為麩皮沈-38，秸稈10-20，豆餅粉22-30，尿素0. 1-0. 3，硫酸鎂0. 2-0. 4，氯化鈷0. 01-0. 05，氯化鋅0. 01-0. 05，氯化硒 0. 01-0. 05，CaC03 0. 3-0. 9，草碳 7. 5-14, K2HP04 0. 1-0. 6，蔗糖 1-5。
全文摘要
本發明提供了一種利用納豆芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌制備復合飼料添加劑的工藝。其固體培養基的各組份重量份為麩皮26-38，秸稈10-20，豆餅粉22-30，尿素0.1-0.3，硫酸鎂0.2-0.4，氯化鈷0.01-0.05，氯化鋅0.01-0.05，氯化硒0.01-0.05，CaCO30.3-0.9，草碳7.5-14，K2HPO40.1-0.6，蔗糖1-5。將納豆芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌接種于上述固體發酵培養基，經過雙菌固態聯合發酵、干燥、粉碎后得到復合微生態制劑。本方法采用了獨特的培養基和雙菌聯合固態發酵技術，加快了菌種繁殖速度，縮短了發酵周期，降低了生產成本，提高了產品的芽胞形成率。
文檔編號C12R1/10GK102342371SQ20111025705
公開日2012年2月8日 申請日期2011年9月1日 優先權日2011年9月1日
發明者田廣斌 申請人:安徽金農惠民生物技術有限公司