一種瓊脂培養基及其制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種瓊脂培養基及其制作方法，主要用于紅藻組織培養過程中愈傷組織的誘導，每升PES培養基中添加蔗糖20～40g、瓊脂5～10g、抗壞血酸5～10mg、維生素E10～15mg、IAA1～4mg、ZT1～4mg；紅藻為石花菜、凝花菜、江蘺、龍須菜、角叉菜、蜈蚣藻中的任意一種；采用先分裝瓊脂再高壓滅菌的方式不但可以避免瓊脂受熱不均造成糊底的現象發生，也可以避免分裝時的二次污染。
【專利說明】一種瓊脂培養基及其制作方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種瓊脂培養基及其制作方法，尤其是一種用于紅藻組織培養過程中誘導愈傷組織形成的瓊脂培養基。
【背景技術】
[0002]瓊脂也稱“瓊膠”，又名洋菜、凍粉，燕菜精，洋粉，是從石花菜、江蘺等紅藻植物提制的多糖，其主要成分為多聚半乳糖的硫酸脂。瓊脂因其有特殊的凝膠性質，已被廣泛使用于食品、醫藥、化工、紡織、國防、科研等領域。瓊脂早已被美國食品藥物管理條例列為公認安全的產品，獲準作為食品添加劑作為專題載入食品化學品藥典之中。1973年聯合國糧農組織和世界衛生組織評價認為瓊脂每人每日每公斤體重允許攝入不加限制，所以瓊脂是安全的、不加限制使用的食品添加劑。
[0003]瓊脂所具有凝膠化特性不但已被各種食品生產所利用，而且在微生物培養基上也得到了廣泛的應用。目前市售的瓊脂培養基主要應用于微生物的培養、分離或鑒定，主要是通過加熱煮沸分裝的方式制備，長時間的加熱煮沸過程中瓊脂如果攪拌不均勻極容易糊底，并且煮沸后分裝的方式也很難避免細菌的污染。

【發明內容】

[0004]針對現有技術存在的缺陷，本發明所要解決的技術問題是提供一種新型的瓊脂培養基，主要用于紅藻組織培養過程中愈傷組織的誘導，先分裝瓊脂再高壓滅菌的方式不但可以避免瓊脂受熱不均造成糊底的現象發生，也可以避免分裝時的二次污染。
[0005]為了解決上述技術問題，本發明的技術方案如下:一種瓊脂培養基，其組成成份及質量數為:每升PES培養基中:蔗糖20~40g、瓊脂5~10g、抗壞血酸5~10mg、維生素E10 ~15mg、IAAl ~4mg、ZTl ~4mg。
[0006]優選的，所述的培養基其組成成份及質量數為:每升PES培養基中:蔗糖25g、瓊脂6g、抗壞血酸 8mg、維生素 E llmg、IAA 2mg、ZT lmg。
[0007]優選的，所述培養基用于紅藻組織培養中愈傷組織的誘導。
[0008]優選的，所述的紅藻為石花菜、凝花菜、江蘺、龍須菜、角叉菜、蜈蚣藻中的任意一種。
[0009]本發明還提供一種瓊脂培養基的制作方法，包括如下步驟:將25g蔗糖、Smg抗壞血酸、Ilmg維生素E、2mg IAA和ImgZT溶解于IL PES培養基中，將其pH調為7.2~7.8、鹽度調為28~30后分裝于數個三口錐形瓶中，將6g瓊脂平均添加到每一個錐形瓶中，封口膜封口后于高壓鍋中高溫高壓滅菌20min，將錐形瓶取出置于平面冷卻至瓊脂凝固即可。
[0010]本發明所述的PES培養液主要用于紅藻培養，其中添加的IAA和ZT配合使用，可以有效的促進紅藻外植體脫分化形成愈傷組織。
[0011]本發明所述的制備方法，采用先分裝瓊脂再高壓滅菌的方式，高壓滅菌鍋可以快速的升溫升壓從而可以避免瓊脂受熱不均造成糊底的現象發生，也可以避免分裝時的二次污染。
【具體實施方式】
[0012]以下通過實施例進一步闡述本發明的有益效果:
實施例1:
一種瓊脂培養基，其組成成份及質量數為:每升PES培養基中:蔗糖25g、瓊脂6g、抗壞血酸 8mg、維生素 E llmg、IAA 2mg、ZT lmg。
[0013]將蔗糖、抗壞血酸、維生素E、IAA和ZT溶解于IL PES培養基中，將其pH調為7.2~7.8、鹽度調為28~30后分裝于20個三口錐形瓶中，將6g瓊脂平均添加到每一個錐形瓶中，每個錐形瓶中添加0.3g瓊脂，封口膜封口后于高壓鍋中高溫高壓滅菌20min，將錐形瓶取出置于平面冷卻至瓊脂凝固即可。 [0014]實施例2:
一種瓊脂培養基，其組成成份及質量數為:每升PES培養基中:蔗糖20g、瓊脂5g、抗壞血酸 5mg、維生素 E IOmg、IAA lmg、ZT lmg。
[0015]將蔗糖、抗壞血酸、維生素E、IAA和ZT溶解于IL PES培養基中，將其pH調為7.2~7.8、鹽度調為28~30后分裝于20個三口錐形瓶中，將5g瓊脂平均添加到每一個錐形瓶中，每個錐形瓶中添加0.25g瓊脂，封口膜封口后于高壓鍋中高溫高壓滅菌20min，將錐形瓶取出置于平面冷卻至瓊脂凝固即可。
[0016]實施例3:
一種瓊脂培養基，其組成成份及質量數為:每升PES培養基中:蔗糖40g、瓊脂10g、抗壞血酸 8mg、維生素 E 15mg、IAA 4mg、ZT 4mg。
[0017]將蔗糖、抗壞血酸、維生素E、IAA和ZT溶解于IL PES培養基中，將其pH調為
7.2~7.8、鹽度調為28~30后分裝于20個三口錐形瓶中，將IOg瓊脂平均添加到每一個錐形瓶中，每個錐形瓶中添加0.5g瓊脂，封口膜封口后于高壓鍋中高溫高壓滅菌20min，將錐形瓶取出置于平面冷卻至瓊脂凝固即可。
[0018]實施例4:
一種瓊脂培養基，其組成成份及質量數為:每升PES培養基中:蔗糖30g、瓊脂7g、抗壞血酸 6mg、維生素 E 12mg、IAA 3mg、ZT 2mg。
[0019]將蔗糖、抗壞血酸、維生素E、IAA和ZT溶解于IL PES培養基中，將其pH調為
7.2~7.8、鹽度調為28~30后分裝于20個三口錐形瓶中，將7g瓊脂平均添加到每一個錐形瓶中，每個錐形瓶中添加0.35g瓊脂，封口膜封口后于高壓鍋中高溫高壓滅菌20min，將錐形瓶取出置于平面冷卻至瓊脂凝固即。
[0020]檢測愈傷組織誘導效率的實驗:
(1)配置普通培養基:將ILPES培養液中添加7g瓊脂，將其pH調為7.2~7.8、鹽度調為28~30后加熱至煮沸，煮沸過程中不斷攪拌避免瓊脂糊底，加熱煮沸后帶瓊脂完全溶解后，于無菌操作臺中分裝于20個錐形瓶中，封口膜封口后待瓊脂冷卻；
(2)接種:將石花菜、凝花菜、江蘺、龍須菜、角叉菜、蜈蚣藻的葉狀體清洗干凈后，于2%濃度的碘化鉀溶液中浸泡2-5min后清洗干凈，將外植體切成0.2-0.5cm的切段，接種于普通培養基和實施例1-4所得的培養基中，每個培養基接種5塊，每個品種每種培養基接種100塊，于溫度18~20°C、光強1000~3000LX、光周期8~12h下培養至愈傷組織形成；
(3)實驗結果如表1所示:
表1:不同種類培養基對紅藻愈傷組織誘導率的影響
【權利要求】
1.一種瓊脂培養基，其特征在于，其組成成份及質量數為:每升PES培養基中:蔗糖20~40g、瓊脂5~10g、抗壞血酸5~10mg、維生素E 10~15mg、IAAl~4mg、ZTl~4mg。
2.根據權利要求1所述的瓊脂培養基，其特征在于，其組成成份及質量數為:每升PES培養基中:鹿糖25g、瓊脂6g、抗壞血酸8mg、維生素E Ilmg、IAA 2mg、ZT lmg。
3.根據權利要求1所述的瓊脂培養基，其特征在于，所述培養基用于紅藻組織培養中愈傷組織的誘導。
4.據權利要求1或權利要求3所述的瓊脂培養基，其特征在于，所述的紅藻為石花菜、凝花菜、江蘺、龍須菜、角叉菜、蜈蚣藻中的任意一種。
5.一種瓊脂培養基的制作方法，其特征在于，包括如下步驟:將25g蔗糖、Smg抗壞血酸、Ilmg維生素E、2mg IAA和lmg ZT溶解于IL PES培養基中，將其pH調為7.2~7.8、鹽度調為28~30后分裝于數個三口錐形瓶中，將6g瓊脂平均添加到每一個錐形瓶中，封口膜封口后于高壓鍋中高溫高壓滅菌 20min，將錐形瓶取出置于平面冷卻至瓊脂凝固即可。
【文檔編號】C12N5/04GK103667172SQ201310555416
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年11月11日 優先權日:2013年11月11日
【發明者】蘇建麗 申請人:青島文創科技有限公司