一種嗜酸乳桿菌及其應用的制作方法
【專利摘要】本發明提供了一株嗜酸乳桿菌，該菌株命名為嗜酸乳桿菌（Lactobacillus?acidophilus）La-P6，已于2013年10月14日保藏于中國武漢武漢大學的中國典型培養物保藏管理中心，其保藏編號為CCTCC?NO:M2013474。本發明的嗜酸乳桿菌對大腸桿菌、沙門氏菌和金黃色葡萄球菌具有很強的抑制能力，并且能夠耐受一定濃度范圍內的多種抗生素，可用作養殖動物的飲水添加劑或飼料添加劑。通過在飼料或飲水中添加嗜酸乳桿菌La-P6，能明顯提高斷奶仔豬的日增重，并且降低了料肉比，促進養殖動物的健康生長。
【專利說明】一種嗜酸乳桿菌及其應用
【技術領域】
[0001]本發明屬于微生物篩選應用【技術領域】，具體涉及一種嗜酸乳桿菌及其應用。
【背景技術】
[0002]在養殖【技術領域】中，抗生素的使用能夠有效地預防動物疾病，降低動物死亡率，減少肉品污染的風險。但是，其在動物飼料中的濫用造成動物性食品抗生素殘留超標，使動物和人體存在對抗生素產生耐藥性的風險。因此，抗生素在飼料中的應用就成為一個有爭議的話題。歐盟自2006年起將全面禁止食品動物食用抗生素促生長飼料添加劑，而且，抗生素對動物和人類的健康造成的風險也已引起我國農業部門的重視。加強管理養殖環節抗生素的合理使用和畜禽食品中抗生素殘留超標，成為食品安全領域關注的熱點。
[0003]為了避免抗生素使用存在的風險，實現對飼料中抗生素的部分或全部替代，益生菌制劑的研究成為當前畜禽養殖的熱點。
[0004]益生菌是動物腸道內的正常菌群，對動物體沒有毒副作用。其附著在動物腸道內，一方面產生一些抑制病原菌生長的物質，另外在生長代謝過程中，可以分泌多種酶類，促進動物對飼料的消化吸收，提高料肉比，促進動物健康生長。因此益生菌制劑成為國內外業界研究的熱點。

【發明內容】

[0005]本發明的目的是提供一株嗜酸乳桿菌及其在畜禽養殖中的應用，所述嗜酸乳桿菌篩選自健康仔豬的新鮮糞樣，具有很強的抑制大腸桿菌、沙門氏菌和金黃色葡萄球菌的能力，并且能與絕大部分抗生素在其安全用藥范圍內`一起添加到畜禽飼料或飲水中使用，從而減少抗生素的使用量。
[0006]本發明一方面提供了一株嗜酸乳桿菌，該菌株命名為嗜酸乳桿菌La_P6(Lactobacillus acidophilus La_P6),已于2013年10月14日保藏于中國武漢武漢大學的中國典型培養物保藏中心，其保藏編號為CCTCC N0:M2013474o
[0007]本發明的嗜酸乳桿菌用作飼料添加劑。
[0008]本發明另一個方面提供了包含上述嗜酸乳桿菌的微生物制劑。
[0009]上述微生物制劑為嗜酸乳桿菌發酵菌液，活菌量為108_109CFU/mL。
[0010]上述微生物制劑可用作飼料添加劑，優選用作飲水添加劑。
[0011]本發明的嗜酸乳桿菌對大腸桿菌、沙門氏菌和金黃色葡萄球菌具有很強的抑制能力，并且能夠耐受一定濃度范圍內的多種抗生素，可用作養殖動物的飲水添加劑或飼料添加劑。通過在飼料或飲水中添加嗜酸乳桿菌La_P6，能明顯提高斷奶仔豬的日增重，并且降低了料肉比，促進養殖動物的健康生長。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0012]圖1:本發明的嗜酸乳桿菌La_P6體外對抗生素的敏感性實驗。【具體實施方式】
[0013]實施例1嗜酸乳桿菌La_P6分離篩選及鑒定:
[0014]1、乳酸菌初篩
[0015]收集青島市平度養殖場健康仔豬新鮮糞樣8份，分別稱取5g加入45mL無菌水，制備成菌懸液，涂布于加0.5%碳酸鈣的MRS平板上,37°C培養48h,分離培養有透明圈的菌株，獲得56株乳酸菌。
[0016]2、抑菌型乳酸菌篩選
[0017]I)乳酸菌液制備:將初篩得到的56株乳酸菌接種于MRS液體培養基中，37°C靜置培養48h ；
[0018]2)致病菌菌液制備:大腸桿菌(購自美國模式培養物集存庫，菌株編號為ATCC25922)、沙門氏菌(購自美國模式培養物集存庫，菌株編號為ATCC14028)和金黃色葡萄球菌(購自美國模式培養物集存庫，菌株編號為ATCC6538)，將菌種接種于營養肉湯，37°C搖床培養過夜；
[0019]3)抑菌實驗一雙層平板，牛津杯法:每5mL滅菌營養瓊脂培養基(50°C左右)加100 μ L致病菌菌液(菌量IO6數量級)，混勻后傾倒至營養瓊脂平板做成雙層平板，凝固后在培養基上放置牛津杯，向牛津杯中添加200 μ L培養好的乳酸菌菌液,待菌液擴散后放入37 °C培養箱中培養20h，觀察抑菌圈直徑；
[0020]選擇抑菌圈明顯的菌株作為待選菌株，進行抗生素耐受篩選。經過兩次篩選，最終篩選得到I株對大腸桿菌(ATCC25922)、沙門氏菌(ATCC14028)，金黃色葡萄球菌(ATCC6538)生長抑制作用最明`顯的菌株。
[0021]3、菌株鑒定
[0022]采用分子生物學的方法對篩選得到的菌株進行鑒定，測得其16s rDNA序列，在GenBank核酸數據庫中進行blast比對,通過比對確認其為嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus),命名為嗜酸乳桿菌 La_P6 (Lactobacillus acidophilus La_P6),并于 2013年10月14日保藏于中國武漢武漢大學的中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCCN0:M2013474。
[0023]實施例2:嗜酸乳桿菌La_P6抑菌實驗
[0024]I)乳酸菌液制備:將嗜酸乳桿菌La_P6接種于MRS液體培養基中，37°C靜置培養48h ；
[0025]2)致病菌菌液制備:大腸桿菌(ATCC25922)、沙門氏菌(ATCC14028)，金黃色葡萄球菌(ATCC6538 )，將菌種接種于營養肉湯，37 0C搖床培養過夜；
[0026]3)抑菌實驗一雙層平板，牛津杯法:每5mL滅菌營養瓊脂培養基(50°C左右)加100 μ L致病菌菌液(菌量IO6數量級)，混勻后傾倒至營養瓊脂平板做成雙層平板，凝固后在培養基上放置牛津杯，向牛津杯中添加200 μ L培養好的嗜酸乳桿菌La_P6菌液,待菌液擴散后放入37 °C培養箱中培養20h，觀察抑菌圈直徑。
[0027]嗜酸乳桿菌La_P6對致病菌的抑制作用如下表所示:
[0028]
【權利要求】
1.一株嗜酸乳桿菌，其特征在于，所述的嗜酸乳桿菌的保藏編號為CCTCCN0:M2013474。
2.權利要求1所述的嗜酸乳桿菌在制備飼料添加劑中的應用。
3.—種微生物制劑，所述微生物制劑包含有權利要求1所述的嗜酸乳桿菌。
4.如權利要求3所述的微生物制劑，為嗜酸乳桿菌發酵菌液，其活菌量為IO8-1O9CFU/mLo
5.權利 要求3所述的微生物制劑作為飼料添加劑的應用。
6.如權利要求5所述的應用，其特征在于所述的飼料添加劑為飲水添加劑。
【文檔編號】C12R1/23GK103555634SQ201310557621
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年11月11日 優先權日:2013年11月11日
【發明者】陳琳, 甄麗, 張霞 申請人:山東康地恩生物科技有限公司, 山東蔚藍生物科技有限公司