專利名稱：利用海參腸自溶制備活性物質的方法
利用海參腸自溶制備活性物質的方法技術領域
本發明屬于海洋副產物精深加工領域，同時涉及自溶、凝膠柱層析和真空冷凍干燥的技術領域。
背景技術：
海參腸是海參加工過程中的副產物，其蛋白質含量高，可達70%左右(以干重計)，是制備活性物質的良好原料。在中國，海參腸多被作為廢棄物丟棄，利用率極低，造成資源浪費及環境污染。
海參腸具有較強的自溶能力。目前，有關利用自溶技術從海參腸中制備活性物質的相關專利未見報道。關于海參腸自溶的文獻報道，主要集中在對其內源酶進行分離、純化及酶學特性研究。日本學者對日本傳統發酵食品“鹽辛”的制作方法進行改進，采用靜水壓不添加食鹽而促進海參腸自溶，但未涉及海參腸自溶活性物質的提取及分離制備。發明內容
針對海參加工中的副產物海參腸自溶能力較強，但同時并未得到充分利用的狀況，本發明旨在提供一種利用自溶技術制備海參腸活性物質及其自溶殘渣活性物質的制備方法。
本發明利用海參腸自溶制備活性物質的方法，以海參腸為原料，經勻漿、自溶、離心取上清液即為海參腸自溶產物；該產物可進一步采用冷凍濃縮的方法濃縮至原體積的10 % 20 %;還可以采用真空冷凍干燥的方式干燥至水分含量小于等于8 %，從而獲得不同產品形式的海參腸活性物質粗品。
其中，所述自溶工序的優選方案為:勻漿后所得勻漿液經紫外線照射后，加入I 4倍體積、pH4.0 7.0的檸檬酸與磷酸氫二鈉緩沖溶液，進行自溶。根據實際情況不同自溶可采取兩種條件:溫度在4 10°C時，自溶4 12h，或者溫度在35°C 60°C自溶時，自溶0.5 4h。
優選方式下，處理量較少時，紫外線照射可以選用30W紫外燈，距離0.5m照射5 40min后進行自溶誘導；處理量較大時，可以將海參腸勻漿液放置在不銹鋼槽內，漿液厚度I 2cm，在上方0.2 0.5m處放置紫外燈，控制漿液液面紫外強度為60 120 μ ff/cm2,保持5 40min進行自溶誘導。
此外，所述離心取上清液的工序，優選方式為:2500 6000r/min離心10 30min,取上清液；或采用超濾的方式,收集IOkDa以下的組分。
為了獲得海參腸活性物質精制品，本發明在制得海參腸活性物質粗品后，經分離、冷凍干燥制得精制活性物質。
其中，所述分離的工序，優選方式為:將所述海參腸活性物質粗品上樣于葡聚糖凝膠Sephadex G-15層析柱,用去離子水洗脫,控制流速為0.3 0.5mL/min,對主要組分(峰面積占各組分總峰面積的70% 80%)進行收集。采用二苯代苦味肼自由基(DPPH)體系和還原能力測定體系，已經證明主要組分具有較強的清除DPPH自由基及還原能力。
此外，所述冷凍干燥的優選工序為:在冷阱溫度-30 -45°c、真空度為50 80Pa條件下進行干燥。
本發明另外提供了一種利用海參腸自溶制備活性物質的方法，主要針對海參腸自溶殘渣活性物質，其目的在于提高海參腸的利用率。具體過程為，以海參腸為原料，經勻漿、自溶。而后分離上清液獲得海參腸自溶產物，同時利用余下殘渣作如下處理:加入2 4倍體積的去離子水混勻，90 100°C加熱5 15min。冷卻后于50°C,pH7.0下,加入1500 3000U/g蛋白的中性蛋白酶，如枯草芽孢桿菌1398，酶解30 180min。酶解完畢后，酶解液于95 10CTC加熱5 IOmin滅酶，冷卻后于2500 6000r/min下離心10 30min,取上清液，或采用超濾的方式，收集IOkDa以下的組分，即為海參腸自溶殘渣活性物質。該產物可進一步采用冷凍濃縮的方法濃縮至原體積的10% 20%;還可以采用真空冷凍干燥的方式干燥至水分含量小于等于8%，從而獲得不同產品形式的海參腸自溶殘渣活性物質粗品。
將所述海參腸自溶殘渣活性物質粗品上樣于葡聚糖凝膠S^hadex G_25層析柱，用去離子水洗脫，控制流速為0.2 0.4mL/min,對峰面積占各組分總峰面積的80% 95%的主要組分進行收集。最后，在冷阱溫度為-30 _45°C，真空度為50 80Pa，至水分含量為小于等于8%為止，凍干后制得精制活性物質。
上述利用殘渣制備活性物質的自溶工序，優選方案為:勻漿后所得勻漿液經紫外線照射后，加入I 4倍體積、pH4.0 7.0的檸檬酸與磷酸氫二鈉緩沖溶液，進行自溶。此夕卜，優選方式下，處理量較少時，紫外線照射可以選用30W紫外燈，距離0.5m照射5 40min后進行自溶誘導；處理量較大時，可以將海參腸勻漿液放置在不銹鋼槽內，漿液厚度為I 2cm,在上方0.2 0.5m處放置紫外燈，控制漿液液面紫外強度為60 120 μ ff/cm2,保持5 40min進行自溶誘導。
本發明突出的優點在于:
1.提高了海參加工過程中副產物的利用率，使其所含營養成分和功能因子得到充分開發，同時還減少了對環境造成的污染。加工處理后的海參腸活性物質具有一定的抗氧化能力，可作為功能基料用于開發多種功能型產品，極具開發潛力。
2.本發明提及的自溶是利用海參腸自身所含有的內源酶進行酶解，采用自溶技術制備海參腸活性物質，最大限度的保持了海參腸所含有的活性成分，得到更優質的產品。同時，針對海參腸自溶后的殘渣，可采用外源酶酶解制備活性物質，使海參腸得以充分利用。
本發明優選工藝中提及的工藝參數，旨在提高活性物質產品的得率和質量，在本發明的工藝參數條件下，海參腸自溶產物中TCA可溶性寡肽的含量提高為自溶前的2 3倍，自溶殘渣蛋白質經變性處理、外源酶酶解后肽得率達到10% 30%。
具體實施方式
本發明一種海參腸自溶活性物質及其自溶殘渣活性物質。海參腸自溶活性物質以海參腸為原料，經勻漿、自 溶、離心、冷凍濃縮、凝膠柱分離及冷凍干燥制成；海參腸自溶后的殘渣，可經變性預處理、外源酶酶解、離心、冷凍濃縮、凝膠柱分離及冷凍干燥的方式制成。該兩種營養品為淡黃色固體粉末，無臭、有海參腸固有的鮮味，易溶于水，有吸濕性，具有一定的體外抗氧化能力，可作為功能基料用于制備多種功能型食品。
1.海參腸自溶活性物質制備具體工藝步驟如下:
(I)原料處理
從新鮮海參中取出海參腸、清洗，去除泥沙和雜質，直接勻漿備用或在_15°C冷凍備用;
⑵自溶
利用海參腸所含內源酶的作用，使其在不同的條件下進行自溶:
海參腸勻漿液經紫外線(30W，0.5m)照射5 40min后，加入I 4倍體積的檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖溶液(ρΗ4.0 7.0)，于35°C 60°C自溶0.5 4h或者于4°C 10°C自溶4 12h。自溶結束后,2500 6000r/min離心10 30min,取上清液；或采用超濾的方式，收集IOkDa以下的組分。真空冷凍濃縮后至原體積的10% 20%，或直接冷凍干燥，即為海參腸自溶活性物質粗品。
處理量較大時，可以將海參腸勻漿液放置在不銹鋼槽內，漿液厚度為I 2cm，上方0.2 0.5m處放置紫外燈，控制漿液液面紫外強度為60 120 μ ff/cm2,保持5 40min進行自溶誘導，之后加入I 4倍體積的檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖溶液(pH4.0 7.0)，按照上述方法進行自溶。
(3)分離
將海參腸活性物質粗品上樣于S^hadex G_15凝膠柱，用去離子水洗脫，控制流速為0.3 0.5mL/min。對主要組分(峰面積占各組分總峰面積的70% 80% )進行收集，同時達到脫鹽的目的。
(4)干燥
對收集的活性組分進行冷凍干燥，冷阱溫度為-30 _45°C，真空度為50 80Pa，至水分含量為小于等于8%為止，凍干后即得到海參腸自溶活性物質。
2.海參腸自溶殘渣活性物質制備具體工藝步驟如下:
(I)預處理
獲得海參腸自溶產物后，取殘渣，加入2 4倍體積的去離子水混勻，90 100°C加熱5 15min,進行蛋白質變性處理,冷卻。
(2)外源酶酶解
在50°C，ρΗ7.0下，加入1500 3000U/g蛋白的中性蛋白酶(如枯草芽孢桿菌1398)，酶解30 180min。酶解完畢后，酶解液于95 100°C加熱5 IOmin滅酶，冷卻后2500 6000r/min離心10 30min,取上清液，或采用超濾的方式，收集IOkDa以下的組分，即為海參腸自溶殘渣活性物質。該產物可進一步采用冷凍濃縮的方法濃縮至原體積的10 20% ;還可以采用真空冷凍干燥的方式干燥至水分含量小于等于8%，從而獲得不同產品形式的海參腸自溶殘渣活性物質粗品。
(3)分離
將海參腸自溶殘渣活性物質粗品上樣于葡聚糖凝膠S印hadex G_25層析柱，用去離子水洗脫，控制流速為0.2 0.4mL/min，對主要組分(峰面積占各組分總峰面積的80% 95% )進行收集，同時達到脫鹽的目的。
(4)干燥
對收集的活性組分進行冷凍干燥，冷阱溫度為-30 _45°C，真空度為50 80Pa，至水分含量為小于等于8%為止，凍干后即得到海參腸自溶殘渣活性物質。
實例一:
將IOOg海參腸清洗、剪碎、勻漿，勻漿處理后紫外線(30W，0.5m)照射25min，加入1.5倍體積的pH5.0的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液，于40°C自溶4h。自溶結束后，3000r/min離心25min，取上清液，殘渣備用。上清液經真空冷凍濃縮為原體積的10%，即為海參腸自溶活性物質粗品。海參腸自溶性物質粗品經Sephadex G_15凝膠柱分離，控制流速為0.4mL/min，收集主要組分，進行冷凍干燥。調節冷阱溫度為_30°C，真空度為80Pa，至水分含量小于8 %，凍干后即得到海參腸自溶活性物質。
海參腸自溶殘渣，加入4倍體積去離子水混勻，100°C加熱5min。冷卻后，在50°C，PH7.0下，加入1500U/g蛋白的枯草芽孢桿菌1398中性蛋白酶，酶解180min。酶解完畢后，酶解液于95°C加熱IOmin滅酶，6000r/min離心IOmin,取上清液,冷凍濃縮至原體積的10%，即為海參腸自溶殘渣活性物質粗品。濃縮液經葡聚糖凝膠S印hadex G_25層析柱，用去離子水洗脫，控制流速為0.25mL/min，收集主要組分，進行冷凍干燥，冷阱溫度為_30°C，真空度為80Pa，至水分含量為小于8%為止，凍干后即得到海參腸自溶殘渣活性物質。兩種產品為淡黃色固體粉末，無臭，有海參腸固有的鮮味，易溶于水，有吸濕性，其具有一定的體外抗氧化能力，可作為功能基料用于制備多種功能型食品。
實例二:
將200g海參腸清洗、剪碎、勻漿，勻漿處理后紫外線(30W，0.5m)照射40min，加入3.5倍體積的pH6.0的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液，于50°C自溶3h。自溶結束后，4000r/min離心20min，取上清液，殘渣備用。上清液經真空冷凍濃縮為原體積的20%，即為海參腸自溶活性物質粗品。海參腸自溶活性物質粗品經Sephadex G_15凝膠柱分離，控制流速為0.5mL/min，收集主要組分，進行冷凍干燥。調節冷阱溫度為_45°C，真空度為50Pa，至水分含含量小于8 %，凍干后即得到海參腸自溶活性物質。
海參腸自溶殘渣，加入2倍體積去離子水混勻，90°C加熱15min。冷卻后，在50°C，PH7.0下，加入2000U/g蛋白的中性蛋白酶，酶解120min。酶解完畢后，酶解液于100°C加熱5min滅酶，IOkDa超濾,收集分子量低于IOkDa的組分,冷凍濃縮至原體積的15%,即為海參腸自溶殘渣活性物質粗品。濃縮液經葡聚糖凝膠Sephadex G_25層析柱，用去離子水洗脫，控制流速為0.3mL/min，收集主要組分，進行冷凍干燥，冷阱溫度為_45°C，真空度為50Pa，至水分含量為小于8%為止，凍干后即得到海參腸自溶殘渣活性物質。兩種產品為淡黃色固體粉末，無臭，有海參腸固有的鮮味，易溶于水，有吸濕性，其具有一定的體外抗氧化能力，可作為功能基料用于制備多種功能型食品。
實例三:
將Ikg海參腸清洗、剪碎、勻漿，放置在不銹鋼槽內，漿液的厚度為I 2cm，在上方0.5m處放置紫外燈，控制漿液液面紫外強度為60 μ ff/cm2,保持15min進行自溶誘導。然后，加入2倍體積的pH4.0的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液，于45°C自溶4h。自溶結束后，3500r/min離心20min，取上清液，殘渣備用。上清液經真空冷凍濃縮為原體積的15%，即為海參腸自溶活性物質粗品。海參腸自溶活性物質粗品經Sephadex G_15凝膠柱分離,控制流速為0.35mL/min，收集主要組分，進行冷凍干燥。調節冷阱溫度為_45°C，真空度為65Pa，至水分含量小于8 %，凍干后即得到海參腸自溶活性物質。
海參腸自溶殘渣，加入3倍體積去離子水混勻，95°C加熱lOmin。冷卻后，在50°C，PH7.0下，加入3000U/g蛋白的枯草芽孢桿菌1398中性蛋白酶，酶解60min。酶解完畢后，酶解液于100°c加熱5min滅酶，IOkDa超濾,收集分子量低于IOkDa的組分,冷凍濃縮至原體積的15%，即為海參腸自溶殘渣活性物質粗品。濃縮液經葡聚糖凝膠Sephadex G_25層析柱，用去離子水洗脫，控制流速為0.25mL/min,收集主要組分，進行冷凍干燥，冷阱溫度為-45°C，真空度為65Pa，至水分含量為小于8%為止，凍干后即得到海參腸自溶殘渣活性物質。兩種產品為淡黃色固體粉末，無臭，有海參腸固有的鮮味，易溶于水，有吸濕性，其具有一定的體外抗氧化能力，可作為功能基料用于制備多種功能型食品。
實例四:
將500g海參腸清洗、剪碎、勻漿，勻漿處理后紫外線(30W，0.5m)照射lOmin，加入4倍體積的pH4.0的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液，于60°C自溶0.5h。自溶結束后，4500r/min離心15min，取上清液，殘渣備用。上清液經真空冷凍濃縮為原體積的20%，即為海參腸自溶活性物質粗品。海參腸自溶活性物質粗品經Sephadex G_15凝膠柱分離，控制流速為0.4mL/min,收集主要組分，進行冷凍干燥。調節冷阱溫度為_35°C，真空度為75Pa，至水分含量小于6%，凍干后即得到海參腸自溶活性物質。
海參腸自溶殘渣，加入2倍體積去離子水混勻，100°C加熱5min。冷卻后，在50°C，PH7.0下，加入2000U/g蛋白的中性蛋白酶，酶解150min。酶解完畢后，酶解液于95°C加熱IOmin滅酶，4500r/min離心15min，取上清液，經真空冷凍濃縮為原體積的20%，即為海參腸自溶殘渣活性物質粗品。濃縮液經葡聚糖凝膠Sephadex G_25層析柱，用去離子水洗脫，控制流速為0.3mL/min，收集主要組分，進行冷凍干燥，冷阱溫度為_35°C，真空度為75Pa，至水分含量為小于8%為止，凍干后即得到海參腸自溶殘渣活性物質。兩種產品為淡黃色固體粉末，無臭，有海參腸固有的鮮味，易溶于水，有吸濕性，其具有一定的體外抗氧化能力，可作為功能基料用于制備多種功能型食品。
實例五:
將300g海參腸清洗、剪碎、勻漿，勻漿處理后紫外線(30W，0.5m)照射30min，加入I倍體積的PH5.0的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液，于35°C自溶6h。自溶結束后，5000r/min離心15min，取上清液，殘渣備用。上清液經真空冷凍濃縮為原體積的20%，即為海參腸自溶活性物質粗品。海參腸自溶活性物質粗品經Sephadex G_15凝膠柱分離，控制流速為0.5mL/min，收集主要組分，進行冷凍干燥。調節冷阱溫度為_40°C，真空度為70Pa，至水分含量小于6%，凍干后即得到海參腸自溶活性物質。
海參腸自溶殘渣，加入4倍體積去離子水混勻，90°C加熱lOmin。冷卻后，在50°C，pH7.0下，加入1500U/g蛋白的中性蛋白酶，酶解180min。酶解完畢后，酶解液于100°C加熱5min滅酶，5000r/min離心15min，取上清液，上清液經真空冷凍濃縮為原體積的15%，即為海參腸自溶殘渣活性物質粗品。濃縮液經葡聚糖凝膠Sephadex G_25層析柱，用去離子水洗脫，控制流速為0.4mL/min，收集主要組分，進行冷凍干燥，冷阱溫度為_40°C，真空度為70Pa，至水分含量為小于8%為止，凍干后即得到海參腸自溶殘渣活性物質。兩種產品為淡黃色固體粉末，無臭，有海參腸固有的鮮味，易溶于水，有吸濕性，其具有一定的體外抗氧化能力，可作為功能基料用于制備多種功能型食品。
實例六:
將1.5kg海參腸清洗、剪碎、勻漿，放置在不銹鋼槽內，漿液的厚度為2cm，在上方0.3m處放置紫外燈，控制漿液液面紫外強度在100 μ ff/cm2,保持20min進行自溶誘導。然后，加入3倍體積的pH7.0的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液，于50°C自溶2h。自溶結束后，2500r/min離心30min，取上清液，殘渣備用。上清液經真空冷凍濃縮為原體積的20%，即為海參腸自溶活性物質粗品。海參腸自溶活性物質粗品經Sephadex G_15凝膠柱分離,控制流速為0.3mL/min，收集主要組分，進行冷凍干燥。調節冷阱溫度為_45°C，真空度為70Pa，至水分含量小于6 %，凍干后即得到海參腸自溶活性物質。
海參腸自溶殘渣，加入2倍體積去離子水混勻，100°C加熱5min。冷卻后，在50°C，pH7.0下，加入2500U/g蛋白的中性蛋白酶，酶解120min。酶解完畢后，酶解液于95°C加熱IOmin滅酶，2500r/min離心30min,取上清液,上清液經冷凍濃縮至原體積的10%,即為海參腸自溶殘渣活性物質粗品。濃縮液經葡聚糖凝膠Sephadex G_25層析柱，用去離子水洗脫，控制流速為0.3mL/min，收集主要組分，進行冷凍干燥，冷阱溫度為_45°C，真空度為70Pa，至水分含量為小于8%為止，凍干后即得到海參腸自溶殘渣活性物質。兩種產品為淡黃色固體粉末，無臭，有海參腸固有的鮮味，易溶于水，有吸濕性，其具有一定的體外抗氧化能力，可作為功能基料用于制備多種功能型食品。
實例七:
將800g海參腸清洗、剪碎、勻漿，勻漿處理后紫外線(30W，0.5m)照射5min，加入4倍體積的PH6.0的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液，于60°C自溶0.5h。自溶結束后，5500r/min離心lOmin，取上清液，殘渣備用。上清液經真空冷凍干后即為海參腸活性物質粗品。海參腸活性物質粗品用水溶解，經Sephadex G-15凝膠柱分離,控制流速為0.45mL/min,收集主要組分，進行冷凍干燥。調節冷阱溫度為_35°C，真空度為60Pa，至水分含量小于6%，凍干后即得到海參腸自溶活性物質。
海參腸自溶殘渣，加入3倍體積去離子水混勻，90°C加熱15min。冷卻后，在50°C，PH7.0下，加入3000U/g蛋白的中性蛋白酶，酶解120min。酶解完畢后，酶解液于100°C加熱5min滅酶，IOkDa超濾,收集分子量低于IOkDa的組分,冷凍濃縮至原體積的15%,即為海參腸自溶殘渣活性物質粗品。濃縮液經葡聚糖凝膠Sephadex G_25層析柱，用去離子水洗脫，控制流速為0.25mL/min，收集主要組分，進行冷凍干燥，冷阱溫度為_35°C，真空度為60Pa，至水分含量為小于8%為止，凍干后即得到海參腸自溶殘渣活性物質。兩種產品為淡黃色固體粉末，無臭，有海參腸固有的鮮味，易溶于水，有吸濕性，其具有一定的體外抗氧化能力，可作為功能基料用于制備多種功能型食品。
實例八:
將2kg海參腸清洗、剪碎、勻漿，放置在不銹鋼槽內，漿液的厚度為1cm，在上方0.5m處放置紫外燈，使漿液液面紫外強度為ΙΟΟμ W/cm2，保持20min進行自溶誘導。然后，加入4倍體積的pH4.0的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液，于55°C自溶1.5h。自溶結束后，6000r/min離心lOmin，取上清液，殘渣備用。上清液經真空冷凍濃縮后即為海參腸自溶活性物質粗品。然后經Sephadex G-15凝膠柱分離,控制流速為0.5mL/min,收集主要組分,進行冷凍干燥。調節冷阱溫度為_35°C，真空度為65Pa，至水分含量小于6%，凍干后即得到海參腸自溶活性物質。
海參腸自溶殘渣，加入4倍體積去離子水混勻，90°C加熱15min。冷卻后，在50°C，pH7.0下，加入2000U/g蛋白的枯草芽孢桿菌1398中性蛋白酶，酶解180min。酶解完畢后，酶解液于95°C加熱5min滅酶，6000r/min離心IOmin,取上清液,上清液經真空冷凍濃縮為原體積的15%，即為海參腸自溶殘渣活性物質粗品。濃縮液經葡聚糖凝膠Sephadex G_25層析柱，用去離子水洗脫，控制流速為0.4mL/min，收集主要組分，進行冷凍干燥，冷阱溫度為-35°C，真空度為65Pa，至水分含量為小于8%為止，凍干后即得到海參腸自溶殘渣活性物質。兩種產品為淡黃色固體粉末，無臭，有海參腸固有的鮮味，易溶于水，有吸濕性，其具有一定的體外抗氧化能力，可作為功能基料用于制備多種功能型食品。
以上所述，僅為本發明較佳的具體實施方式
，但本發明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本技術領域的技術人員在本發明披露的技術范圍內，根據本發明的技術方案及其發明構思加以等同替換或改變，都應涵蓋在本發明的保護范圍之內。
權利要求
1.一種利用海參腸自溶制備活性物質的方法，其特征在于，以海參腸為原料，經勻漿、自溶、取上清液，冷凍濃縮至原體積的10% 20%或真空冷凍干燥至水分含量小于等于8%，制得海參腸活性物質粗品；再經分離、冷凍干燥制得精制活性物質。
2.根據權利要求1所述利用海參腸自溶制備活性物質的方法，其特征在于，所述自溶的工序為: 勻漿后所得勻漿液經紫外線照射后，加入1 4倍體積、pH 4.0 7.0的檸檬酸與磷酸氫二鈉緩沖溶液，在35 60°C下自溶0.5 4h，或在4 10°C時，自溶4 12h。
3.根據權利要求2所述利用海參腸自溶制備活性物質的方法，其特征在于，所述自溶工序中選用30瓦紫外燈,距離0.5m照射5 40min,進行自溶誘導； 或者，將勻漿液放置在不銹鋼槽內，在上方0.2 0.5m處放置紫外燈，控制漿液液面紫外強度為60 120 μ W/cm2，保持5 40min進行自溶誘導。
4.根據權利要求3所述利用海參腸自溶制備活性物質的方法，其特征在于，所述取上清液的工序為:2500 6000r/min離心10 30分鐘，取上清液；或者所述取上清液的工序采用超濾的方式，收集10kDa以下的組分。
5.根據權利要求1-4任一所述利用海參腸自溶制備活性物質的方法，其特征在于，所述分離的工序為: 將所述海參腸活性物質粗品上樣于葡聚糖凝膠Sephadex G_15層析柱，用去離子水洗脫，控制流速為0.3 0.5mL/min,對峰面積占各組分總峰面積70% 80%的活性組分進行收集。
6.根據權利要求5所述利用海參腸自溶制備活性物質的方法，其特征在于，所述冷凍干燥的工序為:在冷阱溫度-30 _45°C、真空度為50 SOPa條件下進行干燥。
7.一種利用海參腸自溶制備活性物質的方法，其特征在于，以海參腸為原料，經勻漿、自溶； 而后取殘洛，加入2 4倍體積的去離子水混勻，90°C 100°C加熱5 15min ;冷卻后于50°C、pH7.0下，加入1500 3000U/g蛋白的中性蛋白酶，酶解30 180min ； 酶解液于95 100°C加熱5 IOmin滅酶，冷卻后于2500 6000r/min下離心10 30min ； 而后取上清液或采用超濾的方式收集IOkDa以下的組分，制得海參腸自溶殘渣活性物質。
8.根據權利要求7所述利用海參腸自溶制備活性物質的方法，其特征在于，所述自溶的工序為: 勻漿后所得勻漿液經紫外線照射后，加入1 4倍體積、pH 4.0 7.0的檸檬酸與磷酸氫二鈉緩沖溶液，在35 60°C下自溶0.5 4h，或在4°C 10°C時，自溶4 12h。
其中，紫外線照射的工序為:所述自溶工序中選用30瓦紫外燈，距離0.5m照射5 40min進行自溶誘導；或者，將勻漿液放置在不銹鋼槽內，漿液厚度1 2cm，在上方0.2 0.5m處放置紫外燈，控制漿液液面紫外強度為60 120 μ w/cm2,保持5 40min進行自溶誘導。
9.根據權利要求7或8所述利用海參腸自溶制備活性物質的方法，其特征在于，將制得的海參腸自溶殘渣活性物質采用冷凍濃縮的方法濃縮至原體積的10% 20%，或者采用真空冷凍干燥的方式干燥至水分含量小于等于8 %，獲得海參腸自溶殘渣活性物質粗品。
10.根據權利要求9所述利用海參腸自溶制備活性物質的方法，其特征在于，將所述海參腸自溶殘渣活性物質粗品上樣于葡聚糖凝膠S^hadex G-25層析柱，用去離子水洗脫，控制流速為0.2 0.4mL/min,對峰面積占各組分總峰面積的80% 95%的主要組分進行收集; 最后，在冷阱溫度為-30 -45°C，真空度為50 SOPa條件下進行干燥，至水分含量小于等于8%為止，凍 干后制得精制活性物質。
全文摘要
本發明公開了一種利用海參腸自溶制備活性物質的方法，所采用的制備方法是海參腸勻漿后，經紫外線照射誘導，在一定條件下利用內源酶的作用使其自溶，自溶混合液經離心、冷凍濃縮、Sephadex G-15分離、冷凍干燥制成。海參腸自溶活性物質為淡黃色固體粉末，無臭，有海參腸固有的鮮味，易溶于水，有吸濕性，具有一定的體外抗氧化能力，可作為功能基料用于制備多種功能型食品。本發明的突出特點是利用海參腸本身具有的自溶能力制備活性物質，能夠最大程度的保持原有的營養成分，同時還減少環境污染。加工處理的工藝合理、簡單、成本低，加工產品綠色、無污染。
文檔編號A23L1/29GK103141872SQ20111043571
公開日2013年6月12日 申請日期2011年12月22日 優先權日2011年12月22日
發明者朱蓓薇, 吳海濤, 董秀萍, 鄭杰, 孫黎明, 周大勇, 李冬梅, 楊靜峰 申請人:大連工業大學