專利名稱：富金花荷葉茶發花制備工藝的制作方法
技術領域：
本發明涉及農產品加工技術領域，具體涉及一種富金花荷葉茶發花制備工藝，其荷葉茶的荷葉是指睡蓮科植物蓮Nelumbo nuciferagaertn.的葉,其發花所述的花即冠突散囊菌(及/re^itt cristarum (Raper & Fennell) Malloch & Cain),俗稱金花。
背景技術：
荷葉茶的營養價值很豐富，含有蓮堿、原荷葉堿和荷葉堿等多種生物堿及維生素C。有清熱解毒、涼血、止血、減肥的作用。荷葉茶的功效也是有醫學資料記載的，總結為以下六大功效:
(I)消脂:荷葉的主要化學成分荷葉堿中含有多種有效的化脂生物堿，能強悍密布人體腸壁上，形成一層脂肪隔離膜，阻止脂肪吸收，防止脂肪堆積，有效分解體內的脂肪，并且強勁排出體外。(2)排毒養顏:常喝荷葉茶可以潤腸通便，排毒功效顯著，能有效打通人體各類代謝通路，清除自由基，調解臟腑功能。有便秘跡象的人每天喝四次荷葉茶，堅持一段時間后可以使大便暢通，體內毒素的減少讓減肥事半功倍，體內毒素少了，皮膚氣色也自然好了。(3)清熱降火:荷葉茶中的荷葉堿具有清心火、平肝火、瀉脾火、降肺火以及清熱養神的功效，調解內分泌，改善人體微循環，荷葉的祛火功能讓荷葉茶成為當之無愧的養心佳品。(4)去油膩:荷葉堿改善油膩飲食習慣，其具有較強的油脂排斥功效，荷葉堿長期積存人體，抑制脂肪吸收，會產生潛信號慣化大腦飲食神經，從而讓你對葷腥油膩的食物漸漸產生反感。

(5)降三高:100%純天然荷葉茶對無任何副作用，不僅無害，反而益處多多，降血壓，降血脂，減肥等功效，長期堅持喝能明顯降低血清中甘油三醇和膽固醇含量，對“三高”即高血壓、高血脂、高膽固醇有顯著的功效。是一種老少皆宜的飲品。(6)疾病保健:由于肥胖人體細胞對胰島素不敏感，患者糖耐量常減低，總脂、膽固醇、甘油三酯及游離脂肪酸常增高，呈高脂血癥與高脂蛋白血癥，此為誘發糖尿病動脈粥樣硬化、冠心病、膽石癥、高血壓等疾病的基礎，荷葉堿能有效分解降低體細胞脂肪，提高其對胰島素的感知度，杜絕高脂疾病發生。冠突散囊菌，也叫金花，過去只在千年靈芝上才偶爾發現過，尤其在湖南安化的黑茶中的茯磚茶中生長及其茂密，這是湖南安化黑茶所獨有的益生菌種，也叫金花菌，這種菌能有效的抑制腸癌，胃癌，肝癌細胞的擴散。在高倍放大鏡下，‘金花’呈金黃色，形狀如球形蘑菇，大量的研究和臨床數據表明，冠突散囊菌的功效與前年靈芝孢子粉非常的類同，能夠有效的提升人體免疫能力，防癌，抗癌，抗氧化，抗衰老，令人延年益壽，此外，消脂減肥的功效遠遠超越其他任何的菌種，所以安化黑茶中金花菌成為了世界各個科研機構的研究熱點。近期，湖南農業大學研究發現，冠突散囊菌(金花)對延長人的壽命能夠產生積極的作用，另外對改善腸道，降三高，糖尿病等慢性病，也具有非常顯著的效果。金花普遍茂盛、色澤鮮艷金黃、顆粒肥大歷來是優質茯茶的最重要品質特征。本發明是為實現金花和荷葉的雙重功能而開發研制的一種富金花荷葉茶發花制備工藝。

發明內容
本發明所要解決的技術問題是解決金花在荷葉上生長困難，也就是發花技術存在的問題，提供一種富金花荷葉茶發花制備工藝，能在3-7天短期內實現發花，而且金花普遍茂盛，色澤鮮艷金黃，顆粒肥大，其發花率均能達到100%。本發明采用的技術方案是
一種富金花荷葉茶發花制備工藝，具體步驟如下
①冠突散囊菌的純化分離；
②一定老化度冠突散囊菌孢子懸液制備與濃度確定；
③初級荷葉茶制作與保存；
④初級荷葉茶渥堆；
⑤添加冠突散囊菌孢子懸液；
⑥烘茶；
⑦發花；
⑧干燥和保存。上述技術方案中，所述的冠突散囊菌的純化分離方法為用添加10%茯磚茶汁的PDA瓊脂固體培養基平板梯度稀釋分離；所述的一定老化度冠突散囊菌孢子懸液制備與濃度確定方法為挑取純化的金花菌落，接種至添加10%茯磚茶汁、20%蔗糖和10%NaCl的PDA液體培養基培養，28°C靜置培養5天，然后升高溫度至30-32°C培養14-30天，震蕩分散孢子，無菌水稀釋孢子懸液濃度控制在107-108f/mL ;所述的初級荷葉茶制作與保存將荷葉洗凈，切絲成0. 2cm寬長條狀，使其維持含水量10%，在100°C密閉殺青2小時，然后揉捻成條索狀后，37°C渥堆24小時，40-50°C干燥I天后制成初級荷葉茶，常溫室內保存；所述的初級荷葉茶渥堆用茯磚茶汁拼配使其維持含水量28%，37°C渥堆24小時；冠突散囊菌孢子懸液添加量為0. 25 mL/100g ;所述的烘茶條件為密閉65_68°C、I小時；所述的發花為控制濕度和溫度發花條件為前兩天濕度80%、溫度26°C，然后濕度70%、溫度28°C直至金花生長普遍茂盛、色澤鮮艷金黃、顆粒肥大，菌花香濃郁為止；所述的干燥和保存為富金花荷葉茶40-50 °C干燥I天后常溫室內保存。PDA 指 Potato Dextrose Agar 的簡稱。PDA瓊脂固體培養基指將馬鈴薯洗凈去皮，稱取200g，切成小塊放入燒杯中，加適量蒸餾水，煮沸I小時，稍冷后用雙層紗布過濾，在濾液中加入15g瓊脂，加熱熔化，最后加入蔗糖20g，混勻，用量筒定容至IOOOmL,趁熱分裝在三角瓶中，在1.1 kg/cm2 (121°C)中保持20分鐘滅囷。PDA液體培養基指上述培養基配制過程操作，但不添加瓊脂。PDA平板指上述培養基滅菌結束后冷卻至50°C左右，在超凈工作臺上將培養基倒入事先已經滅菌并干燥的培養皿中，待冷卻即為制得的PDA瓊脂固體培養基平板。10%茯磚茶汁的PDA固體培養基指將馬鈴薯洗凈去皮，稱取200g，切成小塊放入燒杯中，加適量蒸餾水，煮沸I小時，稍冷后用雙層紗布過濾，在濾液中加IOOmL制備好的茶汁，然后加入15g瓊脂，加熱熔化，最后加入蔗糖20g混勻，用量筒定容至IOOOmL,趁熱分裝在三角瓶中，在1. lkg/cm2(12rC)中保持20分鐘滅菌。滅菌結束后冷卻至50°C左右，在超凈工作臺上將10%茯磚茶汁的PDA瓊脂固體培養基倒入事先已經滅菌并干燥的培養皿中，待冷卻即為制得的10%茯磚茶汁的PDA瓊脂固體培養基平板。10%茯磚茶汁的PDA液體培養基與上述操作過程相同，但不添加瓊脂。平板梯度稀釋法為
將成品茯磚樣本用植物微型粉碎機將樣品粉碎，200目過篩、65°C干燥2小時后稱取Ig樣品，定容IOmL,即配成I X 10 —ig/mL的獲磚樣本溶液,從上述溶液中取I mL定容10 mL配成I X 10 — ig/mL的茯磚樣本溶液，依次配制成濃度I X 10 —3、I X 10 —4、I X 10 — 5g/mL的茯磚茶樣本溶液各10 mL備用。取I X 10 —3、I X 10 —4、I X 10 一 5g/mL的茯磚樣本溶液各0. 5 mL,用涂布器涂布到10%茯磚茶汁的PDA瓊脂固體培養基平板上，超凈臺上吹干15分鐘左右，倒置平皿，28°C培養，3 - 4天后挑取優勢菌一金花菌，同樣條件繼代培養直至純化。畫線接種指用滅菌的接種針在超凈臺上將已經生長好的菌落挑取，在新的固體培養基平皿畫線分離相應微生物。金花菌落指金花菌在固體培養基平板上生長到一定時候形成的一個菌落集合體，菌落是指聚集在一起的微生物團。茯磚茶汁的具體制備方法按照Ig茯磚茶樣本比30mL蒸餾水的比例稱取20g茯磚茶，加入600mL蒸餾水，100°C水浴2小時，待稍冷卻后用量筒定容至600mL即為制備好的
茯磚茶汁。配成10'10'10'10'1(T5是指濃度，單位為g/mL。孢子懸液濃度IO7-1O8個/ml中的“個”是指單個的金花菌的子囊孢子。計數方法為用梯度稀釋法涂布在添加10%茶汁的PDA瓊脂固體培養基平板上生長計數或用722型分光光度計測量其OD值，控制在0. 6左右，使金花孢子懸液濃度控制在每毫升IO7-1O8個金花孢子。本發明提供了一種能在3-7天的短期內實現荷葉發花，而且金花普遍茂盛、色澤鮮艷金黃、顆粒肥大，豐富了功能飲品的品種和口味，極大地提高荷葉和金花的品質。


圖1為本發明培養7天分離純化的冠突散囊菌落照片；
圖2為本發明冠突散囊菌的孢子懸液20天培養結果照片；
圖3為富金花荷葉茶發花結果照片。
具體實施例方式1.金花的分離、純化
冠突散囊菌即金花從益陽茶廠成品湘益牌茯磚樣本中分離。具體分離和純化過程為將成品湘益牌茯磚樣本粉碎，用平板梯度稀釋法在添加10%茯磚茶汁的PDA瓊脂固體培養基平板上28°C培養，繼代泡飲直至純化。2. 一定老化度冠突散囊菌孢子懸液制備與濃度確定
挑取純化的金花菌落，接種至添加10%茯磚茶汁、20%蔗糖和10%NaCl的PDA液體培養基培養，28°C靜置培養5天，然后升高溫度至30-32°C培養14-30天，震蕩分散孢子，無菌水稀釋孢子懸液濃度控制在IO7-1O8個/mL。3.初級荷葉茶制作與保存
將荷葉洗凈，切絲成0. 2cm寬長條狀，使其維持含水量10%，在100°C密閉殺青2小時，然后揉捻成條索狀后，37°C渥堆24小時，40-50°C干燥I天后制成初級荷葉茶，常溫室內保存。4.初級荷葉茶渥堆
用茯磚茶汁拼配使其維持含水量28%，37°C渥堆24小時；
5.添加冠突散囊菌孢子懸液
初級荷葉茶100°c 2小時滅菌冷卻后，按照每IOOg初級荷葉茶添加0. 25mL冠突散囊菌孢子懸液的比例，以噴霧的形式添加，混勻。6.烘茶
烘茶條件為密閉65-68°C、l小時。7.發花控制濕度和溫度發花
控制濕度和溫度發花條件為前兩天濕度80%、溫度26°C，然后濕度70%、溫度28°C直至金花生長普遍茂盛、色澤鮮艷金黃、顆粒肥大，菌花香濃郁為止。8.干燥和保存
富金花荷葉茶40-50°C干燥I天后常溫室內保存。實施例1 :金花的分離、純化
將成品湘益牌茯磚樣本用植物微型粉碎機粉碎，200目過篩、65°C干燥2小時后稱取Ig 樣品，定容 10mL，配成 lO'lO'lO'lO—4、10_5 各 10mL，取 10' 10_4、10_5 三個梯度各
0.0. 5mL涂布添加10%茯磚茶汁的PDA瓊脂固體培養基平板，超凈臺上吹干，28°C培養3天，挑取金黃色優勢菌落，畫線至添加10%茯磚茶汁的PDA瓊脂固體培養基平板上，同樣條件繼代培養直至純化。分離純化的金花菌落見附圖1。實施例2 :冠突散囊菌的孢子懸液制備
挑取純化的金花菌落，接種至添加10%茯磚茶汁、20%蔗糖和10%NaCl的PDA液體培養基培養，28°C靜置培養5天，然后升高溫度至30-32°C培養14-30天，震蕩分散分生孢子，用雙層無菌紗布過濾，再后280rpm振蕩培養分散分生孢子，無菌水稀釋孢子懸液至OD值為
0.6，孢子懸液濃度控制在IO7-1O8個/mL，即為可用的冠突散囊菌孢子懸液。冠突散囊菌的孢子懸液培養結果見附圖2。實施例3 :富金花荷葉茶發花驗證
取新鮮荷葉2Kg，以不接種作為對照，按照具體實施方式
中1-8步在湖南省黑茶品質與發酵關鍵技術控制產學研示范基地進行發花實驗，其發花率均能達到100%，生長普遍茂盛、色澤鮮艷金黃、顆粒肥大，菌花香濃郁。富金花荷葉茶發花結果見附圖3。
權利要求
1.一種富金花荷葉茶發花制備工藝，其特征在于:具體步驟如下: ①冠突散囊菌的純化分離； ②一定老化度冠突散囊菌孢子懸液制備與濃度確定； ③初級荷葉茶制作與保存； ④初級荷葉茶渥堆； ⑤添加冠突散囊菌孢子懸液； ⑥烘茶； ⑦發花； ⑧干燥和保存。
2.根據權利要求1所述的富金花荷葉茶發花制備工藝，其特征在于:所述的冠突散囊菌的純化分離方法為:用添加10%茯磚茶汁的PDA瓊脂固體培養基平板梯度稀釋分離；所述的一定老化度冠突散囊菌孢子懸液制備與濃度確定方法為:挑取純化的金花菌落，接種至添加10%茯磚茶汁、20%蔗糖和10%NaCl的PDA液體培養基培養，28°C靜置培養5天，然后升高溫度至30-32°C培養14-30天，震蕩分散孢子，無菌水稀釋孢子懸液濃度控制在IO7-1O8個/mL ;所述的初級荷葉茶制作與保存:將荷葉洗凈，切絲成0.2cm寬長條狀，使其維持含水量10%，在100°C密閉殺青2小時，然后揉捻成條索狀后，37°C渥堆24小時，40_50°C干燥I天后制成初級荷葉茶，常溫室內保存；所述的初級荷葉茶渥堆:用茯磚茶汁拼配使其維持含水量28%，37°C渥堆24小時；冠突散囊菌孢子懸液添加量為0.25 mL/100g ;所述的烘茶條件為密閉65-68°C、l小時；所述的發花為:控制濕度和溫度發花條件為前兩天濕度80%、溫度26°C，然后濕度70%、溫度28°C直至金花生長普遍茂盛、色澤鮮艷金黃、顆粒肥大，菌花香濃郁為止；所述的干燥和保存為:富金`花荷葉茶40-50°C干燥I天后常溫室內保存。
全文摘要
一種富金花荷葉茶發花制備工藝，其步驟為①冠突散囊菌的純化分離；②一定老化度冠突散囊菌孢子懸液制備與濃度確定；③初級荷葉茶制作與保存；④初級荷葉茶渥堆；⑤添加冠突散囊菌孢子懸液；⑥烘茶；⑦發花；⑧干燥和保存。本發明研制成功了富金花荷葉茶發花制備工藝，使之能在3-7天短期內實現發花，而且金花普遍茂盛，色澤鮮艷金黃，顆粒肥大，發花率均能達到100%。
文檔編號A23F3/34GK103070267SQ20131001468
公開日2013年5月1日 申請日期2013年1月16日 優先權日2013年1月16日
發明者劉石泉, 趙運林, 龍立平, 胡治遠 申請人:湖南城市學院