專利名稱：Ttk基因的用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及生物工程技術領域，尤其涉及一種TTK基因的用途。
背景技術：
TTK基因(NM_003318)，位于染色體6ql3-q21，編碼TTK蛋白激酶，能夠對酪氨酸、絲氨酸、蘇氨酸磷酸化。TTK基因與細胞增殖相關，對有絲分裂過程中的染色體排列起重要作用，主要是負責著絲粒的復制。已有研究發現TTK蛋白是一個有絲分裂過程中監控染色體精確分離的關鍵的檢查點蛋白。當TTK蛋白不能降解時，會產生過多的著絲粒，導致有絲分裂紡錘體異常，進而可能造成腫瘤的發生。目前尚沒有關于TTK基因作為肝癌診斷標志物的報道。

發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種TTK基因的用途，TTK基因可作為診斷肝癌的分子標志物。為了解決上述技術問題，本發明通過如下技術方案實現:在本發明的一個方面，提供了一種TTK基因的用途，用于制備診斷肝癌的產品。優選的，所述診斷肝癌的產品包括:用半定量RT-PCR、基因芯片檢測、或免疫檢測診斷肝癌的產品。所述用半定量RT-PCR診斷肝癌的產品至少包括一對特異擴增TTK基因的引物。

所述用基因芯片檢測診斷肝癌的產品包括:與TTK基因的核酸序列雜交的探針。所述用免疫檢測診斷肝癌的產品包括 與TTK蛋白特異性結合的抗體。在本發明的另一方面，還提供了一種用于診斷肝癌的試劑盒，所述試劑盒包含特異性針對TTK基因的引物或探針，或包含特異性結合TTK蛋白的抗體。利用本發明的試劑盒，可以檢測病人TTK基因的表達情況，從而診斷病人是否患有肝癌。在本發明中，術語“引物”是指一種寡核苷酸，可以是天然的也可以是合成的，它可以作為在一定條件下誘發DNA合成的起始點，在合適條件下誘發合成與核酸鏈互補的引物擴增產物，即在四種不同的三磷酸脫氧核糖核苷及一種聚合試劑(即DNA聚合酶或逆轉錄酶)存在下，在一種合適的緩沖液中并在合適的溫度下進行擴增反應。優選的引物是單股寡脫氧核糖核苷酸。引物的合適長度取決于該引物的設計用途，但一般在15 25個核苷酸之間。在本發明中，所述探針可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合體、PNA或其它衍生物。所述探針的長度沒有限制，只要完成特異性雜交、與目的核苷酸序列特異性結合，任何長度都可以。在本發明中，可以使用一系列本領域已知的方法來制備針對TTK蛋白特異的抗體。例如，將提純的人TTK基因產物或它的抗原片段或人工合成的含有與TTK蛋白有連續5個相同的氨基酸的多肽片段注射入動物體內以產生多抗體。同樣，表達人TTK蛋白或它的抗原片段的細胞也可以用來對動物致免疫而產生抗體。根據本發明制備的抗體也可以是單克隆抗體，這些單克隆抗體可用雜交瘤技術制備。經實驗證明，本發明TTK基因在肝癌組織中的表達明顯高于癌旁組織，因此TTK基因可作為診斷肝癌的特異標志基因，使肝癌診斷更加準確、快速。


下面結合附圖和具體實施方式
對本發明作進一步詳細的說明。圖1是本發明實施例1的TTK基因在人肝癌組織和癌旁組織中差異表達的半定量RT-PCR結果圖。
具體實施方式
下列實施例中，未注明具體條件的實驗方法，通常按常規條件，如《精編分子生物學實驗指南》(F.M.奧斯伯，R.E.金斯頓，J.G.塞德曼等主編，馬學軍，舒躍龍的譯.北京:科學出版社，2004)中所述的方法進行。實施例1用半定量RT-PCR方法檢測肝癌樣本中TTK基因的表達變化

半定量反轉錄-聚合酶鏈反應(SqRT-PCR)是近年來常用的一種簡捷、特異的定量RNA測定方法，通過mRNA反轉錄成cDNA，再進行PCR擴增，并測定PCR產物的數量，可以推測樣品中特異mRNA的相對數量。以半定量RT-PCR為基礎建立起來的mRNA含量測定技術，較含內標化的RT-PCR定量測定的mRNA的方法更為簡便可行。運用半定量RT-PCR方法，檢測20對肝癌樣本中TTK基因的表達變化，發現其在肝癌組織中呈明顯的上調表達趨勢。具體實驗步驟如下:1.組織分離實驗用組織來源于HBV陽性并表達甲胎蛋白的原發性肝癌的手術病人(RT-PCR證實AFP在肝癌均為陽性而癌旁為陰性)。手術切除的肝臟一經離體，迅速切取病灶及周圍5公分外癌旁組織，放入液氮中(-80°C)保存。癌和癌旁的診斷均以病理診斷為最終依據。2.RNA 抽提采用TAKARA公司的Trizol (D9108)對20對肝癌樣本(癌和癌旁)組織進行抽提，并用安捷倫2100對產物的純度和濃度進行檢測。具體操作是:將碾杵和勻漿器等器皿在200°C干烤4h，去除RNA酶，冷卻；加入液氮中預冷，將組織從液氮中迅速取出，碾成粉末；用刮匙將組織放入預先加入TRIzoI試劑的勻漿器中，勻漿數分鐘；將勻漿后的液體轉入無RNA酶的離心管中，加入氯仿后，4°C離心分層；將上層水相轉入一無RNA酶的離心管中，加入氯仿后，4°C離心分層；將上層水相轉入一無RNA酶的離心管中，加異丙醇，4°C離心沉淀RNA ;用75%乙醇洗滌沉淀2次；用無RNA酶的去離子水溶解沉淀。抽提的RNA進行質量鑒定(用安捷倫2100測定RNA濃度、純度和完整性)，結果見下表I。質量鑒定好的RNA存放在_80°C冰箱待用。表120對肝癌樣本的RNA抽提質量檢測結果
權利要求
1.一種TTK基因的用途，其特征在于，用于制備診斷肝癌的產品。
2.根據權利要求1所述的用途，其特征在于，所述診斷肝癌的產品包括:用半定量RT-PCR、基因芯片檢測、或免疫檢測診斷肝癌的產品。
3.根據權利要求2所述的用途，其特征在于，所述用半定量RT-PCR診斷肝癌的產品至少包括一對特異擴增TTK基因的引物。
4.根據權利要求2所述的用途，其特征在于，所述用基因芯片檢測診斷肝癌的產品包括■ 與TTK基因的核酸序列雜交的探針。
5.根據權利要求2所述的用途，其特征在于，所述用免疫檢測診斷肝癌的產品包括 與TTK蛋白特異性結合的抗體。
6.一種用于診斷肝癌的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含特異性針對TTK基因的引物對。
7.一種用于診斷肝癌的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含特異性針對TTK基因的探針。
8.一種用于診斷肝癌的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含特異性結合TTK蛋白的抗體。
全文摘要
本發明公開一種TTK基因的用途，用于制備診斷肝癌的產品。本發明還公開了一種用于診斷肝癌的試劑盒，該試劑盒包含特異性針對TTK基因的引物或探針，或包含特異性結合TTK蛋白的抗體。本發明的TTK基因，可作為診斷肝癌的特異標志基因，使肝癌診斷更加準確、快速。
文檔編號C12Q1/68GK103194529SQ20121000227
公開日2013年7月10日 申請日期2012年1月5日 優先權日2012年1月5日
發明者黃健, 劉星 申請人:上海生物芯片有限公司