專利名稱：用于雞胚液凍干的耐熱保護劑、其制備方法及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及耐熱凍干保護劑，具體為一種用于雞胚液凍干的耐熱保護劑、其制備方法及其應用。
背景技術：
凍干保護劑可影響生物制品的質量、效價和穩定性，改變生物制品的生產工藝，增大產品批次間的穩定性。耐熱凍干保護劑有免疫活性但無藥理活性，可在凍干和保存時維持疫苗的穩定性。耐熱凍干保護劑及其制備方法是疫苗生產中的一項關鍵技術。對于耐熱保護劑在雞胚液保護中的應用，耐熱保護劑中原輔材料的選擇、配制、滅菌、保存和使用，對于耐熱凍干保護劑的保護質量起著至關重要的作用。

發明內容
本發明目的在于提供一種配制方法簡單、成本低、具有良好保護性能的用于雞胚液凍干的耐熱保護劑。本發明的具體技術方案為用于雞胚液凍干的耐熱保護劑，由基礎液和聚乙烯吡咯烷酮PVP液按照4:1的體積比組成；其中，所述基礎液由以下成分組成每800ml體積中含乳酸鈣38 42g、硫脲9 llg、蔗糖48 52g、海藻糖4 6g、谷氨酸鈉48 52g、酶解干酪素NZ-Amine AS 36 39g，其余為純化水；所述PVP液由以下成分組成每200ml 體積中含PVP 28 32g、山梨醇9 llg，其余為純化水。所述基礎液由以下成分組成每800ml體積中含乳酸鈣40g、硫脲10g、蔗糖50g、 海藻糖5g、谷氨酸鈉50g、酶解干酪素NZ-Amine AS37. 5g，其余為純化水。所述PVP液由以下成分組成每200ml體積中含PVP 30g、山梨醇10g，其余為純化水。本發明所要解決的另一個技術問題是提供上述耐熱保護劑的制備方法，其技術方案為制備用于雞胚液凍干的耐熱保護劑的方法，基礎液的配制(1)加熱純化水至沸騰， 按所述比例緩慢加入乳酸鈣，攪拌直至完全溶解透明，用定性濾紙過濾；(2)按所述比例依次將硫脲、蔗糖、海藻糖、谷氨酸鈉、酶解干酪素NZ-Amine AS溶解到乳酸鈣溶液中，加純化水至所述比例；(3)過濾除菌；(4)常溫保存；不能放2-8°C保存，否則會有析出而沉淀；PVP 液的配制(1)加熱純化水至沸騰，按所述比例加入PVP，再加山梨醇，攪拌直至完全溶解透明；(2)高壓滅菌；將基礎液與PVP液按照4:1的體積比混合，即得。常溫保存1 一 2周可用。所述過濾除菌采用微孔濾膜的方式進行。所述微孔濾膜孔徑為0. 22um。所述高壓滅菌為在15磅壓力下滅菌15分鐘。本發明用于雞胚液凍干的耐熱保護劑在保護雞胚液中的應用，耐熱保護劑與雞胚液按照1:1的體積比配制。
本發明的有益效果為適用于雞新城疫活疫苗、雞傳染性支氣管炎活疫苗、雞新城疫雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗；耐熱保護劑可常溫保存；對雞胚液有良好的保護性能； 配制方法簡單、成本低。
具體實施例方式實施例1
用于雞胚液凍干的耐熱保護劑，由基礎液和聚乙烯吡咯烷酮PVP液按照4:1的體積比組成；其中，所述基礎液由以下成分組成每800ml體積中含乳酸鈣40g、硫脲10g、蔗糖 50g、海藻糖5g、谷氨酸鈉50g、酶解干酪素NZ-Amine AS 37. 5g，其余為純化水；所述PVP 液由以下成分組成每200ml體積中含PVP 30g、山梨醇10g，其余為純化水。制備用于雞胚液凍干的耐熱保護劑的方法，基礎液的配制(1)加熱純化水至沸騰，按所述比例緩慢加入乳酸鈣，攪拌直至完全溶解透明，用定性濾紙過濾；(2)按所述比例依次將硫脲、蔗糖、海藻糖、谷氨酸鈉、酶解干酪素NZ-Amine AS (購自北京拜爾迪生物公司)溶解到乳酸鈣溶液中，加純化水至所述比例；(3)采用孔徑為0. 22um的微孔濾膜過濾除菌；(4)常溫保存；PVP液的配制(1)加熱純化水至沸騰，按所述比例加入PVPK30 (購自北京東環聯合化工廠)，再加山梨醇，攪拌直至完全溶解透明；(2)在15磅壓力下高壓滅菌15 分鐘；將基礎液與PVPK30液按照4:1的體積比混合，即得。常溫保存1 一 2周可用。用于雞胚液凍干的耐熱保護劑在保護雞胚液中的應用，耐熱保護劑與雞胚液按照 1:1的體積比配制。實施例2:
用于雞胚液凍干的耐熱保護劑，由基礎液和聚乙烯吡咯烷酮PVP液按照4:1的體積比組成；其中，所述基礎液由以下成分組成每800ml體積中含乳酸鈣42g、硫脲9g、蔗糖 52g、海藻糖4g、谷氨酸鈉52g、酶解干酪素NZ-Amine AS 36g，其余為純化水；所述PVP液由以下成分組成每200ml體積中含PVP ^g、山梨醇llg，其余為純化水。制備用于雞胚液凍干的耐熱保護劑的方法，同實施例1。用于雞胚液凍干的耐熱保護劑在保護雞胚液中的應用，同實施例1。實施例3
用于雞胚液凍干的耐熱保護劑，其特征是，由基礎液和聚乙烯吡咯烷酮PVP液按照 4:1的體積比組成；其中，所述基礎液由以下成分組成每800ml體積中含乳酸鈣38g、硫脲 llg、蔗糖48g、海藻糖6g、谷氨酸鈉48g、酶解干酪素NZ-Amine AS 39g，其余為純化水； 所述PVP液由以下成分組成每200ml體積中含PVP 32g、山梨醇9g，其余為純化水。制備用于雞胚液凍干的耐熱保護劑的方法，同實施例1。用于雞胚液凍干的耐熱保護劑在保護雞胚液中的應用，同實施例1。試驗例保護效力試驗。1、試驗材料毒株新城疫低毒力活疫苗(La Sota株)，購自中國獸醫藥品監察所；SPF雞胚，購自山東省農科院家禽所；
2、試驗疫苗按照本發明方法配制耐熱凍干保護劑，與雞胚液按照1:1的體積比配制， 凍干處理后，得疫苗；
3、試驗疫苗的保存及效價測定分別置于2 8°C和室溫保存，按2010年版《中國獸藥典》方法測定不同時間病毒含量，試驗結果見下表(單位為EID5tl/羽份)
權利要求
1.用于雞胚液凍干的耐熱保護劑，其特征是，由基礎液和聚乙烯吡咯烷酮PVP液按照 4 1的體積比組成；其中，所述基礎液由以下成分組成每800ml體積中含乳酸鈣38 42g、 硫脲9 llg、蔗糖48 52g、海藻糖4 6g、谷氨酸鈉48 52g、酶解干酪素NZ-Amine AS 36 39g，其余為純化水；所述PVP液由以下成分組成每200ml體積中含PVP^ 32g、山梨醇9 llg，其余為純化水。
2.根據權利要求1所述的用于雞胚液凍干的耐熱保護劑，其特征是，所述基礎液由以下成分組成每800ml體積中含乳酸鈣40g、硫脲10g、蔗糖50g、海藻糖5g、谷氨酸鈉50g、 酶解干酪素NZ-Amine AS 37. 5g，其余為純化水。
3.根據權利要求1所述的用于雞胚液凍干的耐熱保護劑，其特征是，所述PVP液由以下成分組成每200ml體積中含PVP 30g、山梨醇10g，其余為純化水。
4.制備權利要求1一3任何一項所述用于雞胚液凍干的耐熱保護劑的方法，其特征是 基礎液的配制(1)加熱純化水至沸騰，按所述比例緩慢加入乳酸鈣，攪拌直至完全溶解透明，用定性濾紙過濾；(2)按所述比例依次將硫脲、蔗糖、海藻糖、谷氨酸鈉、酶解干酪素NZ-Amine AS溶解到乳酸鈣溶液中，加純化水至所述比例；(3)過濾除菌；(4)常溫保存； PVP液的配制(1)加熱純化水至沸騰，按所述比例加入PVP，再加山梨醇，攪拌直至完全溶解透明；(2)高壓滅菌；將基礎液與PVP液按照4:1的體積比混合，即得。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征是所述過濾除菌采用微孔濾膜的方式進行。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征是所述微孔濾膜孔徑為0.22um。
7.根據權利要求4所述的方法，其特征是所述高壓滅菌為在15磅壓力下滅菌15分鐘。
8.權利要求1用于雞胚液凍干的耐熱保護劑在保護雞胚液中的應用，其特征是，耐熱保護劑與雞胚液按照1:1的體積比配制。
全文摘要
本發明涉及一種用于雞胚液凍干的耐熱保護劑、其制備方法及其應用。其目的在于提供一種配制方法簡單、成本低、具有良好保護性能的耐熱保護劑。本發明的具體技術方案為用于雞胚液凍干的耐熱保護劑，由基礎液和PVP液按照4:1的體積比組成；其中，所述基礎液由以下成分組成每800ml體積中含乳酸鈣38～42g、硫脲9～11g、蔗糖48～52g、海藻糖4～6g、谷氨酸鈉48～52g、NZ-AmineAS36～39g，其余為純化水；所述PVP液由以下成分組成每200ml體積中含PVP 28～32g、山梨醇9～11g，其余為純化水。本發明的有益效果為有良好的保護性能；配制方法簡單、成本低。
文檔編號C12N7/00GK102430125SQ201110455420
公開日2012年5月2日 申請日期2011年12月31日 優先權日2011年12月31日
發明者張月美, 李本科, 李炳更, 郝圣峰, 馬景霞 申請人:山東濱州博萊威生物技術有限公司