一種膠凍樣類芽孢桿菌工業(yè)化保護(hù)劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種適用于膠凍樣類芽孢桿菌常溫保藏保護(hù)劑，該保護(hù)劑由1%?3%的海藻糖、2%?3%的VC、10%?30%的甘油以及75%?85%的膠凍樣類芽孢桿菌發(fā)酵液組成，以上百分比均為質(zhì)量百分比。本發(fā)明的有益效果為：本產(chǎn)品組分簡單，成本低廉，且適用于常溫條件下保藏工業(yè)化生產(chǎn)的膠凍樣類芽孢桿菌發(fā)酵液，延長菌種的保藏時(shí)間和保藏活性，另外操作方法簡單、合理，便于大規(guī)模的生產(chǎn)，具有實(shí)用性和先進(jìn)性特點(diǎn)。
【專利說明】一種膠凍樣類芽孢桿菌工業(yè)化保護(hù)劑

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及芽孢桿菌發(fā)酵領(lǐng)域，尤其涉及一種適用于膠凍樣類芽孢桿菌發(fā)酵液常 溫保藏的保護(hù)劑。

【背景技術(shù)】
[0002] 膠凍樣類芽孢桿菌的保藏方法常用的有斜面法、礦油保藏法、冷凍干燥法和液氮 保藏法等。大多數(shù)的保藏方法均需要添加菌種保護(hù)劑來提高菌種的保藏效果，目前針對菌 種保藏保護(hù)劑的研究較多，但是大多數(shù)保藏方法均需提供低溫、干燥等保藏條件，不適用于 菌種發(fā)酵生產(chǎn)企業(yè)發(fā)酵液的保藏。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是提供一種適用于膠凍樣類芽孢桿菌發(fā)酵液常溫保藏的保護(hù)劑，以 克服目前現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足。
[0004] 本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：
[0005] -種適用于膠凍樣類芽孢桿菌常溫保藏保護(hù)劑，該保護(hù)劑由1%?3%的海藻糖、 2 %?3 %的VC、10 %?30 %的甘油以及75 %?85 %的膠凍樣類芽孢桿菌發(fā)酵液組成，以上 百分比均為質(zhì)量百分比。
[0006] 進(jìn)一步的，所述該保護(hù)劑的制備方法包括以下步驟：
[0007] (1)制備膠凍樣類芽孢桿菌發(fā)酵液，所述膠凍樣類芽孢桿菌發(fā)酵液中有效活菌數(shù) 為30?60億/mL ;
[0008] (2)制備滅菌海藻糖：稱取海藻糖500克，加入1000克去離子水，配置濃度為50 % 的海藻糖母液，在常溫、壓力為I. OMPa的條件下，母液經(jīng)加壓過濾板框設(shè)備，通過0. 22 μ m 的過濾膜過濾滅菌后得到滅菌海藻糖；
[0009] (3)制備滅菌甘油：用高溫蒸汽滅菌鍋將純甘油在121 °C、0. IlMPa的條件下，滅菌 30分鐘后得到滅菌甘油；以及
[0010] (4)分別取質(zhì)量百分比為1 %?3%的海藻糖、2%?3%的VC、10%?30%的甘油 以及75%?85%的膠凍樣類芽孢桿菌發(fā)酵液均勻混合，然后放置陰涼處干燥保存。
[0011] 本發(fā)明的有益效果為：本產(chǎn)品組分簡單，成本低廉，且適用于常溫條件下保藏工業(yè) 化生產(chǎn)的膠凍樣類芽孢桿菌發(fā)酵液，延長菌種的保藏時(shí)間和保藏活性，另外操作方法簡單、 合理，便于大規(guī)模的生產(chǎn)，具有實(shí)用性和先進(jìn)性特點(diǎn)。

【具體實(shí)施方式】
[0012] 本發(fā)明實(shí)施例所述的一種適用于膠凍樣類芽孢桿菌常溫保藏保護(hù)劑，該保護(hù)劑由 1 %?3%的海藻糖、2%?3 %的VC、10%?30 %的甘油以及75 %?85%的膠凍樣類芽孢 桿菌發(fā)酵液組成，以上百分比均為質(zhì)量百分比。
[0013] 所述該保護(hù)劑的制備方法包括以下步驟：
[0014] (1)制備膠凍樣類芽孢桿菌發(fā)酵液，所述膠凍樣類芽孢桿菌發(fā)酵液中有效活菌數(shù) 為30?60億/mL ;
[0015] (2)制備滅菌海藻糖：稱取海藻糖500克，加入1000克去離子水，配置濃度為50 % 的海藻糖母液，在常溫、壓力為I. OMPa的條件下，母液經(jīng)加壓過濾板框設(shè)備，通過0. 22 μ m 的過濾膜過濾滅菌后得到滅菌海藻糖；
[0016] (3)制備滅菌甘油：用高溫蒸汽滅菌鍋將純甘油在121 °C、0. IlMPa的條件下，滅菌 30分鐘后得到滅菌甘油；以及
[0017] (4)分別取質(zhì)量百分比為1%?3%的海藻糖、2%?3%的VC、10%?30%的甘油 以及75%?85%的膠凍樣類芽孢桿菌發(fā)酵液均勻混合，然后放置陰涼處干燥保存。
[0018] 實(shí)施例1
[0019] (1)滅菌甘油制備：純甘油121 °C、0. IlMPa滅菌30分鐘；
[0020] ⑵滅菌海藻糖制備：稱取海藻糖500克，加去離子水1000克，配制濃度為50%的 海藻糖母液，母液經(jīng)I. OMPa壓力下過022 μ m過濾膜滅菌。
[0021] (3)膠凍樣類芽孢桿菌發(fā)酵液有效活菌數(shù)40億/mL，總計(jì)50kg，添加滅菌甘油 10kg，滅菌海藻糖母液3. 0kg，VcL 26kg，混合均勻，陰涼干燥保存，做3個(gè)重復(fù)處理。
[0022] 上述發(fā)酵液在常溫陰涼干燥保藏條件下于保藏3個(gè)月、6個(gè)月、9個(gè)月、12個(gè)月、18 個(gè)月每個(gè)重復(fù)搖勻取樣5mL，分別以無菌去離子水稀釋到相應(yīng)的平皿培養(yǎng)，測定其平均活菌 數(shù)如下：
[0023]

【權(quán)利要求】
1. 一種適用于膠凍樣類芽孢桿菌常溫保藏保護(hù)劑，其特征在于：該保護(hù)劑由1%?3% 的海藻糖、2%?3%的VC、10%?30%的甘油以及75%?85%的膠凍樣類芽孢桿菌發(fā)酵液 組成，以上百分比均為質(zhì)量百分比。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的適用于膠凍樣類芽孢桿菌常溫保藏保護(hù)劑，其特征在于，所 述該保護(hù)劑的制備方法包括以下步驟： (1) 制備膠凍樣類芽孢桿菌發(fā)酵液； (2) 制備滅菌海藻糖； (3) 制備滅菌甘油；以及 (4) 分別取質(zhì)量百分比為1 %?3 %的海藻糖、2 %?3 %的VC、10 %?30 %的甘油以及 75%?85%的膠凍樣類芽孢桿菌發(fā)酵液均勻混合，然后放置陰涼處干燥保存。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的適用于膠凍樣類芽孢桿菌常溫保藏保護(hù)劑，其特征在于，步 驟（1)中，所述膠凍樣類芽孢桿菌發(fā)酵液中有效活菌數(shù)為30?60億/mL。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的適用于膠凍樣類芽孢桿菌常溫保藏保護(hù)劑，其特征在于，步 驟（2)中，所述滅菌海藻糖的制備包括：稱取海藻糖500克，加入1000克去離子水，配置濃 度為50%的海藻糖母液，在常溫、壓力為I. OMPa的條件下，母液經(jīng)加壓過濾板框設(shè)備，通過 0. 22 μ m的過濾膜過濾滅菌后得到滅菌海藻糖。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的適用于膠凍樣類芽孢桿菌常溫保藏保護(hù)劑，其特征在于，步 驟（3)中，所述滅菌甘油的制備包括：用高溫蒸汽滅菌鍋將純甘油在121°C、0. IlMPa的條件 下，滅菌30分鐘后得到滅菌甘油。
【文檔編號】C12N1/04GK104212716SQ201310207430
【公開日】2014年12月17日 申請日期:2013年5月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年5月30日
【發(fā)明者】武鳳霞, 鄧祖科, 吳長春 申請人:北京世紀(jì)阿姆斯生物技術(shù)股份有限公司, 北京世紀(jì)阿姆斯農(nóng)業(yè)科技有限公司