乳酸戊糖片球菌及其用途
【專利摘要】本發明涉及一種乳酸戊糖片球菌（Pediococcus?pentosaceus）PP31的新型菌株。本發明提供一種用于治療過敏性疾病的醫藥組合物，其至少包含有上述乳酸戊糖片球菌為有效成份及一醫藥上可接受的載體和/或賦形劑。本發明還提供了一種用以減緩過敏性疾病的食品，其至少包含有上述乳酸戊糖片球菌及一食物成份。本發明所提供的乳酸戊糖片球菌可有效地調控細胞激素的變化，用以治療或預防過敏性疾病，如氣喘及過敏性鼻炎，可作為一醫藥組合物的有效成份，可以口服、涂抹或是噴霧形式投予給患者；也可配合食品成份而作為一用以減緩過敏性的食品，用以減緩過敏性疾病的癥狀或是預防過敏性疾病。
【專利說明】乳酸戊糖片球菌及其用途
【技術領域】
[0001]本發明與微生物有關，特別指一種乳酸戊糖片球菌及其用途。
【背景技術】
[0002]根據統計，臺灣約有三分之一的人口患有過敏性疾病，致使身體不適，嚴重者可造成死亡。而所謂過敏反應，指身體對于外來物質所產生的一種免疫反應，如氣喘(Asthma)、過敏性鼻炎(Atopicrhinitis)、過敏性結膜炎、異位性皮膚癌、蕁麻疫、濕疫(Eczenia)或食物過敏(Food allergy)等。在已公開的醫學研究中指出過敏性疾病的發生主要是與環境與遺傳因子有相關連性，具體來說，生活周遭所充斥的諸多過敏原，例如:塵螨、蟑螂、動物毛屑、化學藥品、花粉、空氣污染，另外還包含食物，如雞蛋、牛奶等，上述過敏原都會被患有過敏性疾病的人體解讀為外來的有害物質，活化免疫細胞中的吞噬細胞，進而引發一連串的過敏現象，如發癢、腫脹發熱等。而除了環境因子外，遺傳因子是過敏發生的另一原因，其中，遺傳性過敏性疾病是一種多重基因遺傳有關的慢性過敏發炎反應，主要染色體發生異常的位置可能位于第5對染色體5p31-33，其為促成過敏性發炎產生細胞激素基因所在位置，而與過敏體質的形成關系密切;第11對染色體llql3與第14對染色體上T細胞接受器基因也影響免疫球蛋白E (Immunoglobulin E，IgE)的總量及與特異性免疫球蛋白的形成有關。
[0003]過敏為人體免疫功能失調而引起不適癥狀，而人體的免疫反應是依據不同機制而分為四型:第一型以免疫球蛋白E抗體為媒介，誘使肥大細胞活化；第二型及第三型則以免疫球蛋白G (Immunoglobulin G, IgG)抗體為媒介，隨不同的免疫球蛋白G亞型及抗原特性，不同程度地參與補體媒介及吞噬作用機制，而第二型對細胞表面或基質抗原直接反應造成，第三型則是與可溶性抗原形成免疫復合體而造成組織傷害；第四型則以T細胞為媒介，進而可再分為三類，第一類為Thl細胞活化吞噬細胞，造成發炎反應；第二類為Th2細胞活化嗜伊紅性白血球(Eosinophils)發炎反應；第三類為毒殺型T細胞直接損壞組織。
[0004]更進一步而言，一般常見的過敏疾病屬于第一型過敏反應(Janeway etal.，1994)，如氣喘、過敏性鼻炎、食物過敏、濕疹等，主要原因為Thl細胞與Th2細胞之間的免疫反應不平衡，且過敏原的反應系較偏向Th2細胞的免疫反應。而Thl細胞會分泌IL-2、IFN-Y及IL-12等細胞激素，主要功能為幫助IgG2a抗體的產生、活化巨噬細胞、天然殺手細胞與毒殺型T細胞，強化細胞免疫反應。并且，在T細胞分化早期，由調控細胞激素可抑制Th2的免疫反應，如IFN- Y可減少IL-4的表現量，并且抑制B細胞進行抗體同型轉換；IFN-α 可增加 IFN-Y 表現量，誘發 Thl 的免疫反應(Sinigaglia et al.，1999 ;林，2006)。簡而言之，當免疫反應偏向分泌IL-12或IFNs細胞激素為主時，則免疫反應偏向Thl型，減緩過敏反應發生。
[0005]而為了減緩過敏反應的發生，除了建議患者避免過敏原外，臨床上對于治療過敏疾病的藥物大多采用抗組織胺(Antihistamine)或是副腎皮質素(又稱類固醇)，用以減緩病患對于過敏原所產生的過敏反應。雖然不論使用抗組織胺或是副腎皮質素雖皆可對于過敏性疾病達到顯著的療效，但，長期使用下或是患者未遵循醫囑下而任意使用，都會對于人體產生不良影響的副作用。而為了避免藥物所產生的副作用，臨床上也有針對過敏疾病采用減敏治療，在明確獲知過敏原的情形下，將過敏原打入體內，使患者自己培養出對抗過敏原的抗體，雖然該減敏治療的方法主要對于過敏性鼻炎與過敏性氣喘有一定成效，但治療需耗費大量時間及金錢，并該減敏療法并非適用每位過敏性疾病患者。
[0006]由上可知，過敏性疾病影響著大多數人的健康，病癥發作時會對于生活造成一定程度的影響，因此，研究者都致力于開發用以減緩過敏癥狀或是改善過敏癥狀的藥物或是方法，力求具有成本低、效果佳、不具有副作用等功效。

【發明內容】

[0007]本發明的主要目的是提供一乳酸戍糖片球菌(Pediococcus pentosaceus) PP31,可用于減緩或改善過敏癥狀。
[0008]本發明的另一目的是提供一種包含上述乳酸戊糖片球菌的用以治療過敏性疾病的醫藥組合物。
[0009]本發明的再一目的是提供一種包含上述乳酸戊糖片球菌的用以減緩過敏性疾病的食品。
[0010]為實現上述目的，本發明采用以下技術方案:
[0011]一種戍糖片球菌(Pediococcus pentosaceus) PP31,保藏在中國普通微生物菌種保藏管理中心，地址為北 京市朝陽區北辰西路I號院3號，保藏編號CGMCC7050，保藏日期為2012年12月28日。
[0012]一種用于治療過敏性疾病的醫藥組合物，該醫藥組合物至少包含有一所述的乳酸戊糖片球菌PP31為有效成份及一醫藥上可接受的載體和/或賦形劑。
[0013]優選的是，所述一種用于治療過敏性疾病的醫藥組合物，該過敏性疾病選自于氣喘及過敏性鼻炎。
[0014]一種用以減緩過敏性疾病的食品，該食品至少包含有一所述的乳酸戊糖片球菌PP31及一食物成份。
[0015]優選的是，所述一種用以減緩過敏性疾病的食品，該過敏性疾病選自于氣喘及過敏性鼻炎。
[0016]本發明的有益效果為:
[0017]本發明所提供的乳酸戊糖片球菌PP31可有效地調控細胞激素的變化，用以有效預防或治療過敏性疾病，如氣喘及過敏性鼻炎，因此，乳酸戊糖片球菌PP31可應用作為一醫藥組合物的有效成份，可以口服、涂抹或是噴霧形式投予給患者；也可配合食品成份而作為一用以減緩過敏性的食品，用以減緩過敏性疾病的癥狀或是預防過敏性疾病。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0018]圖1為實施例二中檢測各組IL-12細胞激素產量的結果示意圖；
[0019]圖2為實施例二中檢測各組IFN- Y細胞激素產量的結果示意圖；
[0020]圖3為實施例二中檢測各組IL-4細胞激素產量的結果示意圖；
[0021]圖4為實施例三中測量各組小鼠致敏后不同時間下的呼吸道阻力參數值的結果示意圖。
【具體實施方式】
[0022]本發明提供的乳酸戍糖片球菌(Pediococcus pentosaceus) PP31,保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，地址為北京市朝陽區北辰西路I號院3號，保藏編號CGMCC7050，保藏H期為2012年12月28日。
[0023]本發明所提供的該乳酸戊糖片球菌PP31，可作為一用于治療過敏性疾病的有效成份，結合醫藥上可接受的載體和/或賦形劑，而形成一醫藥組合物，型態可為錠劑、丸狀、粉末、膠囊等；另外該乳酸戊糖片球菌PP31可與一食品成份形成一用以減緩過敏性疾病的食品，例如:飲品、乳制品、營養補充品等。
[0024]以下，將通過若干實施例及圖示更進一步說明本發明。
[0025]實施例一:分離并培養人體周邊血液單核球
[0026]取有過敏癥狀的人體靜脈血液5mL，以Ficoll Hypaque密度梯度離心法分離出人體周邊血液單核球(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)。將該人體周邊血液單核球培養在含有10%胎牛血清以及1%二合一抗生素的培養基中(RPM1-1640medium)，并以血球計數器在顯微鏡下計算活細胞數目，以供后續實施例使用。
[0027]實施例二:乳酸戊糖片球菌PP31刺激人體周邊血液單核球的免疫測定
[0028]在本實施例中是將實施例一中的人體周邊血液單核球分為兩組，分別以不同培養環境予以培養24小時后， 再以酵素連結免疫分析法檢測各組細胞的Thl途徑的IL-12、IFN-Y及Th2途徑的IL-4細胞激素產量，其中，第一組為未添加任何乳酸菌，作為空白組；第二組為添加本發明所提供的乳酸戊糖片球菌PP31。
[0029]具體是，將實例一中制備完成的人體周邊血液單核球計數并調整濃度后，取三個96孔盤，分為三組，各盤的每孔系分別加入200 μ L的人體周邊血液單核球(濃度為I X IO6CelΙ/mL)后，再依據第二組的條件，將濃度106CFU/mL、體積40 μ L的乳酸菌體分別加入第二組的培養盤的孔洞中，并混合均勻。而后將該二組的培養盤在37°C、5% 二氧化碳環境下培養24小時后，取各組上清液放入_80°C冰箱，以酵孝連結免疫分析法檢測，結果如圖1至圖3所示，其中，圖1為檢測各組IL-12細胞激素產量的結果示意圖；圖2為檢測各組IFN-Y細胞激素產量的結果示意圖；圖3為檢測各組IL-4細胞激素產量的結果示意圖。
[0030]由圖1至圖3結果可知第二組的IFN-Y及IL-12表現量分別高于第一組。第二組的IL-4表現低于第一組。由以上結果顯示添加本發明所提供的乳酸戊糖片球菌PP31可增加IFN- Y、IL-12表現量，降低IL-4表現量，誘發Thl及降低Th2的免疫反應，有效減緩過敏反應的發生。
[0031]實施例三:呼吸道阻力測定
[0032]本實施例是取若干BALB/c小鼠，分為三組，先分別以不同條件飼養連續九周，其中，第一組小鼠為正常小鼠，用以作為空白對照組；第二組小鼠為以卵蛋白(OVA)誘導的氣喘模式小鼠；第三組小鼠為以卵蛋白(OVA)誘導的氣喘模式小鼠，并另喂食本發明所提供的乳酸戊糖片球菌PP31。
[0033]為了要制備第二組及第三組的氣喘模式小鼠，在飼養開始第28天及第48天時分別以卵蛋白(OVA)和佐劑氫氧化鋁混合給予該二組小鼠進行腹腔注射，誘發小鼠產生過敏反應。并于飼養開始第59天至第61天以濃度2mg/mL的卵蛋白滴注在各該組小鼠鼻腔內，使卵蛋白流入各該小鼠呼吸道，完成小鼠氣喘模式的誘導。
[0034]將該三組小鼠分別以呼吸道阻抗儀(BUXCO MAX II)進行呼吸道阻力測定，用以測量各該組小鼠致敏后不同時間下的呼吸道阻力參數值，結果如圖4所示。
[0035]由圖4可知，第一組小鼠為正常小鼠，其呼吸道阻力參數值維持一平穩狀態；而第二組小鼠為氣喘模式小鼠，其呼吸道阻力參數值在致敏一小時后達到高點，而后在各該時間點為緩慢地降低；第三組為喂食乳酸戊糖片球菌PP31的氣喘模式小鼠，雖呼吸道阻力參數值在鼻腔點滴卵蛋白后一小時達到高點，但是而后快速降低，趨至平緩。因此，由本實施例的結果顯示本發明所提供的乳酸戊糖片球菌PP31確有減緩因卵蛋白所引起的呼吸道高過敏性的功效。
[0036]通過上述實施例可知，本發明所提供的乳酸戊糖片球菌PP31可有效地調控細胞激素的變化，用以有效預防或治療過敏性疾病，如氣喘及過敏性鼻炎，因此，乳酸戊糖片球菌PP31可應用作為一醫藥組合物的有效成份，可以口服、涂抹或是噴霧形式投予給患者；也可配合食品成份而作為一用以減緩過敏性的食品，用以減緩過敏性疾病的癥狀或是預防過敏性疾病。
[0037]以上僅是通過各該實施例詳細說明本發明，熟知該【技術領域】者于不脫離本發明精神下，而對于說明書中的實施例所做的任何簡單修改或是變化，均應在本案申請專利保護范圍之內。
【權利要求】
1.一種乳酸戍糖片球菌(Pediococcus pentosaceus) PP31,保藏在中國普通微生物菌種保藏管理中心，地址為北京市朝陽區北辰西路I號院3號，保藏編號CGMCC7050，保藏日期為2012年12月28日。
2.一種用于治療過敏性疾病的醫藥組合物，其特征在于，該醫藥組合物至少包含有一如權利要求1所述的乳酸戊糖片球菌PP31為有效成份及一醫藥上可接受的載體和/或賦形劑。
3.根據權利要求2所述的用于治療過敏性疾病的醫藥組合物，其特征在于，該過敏性疾病選自于氣喘及過敏性鼻炎。
4.一種用以減緩過敏性疾病的食品，其特征在于，該食品至少包含有一如權利要求1所述的乳酸戊糖片球菌PP31及一食物成份。
5.根據權利要求4所述的用以減緩過敏性疾病的食品，其特征在于，該過敏性疾病選自于氣喘及過敏性鼻 炎。
【文檔編號】C12R1/01GK103966117SQ201310042703
【公開日】2014年8月6日 申請日期:2013年2月4日 優先權日:2013年2月4日
【發明者】蔡政志, 呂淑芬, 謝長奇, 陳睿成, 陳鈺馨 申請人:弘光科技大學