工業規模化發酵產黃孢原毛平革菌厚垣孢子及其制劑的方法及其制劑的制作方法
【專利摘要】本發明提供了一種制備黃孢原毛平革菌厚垣孢子的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：（1）將黃孢原毛平革菌的發酵種子接種到發酵培養基中；所述發酵種子為黃孢原毛平革菌的分生孢子和/或菌絲體；（2）將接種了所述黃孢原毛平革菌的發酵種子的發酵培養基進行液體深層發酵，以產生黃孢原毛平革菌的厚垣孢子。另外還提供了一種制備黃孢原毛平革菌厚垣孢子制劑的方法及其制劑。通過上述技術方案，可簡單的、大規模生產黃孢原毛平革菌的厚垣孢子。
【專利說明】工業規模化發酵產黃孢原毛平革菌厚垣孢子及其制劑的方法及其制劑
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種制備黃孢原毛平革菌的厚垣孢子和制備黃孢原毛平革菌的厚垣孢子制劑的方法，以及利用該方法制備的黃孢原毛平革菌的厚垣孢子制劑。
【背景技術】
[0002]黃孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)具有很強且廣譜的降解異生物質的能力。自20世紀80年代初《Science》首次報道了 P.chrysosporium的降解作用，便引起了環境界的廣泛關注，開展了對白腐真菌生物學特性、理化特性、應用等方面的大量研究，成為污水處理、廢氣污染處理和土壤生物修復的有用工具。
[0003]P.chrysosporium在其生長周期內可以產生三種繁殖體,包括菌絲體、厚垣孢子和分生孢子。目前P.chrysosporium的發酵生產主要采用液體發酵菌絲生產漆酶、過氧化物酶等代謝產物，或者采用固體培養生產分生孢子制備分生孢子制劑。由于其菌絲或分生孢子不易保存，在保存和運輸過程中，菌劑中有效微生物大量死亡或活性降低，導致產品的效力減小或功能下降，限制了 P.chrysosporium菌劑的大規模生產應用。厚垣孢子是真菌產生的一種細胞壁加厚的具有抵抗能力的孢子，能抗御不良外界環境，如高溫、低溫、紫外線、pH值和其他化學物質,產品的貨架期長,易于保存。因此開發P.chrysosporium的厚垣孢子制劑，對于P.chrysosporium的商品化開發利用具有重要意義。
[0004]CN102140425A公開了一種黃孢原毛平革菌厚垣孢子的培養方法，但該方法采用搖瓶培養發酵P.chrysosporium,菌絲團需要冷凍后研磨處理制備菌劑,該方法的發酵培養僅為搖瓶水平，從搖瓶到大罐的不斷放大生產過程中還有許多技術難題，且該方法操作步驟復雜，與大規模生產的技術要求有一定的距離。
[0005]因此，亟需開發一種操作簡單且適用于發酵罐大規模生產黃孢原毛平革菌厚垣`孢子的方法。

【發明內容】

[0006]本發明的目的是為了克服現有技術制備黃孢原毛平革菌的厚垣孢子操作步驟復雜、不適于大規模生產的缺陷，提供一種操作方法簡單且可大規模生產黃孢原毛平革菌的厚垣孢子的方法，一種制備黃孢原毛平革菌的厚垣孢子制劑的方法，以及利用該方法得到的黃孢原毛平革菌的厚垣孢子制劑。
[0007]為了實現上述目的，一方面，本發明提供了一種制備黃孢原毛平革菌的厚垣孢子的方法，其中，該方法包括如下步驟:
[0008](I)將黃孢原毛平革菌的發酵種子接種到發酵培養基中；所述發酵種子為黃孢原毛平革菌的分生孢子和/或菌絲體；
[0009](2)將接種了所述黃孢原毛平革菌的發酵種子的培養基進行液體深層發酵，以產生黃孢原毛平革菌的厚垣孢子；[0010]其中，步驟(1)中，所述發酵培養基含有0.5-3.5重量％的碳水化合物、0.1-2重量％的酵母粉、2-8重量％的玉米漿、0.05-1重量％的CaC03、0.005-0.05重量％的ZnS04、
0.005-0.05重量%的MgS04、0.01-0.05重量%的MnSO4和余量的水；
[0011]步驟(2)中，所述液體深層發酵的條件包括:發酵的溫度為25_31°C，通氣量為1:0.5-1體積:(體積.分鐘)，攪拌速度為150-200rpm，發酵的時間為100-120小時。
[0012]第二方面，本發明提供了一種制備黃孢原毛平革菌的厚垣孢子制劑的方法，其中，該方法包括:
[0013](I)按照本發明提供的方法制備含有黃孢原毛平革菌的厚垣孢子的發酵液；
[0014](2)將所述含有黃孢原毛平革菌的厚垣孢子的發酵液與助濾劑混合，得到混合后的物料；
[0015](3)將步驟(2)中所述的混合后的物料進行固液分離，得到含有黃孢原毛平革菌的厚垣孢子制劑。
[0016]第三方面，本發明提供了如上所述的方法制備的黃孢原毛平革菌的厚垣孢子制劑。
[0017]通過上述技術方案，實現了操作方法簡單且可大規模生產黃孢原毛平革菌的厚垣孢子的目的。
[0018]本發明的其他特 征和優點將在隨后的【具體實施方式】部分予以詳細說明。
【具體實施方式】
[0019]以下對本發明的【具體實施方式】進行詳細說明。應當理解的是，此處所描述的【具體實施方式】僅用于說明和解釋本發明，并不用于限制本發明。
[0020]第一方面，本發明提供了一種制備黃孢原毛平革菌的厚垣孢子的方法，其中，該方法包括如下步驟:
[0021](I)將黃孢原毛平革菌的發酵種子接種到發酵培養基中；所述發酵種子為黃孢原毛平革菌的分生孢子和/或菌絲體；
[0022](2)將接種了所述黃孢原毛平革菌的發酵種子的培養基進行液體深層發酵，以產生黃孢原毛平革菌的厚垣孢子；
[0023]其中，步驟(1)中，所述發酵培養基含有0.5-3.5重量％的碳水化合物、0.1-2重量％的酵母粉、2-8重量％的玉米漿、0.05-1重量％的CaC03、0.005-0.05重量％的ZnS04、
0.005-0.05重量%的MgS04、0.01-0.05重量%的MnSO4和余量的水；
[0024]步驟(2)中，所述液體深層發酵的條件包括:發酵的溫度為25_31°C，通氣量為1:0.5-1體積:(體積.分鐘)，攪拌速度為150-200rpm，發酵的時間為100-120小時。
[0025]優選的，步驟(1)中，所述發酵培養基含有1-1.5重量％的碳水化合物、0.5-1重量%的酵母粉、3-5重量%的玉米漿、0.1-0.5重量%的CaC03、0.01-0.02重量%的ZnSO4'
0.01-0.03 重量 ％ 的 MgSO4 和 0.02-0.04 重量 ％ 的 MnS04。
[0026]本發明中，步驟(1)中所述的發酵培養基中含有的碳水化合物為本領域常規的各種可以為培養基提供碳源的碳水化合物，優選的，所述碳水化合物為淀粉、葡萄糖和蔗糖中的一種或多種；所述發酵培養基的PH值為培養基的自然pH值，優選為6.5-6.8。
[0027]本發明中，所述黃孢原毛平革菌的來源沒有特別的限制，例如，可以在工業微生物菌種保藏管理中心通過商購獲得，例如，編號可以為CICC40299，也可以為CICC40719。
[0028]根據本發明，所述黃孢原毛平革菌的發酵種子的接種量可以為常規的接種量，優選以每升所述發酵培養基為基準，所述發酵種子的接種量為5-10體積％。
[0029]其中，步驟(2)中，所述液體深層發酵的操作可以按照常規的液體深層發酵方法進行，優選情況下，所述液體深層發酵的操作包括如下步驟:(I)接種步驟，在所述接種步驟中，將如上所述的黃孢原毛平革菌的分生孢子和/或菌絲體接種到液體培養基中；(2)發酵步驟，在所述發酵步驟中，將接種了黃孢原毛平革菌分生孢子和/或菌絲體的液體培養基在發酵罐中進行發酵。
[0030]其中，所述黃孢原毛平革菌的分生孢子和/或菌絲體可以使用常規的斜面培養法獲得，例如，可以將如上所述的黃孢原毛平革菌的菌絲體接種在PDA培養基(含有馬鈴薯180-220g/L,葡萄糖 18-22g/L，瓊脂 10_25g/L，pH 值 6.8-7.0 )上，在 29-31V 下培養 5-7 天，即可得到大量附著在培養基上的分生孢子和/或菌絲體，可以將斜面培養結束的培養基挖塊以得到用于接種的分生孢子和/或菌絲體。其中，也可以將斜面培養結束的培養基挖塊并接種于液體培養基中擴大培養，得到擴大培養的菌絲體，將擴大培養的菌絲體作為用于發酵生產的接種體。
[0031]所述擴大培養的方法為本領域技術人員所公知，例如，可以將斜面培養結束的培養基挖塊并接種于搖瓶培養基(含有淀粉5-15g/L、葡萄糖5-15g/L、酵母粉3-7g/L、CaC033-5g/L，pH值 6.5-6.8)中，在溫度為 29_35°C、轉速為 150_250rpm 的條件下培養 20-30小時，得到大量的菌絲體；并將所述得到的菌絲體接種于種子罐培養基(含有淀粉5-15g/L、葡萄糖5-15g/L、酵母粉3-7g/L、CaC033_5g/L，pH值自然)中，在溫度為29_31°C、轉速為150-200rpm的條件下培養20-30小時，得到用于發酵培養基接種的大量的菌絲體。
`[0032]其中，所述發酵的條件可以為常規的液體深層發酵條件，例如，發酵的溫度可以為25-31 °C，通氣量可以為1:0.5-1體積:(體積?分鐘)，攪拌速度可以為150-200rpm。盡管在這樣的發酵條件下，即可實現大規模生產黃孢原毛平革菌的厚垣孢子的目的，但為了進一步提高黃孢原毛平革菌厚垣孢子的產量，優選情況下，發酵第0-40小時的溫度為29-31°C，發酵第40小時以后的溫度為27-29°C ;發酵第0-10小時的通氣量為1:0.5-0.8體積:(體積.分鐘)，發酵第10-40小時的通氣量為1:0.8-1體積:(體積.分鐘)，發酵第40小時以后的通氣量為1:0.5-0.8體積:(體積.分鐘)；攪拌速度為175-185rpm。發酵周期為100-120小時，此時，80%以上的菌絲體都形成了厚垣孢子。
[0033]術語“通氣量”一般以通氣比來表示，通常以每分鐘內通過單位體積培養液的空氣體積比來表示(V / V ^mirT1),例如通氣比為1:0.1_1，簡稱通氣量為0.1_1體積:(體積?分鐘)。
[0034]第二方面，本發明提供了一種制備黃孢原毛平革菌的厚垣孢子制劑的方法，其中，該方法包括:
[0035](I)按照本發明提供的方法制備含有黃孢原毛平革菌的厚垣孢子的發酵液；
[0036](2)將所述含有黃孢原毛平革菌的厚垣孢子的發酵液與助濾劑混合，得到混合后的物料；
[0037](3)將步驟(2)中所述的混合后的物料進行固液分離，得到含有黃孢原毛平革菌的厚垣孢子制劑。[0038]所述助濾劑的種類和加入量沒有特別的限制，只要可促進厚垣孢子的分散和發酵液的固液分離，并且對厚垣孢子沒有毒害作用即可。優選地，所述助濾劑為硅藻土和/或輕質碳酸鈣，以每升發酵液為基準，所述助濾劑的加入量為3-5重量％。其中，所述“助濾劑”是一種為防止濾渣堆積過于密實，使過濾順利進行，而使用的細碎程度不同的不溶性惰性材料。
[0039]其中，所述固液分離的方法為本領域技術人員所公知，例如，可以使用板框壓濾過濾或離心的方法得到含有黃孢原毛平革菌的厚垣孢子制劑。
[0040]根據本發明，為了便于含有黃孢原毛平革菌的厚垣孢子制劑的保存，優選情況下，該方法還包括將固液分離得到的固體濾餅或離心沉淀物進行干燥并粉碎得到含有黃孢原毛平革菌的厚垣孢子的干制劑。
[0041]其中，所述干燥的條件包括:干燥的溫度可以為60-80°C ;干燥的時間為可以為16-20小時。
[0042]第三方面，本發明提供了如上所述的方法制備的黃孢原毛平革菌的厚垣孢子制劑。
[0043] 以下將通過實施例對本發明進行詳細描述。
[0044]以下實施例和對比例中，通過血球計數板計數的方法計算產孢量。
[0045]黃孢原毛平革菌購自工業微生物菌種保藏管理中心，編號為CICC40299。
[0046]制備例I
[0047]取削皮后的馬鈴薯20g煮沸20分鐘取汁，將汁與2g葡萄糖、1.5g瓊脂和水配成100ml，裝瓶滅菌后冷卻得到PDA培養基。
[0048]將5g淀粉、5g葡萄糖、2.5g酵母粉、0.15g CaCO3和水配制成500mL，裝瓶(每瓶IOOmL)滅菌后冷卻得到搖瓶培養基。
[0049]將5kg淀粉、5kg葡萄糖、2.5kg酵母粉、1.5kg CaCO3和水配制成500L,裝入種子罐中滅菌后得到種子罐培養基。
[0050]制備例2
[0051]將黃孢原毛平革菌接種于制備例I中的PDA培養基上，30°C下培養5天；將接種并培養后的PDA培養基挖塊接種于制備例I中的搖瓶液體培養基中(100ml液體培養基接種PDA培養基生長的菌苔1cm2)，在30°C和轉速200rpm的條件下，培養24小時，作為發酵種子罐接種體；將培養好的搖瓶接種體接入滅菌后的種子罐培養基中(接種量0.5% (v/v))，在30°C和轉速180rmp的條件下，培養24小時，成為發酵種子。
[0052]實施例1
[0053]本實施例用于說明本發明提供的制備黃孢原毛平革菌的厚垣孢子的方法以及制備黃孢原毛平革菌的厚垣孢子制劑的方法。
[0054](I)發酵培養基的制備:將以每升發酵液為基準，淀粉含量為1.5重量％、酵母粉含量為0.5重量％、玉米漿含量為4重量％、CaCO3含量為0.3重量％、ZnSO4的含量為0.02重量％、MgSO4的含量為0.025重量％和MnSO4的含量為0.03重量％的6500升培養基進行滅菌得到發酵培養基，自然PH值。
[0055](2)將制備例2中得到的發酵種子，按5% (體積/體積)的接種量接種于本實施例步驟(1)中的發酵培養基中。發酵罐中的發酵條件為:發酵第0-40小時的發酵溫度為30°C;發酵第40小時以后的發酵溫度為28°C;發酵第0-10小時的通氣量為1:0.6體積:(體積.分鐘)；發酵第10-40小時的通氣量為1:1體積:(體積.分鐘)，發酵第40小時以后的通氣量為1:0.6體積:(體積.分鐘)；攪拌速度為180rpm。
[0056](3)發酵第110小時時，90%以上菌絲都形成厚垣孢子，發酵液變稀，加入325kg硅藻土，攪拌混勻，將此時的發酵液通過板框壓濾，收集濾餅，將得到濾餅干燥及粉碎得到黃孢原毛平革菌厚垣孢子制劑。其中，所述干燥的溫度為60°C，干燥的時間為20小時。產孢量為5.6 X IO7個厚垣孢子/mL。
[0057]實施例2
[0058]本實施例用于說明本發明提供的制備黃孢原毛平革菌的厚垣孢子的方法以及制備黃孢原毛平革菌的厚垣孢子制劑的方法。
[0059](I)發酵培養基的制備:將以每升發酵液為基準，葡萄糖含量為I重量％、酵母粉含量為I重量％、玉米漿含量為5重量％、CaCO3含量為0.1重量％、ZnSO4的含量為0.01重量％、MgS04的含量為0.03重量％和MnSO4的含量為0.04重量％的6500升培養基進行滅菌得到發酵培養基。
[0060](2)將制備例2中得到的發酵種子，按7% (體積/體積)的接種量接種于本實施例步驟(1)中的發酵培養基中。發酵罐中的發酵條件為:發酵第0-40小時的發酵溫度為31°C;發酵第40小時以后的發酵溫度為29°C;發酵第0-10小時的通氣量為1: 0.8體積:(體積.分鐘)；發酵第10-40小時的通氣量為1:0.9體積:(體積.分鐘)，發酵第40小時以后的通氣量為1:0.5體積:(體積.分鐘)；攪拌速度為185rpm。
[0061](3)發酵第110小時時，90%以上菌絲都形成厚垣孢子，發酵液變稀，加入325kg輕質碳酸鈣，攪拌混勻，將此時的發酵液通過板框壓濾收集厚垣孢子，收集濾餅，并干燥及粉碎即為黃孢原毛平革菌厚垣孢子制劑。其中，所述干燥的溫度為65°C，干燥的時間為19小時。產孢量為3.2X IO7個厚垣孢子/mL。
[0062]實施例3
[0063] 本實施例用于說明本發明提供的制備黃孢原毛平革菌的厚垣孢子的方法以及制備黃孢原毛平革菌的厚垣孢子制劑的方法。
[0064](I)發酵培養基的制備:將以每升發酵液為基準，蔗糖含量為1.3重量％、酵母粉含量為0.8重量％、玉米漿含量為3重量％、CaCO3含量為0.5重量％、ZnSO4的含量為0.015重量％、MgS04的含量為0.01重量％和MnSO4的含量為0.02重量％的6500升培養基進行滅菌得到發酵培養基。
[0065](2)將制備例2中得到的發酵種子，按10% (體積/體積)的接種量接種于本實施例步驟(1)中的發酵培養基中。發酵罐中的發酵條件為:發酵第0-40小時的發酵溫度為29°C;發酵第40小時以后的發酵溫度為27°C;發酵第0-10小時的通氣量為1: 0.5體積:(體積.分鐘)；發酵第10-40小時的通氣量為1:0.8體積:(體積.分鐘)，發酵第40小時以后的通氣量為1:0.8體積:(體積.分鐘)；攪拌速度為175rpm。
[0066](3)發酵第110小時時，90%以上菌絲都形成厚垣孢子，發酵液變稀，加入325kg輕質碳酸鈣，攪拌混勻，將此時的發酵液通過板框壓濾收集厚垣孢子，收集濾餅，并干燥及粉碎即為黃孢原毛平革菌厚垣孢子制劑。其中，所述干燥的溫度為80°C，干燥的時間為16小時。產孢量為2.1 X IO7個厚垣孢子/mL。[0067]實施例4
[0068]本實施例用于說明本發明提供的制備黃孢原毛平革菌的厚垣孢子的方法以及制備黃孢原毛平革菌的厚垣孢子制劑的方法。
[0069]按照實施例1的方法進行黃孢原毛平革菌的厚垣孢子的制備以及黃孢原毛平革菌的厚垣孢子制劑的制備，不同的是，進行黃孢原毛平革菌的厚垣孢子制備的發酵培養基的成分為以每升發酵液為基準，淀粉含量為3.5重量％、酵母粉含量為0.1重量％、玉米漿含量為8重量％、CaCO3含量為0.05重量％、ZnSO4的含量為0.05重量％、MgS04的含量為0.005重量％和MnSO4的含量為0.05重量％。產孢量為7.1 X IO6個厚垣孢子/mL。
[0070]實施例5
[0071]本實施例用于說明本發明提供的制備黃孢原毛平革菌的厚垣孢子的方法以及制備黃孢原毛平革菌的厚垣孢子制劑的方法。
[0072]按照實施例1的方法進行黃孢原毛平革菌的厚垣孢子的制備以及黃孢原毛平革菌的厚垣孢子制劑的制備，不同的是，進行黃孢原毛平革菌的厚垣孢子制備的發酵培養基的成分為，以每升發酵液為基準，淀粉含量為0.5重量％、酵母粉含量為2重量％、玉米漿含量為2重量％、CaCO3含量為I重量％、ZnSO4的含量為0.005重量％、MgS04的含量為0.05重量％和MnSO4的含量為0.01重量％。產孢量為6.6 X IO6個厚垣孢子/mL。
[0073]實施例6
[0074]本實施例用于說明本發明提供的發酵培養基、制備黃孢原毛平革菌的厚垣孢子的方法以及制備黃孢原毛平革菌 的厚垣孢子制劑的方法。
[0075]按照實施例1的方法進行黃孢原毛平革菌的厚垣孢子的制備以及黃孢原毛平革菌的厚垣孢子制劑的制備，不同的是，發酵的過程中發酵第0-40小時的發酵溫度為31°C ；發酵第40小時以后的發酵溫度為25°C。產孢量為9.2X IO6個厚垣孢子/mL。
[0076]實施例7
[0077]本實施例用于說明本發明提供的制備黃孢原毛平革菌的厚垣孢子的方法以及制備黃孢原毛平革菌的厚垣孢子制劑的方法。
[0078]按照實施例1的方法進行黃孢原毛平革菌的厚垣孢子的制備以及黃孢原毛平革菌的厚垣孢子制劑的制備，不同的是，發酵的整個過程中發酵的溫度為30°C。產孢量為
1.2 X IO7個厚垣孢子/mL。
[0079]對比例I
[0080]本實施例用于說明現有技術提供的制備黃孢原毛平革菌的厚垣孢子的方法以及制備黃孢原毛平革菌的厚垣孢子制劑的方法
[0081]按照實施例7的方法進行黃孢原毛平革菌的厚垣孢子的制備以及黃孢原毛平革菌的厚垣孢子制劑的制備，不同的是，發酵的整個過程中發酵的溫度為33°C。產孢量為
2.3 X IO6個厚垣孢子/mL。
[0082]通過上述采用本發明技術方案的實施例1-7與采用現有技術提供的技術方案的對比例I相比，采用本發明的發酵培養基，發酵工藝，產孢量可大大提高。將實施例1-3與實施例4和5進行比較可以看出，當發酵培養基中各物質的含量在本發明優選的范圍內時，其產孢量較高。將實施例1-3與實施例6和7進行比較可以看出，當發酵條件在本發明優選的范圍內時，其產孢量較高。因此，采用本發明的方法可大規模的生產黃孢原平革菌的厚垣孢子；且發酵結束后，制備黃孢原平革菌的厚垣孢子制劑的操作方案簡單。
[0083]以上詳細描述了本發明的優選實施方式，但是，本發明并不限于上述實施方式中的具體細節，在本發明的技術構思范圍內，可以對本發明的技術方案進行多種簡單變型，這些簡單變型均屬于本發明的保護范圍。
[0084]另外需要說明的是，在上述【具體實施方式】中所描述的各個具體技術特征，在不矛盾的情況下，可以通過任何合適的方式進行組合。為了避免不必要的重復，本發明對各種可能的組合方式不再另行說明。 [0085]此外，本發明的各種不同的實施方式之間也可以進行任意組合，只要其不違背本發明的思想，其同樣應當視為本發明所公開的內容。
【權利要求】
1.一種制備黃孢原毛平革菌厚垣孢子的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟: (1)將黃孢原毛平革菌的發酵種子接種到發酵培養基中；所述發酵種子為黃孢原毛平革菌的分生孢子和/或菌絲體； (2)將接種了所述黃孢原毛平革菌的發酵種子的發酵培養基進行液體深層發酵，以產生黃孢原毛平革菌的厚垣孢子； 其中， 步驟(1)中，所述發酵培養基含有0.5-3.5重量％的碳水化合物、0.1-2重量％的酵母粉、2-8重量％的玉米漿、0.05-1重量％的CaC03、0.005-0.05重量％的ZnS04、0.005-0.05重量%的MgS04、0.01-0.05重量%的MnSO4和余量的水； 步驟(2)中，所述液體深層發酵的條件包括:發酵的溫度為25-31°C，通氣量為1:0.5-1體積:(體積.分鐘)，攪拌速度為150-200rpm，發酵的時間為100-120小時。
2.根據權利要求1所述的方法，其中，步驟(1)中，所述發酵培養基含有1-1.5重量％的碳水化合物、0.5-1重量％的酵母粉、3-5重量％的玉米漿、0.1-0.5重量％的CaC03、0.01-0.02 重量 ％ 的 ZnS04、0.01-0.03 重量 ％ 的 MgSO4 和 0.02-0.04 重量 ％ 的 MnSO4。
3.根據權利要求1或2所述的方法，其中，步驟(1)中，所述碳水化合物為淀粉、葡萄糖和蔗糖中的一種或多種。
4.根據權利要求1所述的方法，其中，步驟(2)中，所述液體深層發酵的條件包括:發酵第0-40小時的溫度為29-31°C，發酵第40小時以后的溫度為27-29°C ;發酵第0_10小時的通氣量為1:0.5-0.8體積:(體積.分鐘)，發酵第10-40小時的通氣量為1:0.8-1體積:(體積?分鐘)，發酵第40小時以后的通氣量為1:0.5-0.8體積:(體積?分鐘)；攪拌速度為 175-185rpm。
5.一種制備黃孢原毛平革菌的厚垣孢子制劑的方法，其特征在于，該方法包括: (1)按照權利要求1-4中任意一項所述的方法制備含有黃孢原毛平革菌的厚垣孢子的發酵液； (2)將所述含有黃孢原毛平革菌的厚垣孢子的發酵液與助濾劑混合，得到混合后的物料； (3)將步驟(2)中所述的混合后的物料進行固液分離，得到含有黃孢原毛平革菌的厚垣孢子制劑。
6.根據權利要求5所述的方法，其中，相對于每重量份的所述含有黃孢原毛平革菌的厚垣孢子的發酵液，助濾劑的加入量為3-5重量％。
7.根據權利要求5或6所述的方法，其中，所述助濾劑為硅藻土和/或輕質碳酸鈣。
8.由權利要求5-7中任意一項所述的方法制備的黃孢原毛平革菌的厚垣孢子制劑。
【文檔編號】C12N3/00GK103667169SQ201310228809
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年6月8日 優先權日:2013年6月8日
【發明者】李梅, 蔣細良 申請人:中國農業科學院植物保護研究所