一種甲苯胺藍-dna酶瓊脂培養(yǎng)基及其應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明為微生物領域，特別涉及一種甲苯胺藍-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的組分包括15.5g/L7.5％氯化鈉肉湯、0.5g/LDNA、1.5g/L氯化鈣、6.3g/L三羥甲基氨基甲烷、0.088g/L甲苯胺藍，pH值為8.9-9.1。所述的甲苯胺藍-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基，所述7.5％氯化鈉肉湯為每升7.5％氯化鈉肉湯中含有胰蛋白胨10.0g、牛肉粉5.0g、氯化鈉75.0g、磷酸氫二鉀2.0g。本發(fā)明培養(yǎng)基組方簡單，制備操作方便，成本低，利于推廣應用；菌生長迅速，變異率低；便于觀察，分析。
【專利說明】-種甲苯胺藍-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基及其應用

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明為微生物領域，特別涉及一種甲苯胺藍-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基及其應用。

【背景技術】
[0002] 金黃色葡萄球菌，也稱"金葡菌"，細胞壁含90%的肽聚糖和10%的磷壁酸。其肽 聚糖的網狀結構比革蘭氏陰性菌致密，染色時結晶紫附著后不被酒精脫色故而呈現(xiàn)紫色， 相反，陰性菌的細胞壁肽聚糖層薄、交聯(lián)度差，脂類含量高，所以紫色復合物被酒精沖掉然 后附著了沙黃的紅色。金黃色葡萄球菌與青霉素的發(fā)現(xiàn)有很大的淵源。當年弗萊明就是在 他的金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)皿中發(fā)現(xiàn)有些球菌被殺死了，于是發(fā)現(xiàn)了青霉素。而研究也表 明青霉素只對以金黃色葡萄球菌為代表的革蘭氏陽性菌作用明顯。這也是由肽聚糖層的厚 度和結構造成的。新出現(xiàn)的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌，被稱作超級細菌，幾乎能抵抗人類 所有的藥物，但是萬古霉素可以對付它。典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8 μ m左右， 顯微鏡下排列成葡萄串狀。
[0003] 金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛，大多數(shù)無莢膜，革蘭氏染色陽性。金黃色葡萄球菌 營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好，需氧或兼性厭氧，最適生長溫度37°c，最適生長 pH7. 4,干燥環(huán)境下可存活數(shù)周。平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起，直徑0. 5?I. 0mm。血平 板菌落周圍形成透明的溶血環(huán)。金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在10?15% NaCl肉 湯中生長。可分解葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖，產酸不產氣。甲基紅反應陽性，VP反應弱陽 性。許多菌株可分解精氨酸，水解尿素，還原硝酸鹽，液化明膠。金黃色葡萄球菌具有較強 的抵抗力，對磺胺類藥物、青霉素、紅霉素、土霉素、新霉素等抗生素敏感，但易產生耐藥性， 原因是由于這些菌株產生青霉素酶等。對堿性染料敏感，十萬分之一的龍膽紫液即可抑制 生長。
[0004] 培養(yǎng)基（Medium)是供微生物、植物組織和動物組織生長和維持用的人工配制的 養(yǎng)料，一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽（包括微量元素）以及維生素和水等。有 的培養(yǎng)基還含有抗菌素和色素，用于單種微生物培養(yǎng)和鑒定。
[0005] 培養(yǎng)基（Medium)是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料， 一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽（包括微量元素）以及生長素和水等。有的培養(yǎng) 基還含有抗菌素、色素、激素和血清。
[0006] 培養(yǎng)基由于配制的原料不同，使用要求不同，而貯存保管方面也稍有不同。一般培 養(yǎng)基在受熱、吸潮后，易被細菌污染或分解變質，因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保 存。對一些需嚴格滅菌的培養(yǎng)基（如組織培養(yǎng)基），較長時間的貯存，必須放在3?6°C的 冰箱內。由于液體培養(yǎng)基不易長期保管，均改制成粉末。
[0007] 目前還不能完全從生化反應的基本原理來推斷和計算出適合某一菌種的培養(yǎng)基 配方，只能用生物化學、細胞生物學、微生物學等的基本理論，參照前人所使用的較適合某 一類菌種的經驗配方，再結合所用菌種和產品的特性，采用搖瓶、玻璃罐等小型發(fā)酵設備， 按照一定的實驗設計和實驗方法選擇出較為適合的培養(yǎng)基。
[0008] 培養(yǎng)基設計的基本步驟是：
[0009] 根據(jù)前人的經驗和培養(yǎng)基成分確定時一些必須考慮的問題，初步確定可能的培養(yǎng) 基成分通過單因子實驗最終確定出最為適宜的培養(yǎng)基成分當培養(yǎng)基成分確定后，剩下的問 題就是各成分最適的濃度，由于培養(yǎng)基成分很多，為減少實驗次數(shù)常采用一些合理的實驗 設計方法。這些實驗往往基于多因子實驗，包含均勻設計、正交實驗設計、響應面分析等。


【發(fā)明內容】

[0010] 本發(fā)明克服現(xiàn)有技術中的不足，提供一種甲苯胺藍-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基及其應用。
[0011] 本發(fā)明運用生物化學，微生物學及無機、有機、分析化學和熒光技術的原理，對不 同的碳源、氮源、無機鹽類、維生素、生長促進劑等諸類營養(yǎng)組分的組合進行篩選，對培養(yǎng)基 的PH值、離子強度、氧化-還原電勢、表面張力、氣體環(huán)境等物化因子進行了比較，研究出了 本發(fā)明的培養(yǎng)基。
[0012] 本發(fā)明所采用的技術方案為：
[0013] 一種甲苯胺藍-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的組分包括15. 5g/L7. 5 %氯化鈉 肉湯、0· 5g/LDNA、l. 5g/L氯化鈣、6. 3g/L三羥甲基氨基甲燒、0.088g/L甲苯胺藍，pH值為 8. 9-9. 1 〇
[0014] 在以上方案的基礎上，所述的甲苯胺藍-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基，所述7. 5%氯化鈉肉 湯為每升7. 5%氯化鈉肉湯中含有胰蛋白胨10. 0g、牛肉粉5. 0g、氯化鈉75. 0g、磷酸氫二鉀 2. Og0
[0015] 本發(fā)明還公開了所述的甲苯胺藍-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基的應用，用于核糖核酸酶檢 測。
[0016] 具有脫氧核糖核酸酶的細菌分解培養(yǎng)基中的脫氧核糖核酸（DNA)，使DNA長鏈水 解成數(shù)個單核苷酸的寡核苷酸短鏈，使指示劑甲苯胺藍作用變成粉紅色；氯化鈣提供陽離 子作為激活劑；氯化鈉維持均衡的滲透壓；三羥甲基氨基甲烷為緩沖劑；瓊脂為培養(yǎng)基的 凝固劑。
[0017] 稱取本品27. 58g，加熱溶解于IOOOml蒸餾水中，分裝三角瓶。
[0018] 如立即使用可不需滅菌。如不立即使用，121°C高壓滅菌15分鐘。
[0019] 已滅菌的培養(yǎng)基在室溫可存放4個月無變化，并經數(shù)次熔化后仍可用。
[0020] 本發(fā)明的有益效果：
[0021] 1、培養(yǎng)基組方簡單，制備操作方便，成本低，利于推廣應用；
[0022] 2、菌生長迅速，變異率低；
[0023] 3、便于觀察，分析。

【具體實施方式】
[0024] 實施例1 :
[0025] -種甲苯胺藍-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的組分包括15. 5g/L7. 5 %氯化鈉 肉湯、0· 5g/LDNA、l. 5g/L氯化鈣、6. 3g/L三羥甲基氨基甲燒、0.088g/L甲苯胺藍，pH值為 8. 9-9. 1 〇
[0026] 所述的甲苯胺藍-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基，所述7. 5%氯化鈉肉湯為每升7. 5%氯化鈉 肉湯中含有胰蛋白胨10. 〇g、牛肉粉5. Og、氯化鈉75. Og、磷酸氫二鉀2. Og。
[0027] 具有脫氧核糖核酸酶的細菌分解培養(yǎng)基中的脫氧核糖核酸（DNA)，使DNA長鏈水 解成數(shù)個單核苷酸的寡核苷酸短鏈，使指示劑甲苯胺藍作用變成粉紅色；氯化鈣提供陽離 子作為激活劑；氯化鈉維持均衡的滲透壓；三羥甲基氨基甲烷為緩沖劑；瓊脂為培養(yǎng)基的 凝固劑。
[0028] 稱取本品27. 58g，加熱溶解于IOOOml蒸餾水中，分裝三角瓶。
[0029] 如立即使用可不需滅菌。如不立即使用，121°C高壓滅菌15分鐘。
[0030] 已滅菌的培養(yǎng)基在室溫可存放4個月無變化，并經數(shù)次熔化后仍可用。
[0031] 35°C培養(yǎng)4h結果如下：
[0032]

【權利要求】
1. 一種甲苯胺藍-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基，其特征在于所述培養(yǎng)基的組分包括15. 5g/ 17.5%氯化鈉肉湯、0.58/0)嫩、1.58/1氯化鈣、6.3 8/1三羥甲基氨基甲烷、0.0888/1甲苯 胺藍，pH值為8. 9-9. 1。
2. 根據(jù)權利要求1所述的甲苯胺藍-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基，其特征在于所述7. 5 %氯化鈉 肉湯為每升7. 5%氯化鈉肉湯中含有胰蛋白胨10. Og、牛肉粉5. Og、氯化鈉75. Og、磷酸氫二 鉀 2. 0g。
3. -種根據(jù)權利要求1所述的甲苯胺藍-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基的應用，其特征在于用于核 糖核酸酶檢測。
【文檔編號】C12Q1/14GK104313122SQ201410505132
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年9月28日 優(yōu)先權日:2014年9月28日
【發(fā)明者】高玉成, 劉永祥 申請人:青島康合偉業(yè)商貿有限公司