專利名稱：實時熒光定量檢測厭氧環境中地桿菌屬微生物豐度的引物和探針的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種實時熒光定量檢測環境微生物地桿菌屬豐度的引物和探針，特別是用于地桿菌屬的實時熒光定量PCR檢測，屬于環境生物技術領域。
背景技術：
地桿菌屬(Geobacter)是一類特殊的嚴格厭氧呼吸的環境微生物，是人類發現的第一種能夠利用氧化鐵或其他金屬的氧化物作電子受體進行無氧呼呼以獲取能量的微生物。地桿菌在地層深處、地下水層、淤泥層等大量存在，甚至是優勢菌種。因此，對于清除厭氧環境中有機污染(如原油、多環芳烴等)以及放射性金屬(如鈾等)具有重要意義，而且在無氧呼吸的過程中產生電流，因此也是微生物燃料電池研究的熱門菌種之一。地桿菌之所以能利用金屬氧化物進行無氧呼吸，與其能產生菌毛(pilus)促進菌體與金屬氧化物之間的電子傳遞有密切聯系，因此也稱納米天線。在地下水層或水體沉積物污染原位生物修復或實驗室模擬研究中，地桿菌豐度是監測修復效果的重要依據之一。由于地桿菌多數菌種不可用常規方法培養，研究受到局限。但采用實時熒光定量PCR(q-PCR)技術，則有效地克服了培養上的障礙，成為一種高效、精確監測厭氧環境中地桿菌豐度的新技術。實時熒光定量PCR成敗的關鍵技術之一是找到定量群體存在2個或3個以上保守區域的基因，根據保守區域設計出引物，結合擴增體系和程序的優化，方能取得良好的效
果O盡管其他屬菌種也有菌毛，但多不具備電子穿梭的功能，因此可以推測地桿菌與菌毛相關的基因可能具有特異性，滿足以上要求。針對文獻中對該菌的定量測定中的引物和探針序列已經不能覆蓋GeneBank中的地桿菌屬新出現的菌種和菌株的序列這一問題，本發明提供了對地桿菌屬進行定量PCR檢測所需的引物對和分子信標探針序列，有助于有效進行環境中地桿菌的定量和監測。

發明內容
本發明提供的一種實時熒光定量檢測環境微生物地桿菌屬豐度的引物和探針，其特征是:引物1:F4525' -ACCGGACCTGCAACATCATCACC-3'引物2 :R10575' -CATCGACGACAAGGAGAAG-3'分子信標探針:5，-FAM-GGAGGTGGAAGAGATGCC-MGB-3，檢測過程中PCR擴增反應體系如下表所示(20 μ L體系，單位μ L):
權利要求
1.一種實時熒光定量檢測環境微生物地桿菌屬豐度的引物和探針，其特征是:
全文摘要
本發明涉及一種實時熒光定量檢測環境微生物地桿菌屬豐度的引物和探針，用于地桿菌屬的實時熒光定量PCR檢測，屬于環境生物技術領域。其特征是引物1為ACCGGACCTGCAACATCATCACC，引物2為CATCGACGACAAGGAGAAG，分子信標探針FAM-GGAGGTGGAAGAGATGCC-MGB；擴增體系(uL)為2×熒光定量PCR反應預混液10，引物11，引物21，探針1，染料0.5，DNA模板1；反應條件為95℃預處理1min，進行45個循環反應，每個循環反應包括95℃1min，60.5℃℃45s，于53℃時測定熒光值。擴增出的目標片段長度為624bp。
文檔編號C12Q1/68GK103103282SQ201310043590
公開日2013年5月15日 申請日期2013年1月27日 優先權日2013年1月27日
發明者張祥勝, 范紅香 申請人:鹽城師范學院