Pcr試劑指示劑的制作方法
【專利摘要】一種PCR試劑指示劑，包括PCR試劑，及顏色指示劑。所述顏色指示劑可通過顏色來表示由所述PCR試劑進行DNA裂解后的裂解液的PH值。當前熒光定量PCR試劑都為無色透明試劑，當提取失敗時，只有通過加入內標進行檢測，本方法通過PH指示進行檢測，可發現導致PCR擴增失敗的樣本提取PH偏高偏低問題。加入PH指示劑，當PCR反應液PH超過范圍時，可以通過顏色的改變及早發現，節省失敗后重新提取的時間。
【專利說明】PCR試劑指示劑
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【技術領域】
[0002]本發明涉及PCR緩沖體系，尤其涉及含有特定PH顏色指示劑，用以判斷緩沖體系PH值是否超出要求。
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【背景技術】
[0004]由于現有熒光定量PCR試劑中，使用的一般都是TAQ等耐熱聚合酶，這一類聚合酶都有一個特點，需要提供一個緩沖體系，用以調整改善PH值最利于聚合酶的活性，完成PCR檢測。
[0005]在現有臨床快速檢測試劑盒中，許多還使用PEG沉淀表面活性劑裂解，但血液中PH值處于不正常或者其它問題造成最后核酸裂解液PH值偏高(>8.5)或者偏低(〈6.5)時，可能造成PCR檢測受到抑制，嚴重情況下，會造成PCR失敗。
[0006]然而，核酸裂解液PH值的不正常并不能在PCR檢測之前就通過簡單的方法獲知，而是要得到進行完PCR檢測之后才能得知，由此增加了檢測成本和檢測時間。
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【發明內容】
[0008]為了克服現有技術的不足，本發明旨在提供加入PH指示劑的PCR試劑。當PCR反應液PH超過范圍時，可以通過顏色的改變及早發現，節省失敗后重新提取的時間。
[0009]為了達到上述發明目的，本發明提供了一種PCR試劑指示劑，包括PCR試劑，及顏色指示劑。所述顏色指示劑可通過顏色來表示由所述PCR試劑進行DNA裂解后的裂解液的PH值。
[0010]一些實施例中，所述PCR試劑為熒光定量PCR試劑。
[0011]一些實施例中，所述熒光定量PCR試劑為Taq試劑。
[0012]一些實施例中，當所述核酸裂解液PH值大于預定值時，所述顏色指示劑顯色。
[0013]一些實施例中，當所述核酸裂解液PH值小于預定值時，所述顏色指示劑顯色。
[0014]一些實施例中，當所述核酸裂解液PH值不等于預定值時，所述顏色指示劑顯色。
[0015]一些實施例中，當所述核酸裂解液PH值大于第一預定值時，或小于第二預定值時，或不等于第三預定值時所述顏色指示劑顯色。
[0016]一些實施例中，所述顏色指示劑為中性紅指示劑，溴甲酚綠指示劑，或酚紅。
[0017]本發明的優點在于，當前熒光定量PCR試劑都為無色透明試劑，當提取失敗時，只有通過加入內標進行檢測，本方法通過PH指示進行檢測，可發現導致PCR擴增失敗的樣本提取PH偏高偏低問題。加入PH指示劑，當PCR反應液PH超過范圍時，可以通過顏色的改變及早發現，節省失敗后重新提取的時間。
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【具體實施方式】
[0019]下文將更詳細地描述本發明。然而，本發明可以以許多不同形式實現，并且不應解釋為受在此提出之實施例的限制。相反，提出這些實施例是為了達成充分及完整公開，并且使本【技術領域】的技術人員完全了解本發明的范圍。
[0020]應理解，本發明的描述為單個單元的部分可存在于兩個或兩個以上的物理上獨立但合作實現所描述之功能的實體。此外，描述為兩個或兩個以上物理上獨立的部分可集成入一個單獨的物理上實體以進行所描述的功能。
[0021]現通過詳細說明根據本發明的PCR試劑指示劑的較佳具體實施例，以對本發明做進一步闡述。
[0022]根據本發明的PCR試劑指示劑，包括PCR試劑和顏色指示劑。所述顏色指示劑可通過顏色來表示由所述PCR試劑進行DNA裂解后的裂解液的PH值。
[0023]本實施例中，所采用的PCR試劑為熒光定量PCR試劑。然而，本發明不限于此，可是可采用任何合適的PCR試劑。
[0024]對于熒光定量PCR試劑，本實施例采用Taq試劑。然而，本發明不限于此，可是可采用任何合適的熒光定量PCR試劑。
[0025]所述顏色指示劑可通過顏色來表示由所述PCR試劑進行DNA裂解后的裂解液的PH值。
[0026]具體地，當所述核酸裂解液PH值大于預定值時，所述顏色指示劑顯色。例如，加入這樣的顏色指示劑，當裂解液的PH值大于某一預定值時，該顏色指示劑顯色。
[0027]此外，還可當所述核酸裂解液PH值小于預定值時，所述顏色指示劑顯色。例如，力口入這樣的顏色指示劑，當裂解液的PH值小于某一預定值時，該顏色指示劑顯色。
[0028]此外，還可當所述核酸裂解液PH值不等于預定值時，所述顏色指示劑顯色。例如，加入這樣的顏色指示劑，當裂解液的PH值不等于某一預定值時，該顏色指示劑顯色。
[0029]再者，還可當所述核酸裂解液PH值大于第一預定值時，或小于第二預定值時，或不等于第三預定值時所述顏色指示劑顯色。例如，可加入多個顏色指示劑，其分別當所述核酸裂解液PH值大于第一預定值時，或小于第二預定值時，或不等于第三預定值時所述顏色指示劑顯色。
[0030]應理解，前述預定值可為一定范圍的預定值，而不需要為精確的數值。
[0031 ] 本實施例中，顏色指示劑為中性紅指示劑，溴甲酚綠指示劑，或酚紅。
[0032]現詳細描述根據本發明實施例的PCR試劑指示劑的實例。
[0033]實例一
在Τ0Υ0Β0市售的Taq試劑中單獨在PCR緩沖體系中加入中性紅指示劑:在6.4-8.0范圍變色中，隨著PH值提高，顏色向黃色發展。
[0034]實例二
在QIAGEN市售的Taq試劑中單獨在PCR緩沖體系中加入中單獨在PCR緩沖體系中加入溴甲酚綠:呈現綠色，當弱酸性時，可變為黃色。
[0035]實例三在TAKARA市售的Taq試劑中單獨在PCR緩沖體系中加入單獨在PCR緩沖體系中加入酚紅:注意顏色，酸性為黃色、堿性為紅色。
[0036]實例四
在ABI市售的Taq試劑中單獨在PCR緩沖體系中加入中性紅指示劑及溴甲酚綠混合指示劑:但達到黃色為警示顏色。
[0037]本發明的優點在于，當前熒光定量PCR試劑都為無色透明試劑，當提取失敗時，只有通過加入內標進行檢測，本方法通過PH指示進行檢測，可發現導致PCR擴增失敗的樣本提取PH偏高偏低問題。加入PH指示劑，當PCR反應液PH超過范圍時，可以通過顏色的改變及早發現，節省失敗后重新提取的時間。
[0038]對于本領域技術人員而言，顯然本發明不限于上述示范性實施例的細節，而且在不背離本發明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實現本發明。因此，無論從哪一點來看，均應將實施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發明的范圍由所附權利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權利要求的等同要件的含義和范圍內的所有變化囊括在本發明內。不應將權利要求中的任何附圖標記視為限制所涉及的權利要求。此夕卜，顯然“包括” 一詞不排除其他單元或步驟，單數不排除復數。系統權利要求中陳述的多個單元或裝置也可以由一個單元或裝置通過軟件或者硬件來實現。第一，第二等詞語用來表示名稱，而并不表示任何特定的順序。
【權利要求】
1.一種PCR試劑指示劑，其特征在于，包括: PCR試劑，及 顏色指示劑， 其中，所述顏色指示劑可通過顏色來表示由所述PCR試劑進行DNA裂解后的裂解液的PH值。
2.根據權利要求1所述的PCR試劑指示劑，其特征在于，所述PCR試劑為熒光定量PCR試劑。
3.根據權利要求2所述的PCR試劑指示劑，其特征在于，所述熒光定量PCR試劑為Taq試劑。
4.根據權利要求1所述的PCR試劑指示劑，其特征在于，當所述核酸裂解液PH值大于預定值時，所述顏色指示劑顯色。
5.根據權利要求1所述的PCR試劑指示劑，其特征在于，當所述核酸裂解液PH值小于預定值時，所述顏色指示劑顯色。
6.根據權利要求1所述的PCR試劑指示劑，其特征在于，當所述核酸裂解液PH值不等于預定值時，所述顏色指示劑顯色。
7.根據權利要求1所述的PCR試劑指示劑，其特征在于，當所述核酸裂解液PH值大于第一預定值時，或小于第二預定值時，或不等于第三預定值時所述顏色指示劑顯色。
8.根據權利要求1所述的PCR試劑指示劑，其特征在于，所述顏色指示劑為中性紅指示齊U，溴甲酚綠指示劑，或酚紅。
【文檔編號】C12Q1/68GK104450870SQ201310438107
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2013年9月24日 優先權日:2013年9月24日
【發明者】陳堅, 黎颯 申請人:上海艾迪康醫學檢驗所有限公司