抑制c-MET二聚化的新型抗體及其用途
【專利摘要】本發明涉及抑制c-MET二聚化的新型抗體及其用途。具體地，本發明涉及選擇能夠抑制c-Met的配體依賴性和配體非依賴性激活的抗c-Met抗體的方法。更具體地，所述的方法基于對c-Met二聚化的抑制。另一方面，本發明涉及用于制備治療惡性腫瘤的藥物的這種抗體和包含這種抗體的組合物。診斷方法和試劑盒也是本發明的一部分。
【專利說明】抑制c-MET 二聚化的新型抗體及其用途
[0001]本申請是申請號為200880024368.4，申請日為2008年7月10日，發明名稱為“抑制c-MET 二聚化的新型抗體及其用途”的中國專利申請的分案申請。
【技術領域】
[0002]本發明涉及能夠特異性結合人C-Met受體和/或能夠特異性抑制所述受體的酪氨酸激酶活性的新型抗體，特別是鼠的，嵌合的和人源化來源的單克隆抗體，以及編碼這些抗體的氨基酸和核苷酸序列。更具體而言，本發明所述的抗體能夠抑制c-Met 二聚化。本發明也包含這些抗體作為藥物在預防性和/或治療性處理惡性腫瘤或與所述受體過表達有關的任何病變中的用途，以及在診斷與c-Met過表達有關的疾病的過程中和試劑盒中的用途。本發明最后包含含有所述抗體聯合針對在腫瘤進展或轉移中涉及的其他生長因子的其他抗體和/或化學化合物，和/或化合物和/或抗惡性腫瘤制劑或與毒素結合的制劑的產品和/或組合物，以及它們在預防和/或治療某些惡性腫瘤中的用途。
【背景技術】
[0003]已經顯示，受體酪氨酸激酶(RTK)靶向劑如曲妥單抗、西妥昔單抗、貝伐單抗、伊馬替尼和吉非替尼抑制劑有利于以該蛋白質類為靶標用于治療選定的惡性腫瘤。
[0004]c-Met是RTK亞家族的原型成員，該亞家族也包括RON和SEA。c_Met RTK家族與其他RTK家族在結構上有區別并且是肝細胞生長因子(HGF，也稱離散因子，SF)的唯一已知的高親和性受體[D.P.Bottaro et al, Sciencel991, 251:802-804;L.Naldini et al, Eur.Mol.Biol.0rg.J.1991，10:2867-2878]。c-Met 和 HGF 在 多種組織中廣泛表達，它們的表達一般分別限定于上皮和間充質來源的細胞[M.F.DiRenzo et al., 0ncogenel991, 6:1997-2003;E.Sonnenberg et al.，J.Cell.Biol.1993，123:223-235]。兩者對于正常的哺乳動物的發育都是必需的，并且已經表明它們在細胞遷移、形態分化和三維管狀結構的組織以及生長和血管發生中特別重要[RBaldt et al., Naturel995, 376 =768-771; C.Schmidt et a 1., Nature.1995:373:699-702;Tsarfaty et al.,Sciencel994, 263:98-101]。已經表明，c-Met和HGF受控制的調節在哺乳動物發育、組織保持和修復中是重要的[Nagayama T, Nagayama M, Kohara S，Kamiguchi H, Shibuya M, Katoh Y, ItohJ,Shinohara Y., Brain Res.2004, 5;999(2):155-66;Tahara Y, Ido A, Yamamoto S, MiyataY, Uto H, Hori T, Hayashi K, Tsubouchi H., J Pharmacol Exp Ther.2003, 307 (I):146-51]，它們的失調涉及到惡性腫瘤的進展。
[0005]c-Met的不適當的激活導致的異常信號傳導是在人的惡性腫瘤中觀察到的最常見的改變之一，在腫瘤發生和轉移中起關鍵作用[Birchmeier et al., Nat.Rev.Mol.CellBiol.2003，4:915-925 ; L.Trusolino 和 Comoglio P.M., Nat Rev.Cancer.2002, 2 (4):289-300]。
[0006]不適當的c-Met激活可通過配體依賴性和非依賴性機制(包括c-Met過表達，和/或旁分泌或自分泌激活)發生，或通過獲得性功能突變發生[J.G.Christensen, BurrowsJ.and Salgia R., Cancer Latters.2005，226:1-26]。然而，在配體存在或不存在情況下的c-Met受體的寡聚化在調節激酶對ATP和含酪氨酸的肽底物的結合親和力和結合動力學中是必需的[Hays JL, Watowich SJ, Biochemistry, 2004Augl7, 43: 10570-8]。激活的c-Met募集信號傳導效應物到它位于胞質區中的多停泊位點(multidockingsite)，導致幾個關鍵的信號傳導途徑的激活，這些信號傳導途徑包括Ras-MAPK、PI3K、Src 和 Stat3[Gao CF, Vande Woude GF, Cell Res.2005, 15(1):49-51;Furge KA, ZhangYW, Vande Woude GF, Oncogene.2000, 19 (49):5582-9]。這些途徑對于腫瘤細胞的增殖、浸潤和血管生成和對于逃避細胞凋亡是必需的[Furge KA, Zhang Yff, Vande WoudeGF, Oncogene, 2000,19 (49):5582-9;Gu H, Neel BG,Trends Cell Biol.2003Mar, 13(3):122-30; Fan S，Ma YXj Wang JA，Yuan RQ，Meng Q，Cao Yj Laterra JJj Goldberg ID, RosenEMj Oncogene.2000Apr27, 19(18):2212-23]。此外，相對于其他 RTK，c_Met 信號傳導的獨特之處在于已經報道的它與粘著斑復合物和非激酶結合伙伴如α6β4整合素[TrusolinoLj Bertotti A,Comoglio PM，Cell.2001，107:643-54]，CD44v6[Van der Voort Rj TaherTE, Wielenga VJj Spaargaren Mj Prevo R，Smit Lj David G，Hartmann G，GherardiEj Pals STjJ Biol Chem.1999，274 (10):6499-506]，Plexin BI 或信號素(semaphorin)[Giordano S，Corso S，Conrotto P，Artigiani S，Gilestro G，Barberis D，TamagnoneLj Comoglio PM，Nat Cell Biol.2002，4 (9):720-4;Conrotto Pj Valdembri Dj CorsoS，Serini G，Tamagnone L，Comoglio PM, Bussolino F，Giordano S，Blood.2005，105 (11):4321-9;Conrotto P，Corso S，Gamberini S，Comoglio PM，Giordano S，Oncogene.2004，23:5131-7]之間的相互作用，這可進一步增加了這一受體調節細胞功能的復雜性。最后，近期的數據證明，c-Met可能涉及腫瘤對吉非替尼和埃羅替尼的抵抗，這提示聯合靶向EGFR和c-Met 兩者的化合物可能有重要意義[Engelman JA at al.，Science, 2007，316:1039-43]。
[0007]在過去幾年中，已開發出許多不同策略用來減弱惡性腫瘤細胞系中的c-Met信號傳導。這些策略包括i)抗c -Met或HGF/SF的中和抗體[Cao B，Su Y，OskarssonMj Zhao P, Kort EJj Fisher RJj Wang LMj Vande Woude GFj Proc Natl Acad Sci U SA.2001，98 (13):7443-8 ;Martens T，Schmidt NO, Eckerich C，Fillbrandt Rj MerchantMj Schwall Rj Westphal Mj Lamszus K，Clin Cancer Res.2006，12 (20):6144-52]或使用 HGF/SF 的拮抗劑 NK4 來阻止配體結合 c-Met [Kuba K, Matsumoto K，Date K, ShimuraH，Tanaka M，Nakamura T，Cancer Res.，2000，60:6737-43] ；ii) c-Met 的小 ATP 結合位點抑制劑來阻斷激酶活性[Christensen JGj Schreck Rj Burrows Jj Kuruganti P，Chan E，LeP，Chen Jj Wang X，Ruslim L，Blake R，Lipson KE，Ramphal J，Do S，Cui JJ，CherringtonJMj Mendel DB, Cancer Res.2003，63:7345-55] ；iii)影響通向多停泊位點的工程化的 SH2區多肽，和降低受體或配體表達的RNAi或核酶。這些方法中的大部分表現出c-Met的選擇性抑制，從而導致腫瘤的抑制，并且表明c-Met在惡性腫瘤的治療性干預中可能是令人感興趣的。
[0008]所產生的靶向c-Met的分子中，有些是抗體。
[0009]最廣泛描述的是Genentech[W096/38557]生產的抗c_Met5D5抗體，其在多種模型中單獨加入時作為強力激動劑起作用，當用作Fab片段時作為拮抗劑起作用。這一抗體的單價的工程化的形式被描述為單臂(0AOT5)，在大腸桿菌中作為重組蛋白質而產生，這也是Genentech專利申請[W02006/015371]的主題。然而，這一分子由于它特定的支架(scarfold)而不能被認為是抗體,它也表現出能產生對于人具有免疫原性的突變。在活性方面，這一未糖基化的分子不具有效應物的功能，并且最后沒有清楚的數據證明，0A5D5抑制c-Met的二聚化。此外，當在G55體內模型(表達c-Met但不表達HGF mRNA和蛋白質的成膠質細胞瘤細胞系，其不依賴于配體而生長)中試驗時，單臂抗c-Met對G55腫瘤生長無顯著效應，這提示0A5D5主要通過阻斷HGF結合起作用，并且不能夠靶向不依賴于HGF而激活的腫瘤[Martens T.et al, Clin.Cancer Res., 2006, 12(20):6144-6152]。
[0010]Pfizer描述的另一個祀向c_Met的抗體是通過“主要作為c_Met拮抗劑,并且在有些情況下作為c-Met激動劑”起作用的抗體[W02005/016382]。該申請沒有描述顯示Pfizer抗體對c-Met 二聚化的任何效應的數據。
[0011]本發明的一個新的方面是產生沒有內在的激動活性并且抑制C-Met 二聚化的鼠單克隆抗體。除了靶向配體依賴性腫瘤外，該方法也破壞由于c-Met過表達或細胞內區突變的配體非依賴性c-Met激活，這種激活依舊依賴于寡聚化以進行細胞信號傳導。這種抗體活性的另一方面可能是對c-Met和其伙伴之間的相互作用的產生空間位阻從而破壞c-Met的功能。除了與特異性阻斷c-Met受體有關的功能之外，優選地這些抗體是人源化的和工程化的作為人IgGl以獲得效應物功能如ADCC和⑶C，但不限于此。

【發明內容】

[0012]令人驚訝地，發明人第一次設法產生了能夠結合c-Met也能夠抑制c-Met 二聚化的抗體。在現有技術中，有時候提示能夠抑制c-Met與其伙伴二聚化的抗體可能是令人感興趣的抗體，如果這是真的話，也從來沒有公開過，或清楚的提示有抗體能夠做到這一點。此外，關于抗體的特異性，成功產生這種活性抗體根本是不明顯的。
[0013]第一方面，本發明的主題是產生和選擇本發明所述的抗體的方法。
[0014]更具體地，本發明涉及選擇`能夠抑制配體依賴性和配體非依賴性C-Met激活的抗c-Met抗體或其功能片段之一或衍生物的方法，所述的方法包含下述步驟:
[0015]i)篩選所產生的抗體,選擇能夠特異性結合c-Met的抗體；
[0016]ii)體外評價步驟i)中選定的抗體，并且選擇能夠至少50%,優選至少60%, 70%或80%地抑制至少一種腫瘤類型的腫瘤細胞增殖的抗體；
[0017]iii)試驗步驟ii)中選定的抗體,選擇能夠抑制c_Met 二聚化的抗體。
[0018]如前面所解釋的，由于這種抗體對于更大人群的病人具有實際的意義，抑制C-Met二聚化是本發明的首要方面。不僅配體依賴性激活的c-Met惡性腫瘤(正如直到本發明的情況)，而且配體非依賴性激活的c-Met惡性腫瘤也能通過本發明所述的方法產生的抗體進行治療。
[0019]抗體的產生可通過本領域技術人員已知的任何方法來實現，例如，將骨髓瘤細胞與從免疫小鼠或任何其他與選定的骨髓瘤細胞相容的物種獲得的脾細胞融合[Kohler &Milstein, 1975，Nature, 256:495-497]。免疫動物可包括帶有人免疫球蛋白質位點的轉基因鼠，其然后能直接產生人抗體。其他可能的【具體實施方式】可能在于使用噬菌體顯示技術以篩選文庫。
[0020]篩選步驟i)可通過本領域技術人員已知的任何方法或過程來實現。作為非限制性例子，可以提及的是ELISA、BIAcore、免疫組化、FACS分析和功能性篩選。優選的方法在于通過ELISA對c-Met重組蛋白質進行篩選，并且然后通過FACS分析至少一種腫瘤細胞系，以確定所產生的抗體也能夠識別腫瘤細胞上天然的受體。這一方法將在下述的實施例中進行更精確的描述。
[0021]同樣，步驟ii)也可通過已知的方法或過程來經典地實現，例如使用3H-胸腺嘧啶或任何其他DNA染色劑、MTT、ATP評價等。本發明中優選的腫瘤細胞模型可為BxPC3模型。
[0022]通過抑制c-Met 二聚化，必須理解它優選地為c_Met同二聚化。
[0023]在本發明所述的選擇方法的步驟iii)的優選【具體實施方式】中，所述的步驟iii)在于通過BRET分析表達c-Met-RLuc/c-Met-YFP兩者的細胞來評價抗體，并且選擇能夠至少30%，優選35%、40%、45%、50%、55%或最優選60%地抑制BRET信號的抗體。
[0024]BRET技術為已知技術，其是蛋白質二聚化的代表性技術[Angers etal, PNAS, 2000，97:3684-89]。
[0025]在該方法的步驟iii)中使用的BRET技術是本領域技術人員熟知的，并且將會在下述實施例中進行詳細描述。更具體地，BRET(生物發光共振能量轉移)是發生在生物發光供體(海腎熒光素酶(Renilla LuciferasejRluc))和熒光受體，GFP (綠色熒光蛋白質)或YFP(黃色熒光蛋白質)的突變體之間的非放射性能量轉移。在本案中使用了 EYFP(增強型黃色熒光蛋白質)。轉移的效率依賴于供體和受體之間的方向和距離。因此，只有當兩個分子臨近(1-1Onm)時才可能發生能量轉移。這一屬性用來進行蛋白質-蛋白質相互作用分析。實際上，為研究兩個伙伴間的相互作用，第一個通過基因工程使其融合到海腎熒光素酶中，并且第二個融合到GFP的黃色突變體中。融合蛋白質一般但不是一定在哺乳動物細胞中表達。在其膜具有通透性的底物(腔腸素(coelenterazine))存在條件下，Rluc發射藍光。如果GFP突變體與Rluc接近大于10nm，可發生能量轉移，并且可檢測到另外的黃色信號。測量的BRET信號為受體發射的光和供體發射的光的比率。因此，當使兩個融合蛋白接近或如果構象變化使Rluc和 GFP突變體更近時，BRET信號將會增加。
[0026]如果BRET分析是一個優選的【具體實施方式】的話，本領域技術人員已知的任何方法可用來測量c-Met 二聚化。非限制性地，下述技術可被提及:FRET (熒光共振能量轉移)，HTRF(均相時間分辨熒光)，FUM(熒光壽命成像顯微鏡)或SW-FCCS ((單波長熒光相關光譜法(single wavelength fluorescence cross-correlation spectroscopy))。
[0027]也可使用其他經典的技術，如免疫共沉淀，α篩選，化學交聯，雙雜交，親和層析，ELISA 或遠端 western 印跡(Far western blot)。
[0028]第二方面，本發明的主題為通過所述的方法獲得的分離的抗體或其功能片段之一或衍生物。所述的抗體或其所述的功能片段之一或衍生物能夠特異性結合到人c-Met，并且，如果必要，優選地還能夠抑制其配體HGF的天然結合和/或能夠特異性抑制所述c-Met的酪氨酸激酶活性，所述的抗體也能夠抑制c-Met的二聚化。更具體地，所述的抗體能夠抑制c-Met的配體依賴性和配體非依賴性激活。
[0029]“功能性片段和衍生物”的表述此后會在本說明書中進行詳細的限定。
[0030]在此必須理解，本發明不涉及天然形式的抗體，也就是說，這些抗體不是在其天然的環境中，而是它們能夠從天然來源中通過純化被分離或獲得，或還可通過基因重組獲得，或通過化學合成獲得，因此，它們含有非天然氨基酸，這一點會進一步描述。[0031]更具體地，根據本發明所述的另一方面，其要求保護抗體或其功能片段之一或衍生物，所述的抗體的特征在于其包含至少一個互補決定區⑶R，所述⑶R選自包含氨基酸序列 SEQ ID N0.1 至 17 和 56 至 61 的 CDR。
[0032]含有至少一個⑶R，該⑶R的序列在與序列SEQ ID N0.1至17和56至61進行優化比對后，至少具有80%的同一性，優選地85%、90%、95%或98%的同一性的任何抗體或片段或衍生物，都應理解為本發明的等同物，因此，也是本發明的一部分。
[0033]⑶R區或⑶R的意思是指IMGT限定的免疫球蛋白質的重鏈和輕鏈的高變區。
[0034]IMGT特有編號(IMGT unique numbering)被限定用來比較可變區，而不論抗原受體、鏈的類型或物種[Lefranc M.-P., Immunology Todayl8, 509 (1997) /LefrancΜ.-P., The Immunologist, 7, 132-136 (1999) /Lefranc, M.-P., Pommie, C, Ruiz, M., Giudicelli, V., Foulquier, E., Truong, L., Thouvenin-Contet, V.和 Lefranc, Dev.Comp.1mmunol，27，55-77 (2003)]。在MGT特有編號中，保守氨基酸總是具有相同的位置，例如半胱氨酸23 (第1-CYS)，色氨酸41 (保守-TRP (C0NSERVED-TRP))，疏水氨基酸89，半胱氨酸104(第2-CYS)，苯丙氨酸或色氨酸118(J-PHE或J-TRP)。MGT特有編號提供了對框架區(FR1-1MGT:位置 I 至 26，FR2-1MGT:39 至 55、FR3-1MGT:66 至 104 和 FR4-1MGT:118 至 128)和其互補決定區:CDRHMGT:27 至 38、CDR2-1MGT:56 至 65 和 CDR3-1MGT:105至117的標準限定。由于缺口代表未占據的位置，⑶R-1MGT的長度(在括號中顯示用并點分開，例如[8.8.13])是重要的信息。MGT特有編號用2D圖表示，稱為MGTColliers de Perles[Ruiz, M.and Lefranc, M.-P., Immunogenetics, 53, 857-883(2002)/Kaas, Q.and Lefranc, M.-P., Current Bioinformatics, 2, 21-30 (2007)],并且在 IMGT/3D結構-DB[Kaas, Q., Ruiz, M.and Lefranc, M.-P., T cell receptor and MHC structuraldata.Nuc1.Acids.Res.，32，D208-D210 (2004)]中用 3D 結構表示。
[0035]存在3個重鏈⑶R和3個輕鏈⑶R。根據情況的不同，此處使用的術語⑶R或多個CDR用于表示這些區(含有大部分負責抗體對抗原或其識別的表位的親和性結合的氨基酸殘基的區)中的一個或幾個，或甚至全部。
`[0036]本發明意義上的兩條核酸或氨基酸序列之間的“同一性百分數”是指將要比較的兩個序列之間的核苷酸或同樣的氨基酸殘基的百分數，該百分數在進行最優比對(優化比對)后獲得，這一百分數是純粹統計上的，并且兩個序列間的差異隨機分布并在全長上分布。傳統上，對兩個核酸或氨基酸序列的比較是通過將他們以優化的方式比對后進行比較，所述的比較可通過區段或“比較窗口”進行。除了手工方式之外，進行比較的序列的優化比對可通過 Smith 和 Waterman (1981) [Ad.App.Math.2:482]的局部同源性算法，Neddleman和 Wunsch (1970) [J.Mol.Biol.48:443]的局部同源性算法，Pearson 和 Lipman (1988)[Proc.Natl.Acad.Sc1.USA85:2444)的相似性檢索法，通過使用這些算法的計算機軟件(威斯康辛遺傳學軟件包中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，遺傳學計算機組(GeneticsComputer Group), 575Science Dr.，Madison, WI,或通過BLAST N或 BLAST P 比較軟件的別的方式)的方式進行。
[0037]兩條核酸或氨基酸序列之間的同一性百分數通過以優化方式比較這兩個序列來確定，并且其中進行比較的核酸或氨基酸序列可包含相對于參考序列的加入序列或刪除序列，該參考序列用于在這兩條序列之間進行優化比對。同一性百分數的計算是通過確定兩個序列間相同核苷酸或氨基酸殘基的同樣位置的數目，將這一同樣位置的數目除以所比較窗口的總位置數目，將所獲得的結果乘以100，從而獲得這兩條個序列間的同一性百分數。
[0038]例如，可能使用BLAST程序對2個序列進行BLAST (Tatusova etal,〃Blast2sequences-a new tool for comparing protein 和 nucleotidesequences", FEMS Microbiol Lett.174:247-250)，該程序可在網址 http://www.ncb1.nlm.nih.gov/gorf/bl2.html上獲得,使用那些缺省給定的參數(特別是參數“開放空缺罰分(open gap penalty)”:5,和“擴展空缺罰分(extension gap penalty)”:2 ;選擇作為矩陣，例如該程序建議的“BL0SUM62”矩陣)，將要比較的兩條序列的同一性百分數直接通過該程序計算得出。
[0039]相對于參考氨基酸序列具有至少80%，優選85%、90%、95%或98%的同一性的氨基酸序列，那些相對于參考序列具有某些修飾，特別是刪除、加入或替換了至少一個氨基酸，截短或延長是優選的。在替換一個或多個連續或不連續氨基酸的情況下，該替換優選為所替換的氨基酸被“等同”氨基酸所替換。“等同氨基酸”(equivalent amino acids)的表述在此處的目的是表示任何能夠多個氨基酸之一所替換的任何氨基酸，替換上去的氨基酸具有相應抗體的基本結構卻不會對其生物活性進行實質上修飾，并且這些氨基酸將在以后限定，特別是在實施例中限定。這些等同氨基酸的確定可基于它們與被它們替換的氨基酸的結構同源性，或基于能夠進行的不同抗體間生物活性的比較性試驗。
[0040]通過舉例的方式提及能夠進行的可能的替換，該替換不導致相應的修飾抗體的生物活性的較大修飾。
[0041]作為非限制性的例子，下述表1給出了考慮到保持修飾抗體的生物活性的可能的替換。在同樣條件下，相反的替換當然也是可能的。
[0042]表1
[0043]
【權利要求】
1.一種分離的抗體或其功能性二價片段之一，其特征在于其包含重鏈和輕鏈，所述的重鏈包含氨基酸序列分別為SEQ ID N0.4、5和6的⑶R-H1、⑶R-H2和⑶R-H3 ;所述的輕鏈包含氨基酸序列分別為SEQ ID N0.13,11和14的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。
2.根據權利要求1所述的抗體或其功能性二價片段之一，其特征在于其包含氨基酸序列SEQ ID N0.19的重鏈和氨基酸序列SEQ ID N0.22的輕鏈。
3.—種能夠分泌如權利要求1所述的抗體的鼠雜交瘤，其特征在于所述雜交瘤是于2007年3月14日保藏在巴黎巴斯德研究所CNCM，保藏號為1-3732的鼠雜交瘤。
4.根據權利要求1和2任一項所述的抗體或其功能性二價片段之一，其特征在于其是單克隆抗體。
5.根據權利要求4所述的抗體或其功能性二價片段之一，其特征在于所述的抗體為嵌合抗體，其中輕鏈和重鏈恒定區來自于與小鼠異源的物種的抗體。
6.根據權利要求5的嵌合抗體或其功能性二價片段之一，其特征在于所述異源的物種是人。
7.根據權利要求6的人源化抗體或其功能性二價片段之一，其特征在于源自人抗體的輕鏈和重鏈恒定區分別是輕鏈K區和重鏈Y-1、Y-2或Y-4區。
8.根據權利要求1、2和4-7任一項所述的抗體，其中抗體能夠抑制配體依賴的和配體非依賴的C-Met激活。
9.根據權利要求8所述 的 抗體，其中抗體能夠特異地結合c-Met。
10.根據權利要求9所述的抗體，其中抗體能夠抑制至少一個腫瘤類型的至少50%腫瘤細胞增殖。
11.根據權利要求10所述的抗體，其中抗體能夠抑制C-Met二聚化。
12.根據權利要求1、2和4-11任一項所述的抗體，其中抗體是二價的。
13.一種分離的核酸，其特征在于其選自下述核酸: a)編碼如權利要求1、2和4-12之一所述的抗體或其功能性二價片段之一的核酸；
b)序列SEQ ID N0.27、SEQ ID N0.28、SEQ ID N0.29 和序列 SEQ ID N0.36、SEQ IDN0.34 和 SEQ ID N0.37 的 DNA 核酸序列； c)DNA核酸，其包括 包含序列SEQ ID N0.42和SEQ ID N0.45的核酸序列； d)b)或c)中限定的核酸相對應的RNA核酸；和 e)a),b)和c)中限定的核酸的互補核酸。
14.一種包含如權利要求13的a)、b)和c)部分所述的DNA核酸的載體。
15.—種包含如權利要求14所述的載體的宿主細胞。
16.—種產生如權利要求1、2和4-12之一所述的抗體或其功能性二價片段之一的方法，其特征在于其包含下述階段: a)在培養基中和在適當的培養條件下培養如權利要求14所述的細胞；以及 b)從培養基或所述的培養細胞中收獲產生的所述抗體或其功能性二價片段之一。
17.如權利要求1、2和4-12所述的或通過權利要求16所述的方法獲得的抗體或其功能性二價片段之一用于制備預防或治療c-Met激活相關的惡性腫瘤的藥物的用途。
18.—種包含化合物作為有效成分的組合物，所述的化合物由如權利要求1、2和4-12之一所述的，或通過如權利要求16所述的方法獲得的，抗體或其功能性二價片段之一組成。
19.根據權利要求17所述的組合物，其特征在于其進一步包含作為組合產品以同時、分別或相繼使用的一種制劑，其中所述制劑是抗腫瘤抗體。
20.根據權利要求18或19所述的組合物，其特征在于其進一步包含作為組合產物以同時、分別或相繼使用的至少一種制劑，其中所述制劑是細胞毒性劑/細胞抑制劑。
21.根據權利要求20所述的組合物，其中所述的細胞毒性劑/細胞抑制劑化學偶聯至所述抗體或所述二價功能性片段或其衍生物用于同時使用。
22.根據權利要求21所述的組合物，其中所述的細胞毒性劑/細胞抑制劑選自烷化劑、抗代謝物、抗腫瘤抗生素、有絲分裂抑制劑、染色質功能抑制劑、抗血管生成劑、抗雌激素、抗雄激素或免疫調節劑。
23.根據權利要求22所述的組合物，其中所述的細胞毒性劑/細胞抑制劑是有絲分裂抑制劑。
24.根據權利要求18或19所述的組合物，其特征在于至少一種所述的抗體或其功能性二價片段之一與細胞毒素和/或放射性元素結合。
25.如權利要求18-23之一所述的組合物用于制備預防或治療c-Met激活相關的惡性腫瘤的藥物的用途。
26.如權利要求1、2和4-12之一所述的，或通過如權利要求16的方法獲得的抗體或其功能性二價片段之一，或如權利要求18-24之一所述的組合物，在制備用于預防或治療惡性腫瘤的藥物中的用途。`
27.根據權利要求26所述的用途，其特征在于所述的惡性腫瘤選自前列腺癌、骨肉瘤、肺癌、乳癌、子宮內膜癌、成膠質細胞瘤或結腸癌。
28.根據權利要求25、26或27所述的用途，其特征在于所述惡性腫瘤是cMet激活相關的惡性腫瘤，其選自HGF依賴性和/或非依賴性的惡性腫瘤。
【文檔編號】C12N1/21GK103509112SQ201310478511
【公開日】2014年1月15日 申請日期:2008年7月10日 優先權日:2007年7月12日
【發明者】L·格奇 申請人:皮埃爾法布雷醫藥公司