專利名稱：一種改進的酶法制備阿莫西林的方法
技術領域：
本發明涉及一種阿莫西林的制備方法，具體涉及一種改進的酶法制備阿莫西林的方法。
背景技術：
阿莫西林，化學名為(2S，5R，6R)-3，3-二甲基-6-[(R)-(-)-2-氨基-2-(4-羥基氮基)乙酸氨基]-7-氧代-4-硫雜-I-氮雜雙環[3, 2,0]庚燒-2-甲酸二水合物,它是一種常用的青霉素類廣譜β_內酰胺類抗生素。阿莫西林殺菌作用、穿透細胞壁的能力很強，是目前應用較為廣泛的口服青霉素之一。阿莫西林的制備有化學合成法和酶法制備法，申請號為CN00100579.0、CN02100123. 5、CN200410043624. 8 和 CN201110162540. 6 的發明專利申請公開了阿莫西林 的化學合成方法。化學合成法相對來說，合成路線長(例如，對羥基苯甘氨酸鄧鉀鹽與特戊酰氯混合后經混酐、縮合、水解、結晶、過濾洗滌、干燥等工序)，且生產過程用到大量的溶媒，例如特戊酰氯、吡啶、三乙胺、二氯甲烷等毒性較大的物質，不僅對操作人員毒害大，對環境也造成較大污染；而且化學法合成的阿莫西林具有晶型細小、流動性差、松密度小、分裝困難的缺陷。相對于化學合成法，酶法制備阿莫西林的工藝相對流程較短(如對羥基苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽與6-ΑΡΑ混合后，加酶催化即得到阿莫西林)，工藝簡單，雜質的帶入及產生較少，且制備過程中無溶媒及有毒害的試劑的特點；而且酶法所得產品的晶型較大、完整且規貝U，流動性好，操作時粉塵少、松密度大、分裝收率高，有利于制劑的生產。其中、GoncalvesL R B, Giordan R L C, Giordano R C. Mathematical modelingof batch and semibatch reactors for the enzymic synthesis of amoxicillin[J].Proc Biochem, 2005,40 (I) :247-256);酶法制備阿莫西林的工藝優化研究(中國抗生素雜志2011年I月第36卷第I期第44-47頁);酶法阿莫西林質量研究(河北化工，2008年4月第31卷第4期30-31頁)分別介紹了酶法制備阿莫西林的方法，并將所獲得的阿莫西林產品與化學法獲得的產品進行了質量對比研究。從上述公開的內容可以看出，化學合成法獲得的阿莫西林產品中，阿莫西林含量的最高為99. 37%、總雜含量最低為0. 77%、單雜含量最低為0. 17% ;而上述酶法獲得的阿莫西林產品中，阿莫西林含量的最高為99. 40%、總雜含量最低為0. 61 %、單雜含量最低為0.21% ;無論從產品的含量、總雜、單雜含量上，目前酶法制備工藝制得的阿莫西林的產品質量與化學合成制得的產品質量相當。然而對于藥品而言，產品的質量直接關系到患者的用藥安全，國家一直倡導提高藥品的質量，確保用藥安全，而提高藥品的質量也一直是本領域技術人員不斷追求的目標。因此，有必要進一步改進酶法制備阿莫西林的工藝，以大幅地提高阿莫西林的產品質量
發明內容
針對以上技術缺陷，本發明提供了一種改進的酶法制備阿莫西林的方法。所述方法包括以下步驟I)在10°C 20°C下，用pH值7. O 8. O的水或/和氨水溶液溶解6-APA，加入對
羥基苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽和青霉素G酰基轉移酶；2)將步驟I)所得溶液用氨水調pH值至6. O 6. 5、在21 °C 30°C下進行反應直至6-APA的殘留量低于5mg/ml ;得含有阿莫西林產物的溶液；3)將含阿莫西林產物的溶液分離出青霉素G酰基轉移酶，用鹽酸調pH值到O. 5
2.O以至溶液澄清；然后加入用氨水溶液調節pH值至5. 5 6. 5，并于O 5°C下結晶，即得。本發明的所述步驟I)中，作為實施方式之一，所述pH值7. O 8. O水或氨水溶液，pH值范圍包括但不限于7. O 7. 9,7. O 7. 8,7. O 7. 7,7. O 7. 6,7. O 7. 5,7. O 7. 4,7. O 7. 3,7. O 7. 2 ;7. I 8. 0,7. I 7. 9,7. I 7. 8,7. I 7. 7,7. I 7. 6,7. I 7. 5,7. I 7. 4、7. I 7. 3,7. I 7. 2 ;7. 2 8. 0,7. 2 7. 9,7. 2 7. 8,7. 2 7. 7,7. 2 7. 6,7. 2 7. 5,7. 2 7. 4、
7.2 7. 3 ;7. 3 8. 0,7. 3 7. 9,7. 3 7. 8,7. 3 7. 7,7. 3 7. 6,7. 3 7. 5,7. 3 7. 4 ;7. 4 8. 0,7. 4 7. 9,7. 4 7. 8,7. 4 7. 7,7. 4 7. 6,7. 4 7. 5 ;7. 5 8. 0,7. 5 7. 9,7. 5 7. 8,7. 5 7. 7,7. 5 7. 6 ;7. 6 8. 0、7· 6 7. 9、7· 6 7. 8、7· 6 7. 7 ;7. 7 8. 0、7· 7 7. 9、7· 7 7. 8 ;7. 8 8. 0、7· 8 7. 9 ;或7. 9 8. O ;同樣pH值可以為 7. 0,7. 1,7. 2,7. 3,7. 4,7. 5,7. 6,7. 7,7. 8、7. 9 或8. O
的水或氨水溶液。作為本發明的實施方式之一，所述氨水溶液進一步優選為pH值7. 5±0. I氨水溶液；所述PH值7. 5±0. I氨水溶液可以采用本領域常規的方法進行制備；既可以采用配制好的pH值7. 5 ± O. I的氨水溶液直接溶解6-APA，也可以先用水溶解6-APA，然后加入一定濃度的氨水調節pH值至7. 5±0. I ;其中所述氨水的濃度可以是本領域常規的濃度，本發明優選為3mol/L濃度的氨水溶液；本發明步驟I)中，更進一步優選為先用適量的水溶解6-APA，然后用3mol/L濃度的氨水調節PH值至7.5±0. I ;再加入對羥基苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽和青霉素G酰基轉移酶；作為本發明的實施方式之一，本發明所述步驟I)中10°C 20°C溫度范圍包括但不限于11°C 20°C、12°C 20°C、13°C 20°C、14°C 20°C、15°C 20°C、16°C 20°C、17V 20°C、18°C 20°C、19°C 20°C ；1(TC 19°C、irC 19 、12 19 、13 19 、14 19 、15 19°C、16。。 19。。、17。。 19。。、18。。 19。。；10°C 18°c、irc 18°C、12°C 18°C、13°C 18°C、14°C 18°C、15°C 18°C、16°C 18°C、17°C 18°C ；
1(TC 17°C、irC 17°C、12°C 17°C、13°C 17°C、14°C 17°C、15°C 17°C、16。。 17。。；10°C 16°C、11°C 16°C、12°C 16°C、13°C 16°C、14°C 16°C、15°C 16°C ；10°C 15°C、11°C 15°C、12°C 15°C、13°C 15°C、14°C 15°C ；1(TC 14°C、、11°C 14°C、12°C 14°C、13°C 14°C ；10°C 13°C、11°C 13°C、12°C 13°C ；1(TC 12°C、或 ire 12°C ；也可以是在10°C、11°C、12°C、13°C、14°C、15°C、16°C、17°C、18°C、19°C或 20°C ;本發明進一步優選為14°C 16°C，最佳為15°C ；作為本發明優選的實施方式之一，所述步驟I)中，在14°C 16°C、優選15°C，用水溶解6-APA,并用3. Omol/L的氨水調pH值至7. 5±0. I,然后加入對輕基苯甘氨酸甲酯鹽酸
鹽和青霉素G酰基轉移酶。作為本發明實施方式之一，所述步驟I)中，6-APA與對羥基苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽的重比為I : I. 3 I. 6，優選I. 3 1.4;作為本發明實施方式之一，所述步驟I)中，青霉素G酰基轉移酶的用量為2. 0-2. 5UK/L ；作為實施方式之一，本發明的所述6-APA、D-對羥基苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽、青霉素G酰基轉移酶和/或水均為本領域常規的原料，符合本領域常規的質量標準要求，優選符合如下標準的、任意來源(市上購買或制備)的原料或更高標準的原料)
權利要求
1.一種酶法制備阿莫西林的方法，所述方法包括 1)在10°C 20°C下，用pH值7.O 8. O的水或/和氨水溶液溶解6-APA’加入對羥基苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽和青霉素G酰基轉移酶； 2)將步驟I)所得溶液用氨水調pH值至6.O 6.5、在21°C 30°C下進行反應，直至6-APA的殘留量低于5mg/ml ;得含有阿莫西林產物的溶液； 3)將含阿莫西林產物的溶液分離出青霉素G酰基轉移酶，用鹽酸調pH值到O.5 2. O，以至溶液澄清；然后加入氨水溶液，調節PH值至5. 5 6. 5，并于0°C 5°C下結晶，即得。
2.根據權利要求I所述的方法，其特征在于，所述步驟I)中，6-APA與對羥基苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽的重量比為I : I. 3 I. 6，優選I. 3 1.4;和/或青霉素G酰基轉移酶的用量為 2. 0-2. 5UK/L。
3.根據權利要求I所述的方法，其特征在于，所述步驟I)中，在14°C 16°C、優選15°C，用水溶解6-APA，并用氨水調pH值至7. 5±O. I。
4.根據權利要求I所述的方法，其特征在于，所述步驟2)中，在21°C 24°C，優選22°C 23 °C下進行反應。
5.根據權利要求I所述的方法，其特征在于，所述步驟3)中還包括，析出晶體后，先后分別用水和/或80% 95%的甲醇、乙醇或異丙醇、或90-98%的丙酮的有機溶劑洗滌，干燥，即得。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述步驟3)中，水或有機溶劑與阿莫西林的重量比為2 3 I。
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述步驟3)中，干燥條件為-0. 06Mpa -O. 09Mpa、50°C 60°C下干燥。
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述步驟I)或步驟2)中氨水溶液的濃度為3mol/L ;和/或步驟3)中氨水溶液的濃度為6mol/L。
9.根據權利要求1-8任一所述的方法，其特征在于，所述方法包括 1)6-APA的投料比及溶解 在14°C 16°C條件下將6-APA加入水中，用3mol/L氨水調節pH值7. 5±0. 1，然后加入D-對羥基苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽和青霉素G酰基轉移酶，其中，6-APA與D-對羥基苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽的重量比I : I. 3 I. 4，青霉素G酰基轉移酶的量為2. 0KU/L 2. 5KU/L ； 2)反應過程 用3mol/L的氨水調節步驟I)所得溶液的pH值在6. O 6. 5之間，在22°C -23°C下進行反應，用HPLC檢測6-APA的轉化率，當6-APA的含量低于5mg/ml時，結束反應，得到含阿莫西林產物的溶液； 3)分離、精制 過濾步驟2)所得溶液，以除去青霉素G酰基轉移酶，然后加入與阿莫西林的重量比為2/20 3/20的水，用6mol/L鹽酸調節pH值O. 5 2. 0，至溶液澄清透明，用O. 22微米濾芯過濾； 然后用6mol/L的氨水調節pH值為5. 5 6. 5之間，降溫O 5°C，養晶； 過濾，晶體先后分別用水和/或80% 95%濃度的甲醇、乙醇或異丙醇，或90 98%濃度的丙酮有機溶劑洗滌，其中，水或有機溶劑與阿莫西林重量比為2 3 I。然后在50°C 60°C，真空度-O. 06Mpa -O. 09Mpa下干燥，直至水份低于14. 5%以下，即得。
10.一種權利要求1-9任一所述的方法獲得的阿莫西林產品，其特征在于，所述產品的阿莫西林含量大于或等于100. 7%;總雜的含量小于或等于為O. 15%;單雜的含量小于或等于 O. 10%。
全文摘要
本發明涉及制藥領域，提供了一種改進的酶法制備阿莫西林的方法以及該方法獲得的產品，其包括1)在10℃～20℃下，用pH值7.0～8.0的水或/和氨水溶液溶解6-APA，加入對羥基苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽和青霉素G酰基轉移酶；2)將步驟1)所得溶液調pH值至6.0～6.5、在21℃～30℃下進行反應，直至6-APA的殘留量低于5mg/ml；得含有阿莫西林產物的溶液；3)將含阿莫西林產物的溶液分離出青霉素G酰基轉移酶，用鹽酸調至溶液澄清；然后加入氨水溶液，調節pH值為5.5～6.5，0～5℃下結晶，即得。本發明大幅地提升了阿莫西林產品的質量，進一步提升了阿莫西林產品的用藥安全。
文檔編號C12P37/04GK102660621SQ201210135310
公開日2012年9月12日 申請日期2012年5月4日 優先權日2012年5月4日
發明者劉紅池 申請人:聯邦制藥(內蒙古)有限公司