一種防治芒果細(xì)菌性黑斑病的新藥劑配方及制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種防治芒果細(xì)菌性黑斑病的新藥劑配方及制備方法，配方為100萬單位硫酸鏈霉素7.50μg/mL，20%噻菌銅SC61.90μg/mL，配比為3:2；制備方法為：選取復(fù)配所需要的殺菌劑單劑，菌懸液的制備，復(fù)配藥劑室內(nèi)抑菌效果評(píng)價(jià)。本發(fā)明配方制備的藥劑，克服了單劑防效不理想、防治譜單一、易使芒果細(xì)菌性黑斑病病原菌產(chǎn)生抗藥性的缺點(diǎn)，不僅防效好、兼治療和保護(hù)作用，也擴(kuò)大了防治譜、延緩抗藥性以及防治成本低，本發(fā)明采用含毒介質(zhì)法，按比例混合法對(duì)多個(gè)常見殺菌劑進(jìn)行了復(fù)配，目的是篩選出高效低毒，兼具治療和保護(hù)作用的復(fù)配藥劑，在有效防治芒果細(xì)菌性黑斑病的同時(shí)，延緩病原菌產(chǎn)生抗藥性。
【專利說明】一種防治芒果細(xì)菌性黑斑病的新藥劑配方及制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于芒果細(xì)菌性黑斑病的防治領(lǐng)域，尤其涉及一種防治芒果細(xì)菌性黑斑病的新藥劑配方及制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]芒果(Mangifera indicaL.)屬于漆樹科植物，因其獨(dú)特的風(fēng)味和富含維生素C，被譽(yù)為熱帶水果之王。我國是世界芒果生產(chǎn)大國，近年來芒果種植面積逐漸擴(kuò)大，產(chǎn)量穩(wěn)步上升，每年達(dá)數(shù)百萬噸，居世界第八位。芒果細(xì)菌性黑斑病(Xanthomonas campestrispv.mangiferaeindicae)是嚴(yán)重影響芒果生產(chǎn)的重要病害之一,該病在巴西、南非、印度、巴基斯坦等芒果種植區(qū)均有發(fā)生，在我國的海南、廣東、廣西、福建、云南等省區(qū)芒果園為害嚴(yán)重，一般造成15%~30%的損失，嚴(yán)重時(shí)可達(dá)50%以上，近年來為害有加重的趨勢。該病害主要為害芒果葉片、枝條、花芽、花和果實(shí)。在葉片上最初產(chǎn)生水潰狀小點(diǎn)，逐步變成黑褐色斑點(diǎn)，后擴(kuò)大呈多角形或不規(guī)則、形表面隆起的黑色病斑，周圍常有黃暈，嚴(yán)重時(shí)造成落葉；在枝條、花穗或果柄上，常形成黑褐色梭形潰瘍斑，并開裂流膠；果實(shí)上病斑初呈水潰狀小點(diǎn)，后擴(kuò)大成黑褐色、表面隆起、星狀開裂流膠的病斑，嚴(yán)重影響果面外觀價(jià)值。此病全年均可發(fā)生，氣度高于25°C，相對(duì)濕度大于90%有利于病害的發(fā)生和流行，臺(tái)風(fēng)雨與病害發(fā)生有極其密切的關(guān)系，秋梢期的臺(tái)風(fēng)雨次數(shù)和病葉率，與次年黑斑病發(fā)生的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，可以作為病害流行的預(yù)測指標(biāo)。
[0003]目前，國內(nèi)外對(duì)植物細(xì)菌病害的防治主要依靠化學(xué)藥劑，容易誘發(fā)病原菌產(chǎn)生抗藥性。雖然尚未見芒果細(xì)菌性黑斑病菌產(chǎn)生抗藥性的相關(guān)報(bào)道，但同屬Xanthomonas引起的水稻白葉枯病菌(X.campestris pv..0ryzae)和柑橘潰瘍病菌(X.campestris pv.citri)已對(duì)葉枯唑已經(jīng)產(chǎn)生了抗藥性，在辣椒瘡痂病菌(X.campestris pv.vesicatoria)和水稻細(xì)菌性條斑病菌(X.0ryzae p·v.0ryzicola)中也發(fā)現(xiàn)了耐鏈霉素菌株。農(nóng)藥復(fù)配是延緩病原菌產(chǎn)生抗藥性、提高藥效、降低毒性、擴(kuò)大使用范圍、減少用藥量、降低成本的有效途徑。
[0004]單藥劑長期使用存在芒果細(xì)菌性黑斑病病原菌產(chǎn)生抗藥性的風(fēng)險(xiǎn)，防效會(huì)逐漸降低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種防治芒果細(xì)菌性黑斑病的新藥劑配方及制備方法，旨在解決傳統(tǒng)的防治芒果細(xì)菌性黑斑病使用單藥劑使得芒果細(xì)菌性黑斑病病原菌產(chǎn)生抗藥性，而目前的復(fù)配農(nóng)藥的藥效差、毒性高、使用范圍狹窄、成本高的問題。
[0006]本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種防治芒果細(xì)菌性黑斑病的新藥劑配方，該防治芒果細(xì)菌性黑斑病的新藥劑是17中殺菌劑中選取抑菌效果較好的100萬單位硫酸鏈霉素、3%中生菌素WP、50%敵磺鈉WS、20%噻菌銅SC、鹽酸四環(huán)素等5種單劑，再對(duì)這5種單劑進(jìn)行復(fù)配，獲得一種抑菌效果最好的藥劑配方及藥劑濃度如下:。
[0007]100萬單位硫酸鏈霉素7.50 μ g/mL, 20%噻菌銅SC61.90 μ g/mL, 二者的配比為3:2。
[0008]本發(fā)明的另一目的在于提供一種防治芒果細(xì)菌性黑斑病的新藥劑的制備方法，該防治芒果細(xì)菌性黑斑病的新藥劑的制備方法步驟如下:
[0009]步驟一、選取復(fù)配所需要的殺菌劑單劑；
[0010]步驟二、菌懸液的制備；
[0011 ] 步驟三、復(fù)配藥劑室內(nèi)抑菌效果評(píng)價(jià)。
[0012]進(jìn)一步，復(fù)配所需要的5種殺菌劑單劑采用含毒介質(zhì)法中的最低抑制濃度法測定17種常用殺菌劑對(duì)芒果細(xì)菌性黑斑病病原菌的室內(nèi)抑菌效果獲得。
[0013]進(jìn)一步，菌懸液的具體制備方法如下:
[0014](I)采用病原細(xì)菌XCM-3進(jìn)行單菌落培養(yǎng)，挑取一單菌落接種于30mLLB液體培養(yǎng)基內(nèi)，28°C、150rpm培養(yǎng)24h，制得菌原液；
[0015](2)取ImL菌原液，用無菌 水按10、102、IO3…IOltl倍系列稀釋后涂板于LB固體培養(yǎng)基上，28 °C培養(yǎng)48h，根據(jù)平板菌落計(jì)數(shù)法，推算出菌原液的濃度；
[0016](3)根據(jù)菌原液濃度，制備菌懸液，使菌懸液涂板后長出的菌落數(shù)約100個(gè)。
[0017]進(jìn)一步，步驟三復(fù)配藥劑的室內(nèi)抑菌效果評(píng)價(jià)方法如下:
[0018]采用Horsfall法進(jìn)行復(fù)配劑增效配比的篩選，測得鹽酸四環(huán)素、硫酸鏈霉素、敵磺鈉、中生菌素和噻菌銅共5種單劑的抑菌最低有效濃度C，按6個(gè)比例即5:0、4:1、3:2、2:3、1:4、0:5進(jìn)行配比，將單劑鹽酸四環(huán)素與硫酸鏈霉素、敵磺鈉與中生菌素、硫酸鏈霉素與噻菌銅、硫酸鏈霉素與敵磺鈉、中生菌素與噻菌銅、噻菌銅與鹽酸四環(huán)素組成6種復(fù)配組合，每處理設(shè)3個(gè)重復(fù)；
[0019]采用含毒介質(zhì)法制成不同配比的含毒平板，涂布50 μ L菌懸液于含毒平板上，以無毒平板為對(duì)照，置于28°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，96h后檢查菌落生長情況并記錄數(shù)據(jù)。計(jì)算各配比的抑菌率，若毒力比率明顯大于1，為增效作用；若毒力比率明顯小于1，為拮抗作用；若毒力比率接近I，則為相加作用；
[0020]抑菌率=(對(duì)照長的平均菌落數(shù)-處理長的菌落數(shù))/對(duì)照長的平均菌落數(shù)X 100% ；預(yù)期抑菌率=(單劑A的C劑量實(shí)際抑菌率X配比中的百分比)+ (單劑B的C劑量實(shí)際抑菌率X配比中的百分率)；毒力比率=實(shí)際抑菌率(％)/預(yù)期抑菌率(％)；
[0021]測定硫酸鏈霉素與敵磺鈉、硫酸鏈霉素與鹽酸四環(huán)素、中生菌素與噻菌銅之間的各種比例的復(fù)配。
[0022]本發(fā)明的一種防治芒果細(xì)菌性黑斑病的新藥劑配方，將單劑鹽酸四環(huán)素與硫酸鏈霉素、敵磺鈉與中生菌素、硫酸鏈霉素與噻菌銅、硫酸鏈霉素與敵磺鈉、中生菌素與噻菌銅、噻菌銅與鹽酸四環(huán)素依據(jù)抑菌的作用機(jī)理不同、兼治療和保護(hù)作用而組成6種復(fù)配組合，從中篩選一種防效好、成本低、用藥量少，環(huán)境友好性的新藥劑配方，在有效防治芒果細(xì)菌性黑斑病的同時(shí)，也能延緩病原菌產(chǎn)生抗藥性，所選用的藥劑均為細(xì)菌性病害防治中的常見藥劑，易于讓果農(nóng)接受，適宜廣泛推廣應(yīng)用。
[0023]本發(fā)明提供的防治芒果 細(xì)菌性黑斑病的新藥劑的制備方法采用含毒介質(zhì)法，按“比例混合法”對(duì)多個(gè)常見殺菌劑進(jìn)行了復(fù)配，目的是篩選出高效低毒，兼具治療和保護(hù)作用的復(fù)配藥劑，在有效防治芒果細(xì)菌性黑斑病的同時(shí)，延緩病原菌產(chǎn)生抗藥性。【專利附圖】

【附圖說明】
[0024]圖1是本發(fā)明提供的防治芒果細(xì)菌性黑斑病的新藥劑的制備方法流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0025]為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0026]圖1示出了本發(fā)明提供的防治芒果細(xì)菌性黑斑病的新藥劑的制備方法流程。為了便于說明，僅僅示出了與本發(fā)明相關(guān)的部分。
[0027]下面結(jié)合附圖及具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的應(yīng)用原理作進(jìn)一步描述。
[0028]步驟一、選取復(fù)配所需要的殺菌劑單劑
[0029]本發(fā)明通過含毒介質(zhì)法中的最低抑制濃度法測定了 17中常用殺菌劑對(duì)芒果細(xì)菌性黑斑病病原菌(X.campestris pv.mangiferaeindicae)的室內(nèi)抑菌效果,從中選取室內(nèi)抑菌效果較好的硫酸鏈霉素、中生菌素、敵磺鈉、噻菌銅和鹽酸四環(huán)素等5個(gè)藥劑用于復(fù)配制劑的研制，這5種單劑的生產(chǎn)廠家及用于復(fù)配的濃度設(shè)置見表1。
[0030]表1供試單劑藥劑、生產(chǎn)廠家和濃度設(shè)置
【權(quán)利要求】
1.一種防治芒果細(xì)菌性黑斑病的新藥劑配方，其特征在于，該防治芒果細(xì)菌性黑斑病的新藥劑配方的成分及藥劑濃度如下: 100萬單位硫酸鏈霉素7.50 μ g/mL, 20%噻菌銅SC61.90μ g/mL，配比為3:2。
2.一種防治芒果細(xì)菌性黑斑病的新藥劑的制備方法，其特征在于，該防治芒果細(xì)菌性黑斑病的新藥劑的制備方法步驟如下: 步驟一、選取復(fù)配所需要的殺菌劑單劑； 步驟二、菌懸液的制備； 步驟三、復(fù)配藥劑室內(nèi)抑菌效果評(píng)價(jià)。
3.如權(quán)利要求2所述的防治芒果細(xì)菌性黑斑病的新藥劑的制備方法，其特征在于，復(fù)配所需要的5種殺菌劑單劑采用含毒介質(zhì)法中的最低抑制濃度法測定17種常用殺菌劑對(duì)芒果細(xì)菌性黑斑病病原菌的室內(nèi)抑菌效果獲得。
4.如權(quán)利要求2所述的防治芒果細(xì)菌性黑斑病的新藥劑的制備方法，其特征在于，菌懸液的具體制備方法如下: (1)采用病原細(xì)菌XCM-3進(jìn)行單菌落培養(yǎng)，挑取一單菌落接種于30mLLB液體培養(yǎng)基內(nèi)，280C、150rpm培養(yǎng)24h，制得菌原液； (2)取ImL菌原液，用無菌水按10、IO2UO3…101°倍系列稀釋后涂板于LB固體培養(yǎng)基上，28°C培養(yǎng)48h，根據(jù)平板菌落計(jì)數(shù)法，推算出菌原液的濃度；· (3)根據(jù)菌原液濃度，制備菌懸液，使菌懸液涂板后長出的菌落數(shù)100個(gè)。
5.如權(quán)利要求2所述的防治芒果細(xì)菌性黑斑病的新藥劑的制備方法，其特征在于，步驟三復(fù)配藥劑的室內(nèi)抑菌效果評(píng)價(jià)方法如下: 采用Horsfall法進(jìn)行復(fù)配劑增效配比的篩選，測得鹽酸四環(huán)素、硫酸鏈霉素、敵磺鈉、中生菌素和噻菌銅共5種單劑的抑菌最低有效濃度C，按6個(gè)比例即5:0、4:1、3:2、2:3、1:·4、0:5進(jìn)行配比，將單劑鹽酸四環(huán)素與硫酸鏈霉素、敵磺鈉與中生菌素、硫酸鏈霉素與噻菌銅、硫酸鏈霉素與敵磺鈉、中生菌素與噻菌銅、噻菌銅與鹽酸四環(huán)素組成6種復(fù)配組合，每處理設(shè)3個(gè)重復(fù)； 采用含毒介質(zhì)法制成不同配比的含毒平板，涂布50 μ L菌懸液于含毒平板上，以無毒平板為對(duì)照，置于28°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，96h后檢查菌落生長情況并記錄數(shù)據(jù)，計(jì)算各配比的抑菌率，若毒力比率明顯大于1，為增效作用；若毒力比率明顯小于1，為拮抗作用；若毒力比率接近I，則為相加作用； 抑菌率=(對(duì)照長的平均菌落數(shù)-處理長的菌落數(shù))/對(duì)照長的平均菌落數(shù)X 100% ;預(yù)期抑菌率=(單劑A的C劑量實(shí)際抑菌率X配比中的百分比)+ (單劑B的C劑量實(shí)際抑菌率X配比中的百分率)；毒力比率=實(shí)際抑菌率(％)/預(yù)期抑菌率(％)； 測定硫酸鏈霉素與敵磺鈉、硫酸鏈霉素與鹽酸四環(huán)素、中生菌素與噻菌銅之間的各種比例的復(fù)配。
【文檔編號(hào)】C12Q1/20GK103583543SQ201310547986
【公開日】2014年2月19日 申請(qǐng)日期:2013年11月6日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月6日
【發(fā)明者】蒲金基, 漆艷香, 張賀, 劉曉妹, 張欣, 喻群芳, 陸英, 謝藝賢, 張輝強(qiáng) 申請(qǐng)人:中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境與植物保護(hù)研究所