專利名稱：一種黑麥草種子與農桿菌共培養的轉基因技術的制作方法
技術領域：
一種黑麥草種子與農桿菌共培養的轉基因技術屬于生物技術領域，更具體的說是一種通過黑麥草種子與農桿菌接種液共同培養的辦法實現自動轉基因接種。
背景技術：
目前，黑麥草的轉基因一般采用農桿菌侵染愈傷或基因槍轟擊法，但是這2種方法都是基于組織培養技術，都存在轉化周期長、花費較大、技術和設備要求高的缺點。

發明內容
一種黑麥草種子與農桿菌共培養的轉基因技術發明的目的是采用一種黑麥草種子與農桿菌共同培養的方法，使二者在相互密切接觸的情況下進行自動接種，以期改變現有技術轉化周期長、花費較大、技術和設備要求高的狀況。本發明是這樣實現的1. 一種黑麥草種子與農桿菌共培養轉基因技術的特征在于，以黑麥草種子與農桿菌接種液共同培養實現自動轉基因接種，它包括①黑麥草種子消毒，②與菌液共同培養接種，③暗箱培養，④育苗栽培4個步驟。2.黑麥草種子消毒選取飽滿的黑麥草種子先后用乙醇和84消毒液進行消毒，然后用滅菌水洗凈種子。3.將滅菌后的種 子轉入到OD6c 為O. 3的載入了雙元載體的農桿菌接種液中，于恒溫震蕩培養箱中震蕩培養24小時，培養溫度為28°C，震蕩速度為lOOrpm。4.將與菌液共培養后的種子取出置于發芽盒中，6°C恒溫暗培養4天，注意保濕。5.將培養后的種子單粒播到營養缽中，置于22°C下生長，3葉期即可進行轉基因植株的鑒定。本發明的有益效果一種黑麥草種子與農桿菌共培養的轉基因技術避開了傳統的農桿菌侵染愈傷后或基因松轟擊后再組織培養的技術路線，與現有方法相比有以下幾個優點第一，所需時間減少I個月左右，農桿菌侵染法從愈傷誘導到獲得轉基因植株一般需要3-4個月，本方法從接種開始到鑒定完成只需2-3個月；第二，本方法對技術要求不高，而黑麥草組織培養難度大，愈傷易褐化，因此對實驗者的技術和實驗的條件要求高，而本方法不涉及組織培養過程，因此大大降低了技術難度和實驗條件；第三，本方法所需費用較少，現有的轉基因技術需要借助植物組織培養技術，而組織培養的各種試劑較貴，而且需要建立組培室并配備大量的儀器設備才能開展工作，而本發明免除了這部分的花費，節約了大量資金。
具體實施例方式
下面結合具體實例對本發明進行進一步的描述。實施例1 :將1305GFP載體轉入到黑麥草品種長江2號的植株中1.黑麥草種子消毒選取200粒飽滿的黑麥草長江2號種子首先用70%乙醇消毒2min，然后用84消毒液消毒15min，消毒結束后用滅菌水洗凈種子。2.將滅菌后的長江2號種子轉入到OD6tltl為O. 3的已載入1305GFP載體的農桿菌接種液中，于恒溫震蕩培養箱中培養24小時，培養溫度為28°C，震蕩速度為lOOrpm。3.將與菌液共培養后的種子取出置于發芽盒中，6°C恒溫暗培養4天，注意保濕。4.將培養后的種子單粒播到營養缽中，置于22°C下生長，在3葉期進行轉基因植株的鑒定。通過以上步驟共獲得109株黑麥草幼苗，經鑒定有21株為轉基因植株。歷時55天，比現有的轉基因 技術減少60天左右。
權利要求
1.一種黑麥草種子與農桿菌共培養轉基因技術的特征在于，以黑麥草種子與農桿菌接種液共同培養實現自動接種，它包括①黑麥草種子消毒，②與菌液共同培養接種，③暗箱培養，④育苗栽培4個步驟。
2.根據權利要求1所述的技術，其特征在于，所述的黑麥草種子消毒的做法是選取籽粒飽滿的黑麥草種子，順序用乙醇和84消毒液消毒，消毒結束后用滅菌水洗凈種子。
3.根據權利要求1所述的技術，其特征在于，所述的與菌液共同培養接種的做法是將滅菌后的種子轉入到0D_為O. 3的轉入了雙元載體的農桿菌接種液中，于恒溫震蕩培養箱中培養24小時，培養溫度為28°C，震蕩速度為lOOrpm。
4.根據權利要求1所述的技術，其特征在于，所述的暗箱培養的做法是將與菌液共培養后的種子取出置于發芽盒中，6°C恒溫暗培養4天，注意保濕。
5.根據權利要求1所述的技術，其特征在于，所述的育苗栽培的做法是將培養后的種子單粒播到營養缽中，置于22°C下生長，3葉期即可進行轉基因植株的鑒定。
全文摘要
一種黑麥草種子與農桿菌共培養的轉基因技術，屬于生物技術領域。將黑麥草種子消毒后充分洗凈，與OD600為0.3的已載入雙元載體的農桿菌接種液于恒溫震蕩器中共同震蕩培養，再對種子進行暗箱培養，促進農桿菌侵染并在體內大量增殖擴散，然后將萌發的種子單粒播于營養缽中，3葉期即可進行轉基因鑒定。本方法簡便，操作容易，費用低廉。
文檔編號C12N15/82GK103031332SQ20131001903
公開日2013年4月10日 申請日期2013年1月19日 優先權日2013年1月19日
發明者李杰勤, 王麗華, 詹秋文, 張俊, 趙庭, 萬海波, 周青, 王茂輝, 王薇薇 申請人:安徽科技學院