獲得干細胞及其數據的方法
【專利摘要】本發明提供一種獲得干細胞數據的方法,其包括:(a)處理從一個體獲得的一組織樣本,以獲得一測試樣本;(b)計算該測試樣本的第一部分中第一群顆粒的數量,進而獲得第一數據;(c)計算該測試樣本的第二部分中第二群顆粒里的一種干細胞的數量,進而獲得第二數據;以及(d)根據該第一數據和該第二數據,獲得第三數據。
【專利說明】獲得干細胞及其數據的方法
【技術領域】
[0001] 本發明是有關一種獲得細胞及其資料的方法,尤指一種獲得干細胞及其數據的方 法。
【背景技術】
[0002] 隨著干細胞研究的發展,干細胞已經被視為是預防醫學的先趨,再加上近年來相 關產業也加速成長,突顯人們對于干細胞在醫療應用上的需求。由于干細胞負責體內細胞 的修復和更新,所以干細胞具有維持身體器官與組織健康的功能。因此,干細胞可以視為是 維持整體健康的決定性因素,并藉由干細胞開啟審視健康的新窗口。
【發明內容】
[0003] 本發明主要目的,在于提供多種方法,其是先培養、活化(或催化)、調動、刺激、生 成或增加人或動物體內的干細胞(如多功能干細胞),然后從人或動物的周邊血液中獲得、 收集或收獲干細胞。
[0004] 本發明另一目的,是在提供多種獲得干細胞數據(如某種干細胞在取自人或動物 的組織樣本中每單位體積的數量)的方法。
[0005] 為達到上述目的,本發明提供一種獲得干細胞的方法,其包括以下步驟:(1)讓一 個體(如人或動物)進行或接受一行為;(2)在該個體進行或接受該行為之后,使該個體 等待一段預定時間;(3)在該個體等待該段預定時間之后,從該個體取得一組織樣本;以及 (4)從該組織樣本收集復數個干細胞。該行為可包括服用一種草藥或是一種含有褐藻糖膠 的物質。該段預定時間可以是介于30分鐘到2小時之間、介于1小時到12小時之間或是 介于12小時到36小時之間。該組織樣本可包括該個體的周邊血液。該些干細胞可包括復 數個多功能干細胞(例如尺寸介于〇. 1微米至6微米之間的CD9(+),CD349(+)細胞、尺寸 介于0. 1微米至6微米之間的⑶349(+)細胞、尺寸介于0. 1微米至6微米之間的Lgr5(+) 細胞、尺寸介于〇. 1微米至6微米之間的CD9(-),SSEA4(+)細胞)。上述獲得干細胞的方法 可以還包括,在收集該些干細胞之后,將該些干細胞儲存在溫度低于攝氏0度的環境中。該 些干細胞可以被用在植牙手術、整形手術、癌癥治療、組織修復治療、膝半月板損傷治療或 關節炎治療。
[0006] 為達到上述目的,本發明提供一種獲得干細胞數據的方法,其包括以下步驟:(1) 處理從一個體(如人或動物)獲得的一組織樣本,以獲得一測試樣本;(2)使用血球計數 器(hemocytometer)計算該測試樣本的第一部分中第一群顆粒的數量,進而獲得第一數 據;(3)使用流式細胞儀(flow cytometer)計算該測試樣本的第二部分中第二群顆粒里 的一種干細胞的數量,進而獲得第二數據;以及(4)根據該第一數據和該第二數據,獲得第 三數據。該組織樣本可包括該個體的周邊血液。該第一群顆粒的尺寸和該第二群顆粒的 尺寸是大于或實質上等于一門坎尺寸(threshold size),該門坎尺寸可以是1微米。該 第二群顆粒可包括復數個白血球、復數個紅血球、復數個血小板以及/或是復數個粒細胞 (granulocyte)。該種干細胞可包括一種多潛能干細胞或是一種多功能干細胞(如尺寸介 于0. 1微米至6微米之間的⑶9 (+),⑶349 (+)細胞、尺寸介于0. 1微米至6微米之間的 ⑶349(+)細胞、尺寸介于0. 1微米至6微米之間的Lgr5(+)細胞、尺寸介于0. 1微米至6微 米之間的CD9(-),SSEA4(+)細胞)。該第一數據可包括該第一群顆粒在該測試樣本中每單 位體積的數量。該第二數據可包括該種干細胞的數量占該第二群顆粒的數量的百分比。該 第三數據可包括該種干細胞在該組織樣本中每單位體積的數量。
[0007] 為達到上述目的,本發明提供一種獲得干細胞數據的方法,其包括下列步驟:(1) 處理從一個體(如人或動物)獲得的一組織樣本,以獲得一測試樣本;(2)計算該測試樣本 的第一部分中第一群顆粒的數量,進而獲得第一數據;(3)計算該測試樣本的第二部分中 第二群顆粒里的一種干細胞的數量,進而獲得第二數據;以及(4)根據該第一數據和該第 二數據,獲得第三數據。該組織樣本可包括該個體的周邊血液。該第一群顆粒的尺寸和該 第二群顆粒的尺寸是大于或實質上等于一門坎尺寸,該門坎尺寸可以是1微米。該第二群 顆粒可包括復數個白血球、復數個紅血球、復數個血小板以及/或是復數個粒細胞。該種干 細胞可包括一種多潛能干細胞或是一種多功能干細胞(如尺寸介于〇. 1微米至6微米之間 的⑶9 (+),⑶349 (+)細胞、尺寸介于0. 1微米至6微米之間的⑶349 (+)細胞、尺寸介于0. 1 微米至6微米之間的Lgr5(+)細胞、尺寸介于0. 1微米至6微米之間的⑶9(-), SSEA4(+) 細胞)。該第一數據可包括該第一群顆粒在該測試樣本中每單位體積的數量。該第二數據 可包括該種干細胞數量占該第二群顆粒數量的百分比。該第三數據可包括該種干細胞在該 組織樣本中每單位體積的數量。上述獲得干細胞數據的方法可以還包括,使用血球計數器 進行步驟(2),以及使用流式細胞儀進行步驟(3)。
[0008] 現將經由對說明性實施例、隨附圖式及申請專利范圍的以下詳細描述的評述,使 本發明以及其他組件、步驟、特征、效益及優勢變得明朗。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0009] 圖1為純化程序的流程示意圖。
[0010] 圖2為純化程序的流程示意圖。
[0011] 圖3為純化程序的流程不意圖。
[0012] 圖4為純化程序的流程示意圖。
[0013] 圖5為純化程序的流程示意圖。
[0014] 圖6為純化程序的流程示意圖。
[0015] 圖7A為根據本發明中的一個實施例所繪示一種從一個體的一組織樣本中獲得、 收集或收獲大量干細胞的方法的流程圖。
[0016] 圖7B為根據本發明中的一個實施例所繪示一種發現或偵測一種或多種新種類干 細胞的方法的流程圖。
[0017] 圖7C為根據本發明中的一個實施例所繪示一種確認、決定或評估一種或多種行 為或刺激對于治愈或治療患有一種特定疾病的一個體的效用的方法的流程圖。
[0018] 圖8A至圖8F為三位人類受試者在口服30顆褐藻糖膠補充品之前與之后的干細 胞資料。
[0019] 圖9為根據本發明中的一個實施例所繪示一種獲得人體干細胞數據的方法的流 程圖。
[0020] 圖10繪示用于流式細胞儀的前向散射系數/側向散射系數圖。
[0021] 圖11為一褐藻糖膠補充品的內容/成分信息。
[0022] 圖12為褐藻糖膠的部分分子結構。
[0023] 圖13為根據本發明中的一個實施例所繪示一種獲得個體干細胞數據的方法的流 程圖。
[0024] 圖14A至圖14C為根據本發明中的一個實施例所繪示一種用于獲得干細胞數據的 測量或分析方法的流程圖。
[0025] 圖15繪示一血球計數器的一微小方格圖案(microscopic grid)。
[0026] 圖16繪示用于流式細胞儀的前向散射系數/側向散射系數圖。
[0027] 圖17A為一位人類受試者在食用或攝取褐藻糖膠補充品之后第1. 5小時的干細胞 資料。
[0028] 圖17B為一流式細胞儀的一熒光分布圖,其顯示出在細胞核/細胞質之比為較高 的區域中細胞的熒光光強度分布。
[0029] 圖18為根據本發明中的一個實施例所繪示一種獲得一實驗組參與者在四個特定 時間點的干細胞數據的方法的流程圖。
[0030] 圖19為根據本發明中的一個實施例所繪示一種獲得一對照組參者在四個特定時 間點的干細胞數據的方法的流程圖。
[0031] 圖20A至圖20J為五位人類受試者在口服30顆褐藻糖膠補充品之前與之后的干 細胞資料。
[0032] 圖20K與圖20L為一位人類受試者在沒有口服30顆褐藻糖膠補充品之前與之后 的干細胞資料。
[0033] 符號說明
[0034] 10 收集袋
[0035] 11 過濾器
[0036] 12a 試管
[0037] 12b 試管
[0038] 12c 試管
[0039] 13 離心機
[0040] 14a 試驗樣本
[0041] 14b 試驗樣本
[0042] 14c 試驗樣本
[0043] 15a 分析儀器
[0044] 15b 分析儀器
[0045] 16 紅血球分解液
[0046] 19 貯存器
[0047] 20a 試管
[0048] 20b 試管
[0049] 20c 試管
[0050] 21a 試驗樣本
[0051] 21b 試驗樣本
[0052] 21c 試驗樣本
[0053] 22 紅血球分解液
[0054] 1-20 步驟
[0055] 21-43 步驟
[0056] 49-59 步驟
[0057] 61-70 步驟
[0058] 77 垂直線
[0059] 81 垂直虛線
[0060] 82 水平虛線
[0061] 100a 1毫米的正方形
[0062] 100b 1毫米的正方形
[0063] 100c 1毫米的正方形
[0064] 100d 1毫米的正方形
[0065] 101-104 步驟
[0066] 雖然在圖式中已描繪某些實施例,但本領域技術人應了解,所描繪的實施例為說 明性的,且可在本發明的范疇內構想并實施彼等所示實施例的變化以及本文所述的其他實 施例。
【具體實施方式】
[0067]圖式揭示本發明的說明性實施例。其并未闡述所有實施例。可另外或替代使用其 他實施例。為節省空間或更有效地說明,可省略顯而易見或不必要的細節。相反,可實施一 些實施例而不揭示所有細節。當相同數字或標號出現在不同圖式中時,其是指相同或類似 組件或步驟。
[0068] 當以下描述連同隨附圖式一起閱讀時,可更充分地理解本發明的態樣,該等隨附 圖式的性質應視為說明性而非限制性的。該等圖式未必按比例繪制,而是強調本發明的原 理。
[0069] 以下將先介紹本發明的各種定義與描述,然后再詳細說明本發明的各種實施例。
[0070] 尺寸(Z)的定義:
[0071] 在本發明中,所有后續段落提及的尺寸(Z)是用于描述細胞(例如干細胞或生物 細胞)的大小。尺寸(Z)可以(但不限定)被描述為或是定義為:(1)細胞生物學領域或 干細胞領域對于細胞的大小或代表長度的傳統定義、(2)細胞的直徑(特別是當細胞的形 狀實質上為球體時)、(3)細胞的長軸長度(特別是當細胞的形狀實質上為橢圓體時)、(4) 細胞的寬度(當細胞的形狀近似于正方體時)、(5)細胞的長度(當細胞的形狀近似于長方 體時)或是(6)細胞的最大橫斷面或橫向尺寸。藉由光學顯微鏡或電子顯微鏡(例如掃描 式電子顯微鏡)獲得的細胞影像或是藉由流式細胞儀(flow cytometer)獲得的數據(例 如二維的點、輪廓或是密度圖)是可用于判定或測量尺寸(Z)-不論是直徑、長度、寬度或 是最大橫斷面或橫向尺寸。藉由光學顯微鏡或電子顯微鏡獲得的細胞影像可以是細胞的二 維剖面圖或立體結構。舉例來說,藉由光學顯微鏡或電子顯微鏡(例如掃描式電子顯微鏡) 先獲得一個二維剖面影像,然后通過測量這個二維剖面影像中細胞的最大橫斷面或橫向尺 寸就可以獲得細胞的尺寸(Z)。
[0072] 干細朐定義:
[0073] 干細胞有許多不同的種類,包括多功能干細胞(pluripotent stem cell)、多潛 能干細胞(multipotent stem cell)以及先驅干細胞(progenitor stem cell)。先驅干 細胞也可以稱為專一性干細胞或單能干細胞(unipotent stem cell)。SB-1細胞、SB-2 細胞、類卵裂球干細胞(blastomere-like stem cell,簡稱BLSC)以及極小類胚胎干細 胞(very small embryonic-like stem cell,簡稱VSEL)是屬于多功能干細胞。間質干 細胞(mesenchymal stem cell,簡稱 MSC)、多潛能成體先驅細胞(multipotent adult progenitor cell,簡稱 MAPC)、骨髓多潛能干細胞(bone marrow derived multipotent stem cell,簡稱BMSC)以及多潛能成體干細胞(multipotent adult stem cell,簡稱 MASC)是屬于多潛能干細胞。神經干細胞(neural stem cell)、視網膜干細胞(retina stem cell)、嗅球干細胞(olfactory bulbs stem cell)、上皮干細胞(epidermal stem cell)、腸道干細胞(intestine stem cell)、肌肉干細胞(muscle stem cell)、 胰臟干細胞(pancreatic stem cell)、心臟干細胞(heart stem cell)、肝臟干細胞 (liver stem cell)、腎臟干細胞(kidney stem cell)、內皮干細胞(endothelial stem cell)、脂肪干細胞(adipocyte or adipose-derived stem cell)、成體骨髓多兀性誘 導細胞(marrow-isolated adult multilineage inducible (MIAMI) cell)、前間質干 細胞(pre-mesenchymal stem cell,簡稱 pre-MSC)、多潛能先驅干細胞(multipotent progenitor cells,簡稱 MPP)、譜系限制先驅干細胞(lineage-restricted progenitor cell,簡稱LRP)、共同髓原先驅細胞(common myeloid progenitor cell,簡稱CMP)以及共 同淋巴球先驅細胞(common lymphocyte progenitor cell,簡稱CLP)是屬于先驅干細胞。
[0074] 在后續的段落中,跟隨在細胞(表面)標記后面的符號" + "是表示干細胞可以表達 這種細胞(表面)標記,也就是說流式細胞儀可以藉由某種(特定標記用的)抗體偵測到存 在于干細胞表面的這種細胞(表面)標記。跟隨在細胞(表面)標記后面的符號是表 示干細胞無法表達這種細胞(表面)標記,也就是說這種細胞(表面)標記沒有存在于干 細胞的表面,而且流式細胞儀也無法藉由某種(特定標記用的)抗體偵測到這種細胞(表 面)標記。因此,正號" + "對干細胞而言是指細胞(表面)標記呈現陽性表達(positive expression),而負號對干細胞而言則是指細胞(表面)標記呈現陰性表達(negative expression)〇
[0075] SB-1細胞為含有細胞核的多功能干細胞,而且可以是CD9 (+),CD349 (+)細胞或 CD349(+)細胞。SB-1細胞(例如CD9(+),CD349(+)細胞和CD349(+)細胞)的尺寸(關于 尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義)是小于或等于(但不限定)4微米(micrometer)、 5微米或6微米,例如介于0. 1微米至6微米之間、介于0. 5微米至6微米之間、介于1微 米至6微米之間、介于0. 1微米至5微米之間、介于0. 5微米至5微米之間、介于1微米至 5微米之間、介于0. 1微米至4微米之間、介于0. 5微米至4微米之間或介于1微米至4微 米之間。以⑶9 (+),⑶349(+)細胞為例,SB-1細胞可以表達⑶9和⑶349這兩種細胞(表 面)標記,所以SB-1細胞可用CD9(+)和CD349(+)描述其特征。以CD349(+)細胞為例, SB-1細胞可以表達⑶349這種細胞(表面)標記,所以SB-1細胞可用⑶349 (+)描述其特 征。
[0076] SB-2細胞為含有細胞核的多功能干細胞,而且可以是CD9(_),SSEA4(+)細胞或 Lgr5(+)細胞。SB-2細胞(例如CD9(-),SSEA4(+)細胞和Lgr5(+)細胞)的尺寸(關于 尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義)是小于或等于(但不限定)4微米、5微米或6微 米,例如介于〇. 1微米至6微米之間、介于0. 5微米至6微米之間、介于1微米至6微米之 間、介于0. 1微米至5微米之間、介于0. 5微米至5微米之間、介于1微米至5微米之間、 介于0. 1微米至4微米之間、介于0. 5微米至4微米之間或介于1微米至4微米之間。以 ⑶9(-),SSEA4(+)細胞為例,SB-2細胞可以表達SSEA4這種細胞(表面)標記,但是無法 表達⑶9這種細胞(表面)標記,所以SB-2細胞可用⑶9 (-)和SSEA4 (+)描述其特征。以 Lgr5(+)細胞為例,SB-2細胞可以表達Lgr5這種細胞(表面)標記,所以SB-2細胞可用 Lgr5(+)描述其特征。
[0077] 類卵裂球干細胞(BLSC)為含有細胞核的多功能干細胞,并且可以是CD66e(+)細 胞。CD66e(+)多功能干細胞(也就是類卵裂球干細胞)的尺寸(請參閱尺寸(Z)的定義) 是小于或等于(但不限定)4微米、5微米或6微米,例如介于0. 1微米至6微米之間、介于 0. 5微米至6微米之間、介于1微米至6微米之間、介于0. 1微米至5微米之間、介于0. 5微 米至5微米之間、介于1微米至5微米之間、介于0. 1微米至4微米之間、介于0. 5微米至4 微米之間或介于1微米至4微米之間。類卵裂球干細胞可以表達CD66e這種細胞(表面) 標記,因而可用⑶66e(+)描述其特征。
[0078] 極小類胚胎干細胞(VSEL)為含有細胞核的多功能干細胞,而且可以是 CD133 (+),CD45 (-),Lin (-)細胞或 CXCR4 (+),CD45 (-),Lin (-)細胞。極小類胚胎干細胞(例 如 CD133 (+),CD45 (-),Lin (-)多功能干細胞和 CXCR4 (+),CD45 (-),Lin (-)多功能干細胞) 的尺寸(關于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義)是小于或等于(但不限定)4微米、 5微米或6微米,例如介于0. 1微米至6微米之間、介于0. 5微米至6微米之間、介于1微米 至6微米之間、介于0. 1微米至5微米之間、介于0. 5微米至5微米之間、介于1微米至5 微米之間、介于0. 1微米至4微米之間、介于0. 5微米至4微米之間或介于1微米至4微米 之間。以⑶133(+),⑶45(-),Lin(_)多功能干細胞為例,極小類胚胎干細胞可以表達⑶133 這種細胞(表面)標記,但是無法表達CD45和Lin這兩種細胞(表面)標記,所以極小類 胚胎干細胞可用〇0133(+)、0045(-)和1^11(-)描述其特征。以0乂0?4(+),0045(-),1^11(-) 多功能干細胞為例,極小類胚胎干細胞可以表達CXCR4這種細胞(表面)標記,但是無法表 達⑶45和Lin這兩種細胞(表面)標記,所以極小類胚胎干細胞可用CXCR4(+)、⑶45(-) 和Lin(-)描述其特征。另外,極小類胚胎干細胞略小于紅血球。
[0079] 間質干細胞(mesenchymal stem cell,簡稱MSC)為含有細胞核的多潛能干細 胞,而且可以是⑶13(+)多潛能干細胞、⑶29(+)多潛能干細胞、⑶44(+)多潛能干細胞、 ⑶73(+)多潛能干細胞、⑶90(+)多潛能干細胞或⑶105(+)多潛能干細胞。間質干細胞可以 表達下列一種或多種的細胞(表面)標記:⑶13、⑶29、⑶44、⑶73、⑶90和⑶105。因此, 間質干細胞可以具有下列一種或多種的特征:CD13 (+)、CD29 (+)、CD44 (+)、CD73 (+)、C90 (+) 和 CD105(+)。
[0080] 間質干細胞是由不同的群體所組成,因此具有各種的尺寸及形狀。例如,某些間質 干細胞的尺寸(關于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義)是小于或等于(但不限定)4 微米、5微米或6微米,例如介于0. 1微米至6微米之間、介于0. 5微米至6微米之間、介于 1微米至6微米之間、介于0. 1微米至5微米之間、介于0. 5微米至5微米之間、介于1微米 至5微米之間、介于0. 1微米至4微米之間、介于0. 5微米至4微米之間或介于1微米至4 微米之間。另有某些間質干細胞的尺寸(關于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義)則 是大于6微米、7微米或10微米。
[0081] 造血干細胞(hematopoietic stem cell,簡稱HSC)為含有細胞核的多潛能干細 胞,而且可以是 CD34 (+),cKit (-),CD38 (-),Lin (-)細胞或 CD150 (+),CD244 (-),CD48 (-) 細胞。造血干細胞(例如⑶34⑴,cKit(-),⑶38(-),Lin(_)多潛能干細胞和 CD150(+),CD244(-),CD48(_)多潛能干細胞)的尺寸(關于尺寸的描述可參閱上述尺寸 (Z)的定義)是小于或等于(但不限定)4微米、5微米或6微米,例如介于0. 1微米至6微米 之間、介于〇. 5微米至6微米之間、介于1微米至6微米之間、介于0. 1微米至5微米之間、 介于0. 5微米至5微米之間、介于1微米至5微米之間、介于0. 1微米至4微米之間、介于 0. 5微米至4微米之間或介于1微米至4微米之間。以CD34 (+),cKit (-),CD38 (-),Lin (-) 多潛能干細胞為例,造血干細胞可以表達⑶34這種細胞(表面)標記,但是無法表達cKit、 ⑶38和Lin這三種細胞(表面)標記,所以造血干細胞可用⑶34(+)、cKit(-)、⑶38(-)和 1^11(-)描述其特征。以00150(+),00244(-),0048(-)多潛能干細胞為例,造血干細胞可以 表達⑶150這種細胞(表面)標記,但是無法表達⑶244和⑶48這兩種細胞(表面)標記, 所以造血干細胞可用CD150(+)、CD244(_)和CD48(_)描述其特征。
[0082] 多潛能成體先驅細胞(multipotent adult progenitor cell,簡稱 MAPC)為含有 細胞核的多潛能干細胞,而且可以是⑶13 (+),SSEA1 (+)細胞。⑶13 (+),SSEA1 (+)多潛能干 細胞(也就是多潛能成體先驅細胞)可以表達CD13與SSEA1這兩種細胞(表面)標記。因 此,多潛能成體先驅細胞可用CD13(+)和SSEA1(+)描述其特征。多潛能成體先驅細胞(例 如CD13(+),SSEA1(+)多潛能干細胞)的尺寸(關于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定 義)可以是(但不限定)大于6微米、7微米或10微米,例如介于8微米至15微米之間。
[0083] 骨髓多潛能干細胞(bone marrow derived multipotent stem cell,簡稱 BMSC) 為含有細胞核的多潛能干細胞,而且可以是CD105 (+)多潛能干細胞、CD117 (+)多潛能干細 胞或CD13(+),SSEA3(+)多潛能干細胞。以CD105(+)多潛能干細胞為例,骨髓多潛能干細 胞可以表達⑶105這種細胞(表面)標記,因而可用⑶105(+)描述其特征。以⑶117(+) 多潛能干細胞為例,骨髓多潛能干細胞可以表達CD117這種細胞(表面)標記,因而可 用⑶117(+)描述其特征。以⑶13 (+),SSEA3(+)多潛能干細胞為例,骨髓多潛能干細胞 可以表達⑶13和SSEA3這兩種細胞(表面)標記,因而可用⑶13(+)和SSEA3(+)描述 其特征。骨髓多潛能干細胞(例如CD105(+)多潛能干細胞、CD117(+)多潛能干細胞和 CD13(+),SSEA3(+)多潛能干細胞)的尺寸(關于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義) 可以是(但不限定)大于6微米、7微米或10微米,例如介于8微米至15微米之間。
[0084] 多潛能成體干細胞(multipotent adult stem cell,簡稱MASC)為含有細胞核的 多潛能干細胞,而且可以是0ct4(+)多潛能干細胞、Nanog(+)多潛能干細胞或Rexl(+)多潛 能干細胞。以0ct4(+)多潛能干細胞為例,多潛能成體干細胞可以表達0ct4這種細胞(表 面)標記,因而可用0ct4(+)描述其特征。以Nanog(+)多潛能干細胞為例,多潛能成體干 細胞可以表達Nanog這種細胞(表面)標記,因而可用Nanog(+)描述其特征。以RexI (+) 多潛能干細胞為例,多潛能成體干細胞可以表達RexI這種細胞(表面)標記,因而可用 Rexl(+)描述其特征。多潛能成體干細胞(例如0ct4(+)多潛能干細胞、Nanog(+)多潛能 干細胞和RexI (+)多潛能干細胞)的尺寸(關于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義) 可以是(但不限定)大于6微米、7微米或10微米,例如介于8微米至15微米之間。
[0085] 成體骨髓多兀性誘導(marrow-isolated adult multilineage inducible,簡稱 MIAMI)細胞為含有細胞核的先驅干細胞,而且可以是CD29 (+),CD63 (+),CD81 (+),CD122 (+),⑶164(+)先驅干細胞。成體骨髓多元性誘導細胞可以表達⑶29、⑶63、⑶81、⑶122 和CD164這五種細胞(表面)標記,因而可用CD29(+)、CD63(+)、CD81(+)、CD122(+)和 CD164(+)描述其特征。成體骨髓多元性誘導細胞(例如CD29(+),CD63(+),CD81(+),CD12 2(+),CD164(+)先驅干細胞)的尺寸(關于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義)可以 是(但不限定)大于6微米、7微米或10微米,例如介于8微米至15微米之間。
[0086] 前間質干細胞(pre-mesenchymal stem cell,簡稱pre-MSC)為含有細胞核的先 驅干細胞,而且可以是SSEA1(+)先驅干細胞。前間質干細胞可以表達SSEA1這種細胞(表 面)標記,因而可用SSEA1 (+)描述其特征。前間質干細胞(例如SSEA1 (+)先驅干細胞) 的尺寸(關于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義)可以是(但不限定)大于6微米、7 微米或10微米,例如介于8微米至15微米之間。
[0087] 多潛能先驅干細胞(multipotent progenitor cell,簡稱 MPP)為 含有細胞核的先驅干細胞,而且可以是⑶34⑴,cKit(+),⑶38(-),Lin(_) 細胞或⑶150(-),⑶244(+),⑶48(-)細胞。多潛能先驅干細胞(例如 CD34 (+),cKit (+),CD38 (-),Lin (-)先驅干細胞和 CD150 (-),CD244 (+),CD48 (-)先驅干細 胞)的尺寸(關于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義)是大于(但不限定)6微米、7微 米或10微米,例如介于8微米至15微米之間。以CD34 (+),cKit (+),CD38 (-),Lin (-)先驅 干細胞為例,多潛能先驅干細胞可以表達CD34和cKit這兩種細胞(表面)標記,但是無法 表達⑶38和Lin這兩種細胞(表面)標記,所以多潛能先驅干細胞可用⑶34 (+)、cKit (+)、 CD38 (-)和Lin (-)描述其特征。以CD150 (-),CD244 (+),CD48 (-)先驅干細胞為例,多潛能 先驅干細胞可以表達CD244這種細胞(表面)標記,但是無法表達CD150和CD48這兩種細 胞(表面)標記,所以多潛能先驅干細胞可用CD150(-)、CD244(+)和CD48(_)描述其特征。
[0088] 譜系限制先驅干細胞(lineage-restricted progenitor cell,簡稱 LRP)為含有細胞核的先驅干細胞,而且可以是⑶34(-),cKit(+),⑶38(-),Lin(_) 細胞或⑶150(-),⑶244(+),⑶48⑴細胞。譜系限制先驅干細胞(例如 CD34 (-),cKit (+),CD38 (-),Lin (-)先驅干細胞和 CD150 (-),CD244 (+),CD48 (+)先驅干細 胞)的尺寸(關于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義)是大于(但不限定)6微米、7微 米或10微米,例如介于8微米至15微米之間。以CD34 (-),cKit (+),CD38 (-),Lin (-)先驅干 細胞為例,譜系限制先驅干細胞可以表達cKit這種細胞(表面)標記,但是無法表達CD34、 ⑶38和Lin這三種細胞(表面)標記,所以譜系限制先驅干細胞可用⑶34(-)、cKit (+)、 CD38(_)和Lin(-)描述其特征。以CD150(-),CD244(+),CD48(+)先驅干細胞為例,譜系限 制先驅干細胞可以表達CD244和CD48這兩種細胞(表面)標記,但是無法表達CD150這種 細胞(表面)標記,所以譜系限制先驅干細胞可用CD150(-)、CD244(+)和CD48(+)描述其 特征。
[0089] 共同髓原先驅細胞(common myeloid progenitor cell)或共同淋巴球先驅細胞 (common lymphocyte progenitor cell)為含有細胞核的先驅干細胞,而且可以是⑶90(+) 細胞。共同髓原先驅細胞或共同淋巴球先驅細胞(例如CD90(+)先驅干細胞)的尺寸(關 于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義)是大于(但不限定)6微米、7微米或10微米, 例如介于8微米至15微米之間。共同髓原先驅細胞或共同淋巴球先驅細胞可表達CD90這 種細胞(表面)標記,所以可用CD90(+)描述其特征。
[0090] 造血先驅細胞(hematopoietic progenitor cell,簡稱HPC)為含有細胞核的先 驅干細胞,而且可以是CD24(+)先驅干細胞、CD38(+)先驅干細胞、CD48(+)先驅干細胞、 CD244(+)先驅干細胞或CXCR4(+)先驅干細胞。造血先驅細胞可以表達下列一種或多種的 細胞(表面)標記:⑶24、⑶38、⑶48、⑶244和CXCR4。因此,造血先驅細胞可以具有下列 一種或多種的特征:CD24 (+)、CD38 (+)、CD48 (+)、CD244 (+)和 CXCR4 (+)。
[0091] 間質先驅細胞(mesenchymal progenitor cell)為含有細胞核的先驅干細胞,而 且可以是CXCR4(+)先驅干細胞、SSEA1(+)先驅干細胞、CD271(+)先驅干細胞或Str〇-l(+) 先驅干細胞。間質先驅細胞可以表達下列一種或多種的細胞(表面)標記:CXCR4、SSEA1、 CD271和Stro-1。因此,間質先驅細胞可以具有下列一種或多種的特征:CXCR4(+)、 SSEA1(+)、CD271 (+)或 Stro-1(+)。
[0092] 行為或刺激(X)的描沭:
[0093] 以下列出許多種行為或刺激(X)的范例。這些項目可以經過事先評估,確認能有 效增加一個體(例如人體或非人體(如動物體))體內某一種或特定幾種干細胞的細胞數 量。
[0094] 行為或刺激(X)包括:
[0095] 1.服用藥物,此藥物可以是合成藥物或是含有天然萃取物的藥物;
[0096] 2.服用草藥或中藥,此草藥或中藥可以是冬蟲夏草、人參、枸杞、靈芝、牛樟芝以及 /或是巴西蘑菇;
[0097] 3.服用營養品或膳食補充品(dietary supplement),例如營養片或營養粉。此 營養品或膳食補充品可以包含有下列一種或多種的物質或成分:維他命(如維他命A、維 他命B、維他命B群、維他命B12、維他命D、維他命D3、維他命E等)、巨量與微量礦物質(如 隹丐、鈉、鉀、氟、溴、鉻、碘、娃、硒、鈹、鋰、鈷、f凡、鎳等)、多醣(polysaccharide)、含巖藻糖的 高分子活性醣蛋白(high molecular weight fucose-containing glycoprotein)、海藻 (包括綠藻、藍綠藻、褐藻等)、巖藻糖(fucose)、褐藻的主要成分一褐藻糖膠(fucoidan)、 小分子褐藻糖膠(oligo fucoidan)、藻類、含有褐藻糖膠的褐藻(例如生長或生產在日本 沖繩縣(Okinawa)的褐藻)、日本的水云(mozuku)、綠藻、藍綠藻(或稱藍藻)、褐藻(包括 水云、昆布(kelp)、裙帶菜(undaria pinnatifida)、羊棲菜(sargassum fusiforme)等)、 植化素(phytochemical)(例如異黃酮素(isoflavones)、植物雌激素(phytoestrogen) 等)、爺紅素(lycopene)、綠茶素 (green tea essence)、表沒食子兒茶素沒食子酸脂 (epigallocatechin gallate,簡稱 EGCG)、醋質營養素(gluconutrients)(例如半乳 糖(Galactose)、木糖(Xylose)、葡萄糖(Glucose)、甘露糖(Mannose)、乙酰葡萄糖胺 (N-acetyl glucosamine)、乙酰半乳糖胺(N-acetyl galactosamine)、乙酰神經胺酸 (N-acetyl neuraminic acid)等)、魚油、香樁、取自植物、葉子、果實、蔬菜、魚、海藻或藻類 的營養素;
[0098] 4.勵行素食飲食;
[0099] 5.食用健康食品或有機食品;
[0100] 6.服用另類(非傳統的)藥物;
[0101] 7.接受另類療法或另類治療(例如葛森療法(Gerson therapy)、布魯士癌癥療法 (the Breuss cancer cure)等);
[0102] 8.接受針灸治療;
[0103] 9.接受按摩(例如足底按摩);
[0104] 10.做運動(例如走路、慢跑、跳舞、體操、瑜珈、有氧運動、太極拳等);
[0105] 11.睡覺(其目的在于評估睡眠質量);
[0106] 12.冥想;
[0107] 13.進行由個人、保健專家或醫生設計的健康改善計劃或疾病治療計劃;
[0108] 14.服用某種可以改善體內器官健康狀況的營養品,例如服用可以改善前列腺健 康狀況的茄紅素;
[0109] 15.進行復健計劃,以治療傷害、治療由手術造成的創傷或是治療疾病;
[0110] 16.飲用藥酒(藥酒乃是將一種或數種藥材浸泡在酒里存放一段時間而制成),例 如飲用人參藥酒(人參藥酒是將人參浸泡在高酒精濃度米酒里一個月的時間而制成);
[0111] 17.服用政府部門或機構(例如美國食品藥物管理局)核準用于治療特定疾病 (例如癌癥、皮膚病、腎臟病等)的一種或數種藥物;
[0112] 18.接受政府部門核準用于治療特定疾病(例如癌癥、皮膚病、腎臟病等)的一種 或數種治療方法;
[0113] 19.從事或參與宗教活動,例如禱告或拜神等;
[0114] 20.接受陽光(或日光)直接照射或間接照射,而接受照射的時間可以是:(1)日 出前10分鐘至日出后50分鐘(此時含有大量的紅外線)的早晨時段、(2)上午11點30分 (11:30AM)至下午12點30分(12:30PM)(此時含有大量的紫外線)的中午時段、或是(3) 日落前50分鐘至日落后10分鐘(此時含有大量的紅外線)的下午時段;
[0115] 21.照射日光燈或發光二極管(LED)發出的光源,而日光燈或發光二極管(LED)發 出的光源可包含可見光的整個光譜(spectrum)、紅外線的整個光譜、紅光的整個光譜、綠光 的整個光譜、藍光的整個光譜、紫外線的整個光譜或混合上述一種以上光線的整個光譜;
[0116] 22.進行或接受改善身體自愈力的計劃、治療、方法、儀器以及/或是系統,例如病 后、傷后或術后用于改善身體自愈力的方法或治療(如高壓氧治療);
[0117] 23.飲用咖啡(例如黑咖啡);
[0118] 24.喝茶(例如綠茶、紅茶或茉莉花茶;
[0119] 25.飲用紅酒;
[0120] 26.服用褪黑激素(melatonin);
[0121] 27.聆聽音樂,例如莫扎特交響曲或貝多芬交響曲;
[0122] 28. 口服一顆或多顆褐藻補充品,其中每一顆褐藻補充品可以含有重量百分比超 過60 %的褐藻糖膠或小分子褐藻糖膠,有關褐藻補充品的敘述可以參考以下第一實驗和圖 11的敘述;
[0123] 29.注射含有褐藻糖膠或小分子褐藻糖膠的物質(如營養品或補充品);
[0124] 30.服用或攝取4.5克(或超過3.5克)的沖繩褐藻補充品,此沖繩褐藻補充品包 括重量百分比為80% (或是超過70%)的日本水云粉(有關沖繩褐藻補充品的敘述請參 閱以下第一實驗和圖11的相關敘述),其中4. 5克的沖繩褐藻補充品例如含有3克(或是 超過2克)的褐藻糖膠或是包括重量百分比超過60 %的褐藻糖膠,圖12揭示褐藻糖膠的部 分分子結構;
[0125] 31.服用荷爾蒙補充品或是注射荷爾蒙;以及
[0126] 32.服用營養品、營養產品、營養液、營養飲料、營養補充劑或營養食品,其含有: (1) 各種的胺基酸(例如精胺酸(Arginine)、組胺酸(Histidine)、離胺酸(Lysine)、天 門冬胺酸(Aspartic acid)、麩胺酸(Glutamic acid)、絲胺酸(Serine)、輕丁胺酸(或 稱蘇胺酸,Threonine)、天門冬酰胺酸(Asparagine)、麩酰胺酸(Glutamine)、半胱胺酸 (Cysteine)、硒半胱胺酸(Selenocysteine)、甘胺酸(Glycine)、脯胺酸(Proline)、色胺 酸(Tryptophan)、丙胺酸(Alanine)、繳胺酸(Valine)、異白胺酸(Isoleucine)、白胺酸 (Leucine)、甲硫胺酸(Methionine)、苯丙胺酸(Phenylalanine)、酪胺酸(Tyrosine)等)、 (2) 均衡胺基酸(balanced amino acid)、或是(3)九種人體必需胺基酸(也就是,組胺酸、 異白胺酸、白胺酸、離胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、羥丁胺酸、色胺酸以及纈胺酸)。例如,(a) 含紅豆、綠豆或黑豆發酵物的產品、(b)含一種或數種水果(例如甜菜(sugar beet)、蘋果、 番石榴、奇異果、葡萄、菠蘿、火龍果、青木瓜、西紅柿、酪梨等)發酵物的液態物、飲料或飲 品、(c)將一種或數種藥材浸泡在酒里存放一段時間而制成的藥酒,例如將人參浸泡在高酒 精濃度的米酒里一個月時間而制成的人參藥酒。
[0127] 另外,進行上述的行為或刺激(X)可以將劑量、強度、持續時間、施行頻率(每一個 行為可包括一種以上的細部行為(sub-action),例如以每次間隔一小時的方式服用一顆藥 物共三次)以及/或是施行時間(例如一天的時段(如早晨、中午、下午、傍晚、晚上)、用 餐之前、用餐當中、用餐之后、季節(如春天、夏天、秋天、冬天)等)等因素納入考慮。舉例 來說,當個體(例如人體或非人體)服用藥物或營養品時,可將劑量(例如克數)以及時間 (例如早餐前、早餐后、睡前)等因素納入考慮。又例如,當個體(例如人體或非人體)照 射陽光時,可將一天的時段(例如早晨、中午或下午)、季節(例如春天、夏天、秋天或冬天) 以及持續照射時間(例如30分鐘、1小時或2小時)等因素納入考慮。
[0128] 個體(S)與鉬織樣本(P)的描沭:
[0129] 個體(S)可以是人體,例如孩童、青少年、成年男子、成年女子或老年人。或者,個 體(S)也可以是非人體(或稱非人體生物),例如寵物(動物)、農場動物、實驗用動物或疾 病模式動物(disease-model animal)。以下列出寵物、農場動物、實驗用動物或疾病模式動 物的范例:靈長類動物(如猴子或大猩猩)、狗、嚙齒動物(如老鼠或豚鼠)、貓、馬、牛、羊、 豬、雞、鴨、鵝、鳥、大象、青蛙、魚等。個體⑶的敘述可以用在后續的各個實施例中。在本 發明中,個體(S)可以作為參與者或受試者。
[0130] 含有各種細胞的組織樣本(P)可以從個體(S)的體液(bodily fluid)或固體組 織(solid tissue)取出、獲得、得到或取得。個體(S)的體液可以是血液(如周邊血液 (peripheral blood))或是骨髓等。當個體(S)為人體時,體液可以是人體的骨髓或是人體 的血液(如周邊血液)。周邊血液是指體內循環流動的血液。個體(S)的固體組織可以是 神經、肌肉、皮膚、內臟、骨骼、腎臟、肝臟、胰臟、胸腺、脂肪細胞或是脂肪組織等。當組織樣 本(P)是從個體(S)的體液取得時,組織樣本(P)可以是體液樣本,例如周邊血液樣本、全 血樣本或骨髓樣本。全血可以從個體(S)(如人體)的周邊血液收集取得,然后和抗凝劑混 合而成,但是尚未進行其它的處理。當組織樣本(P)是從個體(S)的固體組織取得時,組織 樣本(P)可以是固體組織樣本,例如肌肉樣本或脂肪細胞樣本。當個體(S)為人體時,組織 樣本(P)可以是人體骨髓樣本或是人體血液樣本(如周邊血液樣本或全血樣本)。
[0131] 檢測或測量方法(M0):
[0132] 當取自個體(其可參閱個體(S)的敘述)的組織樣本為血液樣本(如周邊血液樣 本或全血樣本)時,檢測或測量方法(M0)可以透過執行分析前的準備程序(Y0)然后再執 行分析程序(T0)的方式從血液樣本中獲得有關一種或多種干細胞(如前所述)的結果或 數據。該結果或數據可包括每一種干細胞的數量。
[0133] 分析前的準備程序(Y0)可以透過下列兩種方式中的任何一種來處理取自個體的 血液樣本。
[0134] 用于準備程序(Y0)的第一種方式敘述如下。首先,將混合液(cocktail)加到 裝有全血(其從上述個體取得)的試管中,并在均勻混合全血和混合液之后,獲得血液樣 本。舉例來說,當混合液為100微升(μ L)的RosetteSep?富含人類先驅細胞混合液 (RosetteSep? Human Progenitor Enrichment Cocktail)時,試管內則裝有 2 毫升 (mL)的全血。接著,將血液樣本在室溫(如27°C左右)培養一段時間(例如20分鐘左右)。 在完成培養后,以第一溶液稀釋血液樣本,然后慢慢地將兩者混合。待完成混合后,獲得稀 釋樣本。所述的第一溶液可以是2%胎牛血清(fetal bovine serum,簡稱FBS)/磷酸鹽緩 沖液(phosphate-buffered saline,簡稱PBS)。接著,將稀釋樣本慢慢倒入裝有試劑(例 如FicolΙ-Paque?)的試管中。在倒入的過程中,須避免稀釋樣本與試劑相互混合,以及 讓稀釋樣本位在試劑上面。接著,將含有稀釋樣本與試劑的混合物在室溫(如攝氏27°C左 右)下以適當的轉速(例如每分鐘3, 000轉)離心一段時間(例如20分鐘),待離心完成 后,可形成四個明顯的分層。這四個明顯的分層由上而下分別是血漿層、富含多種細胞的細 胞層、試劑層以及紅血球層。接下來,將血漿層、富含多種細胞的細胞層以及試劑層的上半 部放入到另一試管中,然后以適當的轉速(例如每分鐘3, 000轉)離心一段時間(例如20 分鐘),待離心完成后,可獲得離心樣本。接著,移除離心樣本的上清液(supernatant),并 使離心樣本內的多種細胞重新懸浮于第二溶液(例如2% FBS/PBS)中。再來,將適當的緩 沖液(如3X紅血球分解液(red-blood-cell (RBC) lysis buffer)加到第二溶液中,并使 含有緩沖液的第二溶液在室溫培養一段時間(例如10分鐘),然后以第三溶液(例如2% FBS/PBS)沖洗第二溶液(此時含有緩沖液)內的多種細胞兩次。待沖洗完成后,使多種細 胞重新懸浮于第四溶液(例如含有1 %或2%牛血清白蛋白(bovine serum albumin,簡稱 BSA)的磷酸鹽緩沖液)中,以獲得含有多種細胞和第四溶液的混合物。在本發明中,讓0.1 克的牛血清白蛋白溶解在10毫升的磷酸鹽緩沖液中,可以獲得含有1 %牛血清白蛋白的 磷酸鹽緩沖液;讓〇. 2克的牛血清白蛋白溶解在10毫升的磷酸鹽緩沖液中,可以獲得含有 2%牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液。接著,將含有適當抗體的試劑加到含有多種細胞和第四 溶液的混合物中,進而形成試驗樣本。此試驗樣本可以被用于后續的分析程序(το)中。
[0135] 用于準備程序(Y0)的第二種方式敘述如下。首先,將6%羥乙基淀粉 (Hetastarch)加入到全血(其從上述個體取得)中(6%羥乙基淀粉與全血的體積比為1 : 5),以獲得血液樣本。6%羥乙基淀粉是一種磷酸鹽緩沖液(PBS)內含有6%的羥乙基淀粉 的溶液,也就是每100毫升(mL)的磷酸鹽緩沖液含有6克的羥乙基淀粉。接著,讓血液樣 本在室溫(如約27°C )靜置或培育一段時間(例如至少30分鐘)。待血液樣本形成上下 兩個分層后,在不擾動下分層(其為紅血球層)的情況下,將上分層(其為細胞層)以吸取 器(pipette)移出并放置到一試管中,然后再將試管內的上分層以適當的轉速(例如每分 鐘3, 000轉)離心一段時間(例如15分鐘),并在離心完成后獲得離心樣本。接下來,將離 心樣本的上清液移除,并以適當的鹽溶液(如PBS)沖洗離心樣本的顆粒。然后,使顆粒重 新懸浮于一適當溶液(例如含有1%或2%牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液)中,以獲得含有 顆粒和適當溶液的混合物。最后,將含有適當抗體的試劑加到含有顆粒和適當溶液的混合 物中,進而形成試驗樣本。此試驗樣本可以被用于后續的分析程序(T0)中。
[0136] 在完成準備程序(Y0)之后,以分析程序(TO)分析從準備程序(Y0)第一種或第二 種方式獲得的試驗樣本,進而得到血液樣本中有關一種或多種干細胞的一組結果或數據。 該組結果或數據可透過量化、質化或描述等方式呈現。此處所述的一種或多種干細胞可以 包括下列一種或多種干細胞:至少一種多功能干細胞(例如SB-1細胞、SB-2細胞、類卵裂 球干細胞、極小類胚胎干細胞、其它種類的多功能干細胞以及/或是一群選定的兩種或兩 種以上的多功能干細胞)、至少一種多潛能干細胞(例如間質干細胞、其它種類的多潛能干 細胞以及/或是一群選定的兩種或兩種以上的多潛能干細胞)、造血干細胞以及至少一種 先驅干細胞。
[0137] 分析程序(T0)可以透過流式細胞技術(flow cytometry)完成。流式細胞技術可 以透過流式細胞儀(flow cytometer,其為一種分析儀器)執行細胞計數、細胞分類以及生 物標記偵測等步驟來分析血液樣本的參數。流式細胞儀可以用來分析血液樣本中特定的細 胞(表面)標記是否呈現陽性表達。藉由流式細胞儀,上述有關一種或多種干細胞的結果 或數據可包括干細胞的種類以及上述一種或多種干細胞的相關數值(例如數量、百分比以 及/或是尺寸大小)。
[0138] 檢測或測量方法(Ml):
[0139] 檢測或測量方法(Ml)可以透過執行純化程序(Y1)然后再執行分析程序(T1)的 方式來完成。純化程序(Y1)可以透過下列三種方式中的任何一種方式來處理取自一個體 (其可參閱個體(S)的敘述)的一組織樣本。有關該組織樣本的說明可參閱組織樣本(P) 的敘述。例如,當該組織樣本是從上述個體的體液(例如人體血液、周邊血液或是骨髓)取 得時,該組織樣本為一體液樣本(例如周邊血液樣本、全血樣本或是骨髓樣本)。當該組織 樣本是從上述個體的固體組織(例如肌肉或脂肪細胞)取得時,該組織樣本為一固體組織 樣本(例如肌肉樣本或脂肪細胞樣本)。另外,若該組織樣本是從上述個體的固體組織取 得,在進行純化程序(Y1)之前,會在該組織樣本中加入膠原蛋白酶(collagenase),并且讓 該組織樣本與膠原蛋白酶在適當的溫度下(此溫度可以是37°C左右、30°C以上、介于35°C 至39°C之間或是介于30°C至40°C之間)作用至少6或8小時。
[0140] 在純化程序(Y1)的第一種方式中,請參閱圖1所示,首先將上述的組織樣本移到 含有抗凝血劑(例如二價陽離子螯合劑)的收集袋10里。此二價陽離子螯合劑(divalent cation chelating agent)可以是乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid,簡 稱EDTA)。接著,利用裝在收集袋10底部的過濾器11,讓該組織樣本中的小細胞流出收集 袋10而被收集到試管12a里。可通過過濾器11的小細胞的尺寸(關于尺寸的描述可參閱 上述尺寸(Z)的定義)是小于或等于4微米、5微米或6微米,例如介于0. 1微米至6微米 之間、介于〇. 5微米至6微米之間、介于1微米至6微米之間、介于0. 1微米至5微米之間、 介于0. 5微米至5微米之間、介于1微米至5微米之間、介于0. 1微米至4微米之間、介于 0. 5微米至4微米之間或是介于1微米至4微米之間。接下來,利用離心機13將試管12a以 適當的離心力(例如1,〇〇〇g、大于700g、大于1,300g、介于500g至2, 500g之間、介于800g 至1,600g之間)離心一段時間(例如18分鐘左右、12分鐘以上、16分鐘以上、10至30分 鐘、15至22分鐘)。待試管12a完成離心后,這些小細胞會被分離出來。最后,將這些小細 胞放置到一溶液中(此溶液可以含有PBS與BSA),并使這些小細胞重新懸浮于此溶液中,以 獲得含有這些小細胞和此溶液的試驗樣本14a。試驗樣本14a可用于后續的分析程序(T1) 中。
[0141] 在純化程序(Y1)的第二種方式中,請參閱圖2所示,若上述的組織樣本是從固體 組織取得,則將經過膠原蛋白酶處理的組織樣本(如前所述)放入到試管12b中。接著,利 用離心機13以低轉速產生的離心力(例如大約100g、介于50g至450g之間或是介于80g至 250g之間)將試管12b離心一段時間(例如10分鐘左右、8分鐘以上、12分鐘以上、8至15 分鐘、9至20分鐘),然后再以高轉速產生的離心力(例如1,000g、大于700g、大于1,300g、 介于500g至2, 500g之間或是介于800g至1,600g之間)將試管12b離心一段時間(例如 18分鐘左右、12分鐘以上、16分鐘以上、10至30分鐘、15至22分鐘)。待試管12a完成離 心后,可從組織樣本中分離出小細胞。這些分離出來的小細胞的尺寸(關于尺寸的描述可 參閱上述尺寸(Z)的定義)是小于或等于4微米、5微米或6微米,例如介于0. 1微米至6 微米之間、介于0. 5微米至6微米之間、介于1微米至6微米之間、介于0. 1微米至5微米 之間、介于〇. 5微米至5微米之間、介于1微米至5微米之間、介于0. 1微米至4微米之間、 介于0. 5微米至4微米之間或是介于1微米至4微米之間。最后,將這些小細胞放置到一 溶液中(此溶液可以含有PBS與BSA),并使這些小細胞重新懸浮于此溶液中,以獲得含有這 些小細胞和此溶液的試驗樣本14b。試驗樣本14b可用于后續的分析程序(T1)中。
[0142] 在純化程序(Y1)的第三種方式中,請參閱圖3所示,若上述的組織樣本是從體液 取得,則將該組織樣本以紅血球分解液16培養或作用一段時間(例如10分鐘左右、8分鐘 以上、12分鐘以上、8至15分鐘或是9至20分鐘),以消除組織樣本中所有的紅血球細胞。 接著,將含有組織樣本與紅血球分解液16的混合液倒入試管12c中。然后,利用離心機13 以低轉速產生的離心力(例如大約l〇〇g、介于50g至450g之間或是介于80g至250g之間) 將試管12c離心一段時間(例如10分鐘左右、8分鐘以上、12分鐘以上、8至15分鐘或是 9至20分鐘),然后再以高轉速產生的離心力(例如1,000g、大于700g、大于1,300g、介于 500g至2, 500g之間或是介于800g至1,600g之間)將試管12c離心一段時間(例如18分 鐘左右、12分鐘以上、16分鐘以上、10至30分鐘或是15至22分鐘)。待試管12c完成離 心后,可從含有組織樣本與紅血球分解液16的混合液中分離出小細胞。這些分離出來的小 細胞的尺寸(關于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義)是小于或等于4微米、5微米 或6微米,例如介于0. 1微米至6微米之間、介于0. 5微米至6微米之間、介于1微米至6 微米之間、介于0. 1微米至5微米之間、介于0. 5微米至5微米之間、介于1微米至5微米 之間、介于〇. 1微米至4微米之間、介于0. 5微米至4微米之間或是介于1微米至4微米之 間。最后,將這些小細胞放置到一溶液中(此溶液可以含有PBS與BSA),并使這些小細胞重 新懸浮于此溶液中,以獲得含有這些小細胞和此溶液的試驗樣本14c。試驗樣本14c可用于 后續的分析程序(T1)中。
[0143] 在利用純化程序(Y1)獲得試驗樣本14a、14b或14c之后,以分析程序(T1)對試 驗樣本14a、14b或14c進行分析,進而獲得上述組織樣本中有關一種或多種小尺寸干細 胞的一組結果或數據。該組結果或數據可透過量化、質化或描述等方式呈現。另外,圖1、 圖2或圖3所示的分析儀器15a(例如逆轉錄聚合酶連鎖反應(reverse transcription polymerase chain reaction ;RT-PCR)儀或是流式細胞儀)可用于進行分析程序(T1)。上 述有關一種或多種小尺寸干細胞的該組結果或數據可以包括小尺寸干細胞的種類以及上 述一種或多種小尺寸干細胞的相關數值(例如數量、百分比以及/或是尺寸大小)。此處 所述的一種或多種小尺寸干細胞可以包括下列一種或多種干細胞:至少一種多功能干細胞 (例如SB-1細胞、SB-2細胞、類卵裂球干細胞、極小類胚胎干細胞、其它種類的多功能干細 胞以及/或是一群選定的兩種或兩種以上的多功能干細胞)、至少一種多潛能干細胞(例如 間質干細胞、其它種類的多潛能干細胞以及/或是一群選定的兩種或兩種以上的多潛能干 細胞)、造血干細胞以及至少一種先驅干細胞。這些小尺寸干細胞的尺寸(關于尺寸的描述 可參閱上述尺寸(Ζ)的定義)是小于或等于4微米、5微米或6微米,例如介于0. 1微米至 6微米之間、介于0. 5微米至6微米之間、介于1微米至6微米之間、介于0. 1微米至5微米 之間、介于〇. 5微米至5微米之間、介于1微米至5微米之間、介于0. 1微米至4微米之間、 介于0. 5微米至4微米之間或是介于1微米至4微米之間。
[0144] 分析程序(Τ1)可以透過以下兩種方式達成:流式細胞技術或是逆轉錄聚合酶連 鎖反應(RT-PCR)分析法(例如實時逆轉錄聚合酶連鎖反應分析法(real-time RT-PCR analysis))。流式細胞技術可以透過流式細胞儀(此儀器為一種分析儀器15a)執行細胞 計數、細胞分類以及生物標記偵測等步驟來分析一樣本的參數。流式細胞儀15a可以用來 分析樣本中特定的細胞(表面)標記是否呈現陽性表達。逆轉錄聚合酶連鎖反應分析法可 以透過(實時)逆轉錄聚合酶連鎖反應儀(此儀器為一種分析儀器15a)來偵測與量化一 樣本中干細胞的基因表達。透過逆轉錄聚合酶連鎖反應分析法獲得的結果可以得知干細胞 表達的各種基因,而這些基因可以是0ct4、Nanog、Nestin以及甲種胚胎蛋白(alpha-feto protein)〇
[0145] 檢測或測量方法(M2):
[0146] 檢測或測量方法(M2)可以透過執行純化程序(Y2)然后再執行分析程序(T2)的 方式來完成。純化程序(Y2)可以透過下列三種方式中的任何一種方式來處理取自一個體 (其可參閱個體(S)的敘述)的一組織樣本。有關該組織樣本的說明可參閱組織樣本(P)的 敘述。例如,當該組織樣本是從上述個體的體液(例如人體血液、周邊血液或是骨髓)取得 時,該組織樣本為一體液樣本(例如周邊血液樣本、全血樣本或是骨髓樣本)。當該組織樣 本是從上述個體的固體組織(例如肌肉或脂肪細胞)取得時,該組織樣本為一固體組織樣 本(例如肌肉樣本或脂肪細胞樣本)。另外,若該組織樣本是從上述個體的固體組織取得, 在進行純化程序(Y2)之前,會在該組織樣本中加入膠原蛋白酶,并且讓該組織樣本與膠原 蛋白酶在適當的溫度下(此溫度可以是37°C左右、30°C以上、介于35°C至39°C之間或是介 于30°C至40°C之間)作用至少6或8小時。
[0147] 在純化程序(Y2)的第一種方式中,請參閱圖4所示,首先將上述的組織樣本移到 含有抗凝血劑(例如二價陽離子螯合劑)的收集袋或貯存器19里,以獲得含有組織樣本與 抗凝血劑的混合液。上述的二價陽離子螯合劑可以是乙二胺四乙酸(EDTA)。接著,將混合 液倒入到試管20a中。然后,利用離心機13將試管20a以適當的離心力(例如1,000g、大 于700g、大于1,300g、介于500g至2, 500g之間或是介于800g至1,600g之間)離心一段時 間(例如18分鐘左右、12分鐘以上、16分鐘以上、10至30分鐘或是15至22分鐘)。待試 管20a完成離心后,分離出包含大細胞與小細胞在內的所有細胞。這些小細胞的尺寸(關 于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義)可以是小于或等于4微米、5微米或6微米,例 如介于0. 1微米至6微米之間、介于0. 5微米至6微米之間、介于1微米至6微米之間、介 于0. 1微米至5微米之間、介于0. 5微米至5微米之間、介于1微米至5微米之間、介于0. 1 微米至4微米之間、介于0. 5微米至4微米之間或是介于1微米至4微米之間。這些大細 胞的尺寸(關于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義)可以是大于6微米。最后,將上 述含有大細胞與小細胞在內的所有細胞放置到一溶液中(此溶液可以含有PBS與BSA),并 使這些細胞重新懸浮于此溶液中,以獲得含有這些細胞及此溶液的試驗樣本21a。試驗樣本 21a可用于后續的分析程序(T2)中。
[0148] 在純化程序(Y2)的第二種方式中,請參閱圖5所示,若上述的組織樣本是從固體 組織取得,則將經過膠原蛋白酶處理的組織樣本(如前所述)放入到試管20b中。接著,利 用離心機13以高轉速產生的離心力(例如1,000g、大于700g、大于1,300g、介于500g至 2, 500g之間或是介于800g至1,600g之間)將試管20b離心一段時間(例如18分鐘左右、 12分鐘以上、16分鐘以上、10至30分鐘或是15至22分鐘)。待試管20a完成離心后,分 離出包含大細胞與小細胞在內的所有細胞。此處有關大細胞與小細胞的敘述,請參閱上述 純化程序(Y2)的第一種方式中的相關敘述。最后,將上述含有大細胞與小細胞在內的所有 細胞放置到一溶液中(此溶液可以含有PBS與BSA),并使這些細胞重新懸浮于此溶液中, 以獲得含有這些細胞及此溶液的試驗樣本21b。試驗樣本21b可用于后續的分析程序(T2) 中。
[0149] 在純化程序(Y2)的第三種方式中,請參閱圖6所示,若上述的組織樣本是從體液 取得,則將該組織樣本以紅血球分解液22培養或作用一段時間(例如10分鐘左右、8分鐘 以上、12分鐘以上、8至15分鐘或是9至20分鐘),以消除組織樣本中所有的紅血球細胞。 接著,將含有組織樣本與紅血球分解液22的混合液倒入試管20c中。然后,利用離心機13 以高轉速產生的離心力(例如l,〇〇〇g、大于700g、大于l,300g、介于500g至2,500g之間或 是介于800g至1,600g之間)將試管20c離心一段時間(例如18分鐘左右、12分鐘以上、 16分鐘以上、10至30分鐘或是15至22分鐘)。待試管20c完成離心后,從含有組織樣本 與紅血球分解液22的混合液中分離出包含大細胞與小細胞在內的所有細胞。此處有關大 細胞與小細胞的敘述,請參閱上述純化程序(Y2)的第一種方式中的相關敘述。最后,將上 述含有大細胞與小細胞在內的所有細胞放置到一溶液中(此溶液可以含有PBS與BSA),并 使這些細胞重新懸浮于此溶液中,以獲得含有這些細胞及此溶液的試驗樣本21c。試驗樣本 21c可用于后續的分析程序(T2)中。
[0150] 在利用純化程序(Υ2)獲得試驗樣本21a、21b或21c之后,以分析程序(Τ2)對試 驗樣本21a、21b或21c進行分析,進而獲得上述組織樣本中有關一種或多種干細胞的一組 結果或數據。該組結果或數據可透過量化、質化或描述等方式呈現。另外,圖4、圖5或圖6 所示的分析儀器15b (例如逆轉錄聚合酶連鎖反應(RT-PCR)儀或是流式細胞儀)可用于進 行分析程序(T2)。上述有關一種或多種干細胞的結果或數據可以包括干細胞的種類以及上 述一種或多種干細胞的相關數值(例如數量、百分比以及/或是尺寸大小)。此處所述的一 種或多種干細胞可以包括一種或多種小尺寸干細胞(相關內容請參閱分析程序(T1)中的 敘述)以及/或是一種或數種大尺寸干細胞(例如至少一種多潛能干細胞(如某些種類的 間質干細胞))。這些大尺寸干細胞的尺寸(關于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義) 可以是大于6微米。
[0151] 分析程序(T2)可以透過以下兩種方式達成:流式細胞技術或是逆轉錄聚合酶連 鎖反應(RT-PCR)分析法(例如實時逆轉錄聚合酶連鎖反應分析法)。流式細胞技術可以 透過流式細胞儀(此儀器為一種分析儀器15b)執行細胞計數、細胞分類以及生物標記偵 測等步驟來分析一樣本的參數。流式細胞儀15b可以用來分析樣本中特定的細胞(表面) 標記是否呈現陽性表達。逆轉錄聚合酶連鎖反應分析法可以透過(實時)逆轉錄聚合酶連 鎖反應儀(此儀器為一種分析儀器15b)來偵測與量化一樣本中干細胞的基因表達。透過 逆轉錄聚合酶連鎖反應分析法獲得的結果可以得知干細胞表達的基因,而這些基因可以是 0ct4、Nanog、Nestin以及甲種胚胎蛋白。
[0152] 前面段落所描述或提及的項目、規格、定義、方法、材料、制程、設備、步驟等都可以 用在以下所提及的所有實施例中。例如,在以下段落中,「尺寸」一詞的定義可以參考上述 有關尺寸(Z)的敘述,「個體」一詞的定義可以參考上述有關個體(S)的敘述,「組織樣本」 一詞的定義可以參考上述有關組織樣本(P)的敘述。
[0153] 實施方式
[0154] 實施例1 :
[0155] 以下將敘述從一生物(例如人體或動物體)獲取、收集或收獲大量干細胞的方法。 圖7A為根據本發明中的一個實施例所繪示的流程圖,其是提供一種從取自一個體的一組 織樣本中獲取、收集或收獲大量干細胞的方法。所述的干細胞可以是本發明在"干細胞定 義"里所提及的一種或多種干細胞。請參閱圖7A所示,在步驟51中,一個體進行或接受一 種或多種的行為或刺激(X),例如服用或攝取一營養品或膳食補充品(如含有重量百分比 超過60%的褐藻糖膠或小分子褐藻糖膠的褐藻補充品或是一顆或多顆在以下第一實驗和 圖11所提及的褐藻糖膠補充品)、服用經過政府部門(如美國食品藥物管理局)核準的一 種或多種藥物以及/或是服用一草藥或一中藥。有關此個體(也就是前述的生物)的說明 可以參閱個體(S)的敘述。例如,此個體可以是一人類或是一動物(如狗、貓、豬、雞、鴨或 牛)。另外,在進行步驟51所述的一種或多種行為或刺激時,可以將劑量、強度、持續時間、 施行頻率(例如以每次間隔一小時的方式服用一顆營養品或膳食補充品共三次)以及/或 是施行時間(例如一天的時段(如早晨、中午、下午、傍晚、晚上)、用餐之前、用餐當中、用 餐之后、季節(如春天、夏天、秋天、冬天)等)等因素納入考慮。例如,當個體服用藥物或 補充品(如褐藻糖膠補充品)的時候,可將劑量(例如克數)以及施行時間(例如早餐前、 早餐后或是睡覺前)等因素納入考慮。步驟51所述的一種或多種行為或刺激可以讓個體 在進行或接受步驟51所述的一種或多種行為或刺激一段時間之后,增加個體的周邊血液 中特定一種或多種干細胞(其可是本發明在"干細胞定義"里所提及的一種或多種干細胞) 的數量。
[0156] 在步驟52中,在個體進行或接受上述的一種或多種的行為或刺激(X)之后,讓個 體等待一段(預定的)時間,例如15分鐘至60分鐘、20分鐘至100分鐘、30分鐘至2小時、 0. 5小時至3小時、1小時至12小時、12小時至36小時或是36小時至50小時。透過步驟 51和步驟52,可以增加或擴增活體內的干細胞數量。接著,在步驟53中,從個體獲得一組織 樣本(如周邊血液樣本)。有關組織樣本的說明可參閱組織樣本(P)的敘述。接著,在步驟 54中,對組織樣本進行一種干細胞獲取、收集或收獲程序或方法,進而從組織樣本大量地獲 取、收集到或收獲上述的特定一種或多種的干細胞(其可是本發明在"干細胞定義"里所提 及的一種或多種干細胞)。例如,透過對組織樣本進行上述的干細胞獲取、收集或收獲程序 或方法,可以從組織樣本中大量地獲取、收集到或收獲SB-1細胞以及/或是SB-2細胞。
[0157] 接著,在步驟55中,經由上述干細胞獲取、收集或收獲程序或方法而從組織樣本 中獲得的一種或多種的干細胞可以為了以后的用途(PS)(其敘述在下一段段落中)而被存 放(或儲存)在溫度低于攝氏〇度(例如攝氏負30度或攝氏負80度)的一設施(如冰 箱)中一段時間(例如1個月以上或一年以上)。此設施可以由一機構(如細胞銀行)所 提供。這些被儲存的干細胞可以在獲取、收集到或收獲這些干細胞后的一段時間(如一個 月、三個月、六個月、一年、兩年、五年或十年)之后因為用途(PS)而被用在上述同一個體或 另一個體上。此處所述的另一個體可以是與上述個體相同生物分類的物種,而且可以與上 述個體有相同的血型(如A型、B型、C型或AB型)。
[0158] 這些被儲存的干細胞可以被用在以下的用途(PS)上,此用途(PS)可以是:干細 胞治療、抗衰老治療或產品、逆轉老化(reverse ageing)治療或產品、創傷治療或產品、臉 部整容治療或產品、整形手術、侵入式醫學美容治療、非侵入式醫學美容治療或產品、重建 整形外科手術、癌癥治療、退化性疾病治療、自體免疫疾病治療、牙齒治療、植牙手術、燒燙 傷治療、膝半月板損傷治療、關節炎治療、膝關節炎治療、骨損傷治療、骨折治療、組織修復 治療、組織或器官復制、再生性復制(reproductive cloning)、治療性復制(therapeutic cloning)、化妝品、皮膚護理產品、面膜、飼料添加物、營養品、補充品。在一范例中,這些被 儲存的干細胞可以透過一個適當的方法(如注射或涂抹)而被用在上述個體或上述另一個 體的一組織或器官(如皮膚、骨頭、關節、牙齒、肝臟或腎臟)上。在另一范例中,這些被儲存 的干細胞可以與某些緩沖液(如鹽)混合,然后透過一個適當的方法(如注射或涂抹)將 混合緩沖液的干細胞用在上述個體或上述另一個體的一組織或器官(如皮膚、骨頭、關節、 牙齒、肝臟或腎臟)上。
[0159] 實施例2:
[0160] 經由上述干細胞獲取、收集或收獲程序或方法而從上述組織樣本中獲得的一種或 多種的干細胞可以不用存放在上述溫度低于攝氏0度的設施中而被用在上述的用途(PS) 中。或者,經由上述干細胞獲取、收集或收獲程序或方法而從上述組織樣本中獲得的一種或 多種的干細胞可以不用存放在上述溫度低于攝氏0度的設施中,而是透過適當的方法(如 注射或涂抹)用在上述個體或另一個體的一組織或器官(如皮膚、骨頭、關節、牙齒、肝臟或 腎臟)上。此處所述的另一個體可以是與上述個體相同生物分類的物種,而且可以與上述 個體有相同的血型(如A型、B型、C型或AB型)。
[0161] 實施例3:
[0162] 從步驟53獲得的組織樣本可以被存放在一細胞銀行或一冷藏設備(如冰箱或冷 凍庫)之溫度低于攝氏0度(例如攝氏負30度或攝氏負80度)的環境中。在組織樣本存 放一段時間(如一個月、三個月、六個月、一年、兩年、五年或十年)之后,從冷藏設備取出組 織樣本,然后對組織樣本進行一種干細胞獲取、收集或收獲方法,進而從組織樣本中獲取、 收集到或收獲上述的特定一種或多種的干細胞(其可是本發明在"干細胞定義"里所提及 的一種或多種干細胞)。例如,透過對組織樣本進行上述的干細胞獲取、收集或收獲方法,可 以從組織樣本中獲取、收集到或收獲SB-1細胞以及/或是SB-2細胞。經由上述干細胞獲 取、收集或收獲程序或方法而從組織樣本中獲得的一種或多種的干細胞可以被用在上述的 用途(PS)中或是透過適當的方法(如注射或涂抹)用在上述個體或另一個體的一組織或 器官(如皮膚、骨頭、關節、牙齒、肝臟或腎臟)上。此處所述的另一個體可以是與上述個體 相同生物分類的物種,而且可以與上述個體有相同的血型(如A型、B型、C型或AB型)。
[0163] 實施例4:
[0164] 從步驟53獲得的組織樣本可以被存放在一細胞銀行或一冷藏設備(如冰箱或冷 凍庫)之溫度低于攝氏0度(例如攝氏負30度或攝氏負80度)的環境中。此組織樣本含 有上述的特定一種或多種的干細胞(其可是本發明在"干細胞定義"里所提及的一種或多 種干細胞),例如SB-1細胞以及/或是SB-2細胞。在組織樣本存放一段時間(如一個月、 三個月、六個月、一年、兩年、五年或十年)之后,從冷藏設備取出組織樣本,然后將組織樣 本用在上述的用途(PS)中或是透過適當的方法(如注射或涂抹)用在上述個體或另一個 體的一組織或器官(如皮膚、骨頭、關節、牙齒、肝臟或腎臟)上。此處所述的另一個體可以 是與上述個體相同生物分類的物種,而且可以與上述個體有相同的血型(如A型、B型、C型 或AB型)。
[0165] 實施例5:
[0166] 從步驟53獲得的組織樣本可以不用被存放在一細胞銀行或一冷藏設備(如冰箱 或冷凍庫)的(非常)低溫環境中一段時間(如一個月、三個月、六個月、一年、兩年、五年 或十年),而是直接用在上述的用途(PS)中或是透過適當的方法(如注射或涂抹)用在上 述個體或另一個體的一組織或器官(如皮膚、骨頭、關節、牙齒、肝臟或腎臟)上。此處所 述的另一個體可以是與上述個體相同生物分類的物種,而且可以與上述個體有相同的血型 (如A型、B型、C型或AB型)。另外,上述的組織樣本含有上述的特定一種或多種的干細胞 (其可是本發明在"干細胞定義"里所提及的一種或多種干細胞),例如SB-1細胞以及/或 是SB-2細胞。
[0167] 實施例6:
[0168] 從步驟53獲得的組織樣本可以用來發現或偵測尚未被識別或發現的一種或多種 的新種類干細胞。以下在本實施例的敘述是以組織樣本是從個體的周邊血液獲得作為范例 來進行說明。在個體進行或接受步驟51所述的一種或多種的行為或刺激(X)之前,個體的 周邊血液可以沒有上述一種或多種的新種類干細胞或是僅有相當稀少(也就是指數量非 常的低或是無法偵測)的上述一種或多種的新種類干細胞,所以無法使用或是非常難以使 用一流式細胞儀或是其它測量工具發現上述一種或多種的新種類干細胞。在個體進行步驟 51和步驟52之后,上述一種或多種的新種類干細胞會在個體的周邊血液內增加、進行活化 反應、流動、生成或進行刺激反應。因此,透過一流式細胞儀或是其它測量工具,可以輕易地 發現上述一種或多種的新種類干細胞,相關內容可參閱下面步驟59的敘述。
[0169] 透過發現或偵測新種類干細胞的方法,可以發現或偵測到上述一種或多種的新種 類干細胞。圖7B揭示一種發現或偵測一種或多種新種類干細胞的方法的流程圖。請參閱圖 7B所示,在依序進行步驟51至步驟53之后,接著進行步驟59。在步驟59中,利用一種可 以偵測上述一種或多種的新種類干細胞的分析方法(如前面所述的檢測或測量方法(M0)、 (Ml)或(M2))來處理步驟53所獲得的組織樣本(例如周邊血液樣本)。上述的分析方法 包括偵測組織樣本中的細胞是否含有細胞核的步驟以及組織樣本中的細胞是否可以表達 以及/或是無法表達一種或多種選定的細胞(表面)標記的步驟。
[0170] 實施例7:
[0171] 利用前面所述的檢測或測量方法(MO)、(Ml)或(M2)、圖9中的步驟61至步驟70、 圖14A-圖14C中的步驟1至步驟20、之后所述的整合系統、裝置、儀器或工具(AD)或是之 后所述的單一系統、儀器、工具或裝置(TD),可以從圖7A步驟53所獲得的組織樣本中獲得 有關上述個體在進行或接受步驟51所述的一種或多種的行為或刺激(X)之后的干細胞數 據(以下稱"數據A")。數據A可以包括各種干細胞的數量、各種干細胞所占的百分比以及 /或是一種或多種干細胞在步驟53所獲得的組織樣本中每毫升的數量(也就是一種或多種 干細胞在步驟53所獲得的組織樣本中每單位體積的數量)。此處所述的一種或多種干細胞 可以是本發明在"干細胞定義"里所提及的一種或多種干細胞。例如,數據A可以包括SB-1 細胞的數量或百分比、SB-2細胞的數量或百分比、類卵裂球干細胞的數量或百分比、極小類 胚胎干細胞的數量或百分比、間質干細胞的數量或百分比、造血干細胞的數量或百分比、一 種或多種的多功能干細胞、多潛能干細胞以及/或是先驅干細胞的數量或百分比、以及/或 是一種或多種的多功能干細胞、多潛能干細胞和/或先驅干細胞在步驟53所獲得的組織樣 本中每單位體積的數量。數據A可以用于臨床診斷或是用于監測、決定、確認或評估個體的 病程階段(disease stage)、治療進展(treatment progress)、健康狀況以及/或是生理情 況。
[0172] 或者,數據A可以用來評估或確認步驟51所述的一種或多種的行為或刺激(X)對 于治療或治愈患有一種特定疾病的個體的功效(或效用)。在此范例中,可以透過控制步 驟51所述的一種或多種的行為或刺激(X)的劑量、強度、持續時間、施行頻率以及/或是施 行時間來治療或治愈患有上述特定疾病的個體。上述的特定疾病可以是前列腺癌、肝癌、胃 癌、口腔癌、大腸癌、乳癌、肺癌、鼻咽癌、子宮頸癌、皮膚癌、食道癌、膀胱癌、胰臟癌、子宮內 膜癌、卵巢癌、膽囊癌、甲狀腺癌、白血病、淋巴癌、非何杰金氏淋巴瘤、黑色素瘤、帕金森氏 癥(parkinsonism)、阿茲海默病(Alzheimer's disease)、癡呆癥(dementia)、糖尿病、過 敏性鼻炎、腦瘤、后天免疫缺乏癥候群(acquired immunodeficiency syndrome)。在本范例 中,也可以獲得有關上述個體在進行或接受步驟51所述的一種或多種的行為或刺激(X)之 前的干細胞數據(以下稱"數據B")。然后,透過比較數據A與數據B,可以確認、決定或評 估步驟51所述的一種或多種的行為或刺激(X)對于治療或治愈患有上述特定疾病的個體 的功效(或效用)。圖7C根據本范例繪出一種確認、決定或評估步驟51所述的一種或多種 的行為或刺激(X)對于治愈或治療患有上述特定疾病的個體的功效(或效用)的方法的流 程圖。
[0173] 請參閱圖7C所示,在步驟49中,從上述個體取出、獲得、得到或取得一組織樣本 (以下稱"第一組織樣本")。有關第一組組織樣本的說明可參閱前面所述的組織樣本(P)。 接著,在步驟50中,以第一檢測或測量方法分析或檢測第一組織樣本,進而獲得與第一組 織樣本中一種或多種干細胞有關的第一干細胞數據(也就是數據B)。第一干細胞數據可藉 由量化或描述等方式呈現。第一檢測或測量方法可以包括取得和/或測量干細胞的步驟。 有關第一檢測或測量方法的說明可參閱檢測或測量方法(MO)、(Ml)或(M2)的敘述、圖9中 步驟61至步驟70的敘述或是圖14A-圖14C中步驟1至步驟20的敘述。除了透過第一 檢測或測量方法,第一干細胞數據也可以透過之后所述的整合系統、裝置、儀器或工具(AD) 或是之后所述的單一系統、儀器、工具或裝置(TD)來獲得。
[0174] 第一干細胞數據報括數個結果或數據Ru-R+b,其中a為正整數(例如是2到100 中的任何一個數字),b也是正整數(例如是1或2)。R的第一個下標數字(也就是跟隨在 字母R之后的數字一 1到a)是代表某一種選定的干細胞。R的第二個下標數字(也就是跟 隨在第一個下標數字之后的數字一 1到b)是代表某一種數據型態。
[0175] 以下將對R的第一個下標數字進行敘述。在R的第一個下標數字為1的時候,結 果或數據Ru_R lib可以是與"SB-1細胞"有關的結果或數據。在R的第一個下標數字為2 的時候,結果或數據R2il_R 2ib可以是與"SB-2細胞"有關的結果或數據。在R的第一個下標 數字為3的時候,結果或數據R3il-R 3,b可以是與"類卵裂球干細胞(BLSC) "有關的結果或數 據。在R的第一個下標數字為4的時候,結果或數據R41-R4b可以是與"極小類胚胎干細胞 (VSEL) "有關的結果或數據。在R的第一個下標數字為5的時候,結果或數據R5il-R5,b可 以是與"某一種多潛能干細胞(如間質干細胞或多潛能成體先驅細胞)"有關的結果或數 據。在R的第一個下標數字為6的時候,結果或數據Rw-Rm可以是與"另一種多潛能干細 胞(如造血干細胞、骨髓多潛能干細胞或多潛能成體干細胞)"有關的結果或數據。在R的 第一個下標數字為7的時候,結果或數據R 7;1-R7,b可以是與"某一種先驅干細胞(如前間質 干細胞、多潛能先驅干細胞、譜系限制先驅干細胞、共同髓原先驅細胞、共同淋巴球先驅細 胞或造血先驅細胞)"有關的結果或數據。在R的第一個下標數字為8的時候,結果或數據 R8, i_R8, b可以是與"另一種先驅干細胞(如成體骨髓多元性誘導細胞或間質先驅細胞)"有 關的結果或數據。
[0176] 以下將對R的第二個下標數字進行敘述。在R的第二個下標數字為1的時候,結 果或數據R M-Rail可以是與"干細胞的數量"有關的結果或數據。在R的第二個下標數字為 2的時候,結果或數據R li2_Ra,2可以是與"干細胞的百分比"有關的結果或數據。在R的第 二個下標數字為3的時候,結果或數據R li3-Ra,3可以是與"干細胞在一組織樣本(如上述的 第一組織樣本)中每單位體積(如每毫升)的數量"有關的結果或數據。
[0177] 因此,結果或數據Ru可代表或顯示出SB-1細胞的數量。結果或數據Rli2可代表 或顯示出SB-1細胞的百分比。結果或數據可代表或顯示出SB-1細胞在一組織樣本 (如上述的第一組織樣本)中每單位體積(如每毫升)的數量。結果或數據R 2il可代表或 顯示出SB-2細胞的數量。結果或數據R2,2可代表或顯示出SB-2細胞的百分比。結果或數 據R 2i3可代表或顯示出SB-2細胞在一組織樣本(如上述的第一組織樣本)中每單位體積 (如每毫升)的數量。其它的結果或數據則以此類推,在此就不加以論述。
[0178] 請參閱圖7C所示,在進行完(或完成)步驟49或步驟50之后,依序進行前面所 述的步驟51至步驟53,因而從進行或接受步驟51所述之一種或多種行為或刺激(X)之后 的個體取出、獲得、得到或取得一組織樣本(以下稱"第二組織樣本")。有關第二組組織樣 本的說明可參閱前面所述的組織樣本(P)。第一與第二組織樣本可以是從個體的同一種組 織所獲得的兩個樣本。例如,第一與第二組織樣本可以從個體的周邊血液、骨骼、肌肉、脂肪 細胞或是脂肪組織獲得。在一范例中,第一與第二組織樣本都可以是周邊血液樣本。
[0179] 接著,在步驟56中,以第二檢測或測量方法分析或檢測第二組織樣本,進而獲得 與第二組織樣本中一種或多種干細胞有關的第二干細胞數據(也就是數據A)。第二干細胞 數據可藉由量化或描述等方式呈現。第二檢測或測量方法可以包括取得和/或測量干細胞 的步驟。有關第二檢測或測量方法的說明可參閱檢測或測量方法(MO)、(Ml)或(M2)的敘 述、圖9中步驟61至步驟70的敘述或是圖14A-圖14C中步驟1至步驟20的敘述。除了 透過第二檢測或測量方法,第二干細胞數據也可以透過之后所述的整合系統、裝置、儀器或 工具(AD)或是之后所述的單一系統、儀器、工具或裝置(TD)來獲得。
[0180] 第二干細胞數據含有與步驟50所提及的第一干細胞數據相同類型的信息內容, 也就是說第二干細胞數據含有對應的結果或數據& ,其中有關R的第一個與第二個下 標數字是定義在、描述在或是說明在步驟50所提及的第一干細胞數據的Ru-Ra, b中。為了 獲得相同類型的信息內容以及減少實驗誤差,本發明透過相同的方式(例如檢測或測量方 法(MO)、(Ml)或(M2)、圖9的步驟61至步驟70或是圖14A-圖14C的步驟1至步驟20) 或是相同的儀器(例如整合系統、裝置、儀器或工具(AD)或是單一系統、儀器、工具或裝置 (TD))來進行獲得第一干細胞數據與第二干細胞數據的第一與第二檢測或測量方法。
[0181] 接著,在步驟57中,根據對第一干細胞數據與第二干細胞數據所做的分析(其可 包括比較第一干細胞數據與第二干細胞數據),可以確認、決定或評估步驟51所述的一種 或多種的行為或刺激(X)對于治愈或治療患有上述特定疾病的個體的功效(或效用)。第 一干細胞數據與第二干細胞數據可以做成一份評估或檢查報告。另外,圖7C的步驟49、步 驟50、步驟51、步驟52、步驟53、步驟56和步驟57也可以用來確認、決定、評估或測試步驟 51所述之一種或多種的行為或刺激(如服用或攝取一顆或多顆以下第一實驗和圖11所提 及的褐藻補充品)的效果或功效(或效用)。
[0182] 請參閱圖7C所示,在進行完(或完成)步驟56或步驟57之后,如果需要可以進 行步驟58,也就是讓相同個體依序進行步驟51、步驟52、步驟53、步驟56和步驟57 -次或 多次。在步驟58中,每次進行步驟53的時候,都會在進行完(或完成)步驟52之后,從相 同個體獲得或得到一組織樣本。在步驟58中,每次以一檢測或測量方法(如步驟56所提 及的檢測或測量方法)分析或檢測從相同個體獲得的組織樣本都可以獲得與組織樣本中 一種或多種干細胞有關的干細胞數據(其說明可參閱步驟50所述的第一干細胞數據)。在 步驟58中,每次將當前的干細胞數據和前一次的干細胞數據進行比較(如步驟57所述的 比較第一干細胞數據與第二干細胞數據)都可以確認、決定或評估步驟51所述的一種或多 種的行為或刺激(X)對于治愈或治療患有上述特定疾病的個體的功效(或效用)。步驟58 所獲得的每一組干細胞數據可以含有與步驟50所述的第一干細胞數據相同類型的信息內 容,也就是說步驟58所獲得的每一組干細胞數據含有對應的結果或數據& rlb,其中有關 R的第一個與第二個下標數字是定義在、描述在或是說明在步驟50所提及的第一干細胞數 據的R1;1_Ra;b中。另外,圖7C的步驟58也可以用來確認、決定、評估或測試步驟51所述的 一種或多種的行為或刺激(如服用或攝取一顆或多顆以下第一實驗和圖11所提及的褐藻 補充品)的效果或功效(或效用)。
[0183] 在接下來的內容中,將以一種增加人體周邊血液干細胞數量的方法作為范例,敘 述第一實驗并顯示相關的實驗結果。圖8A-圖8F顯示出三位人類受試者在口服30顆褐藻 糖膠補充品之前與之后的干細胞數據。透過步驟49至步驟53和步驟56至步驟58的這個 方法,可以從三位人類受試者獲得圖8A-圖8F的干細胞數據。在第一實驗中,每一位人類 受試者在步驟51中是口服30顆褐藻糖膠補充品。每一顆褐藻糖膠補充品的重量為151. 3 毫克(mg),并且含有0. 1克的褐藻糖膠(其是透過萃取的方式從生長在日本沖繩縣周圍海 域的褐藻中獲得)和0.04克的膳食纖維。此褐藻糖膠補充品可以在日本沖繩縣生產。褐 藻是海藻的一種。褐藻有各式各樣的種類,例如水云、昆布、裙帶菜、羊棲菜等。綠藻、藍藻 或藍綠藻是生長在靠近海岸的地方或是在淺海里,而且依賴光合作用生長。紅藻是生長在 深海里,而且倚賴微光進行光合作用。褐藻是生長在介于綠/藍藻和紅藻之間的海洋中,換 句話說,褐藻是生長在海洋深度中間的地方。
[0184] 圖11顯示用在第一實驗之褐藻糖膠補充品的內容/成分信息。如圖11所示,一顆 褐藻糖膠補充品含有重量百分比為80%的水云粉(mozuku powder)、重量百分比為15%的 結晶纖維素 (crystalline cellulose)、重量百分比為3 %的鹿糖脂肪酸酯(sucrose fatty acid esters)以及重量百分比為2%的精細二氧化硅。水云粉是萃取自(或是提取自)生 長在日本沖繩縣周圍海域中的水云褐藻(為一種海藻)。然后,將水云粉混合結晶纖維素、 蔗糖脂肪酸酯以及精細二氧化硅,就可以獲得這顆褐藻糖膠補充品。在第一實驗中,每一 位受試者口服30顆沖繩褐藻糖膠補充品,也就是說每一位受試者服用4. 5克(或超過3. 5 克)的沖繩褐藻補充品,此沖繩褐藻補充品包括重量百分比為80% (或是超過70%)的水 云粉。這30顆的沖繩褐藻糖膠補充品(也就是約4. 5克左右的沖繩褐藻補充品)含有3 克(或是超過2克)的褐藻糖膠或是含有重量百分比超過60%的褐藻糖膠。因此,每一位 受試者服用3克(或是超過2克)的褐藻糖膠。
[0185] 在第一實驗中,這三位受試者每一位的體重大約是75公斤。這意味著褐藻糖膠的 劑量是每公斤體重約40毫克。或者,褐藻糖膠的劑量也可以是每公斤體重超過20毫克、30 毫克、40毫克或是50毫克。圖12揭示褐藻糖膠的部分分子結構,其包含多個環形結構,每 一個環形結構含有5個碳原子(C)和1個氧原子(0)。另外,此分子結構也包含數個基團 (radical) R,其可是S03*H。S03基團在褐藻糖膠中扮演著非常重要的角色。在沖繩褐藻 糖膠補充品中,硫(S)在褐藻糖膠分子中的重量百分比大約是12%。對本發明的實施例而 言,在這個褐藻糖膠補充品中,硫(S)在褐藻糖膠分子中的重量百分比也可以大于6%、8% 或10%。或者,在這個褐藻糖膠補充品中,硫(S)在褐藻糖膠分子中的重量百分比也可以大 于 12%、16%或 20%。
[0186] 在第一實驗中,這三位受試者是:(1)受試者A :-位近三十歲的女性,其實驗數據 顯示在圖8A和圖8B ; (2)受試者B :-位五十五歲左右的男性,其實驗數據顯示在圖8C和 圖8D ;以及(3)受試者C :一位五十歲出頭的男性,其實驗數據顯示在圖8E和圖8F。圖8A 和圖8B的干細胞數據顯示受試者A在食用或攝取褐藻糖膠補充品之前、之后第1. 5小時、 之后第24小時以及之后第48小時的每一種干細胞(共有27種干細胞)的百分比。圖8C 和圖8D的干細胞數據顯示受試者B在食用或攝取褐藻糖膠補充品之前、之后第1. 5小時、 之后第24小時以及之后第48小時的每一種干細胞(共有27種干細胞)的百分比。圖8E 和第8圖8F的干細胞數據顯示受試者C在食用或攝取褐藻糖膠補充品之前、之后第1. 5小 時、之后第24小時以及之后第48小時的每一種干細胞(共有27種干細胞)的百分比。
[0187] 用于干細胞研究的實驗方法、程序和規范(其包括使用流式細胞儀)已敘述在前 面的段落中。圖9的步驟61至步驟70也可以用來獲得每一位受試者在食用或攝取褐藻糖 膠補充品之前、之后第1. 5小時、之后第24小時以及之后第48小時的每一種干細胞(共有 27種干細胞)的百分比。請參閱圖9所示,在步驟61中,從一個體(如上述三位人類受試 者的任何一位)獲得或收集5毫升的周邊血液,然后將5毫升的周邊血液放進第一試管中, 并使其混合二價陽離子螯合劑(例如乙二胺四乙酸)。接著,在步驟62中,將1毫升的6% 羥乙基淀粉加到第一試管內的5毫升周邊血液中,以形成一個第一中間樣本。6%羥乙基淀 粉是一種磷酸鹽緩沖液內含有6%的羥乙基淀粉的溶液,也就是每100毫升的磷酸鹽緩沖 液含有6克的羥乙基淀粉。接著,在步驟63中,讓第一中間樣本在室溫(如約27°C)靜置 或培育一段時間(例如至少30分鐘)。待第一中間樣本形成上下兩個分層后,在不擾動下 分層(其為紅血球層)的情況下,將上分層(其為細胞層)以吸取器移出并放置到第二試 管中。然后,在步驟64中,將放到第二試管內的上分層以適當的轉速(例如每分鐘3, 000 轉)離心一段時間(例如15分鐘),并在離心完成后,獲得離心樣本。接著,在步驟65中, 移除離心樣本的上清液。接下來,在步驟66中,以適當的鹽溶液(如PBS)沖洗離心樣本的 顆粒,然后使顆粒重新懸浮于3毫升的第一溶液(例如含有1 %或2%牛血清白蛋白的磷酸 鹽緩沖液)中,以獲得3毫升樣本。
[0188] 接著,在步驟67中,將3毫升樣本分到多個樣本容器(如試管)中。每個樣本容 器含有來自3毫升樣本的100微升(microliter)溶液(以下稱" 100微升樣本")。然后, 每個樣本容器可以加入特定一種的染色劑(其可含有特定一種的抗體或是多種特定的抗 體)。加到每個樣本容器里的染色劑可以是彼此不同的,所以每個樣本容器中的染色劑所含 有的一種或多種抗體也可以是彼此不同的。因此,加到這些樣本容器里的染色劑是彼此含 有不同種類的抗體。在每個樣本容器中加入一種特定染色劑的目的在于識別一種特定的細 胞(表面)標記、多種選定的細胞(表面)標記或是特定種類的干細胞。在染色劑里的每 一種抗體可以用來識別一種特定的細胞(表面)標記、一種特定的干細胞或是多種特定的 干細胞或細胞(表面)標記。這些染色劑里的每一種抗體是不同于這些染色劑里的其它種 抗體。因此,每一個樣本容器里含有一個第二中間樣本,而且每一個第二中間樣本都是由經 過上述對應的染色劑(其含有一種或多種特定的抗體)染色的100微升樣本所構成。
[0189] 接著,在步驟68中,讓這些樣本容器里的第二中間樣本在室溫(如約27°C )靜置 或培育一段時間(例如至少30分鐘)。接著,在步驟69中,將每一個第二中間樣本和大約 400微升的第二溶液(如含有1 %或2%牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液)進行混合,以形成 體積為500微升的樣本(以下稱"500微升樣本")。每一個500微升樣本都是100微升樣 本(其是經過相對應的一種染色劑(此染色劑含有一種或多種抗體)染色)和第二溶液的 混合物。接著,在步驟70中,利用一流式細胞儀分析這些樣本容器里的500微升樣本,進而 獲得干細胞數據。在第一實驗中,流式細胞儀會去計數和分析每個500微升樣本里的其中 一百萬個顆粒(其是含有干細胞、其它的細胞以及來自加入的染色劑或第二溶液的顆粒)。
[0190] 在圖9的步驟70中,透過流式細胞儀測量到的前向散射系數(forward scattering coefficient,簡稱 FSC)和側向散射系數(side scattering coefficient,簡 稱SSC),可以將上述提及的每個500微升樣本里的其中一百萬個顆粒(其是含有干細胞、 其它的細胞以及來自加入的染色劑或第二溶液的顆粒)區分成對應的多個細胞群或顆粒 群。圖10是用在上述流式細胞儀的前向散射系數/側向散射系數圖,并且顯示某個500微 升樣本里的一百萬個顆粒(其系含有干細胞、其它的細胞以及來自加入的染色劑或第二溶 液的顆粒)的多個細胞群或顆粒群。請參閱圖10所示,橫軸代表范圍從1〇 3到1〇7 2的前 向散射系數,縱軸代表范圍從101到1〇72的側向散射系數。在本發明中,前向散射系數與 一個細胞或顆粒的表面積或尺寸有關或是成比例,側向散射系數與一個細胞或顆粒的粒性 (granularity)或內部復雜度有關或是成比例。位在圖10所示的垂直虛線81右側區域的 點狀物可以代表尺寸大于1微米的顆粒或細胞。位在圖10所示的水平虛線82上方區域的 點狀物可以代表側向散射系數大于1〇 2的顆粒或細胞。
[0191] 圖10所示的細胞群或顆粒群包括:(1)微顆粒(micro particles),如區域P1所 示;(2)尺寸大于1微米且側向散射系數大于102的細胞,如區域P3所示;(3)未知的微 顆粒,如區域P4所示;(4)染色緩沖溶液(staining buffer),如區域P5所示;(5)淋巴球 (lymphocyte),如區域P6所示;(6)紅血球,如區域P7所示;(7)粒細胞(granulocyte),如 區域P8所示;以及(8)血小板,如區域P9所示。區域P3包括區域P1、區域P6、區域P7、區 域P8和區域P9。感興趣的細胞或顆粒(以下稱"全部細胞或顆粒TS")是位在區域P3里, 但是沒有位在區域P1、區域P6、區域P7、區域P8和區域P9這些區域里。全部細胞或顆粒 TS包含有一種或多種上述的27種干細胞(例如SB-1細胞以及/或是SB-2細胞)。在本 發明中,其它500微升樣本含有與圖10所提及的細胞群或顆粒群相同的細胞群或顆粒群。
[0192] 透過流式細胞儀,可以測得(或獲得)每個500微升樣本里的全部細胞或顆粒TS 的數量以及在全部細胞或顆粒TS中選定種類干細胞的數量。然后,使用上述的數據或資 料,可以得到圖8A-圖8F所示的"上述27種干細胞中每一種干細胞的數量或總數占全部細 胞或顆粒TS的數量或總數的百分比"。圖8A-圖8F所示的每一種干細胞的百分比可以透過 下列的計算方式來獲得:將每一種干細胞的數量或總數除以對應的全部細胞或顆粒TS的 數量或總數,然后將每一個相除的結果乘以100% (其是為了將相除的結果轉換成百分比 數字)。在步驟70中,透過上述流式細胞儀獲得的干細胞數據報括"每一種干細胞(共有 27種干細胞)的數量或總數占對應的全部細胞或顆粒TS的數量或總數的百分比"。
[0193] 因此,對上述三位人類受試者進行步驟61至步驟70所述的方法,可以獲得圖 8A-圖8F所示的每位人類受試者在食用或攝取上述褐藻糖膠補充品之前、之后第1. 5小時、 之后第24小時以及之后第48小時的"每一種干細胞(共有27種干細胞)的數量或總數 占對應的全部細胞或顆粒TS的數量或總數的百分比"。利用獲得的百分比數據,則可獲得 每位人類受試者在食用或攝取褐藻糖膠補充品之前和之后第1. 5小時每一種干細胞(共有 27種干細胞)的百分比變化(percentage change)、在食用或攝取褐藻糖膠補充品之前和 之后第24小時每一種干細胞(共有27種干細胞)的百分比變化或是在食用或攝取褐藻糖 膠補充品之前和之后第48小時每一種干細胞(共有27種干細胞)的百分比變化。這些百 分比變化的數據可以用來建立或得到干細胞在體內培養或培育的最佳收獲(或獲取)時間 點(例如在食用或攝取褐藻糖膠補充品之后的第24小時)。
[0194] 請再次參閱圖8A-圖8F,將三位人類受試者在食用或攝取褐藻糖膠補充品之前的 數據和三位人類受試者在食用或攝取褐藻糖膠補充品之后第24小時的數據進行比較,得 知大部分種類的干細胞在百分比上顯示出有增加的情況。特別是可以發現下列的干細胞在 百分比上有兩倍或是更多的增加:SB-1細胞、⑶44(+)多潛能干細胞、⑶13(+)多潛能干細 胞、⑶73(+)多潛能干細胞、⑶90(+)多潛能干細胞、⑶34(+)造血干細胞、⑶48(+)先驅干 細胞、⑶244(+)先驅干細胞、⑶140b(+)先驅干細胞、⑶117(+)先驅干細胞、⑶10(+)先驅 干細胞以及CD33(+)先驅干細胞。上述12種干細胞在百分比上有兩倍或是更多的增加是 透過下列的方式得知:將三位人類受試者在食用或攝取褐藻糖膠補充品之后第24小時有 關上述12種干細胞的"干細胞的數量或總數占對應的全部細胞或顆粒TS的數量或總數的 百分比"和三位人類受試者在食用或攝取褐藻糖膠補充品之前有關上述12種干細胞的"干 細胞的數量或總數占對應的全部細胞或顆粒TS的數量或總數的百分比"進行比較。
[0195] 根據圖8A-圖8F的干細胞數據顯示,服用上述的褐藻糖膠補充品可以導致、引起 或造成某些種類干細胞的百分比在三位人類受試者食用或攝取褐藻糖膠補充品之后第24 小時的周邊血液中至少有兩倍的增加。此處所述的"兩倍增加"是指「某些特定種類的干細 胞在食用或攝取褐藻糖膠補充品之前的百分比」和「這些特定種類的干細胞在食用或攝取 褐藻糖膠補充品之后第24小時(也可以是其它特定時間,例如第1. 5小時、第3小時、第6 小時、第9小時、第12小時、第18小時、第30小時或第36小時)的百分比」的比例。另外, 圖8A-圖8F的干細胞數據也顯示,其它種類的干細胞也有1. 5倍、3倍或4倍的增加。因 此,口服褐藻糖膠(一種褐藻的主要成分)可以是一種使人類或動物的周邊血液增加干細 胞的有效方法。綜上所述,一種行為,例如口服3克(也就是超過2克)的褐藻糖膠(其可 來自上述的褐藻糖膠補充品)或是一種或多種的行為或刺激(X),可以導致、引起、活化或 催化人類或動物周邊血液中的干細胞至少有1.5倍(或以上)、2倍(或以上)、3倍(或以 上)或4倍(或以上)的增加。
[0196] 某些準則(或標準)可以設定用來決定步驟53獲得的組織樣本(其在進行或接 受步驟51的一種或多種的行為或刺激(X)之后取得)是否可以用于收獲、獲得或是收集圖 7A步驟54的干細胞。例如,請參閱圖7A所示,當測量結果或數據顯示SB-1細胞的數量或 總數占全部細胞或顆粒TS的數量或總數的百分比是大于20%、25%或30%、SB-2細胞的數 量或總數占全部細胞或顆粒TS的數量或總數的百分比是大于20%、25%或30%以及/或 是類卵裂球干細胞的數量或總數占全部細胞或顆粒TS的數量或總數的百分比是大于5% 或10%的時候,從步驟53獲得的組織樣本(其在進行或接受步驟51的一種或多種的行為 或刺激(X)之后取得)才可以用來收獲、獲得或是收集干細胞。或者,請參閱圖7A所示,當 測量結果或數據顯示SB-1細胞、SB-2細胞以及/或是類卵裂球干細胞至少有1. 5倍(或 以上)增加、2倍(或以上)增加或是3倍(或以上)增加的時候,從步驟53獲得的組織 樣本(其在進行或接受步驟51的一種或多種的行為或刺激(X)之后取得)才可以用來收 獲、獲得或是收集干細胞。此處所述的X倍(如1. 5倍、2倍或3倍)增加已定義在前面的 段落中。
[0197] 根據圖8A-圖8F所示的結果,證實口服褐藻糖膠可以增加人類或動物的周邊血液 中干細胞的數量。因此,用來表示(或指出)口服褐藻糖膠(其為一種行為或刺激(X))有 益于增加人體某些種類干細胞數量的標志、記號、陳述或符號就可以被允許貼在或是印在 一種產品(如上述的褐藻糖膠補充品)的包裝、容器或是包裝紙上。在另外一個范例中,圖 8A-圖8F所示的結果也可以用來判斷使用在口服褐藻糖膠補充品這種行為的劑量、強度、 持續時間、施行頻率以及/或是施行時間是否有益于增加人體某些種類干細胞的數量。根 據圖8A-圖8F所示的結果,每天或是一次服用30顆的褐藻糖膠補充品(這30顆褐藻糖膠 補充品含有3克(或是超過2克)的褐藻糖膠)可以用來治療某些疾病或是傷害或是用來 維持健康。
[0198] 一般情況下,圖8A-圖8F所述的27種干細胞在組織中可以認為是靜止或休眠的 (quiescent),但是在食用或攝取褐藻糖膠補充品之后,可以讓這27種干細胞移動或調動 到周邊血液中,并且活化或分化這27種干細胞來修補受損傷的組織。因此,褐藻的褐藻糖 膠成分可以在干細胞從一適當位置(如肌肉或骨髓)移動或調動到血流的機制中或是在活 化或生成干細胞的機制中扮演一個關鍵性的角色。換句話說,褐藻的主要成分一褐藻糖膠, 可以是干細胞的一種調動(或移動)器、產生器或是活化(或催化)器。前面敘述的實施 例可以用來調動、產生或是活化(或催化)一種或多種的干細胞(例如SB-1細胞以及/或 是SB-2細胞)。
[0199] 圖13所示為一種獲得有關一個體的干細胞數據(或資料)的方法。請參閱圖13 所示,在步驟101中,一實驗對象(如前面所述的個體(S))進行或接受一種或多種的行為 或刺激(X)。例如,實驗對象(或稱實驗組參與者)可以在步驟101中口服30顆褐藻糖膠 補充品(其可是圖11和圖12所提及的褐藻糖膠補充品),所以實驗對象在步驟101中服 用了 3克(也就是超過2克)的褐藻糖膠。或者,實驗對象也可以在步驟101中接受注射 一種含有褐藻糖膠或小分子褐藻糖膠的營養品或補充品。接著,在步驟102中,在實驗對象 進行或接受步驟101所述的一種或多種的行為或刺激(X)之后,讓實驗對象等待一段(預 定的)時間,例如1. 5小時、12小時、24小時、48小時、0. 5小時至3小時或是1小時至2小 時。接下來,在步驟103中,將實驗對象在一特定時間點的周邊血液取出,并放到一采血管 (例如乙二胺四乙酸(EDTA)試管)中,以獲得一血液樣本(也就是一組織樣本)。所述的 特定時間點為該段(預定的)時間結束的時間點。血液樣本的體積可以是大于或等于5毫 升或10毫升。接著,在步驟104中,對血液樣本進行一測量或分析方法(以下稱"測量方法 MT"),進而獲得實驗對象在所述的特定時間點的干細胞數據。該干細胞數據可包括實驗對 象在所述的特定時間點的周邊血液中,每單位體積(如每毫升)的每一種干細胞(其可是 本發明在"干細胞定義"里所提及的多種干細胞)的數量。在對血液樣本進行步驟104中 的測量方法MT之前,血液樣本可以存放在溫度介于1°C至30°C之間(例如介于1°C至10°C 之間、介于l〇°C至20°C之間或是介于20°C至30°C之間)的環境中。從步驟103獲得血液 樣本到步驟104對血液樣本進行測量方法MT的時間間隔可以是等于或小于30分鐘、60分 鐘、12小時、24小時、48小時、72小時或是1星期,例如是介于10分鐘到30分鐘之間、介于 30分鐘到60分鐘之間、介于0. 5小時到2小時之間、介于2小時到12小時之間、介于12小 時到24小時之間、介于24小時到48小時之間或是介于48小時到72小時之間。
[0200] 圖13步驟104所提及的測量方法MT可以包括圖14A的步驟1至步驟8、圖14B的 步驟9至步驟14以及圖14C的步驟15至步驟20。請參閱圖14A所示,在步驟1中,將含有 6%輕乙基淀粉的紅血球凝集劑(erythrocyte aggregation agent)加到裝有一血液樣本 (如周邊血液)的一采血管(例如乙二胺四乙酸(EDTA)試管)中,以形成第一中間樣本。 含有6 %羥乙基淀粉的紅血球凝集劑可以是HetaS^?溶液。裝有血液樣本的采血管例如 可以在圖13的步驟103中獲得。血液樣本可以透過以下方式獲得:取出一個體(如前面所 述的個體(S))的周邊血液,并將取出的周邊血液放到上述的采血管中。在對血液樣本進行 步驟1之前,可以將血液樣本存放在溫度介于1°C至30°C之間(例如介于1°C至10°C之間、 介于10°C至20°C之間或是介于20°C至30°C之間)的環境中。從獲得血液樣本到對血液樣 本進行步驟1的時間間隔可以是等于或小于30分鐘、60分鐘、12小時、24小時、48小時、72 小時或是1星期,例如介于10分鐘到30分鐘之間、介于30分鐘到60分鐘之間、介于0. 5 小時到2小時之間、介于2小時到12小時之間、介于12小時到24小時之間、介于24小時 到48小時之間或是介于48小時到72小時之間。血液樣本的體積可以是大于或等于5毫 升或10毫升。血液樣本與含有6%羥乙基淀粉的紅血球凝集劑的體積比可以是5:1。6% 羥乙基淀粉是一種磷酸鹽緩沖液(PBS)內含有6%的羥乙基淀粉的溶液,也就是每100毫升 (mL)的磷酸鹽緩沖液含有6克的羥乙基淀粉。
[0201] 接著,在步驟2中,將第一中間樣本放到第一試管(如falcon試管)中,然后讓第 一中間樣本在室溫(如27°C左右)培養一段時間(例如30分鐘至90分鐘)。待第一試管 中的第一中間樣本形成上下兩個分層后,在不擾動下分層(其為紅血球層)的情況下,將上 分層(其為細胞層)以吸取器移出并放置到第二試管中。接下來,在步驟3中,將移到第二 試管內的上分層以適當的轉速(例如每分鐘1,800轉或是每分鐘3, 000轉)離心一段時間 (例如10分鐘至20分鐘),并在離心完成后獲得第一離心樣本。接著,在步驟4中,將第一 離心樣本的上清液移除,并使第一離心樣本里的顆粒重新懸浮于不含有鈣與鎂的第一含鹽 溶液(例如不含有鈣與鎂的杜爾貝科(Dulbecco)磷酸鹽緩沖液)中,以形成第二中間樣 本。第一離心樣本里的顆粒有部分來自于血液樣本。接下來,在步驟5中,將第二中間樣本 以適當的轉速(例如每分鐘1,800轉或是每分鐘3, 000轉)離心一段時間(例如10分鐘 至20分鐘),并在離心完成后獲得第二離心樣本。
[0202] 接著,在步驟6中,將第二離心樣本的上清液移除,并使第二離心樣本里的顆粒重 新懸浮于不含有鈣與鎂的第二含鹽溶液(例如不含有鈣與鎂的杜爾貝科(Dulbecco)磷酸 鹽緩沖液)中,以形成第三中間樣本。第二離心樣本里的顆粒有部分來自于血液樣本。接 下來,在步驟7中,將第三中間樣本以適當的轉速(例如每分鐘1,800轉或是每分鐘3, 000 轉)離心一段時間(例如10分鐘至20分鐘),并在離心完成后獲得第三離心樣本。接著, 在步驟8中,將第三離心樣本的上清液移除,并使第三離心樣本里的顆粒重新懸浮于第一 培養液(例如含有1 %牛血清白蛋白(BSA)的磷酸鹽緩沖液)中,以獲得一個經過處里的樣 本(以下稱"處理過樣本")。在本發明中,讓〇. 1克的牛血清白蛋白溶解在10毫升的磷酸 鹽緩沖液中,可以獲得含有1 %牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液。第三離心樣本里的顆粒有部 分來自于血液樣本。處理過樣本的體積可以大于或等于0. 8毫升或3毫升,而且也可以小 于步驟1所述的血液樣本的體積。第一培養液的體積可以大致等于處理過樣本的體積。
[0203] 請參閱圖14B所示,在透過步驟8獲得處理過樣本之后,依序進行步驟9至步驟 14。在步驟9中,從處理過樣本中取出一部分(以下稱"第一部分樣本"),然后將第一部分樣 本分到第三試管中。接著,在步驟10中,將染色劑(例如臺盼藍(trypan blue))加到裝有 第一部分樣本的第三試管中,讓染色劑和第一部分樣本混合,以形成第一測試樣本。第一部 分樣本的體積可以是介于5微升(microliter)至50微升之間(例如10微升),而且可以等 于染色劑的體積。接下來,在步驟11中,將部分的第一測試樣本(此部分的體積可以是介于 10微升至20微升之間(例如10微升))放入到一個血球計數器(hemocytometer)的一個 空室(chamber)中。此血球計數器具有位在上述空室下方的一微小方格圖案(microscopic grid),如圖15所示。此微小方格圖案包括4個寬度為1毫米(mm)的正方形(也可以稱為 1毫米寬正方形)100a-100d,而且這4個正方形100a-100d中的每一個又再分成16個寬度 為0. 25毫米的正方形(也可以稱為0. 25毫米寬正方形)。另外,一玻璃蓋玻片覆蓋在上述 空室的上面。位在玻璃蓋玻片底部表面與上述空室地面之間的空間,其深度為0. 1毫米。因 此,4個1毫米寬正方形100a-100d中的每一個都代表0. 1立方毫米(mm3)或是ΚΓ4毫升。
[0204] 請參閱圖14B所示,在進行完(或完成)步驟11之后,如步驟12所述,將血球計 數器放到顯微鏡的載物臺(stage)上。此顯微鏡的總放大倍率可以是大于或等于200倍。 另外,此顯微鏡可以包括放大倍率大于或等于10倍的接目鏡(ocular lens)以及放大倍率 大于或等于20倍的接物鏡(objective lens)。接著,在步驟13中,透過顯微鏡的視野范 圍,計數(或計算)位在1毫米寬正方形l〇〇a里其中一個0. 25毫米寬正方形內尺寸大于 或等于1微米的細胞(也可以稱為彡1微米細胞),進而獲得彡1微米細胞在1毫米寬正 方形100a之上述0. 25毫米寬正方形內的數量(或總數)。因此,將彡1微米細胞在1毫 米寬正方形l〇〇a之上述0. 25毫米寬正方形內的數量(或總數)乘以16 (其為1毫米寬正 方形100a所具有0. 25毫米寬正方形的數量),可估算出彡1微米細胞在1毫米寬正方形 l〇〇a里的數量(或總數)。接下來,在步驟14中,將彡1微米細胞在1毫米寬正方形100a 里的數量(或總數)乘以一個稀釋系數(例如等于或大于1.5、2或3),然后將相乘的結果 除以1毫米寬正方形l〇〇a的體積(也就是ΚΓ 4毫升),因而估算出彡1微米細胞在處理過 樣本中每毫升的數量(也就是> 1微米細胞在處理過樣本中每單位體積的數量)。例如,當 第一部分樣本用體積和第一部分樣本相同的染色劑稀釋的時候,上述的稀釋系數可以是2。 步驟13和步驟14所提及的> 1微米細胞可以包括微顆粒、粒細胞、紅血球、血小板、白血球 (包含淋巴球)以及各種的干細胞,其中微顆粒可以沒有細胞核或細胞質。
[0205] 此外,在步驟14中,> 1微米細胞在處理過樣本中每毫升的數量也可以透過以下 的方式來估算:首先將> 1微米細胞在血球計數器之每個1毫米寬正方形里的平均計數 (或數量)乘以上述的稀釋系數,然后將相乘的結果除以血球計數器里每個1毫米寬正方 形的平均體積(也就是1〇_ 4毫升)。在這種情況下,步驟13包括:(1)透過顯微鏡的視野 范圍,算出每一個1毫米寬正方形(共有4個,也就是1毫米寬正方形100a-100d)中某個 0. 25毫米寬正方形里尺寸大于或等于1微米之細胞(也可以稱為> 1微米細胞)的數量, 以獲得4個> 1微米細胞的原始數量(或總數),以及(2)將每一個> 1微米細胞的原始 數量(或總數)乘以16 (其為4個1毫米寬正方形100a-100d中,每一個1毫米寬正方形 里所具有0. 25毫米寬正方形的數量),因而估算出(或獲得1微米細胞在每一個1毫 米寬正方形(共有4個,也就是1毫米寬正方形100a-100d)里的數量(或總數)。因此, >1微米細胞在血球計數器的每個1毫米寬正方形里的平均計數(或數量)可以透過以下 方式獲得:將> 1微米細胞在每一個1毫米寬正方形(共有4個,也就是1毫米寬正方形 100a-100d)里的數量(或總數)相加起來,然后將相加的結果除以4 (其為血球計數器中1 毫米寬正方形的數量,也就是4個1毫米寬正方形100a-100d)。
[0206] 請參閱圖14C所示,在透過步驟8獲得處理過樣本之后,依序進行步驟15至步驟 20。在步驟15中,從處理過樣本中取出另一部分(以下稱"第二部分樣本"),然后將第二部 分樣本分到多個樣本容器(如試管)中。因此,每個樣本容器中含有L微升的第二部分樣 本(L微升的第二部分樣本以下稱為"小部分樣本"),其中L可以是50到250中的任何一 個數字(例如100)。在處理過樣本是均勻且含有大致相同之內容物的情況下,第二部分樣 本可以假定含有與步驟9所述的第一部分樣本大致上相同的內容物。第二部分樣本的總體 積可以是介于〇. 5毫升至18微升之間(例如2微升)。樣本容器的數量可以是2個至50 個之間。接著,在步驟16中,在每一個樣本容器中加入一種特定的染色劑(其可含有一種 或多種的抗體)。加到每一個樣本容器中的染色劑可以是彼此不同的,而且可以含有特定一 種的抗體或是多種特定的抗體。每一個樣本容器中的染色劑所含有的一種或多種抗體可以 是彼此不同的。在每個樣本容器中加入一種或多種染色劑的目的在于識別一種或多種特定 的細胞(表面)標記或是一種或多種的干細胞(每一種干細胞可以用本發明在"干細胞定 義"里所提及的一種或多種細胞(表面)標記描述其特征)。這些染色劑中的每一種抗體 可以用來識別一種特定的細胞(表面)標記、一種特定的干細胞或是多種選定的干細胞或 細胞(表面)標記,而且與這些染色劑中的其它種抗體所識別的干細胞或細胞(表面)標 記有所不同。因此,每一個樣本容器中含有一個第四中間樣本,而且每一個第四中間樣本都 是由經過上述對應的染色劑(其含有一種或多種特定的抗體)染色的小部分樣本所構成。
[0207] 接著,在步驟17中,將這些樣本容器中的第四中間樣本在室溫(如27°C左右)培 養一段時間(例如至少30分鐘)。接下來,在步驟18中,將在這些樣本容器中的每一個第 四中間樣本和第二培養液(例如含有1 %牛血清白蛋白(BSA)的磷酸鹽緩沖液)混合,以形 成多個第二測試樣本(也可以稱為"流式細胞儀樣本")。每個第二測試樣本都是小部分樣 本(其經過相對應的一種染色劑(此染色劑含有一種或多種抗體)染色)和第二培養液的 混合物。每個第二測試樣本的體積可以是介于250微升至1,250微升之間,例如500微升。 用來和每個第四中間樣本混合的第二培養液的體積可以是介于200微升至1,000微升之間 (例如400微升),而且大于對應的小部分樣本的體積。
[0208] 接著,在步驟19中,利用流式細胞儀分析這些樣本容器中的第二測試樣本,進而 獲得多組數據(或資料)。每一組數據(其從對應的第二測試樣本中獲得)包含有:尺寸 大于或等于1微米之細胞的數量(以下稱"細胞數C1")、細胞核/細胞質之比為較高的區 域中的細胞數量(以下稱"細胞數C2")以及一種特定的(或選定的)干細胞在細胞核/ 細胞質之比為較高的區域中的數量占細胞數C2的百分比(以下稱"干細胞百分比SP")。 上述的一種特定的(或選定的)干細胞可以是本發明在"干細胞定義"里所提及的任何一 種干細胞,或是以本發明在"干細胞定義"里所提及的一種或多種細胞(表面)標記(例如 CD349(+)、Lgr5(+)或CD66e(+))描述其特征的干細胞。在細胞核/細胞質之比為較高的 區域中的細胞,其尺寸(關于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義)可以是大于或等于1 微米、1. 1微米、1. 5微米、2微米、2. 1微米或3微米,或是介于1微米至15微米之間(例如 介于2微米至6微米之間)。另外,在細胞核/細胞質之比為較高的區域中的細胞,其具有 細胞核以及/或是細胞質,而且含有各種在"干細胞定義"里所提及的干細胞(例如上述的 一種特定的(或選定的)干細胞),但卻幾乎不含有微顆粒、粒細胞、紅血球、血小板和白血 球(包含淋巴球)。在步驟13、步驟14和步驟19里所提及的尺寸大于或等于1微米(其 為一門坎尺寸(threshold size))的細胞大致上具有相同的性質或特性。步驟19所提及 的尺寸大于或等于1微米的細胞可以包括微顆粒、粒細胞、紅血球、血小板、白血球(其包含 淋巴球)以及在細胞核/細胞質之比為較高的區域中的細胞,其中微顆粒可以沒有細胞核 或細胞質。
[0209] 在上述的每一組數據中,細胞數C1包括:(1)細胞數C2 ; (2)粒細胞的數量;(3)血 小板的數量;(4)紅血球的數量;(5)白血球的數量;以及(6)微顆粒的數量。圖16是用在 上述流式細胞儀的前向散射系數/側向散射系數圖。請參閱圖16所示,橫軸代表前向散射 系數,縱軸代表側向散射系數。在使用流式細胞儀分析每一個第二測試樣本之前,圖16的 前向散射系數/側向散射系數圖可以事先設定在流式細胞儀分析中。圖16的前向散射系數 /側向散射系數圖包含有:(1)血小板的區域P1 ; (2)微顆粒的區域P2 ; (3)紅血球與白血球 的區域P3 ;(4)細胞核/細胞質之比為較高的區域,如區域P4所示;以及(5)粒細胞的區域 (圖中未示)。在用流式細胞儀分析每一個第二測試樣本之前,可以使用微粒(microbeads) 或聚合物顆粒,將流式細胞儀的前向散射系數設定在1微米尺寸所對應的(近似)數值。 這個(近似)數值可以用來定義出(或建立出)細胞尺寸大于或等于1微米的特定區域 (threshold region),并透過這個特定區域確定或測定尺寸大于或等于1微米的細胞,因而 獲得這個特定區域中的細胞數C1。上述的區域P1至P4和上述的粒細胞的區域都是位在這 個特定區域中。在步驟19中,流式細胞儀會不斷地分析每個第二測試樣本,直到(1)對應的 細胞數C1達到一個特定數目(其可是大于或等于五十萬、八十萬或一百萬)或是(2)對應 的細胞數C2達到一個特定數目(其可是大于或等于1000、1500、2000、2500、3000或3500) 為止。因此,在完成每個第二測試樣本的分析之后,可以獲得與該些第二測試樣本有關的上 述多組數據(一個第二測試樣本可以獲得一組數據)。
[0210] 請參閱圖14C所示,在進行完(或完成)步驟14和步驟19之后,接著進行圖14C 的步驟20,以獲得干細胞數據(或資料)。在步驟20中,根據> 1微米細胞在處理過樣本中 每毫升的數量(其可從步驟14獲得)以及上述含有細胞數C1、細胞數C2與干細胞百分比 SP的多組數據(其可從步驟19獲得),可以計算出(或獲得)該干細胞數據。該干細胞數 據可以包括每一種特定的干細胞(其可是本發明在"干細胞定義"里所提及的干細胞)在血 液樣本中每毫升的數量(也可以稱為上述每一種特定的干細胞在血液樣本中每單位體積 的數量)。透過以下的計算,可獲得上述每一種特定的干細胞在血液樣本中每毫升的數量: (1)將細胞核/細胞質之比為較高的區域P4中獲得的細胞數C2除以上述細胞尺寸大于或 等于1微米的特定區域中獲得的細胞數C1,然后將相除的結果乘以100% (其為了將相除 的結果轉換成百分比數字),因而獲得細胞數C2占細胞數C1的百分比(其是一種與細胞 數C1和細胞數C2之間的關系有關的數據或資料);(2)將細胞數C2占細胞數C1的百分比 乘以與一種選定之干細胞有關的干細胞百分比SP,然后將相乘的結果乘以100% (其為了 將相乘的結果轉換成百分比數字),因而獲得該種選定的干細胞的數量占細胞數C1的百分 比(其是一種與處理過樣本有關以及與該種選定的干細胞和細胞數C1之間的關系有關的 數據或資料);(3)將該種選定的干細胞占細胞數C1的百分比乘以> 1微米細胞在處理過 樣本中每毫升的數量(其從步驟14中獲得),因而獲得該種選定的干細胞在處理過樣本中 每毫升的數量(也就是該種選定的干細胞在處理過樣本中每單位體積的數量),其是一種 與該種選定的干細胞和處理過樣本之間的關系有關的數據;(4)將處理過樣本的體積(單 位為毫升)除以血液樣本的體積(單位為毫升),因而獲得一個體積改變系數(或稱樣本 準備系數),其可是處理過樣本的體積與血液樣本的體積的比率;以及(5)將該種選定的干 細胞在處理過樣本中每毫升的數量乘以體積改變系數,因而獲得該種選定的干細胞在血液 樣本中每毫升的數量(也就是該種選定的干細胞在血液樣本中每單位體積的數量),其是 一種與該種選定的干細胞和血液過樣本之間的關系有關的數據或資料,而且可以用來代表 該種選定的干細胞在一個體(如圖13所述的實驗對象)的周邊血液中每毫升的數量。該 種選定的干細胞可以是本發明在"干細胞定義"里所提及的任何一種干細胞,或是以本發明 在"干細胞定義"里所提及的一種或多種細胞(表面)標記(其可包括CD349(+)、Lgr5(+) 或CD66e(+))描述其特征的干細胞。為了能更準確地獲得上述的干細胞數據,與該種選定 的干細胞有關的細胞數C2可以是大于或等于1,000顆細胞、1,500顆細胞、2, 000顆細胞或 2, 500顆細胞。
[0211] 更詳細地說,圖14B所提及的細胞數量可以透過計算尺寸大于或等于一給定門坎 尺寸(在> 1微米細胞的數量或4個> 1微米細胞的原始數量的范例中,該給定門坎尺寸 等于1微米)的細胞的數量來獲得,圖14C所提及的細胞數C1可以透過計算(或計數)尺 寸大于或等于該給定門坎尺寸(在本范例中,該給定門坎尺寸等于1微米)的細胞的數量 來獲得。該給定門坎尺寸除了可以是本范例所述的1微米之外,也可以是〇. 5微米、0. 8微 米、1. 5微米、2微米或3微米。在細胞數C1是透過計算尺寸大于或等于該給定門坎尺寸 (在本范例中,該給定門坎尺寸等于1微米)之細胞的數量而獲得的情形下,用于分析每個 第二測試樣本的流式細胞儀可以透過尺寸為該給定門坎尺寸(在本范例中,該給定門坎尺 寸等于1微米)的微粒或聚合物顆粒來設定前向散射系數/側向散射系數圖中前向散射系 數的(近似)數值,以定義出(或建立出)細胞尺寸大于或等于該給定門坎尺寸的特定區 域(threshold region),并透過這個特定區域確定或測定尺寸大于或等于該給定門坎尺寸 (在本范例中,該給定門坎尺寸等于1微米)的細胞。
[0212] 根據圖13、圖14A、圖14B和圖14C所述的方法,本發明可以使用一個整合系統、裝 置、儀器或工具(AD)來獲得步驟20所提及的干細胞數據(其與圖13所述之實驗對象的血 液樣本有關)。這個整合系統、裝置、儀器或工具(AD)可包括:(1) 一個第一裝置、儀器或工 具,其可從實驗對象(或個體)獲得或取得血液樣本,如圖13的步驟103所述;(2) -個第 二裝置、儀器或工具(其可包括一離心機),其可處理血液樣本,以獲得或制備出處理過樣 本(其為一測試樣本),如圖14A的步驟1至步驟8所述;(3) -個第三裝置、儀器或工具 (其可以包括一血球計數器、一顯微鏡和由一軟件編譯的一處理器/計算機),其可透過第 一方法從處理過樣本的第一部分獲得第一數據(例如圖14B步驟14所獲得的> 1微米細 胞在處理過樣本中每毫升的數量),該第一方法可以包括使用血球計數器(和顯微鏡)計算 處理過樣本的第一部分的顆粒或細胞的數量,如圖14B的步驟9至步驟14所述;(4) 一個第 四裝置、儀器或工具(其可包括一流式細胞儀和一處理器/計算機),其可透過第二方法從 處理過樣本的第二部分獲得第二數據(例如與一種選定的干細胞有關的干細胞百分比SP) 和第三數據(例如與該種選定的干細胞有關的細胞數C2占與該種選定的干細胞有關的細 胞數C1的百分比),該第二方法可以包括使用流式細胞儀計算處理過樣本的第二部分的顆 粒或細胞的數量,如圖14C的步驟15至步驟20所述;以及(5) -個第五裝置、儀器或工具 (例如一計算機或一處理器),其可:(a)對第二數據和第三數據進行第一運算或計算(例 如將第二數據乘以第三數據(譬如將干細胞百分比SP乘以細胞數C2占細胞數Cl的百分 比),然后將相乘的結果乘以100% ),以獲得與處理過樣本有關的第四數據(例如該種選 定的干細胞的數量占細胞數C1的百分比);(b)對第一數據和第四數據進行第二運算或計 算(例如將第一數據乘以第四數據(譬如將>1微米細胞在處理過樣本中每毫升的數量乘 以該種選定的干細胞的數量占細胞數C1的百分比)),以獲得與處理過樣本有關的第五數 據(例如該種選定的干細胞在處理過樣本中每毫升的數量);(C)對處理過樣本的體積和血 液樣本的體積進行第三運算或計算(例如將處理過樣本的體積除以血液樣本的體積),以 獲得上述的體積改變(或樣本準備)系數(例如處理過樣本的體積與血液樣本的體積的比 率);以及(d)對第五數據和體積改變(或樣本準備)系數進行第四運算或計算(例如將 第五數據乘以體積改變(或樣本準備)系數(譬如將該種選定的干細胞在處理過樣本中每 毫升的數量乘以處理過樣本的體積與血液樣本的體積的比率)),以獲得與血液樣本有關的 第六數據(例如該種選定的干細胞在血液樣本中每毫升的數量)。
[0213] 另外,亦可將上述的第一、第二、第三、第四和第五裝置、儀器或工具中的任兩個或 以上的裝置、儀器或工具合并組成一個可以進行上述任兩個或以上的裝置、儀器或工具之 功能的整合裝置、儀器或工具或是單一裝置、儀器或工具。例如,第一和第二裝置、儀器或工 具可以合并組成一個可以進行第一和第二裝置、儀器或工具的功能的第一整合裝置、儀器 或工具或是第一單一裝置、儀器或工具,以及第三、第四和第五裝置、儀器或工具可以合并 組成一個可以進行第三、第四和第五裝置、儀器或工具的功能的第二整合裝置、儀器或工具 或是第二單一裝置、儀器或工具。或者,第二、第三、第四和第五裝置、儀器或工具可以合并 組成一個可以進行第二、第三、第四和第五裝置、儀器或工具的功能的整合裝置、儀器或工 具或是單一裝置、儀器或工具。或者,第二、第三和第四裝置、儀器或工具可以合并組成一 個可以進行第二、第三和第四裝置、儀器或工具的功能的整合裝置、儀器或工具或是單一裝 置、儀器或工具。或者,第三和第四裝置、儀器或工具可以合并組成一個可以進行第三和第 四裝置、儀器或工具的功能的整合裝置、儀器或工具或是單一裝置、儀器或工具。或者,第四 和第五裝置、儀器或工具可以合并組成一個可以進行第四和第五裝置、儀器或工具的功能 的整合裝置、儀器或工具或是單一裝置、儀器或工具。
[0214] 在本發明中,第三裝置、儀器或工具可以用來獲得尺寸大于或等于該給定門坎尺 寸(在本范例中,該給定門坎尺寸等于1微米)的細胞在處理過樣本中每單位體積的數量, 第四和第五裝置、儀器或工具可以用來獲得該種選定的干細胞在尺寸大于或等于該給定門 坎尺寸(在本范例中,該給定門坎尺寸等于1微米)的細胞中的百分比(其與處理過樣本 有關)。將上述獲得的細胞在處理過樣本中每毫升的數量乘以上述獲得之該種選定的干細 胞的百分比,可以獲得該種選定的干細胞在處理過樣本中每單位體積的數量。將該種選定 的干細胞在處理過樣本中每單位體積的數量乘以上述的體積改變(或樣本準備)系數,可 以獲得該種選定的干細胞在血液樣本中每單位體積的數量。透過將第三裝置、儀器或工具 所獲得的細胞數量數據結合第四和第五裝置、儀器或工具所獲得的該種選定的干細胞的百 分比的方式,可以更準確地獲得該種選定的干細胞在周邊血液中的數量。
[0215] 根據圖13、圖14A、圖14B和圖14C所述的方法,本發明可以使用一個單一系統、裝 置、儀器或工具(TD)來獲得步驟20所提及的干細胞數據(其與圖13所述之實驗對象的血 液樣本有關)。這個單一系統、裝置、儀器或工具(TD)可以提供或執行:(1)第一功能,其可 從實驗對象(或個體)獲得或取得血液樣本,如圖13的步驟103所述;(2)第二功能,其可 處理血液樣本,以獲得或制備出處理過樣本(其為一測試樣本),如圖14A的步驟1至步驟 8所述;(3)第三功能,其可透過第一方法(其可是圖14B的步驟9至步驟14所描述的方 法)從處理過樣本的第一部分獲得第一數據(例如圖14B步驟14所獲得的> 1微米細胞 在處理過樣本中每毫升的數量);(4)第四功能,其可透過第二方法(其可是圖14C的步驟 15至步驟20所描述的方法)從處理過樣本的第二部分獲得第二數據(例如與一種選定的 干細胞有關的干細胞百分比SP)和第三數據(例如與該種選定的干細胞有關的細胞數C2 占與該種選定的干細胞有關的細胞數C1的百分比);(5)第五功能,其可對第二數據和第三 數據進行第一運算或計算(例如將第二數據乘以第三數據(譬如將干細胞百分比SP乘以 細胞數C2占細胞數C1的百分比),然后將相乘的結果乘以100% ),以獲得與處理過樣本有 關的第四數據(例如該種選定的干細胞的數量占細胞數C1的百分比);(6)第六功能,其可 對第一數據和第四數據進行第二運算或計算(例如將第一數據乘以第四數據(譬如將>1 微米細胞在處理過樣本中每毫升的數量乘以該種選定的干細胞的數量占細胞數C1的百分 比)),以獲得與處理過樣本有關的第五數據(例如該種選定的干細胞在處理過樣本中每毫 升的數量);(7)第七功能,其可對處理過樣本的體積和血液樣本的體積進行第三運算或計 算(例如將處理過樣本的體積除以血液樣本的體積),以獲得上述的體積改變(或樣本準 備)系數(例如處理過樣本的體積與血液樣本的體積的比率);以及(8)第八功能,其可對 第五數據和體積改變(或樣本準備)系數進行第四運算或計算(例如將第五數據乘以體積 改變(或樣本準備)系數(譬如將該種選定的干細胞在處理過樣本中每毫升的數量乘以處 理過樣本的體積與血液樣本的體積的比率)),以獲得與血液樣本有關的第六數據(例如該 種選定的干細胞在血液樣本中每毫升的數量)。
[0216] 由單一系統、裝置、儀器或工具(TD)所提供的第三功能可以用來獲得尺寸大于或 等于該給定門坎尺寸(在本范例中,該給定門坎尺寸等于1微米)之細胞在處理過樣本中 每單位體積的數量。由單一系統、裝置、儀器或工具(TD)所提供的第四和第五功能可以用 來獲得該種選定的干細胞在尺寸大于或等于該給定門坎尺寸(在本范例中,該給定門坎尺 寸等于1微米)的細胞中的百分比(其與處理過樣本有關)。將上述獲得的細胞在處理過 樣本中每毫升的數量乘以上述獲得的該種選定的干細胞的百分比,可以獲得該種選定的干 細胞在處理過樣本中每單位體積的數量。將該種選定的干細胞在處理過樣本中每單位體積 的數量乘以上述的體積改變(或樣本準備)系數,可以獲得該種選定的干細胞在血液樣本 中每單位體積的數量。透過將單一系統、裝置、儀器或工具(TD)的第三功能所獲得的細胞 數量數據結合單一系統、裝置、儀器或工具(TD)的第四與第五功能所獲得的該種選定的干 細胞的百分比的方式,可以更準確地獲得該種選定的干細胞在周邊血液中的數量。
[0217] 在某些應用上,本發明也可以透過一單一系統、裝置、儀器或工具來提供或執行上 述的第一至第八功能中任兩個(或以上)的功能可由。例如,這個單一系統、裝置、儀器或 工具可以提供或執行上述的第三和第四功能、上述的第二、第三和第四功能、上述的第三、 第四、第五、第六和第八功能或是上述的第三至第八功能。
[0218] 圖17A顯示一位五十五歲左右的男性(其是作為一實驗對象)在食用或攝取褐藻 糖膠補充品之后第1. 5小時的干細胞數據。本發明透過對此位男性進行圖13所述的方法 獲得圖17A所示的干細胞數據。在這個范例中,此位男性在步驟101中是口服30顆褐藻糖 膠補充品,而此褐藻糖膠補充品可以與圖11和圖12所提及的褐藻糖膠補充品相同。因此, 此位男性在步驟101中是服用3克(也就是大于2克)的褐藻糖膠。在步驟102中,讓此 位男性在服用30顆褐藻糖膠補充品之后等待1. 5小時。在步驟103中,取出此位男性的周 邊血液,并將取出的周邊血液放到一采血管中,因而獲得一個10毫升血液樣本。接著,透過 圖14A的步驟1至步驟8,將10毫升血液樣本處理成一個3毫升處理過樣本。3毫升處理過 樣本會被分成兩部分,一部分(以下稱"第一部分")用在圖14B的步驟9至步驟14中,另 一部分(以下稱"第二部分")用在圖14C的步驟15至步驟19中。在對3毫升處理過樣本 的第一部分進行圖14B的步驟9至步驟14之后,可以獲得> 1微米細胞在3毫升處理過樣 本中每毫升的數量,如圖17A中的第(A)欄所示。在對3毫升處理過樣本的第二部分進行 圖14C的步驟15至步驟19之后,可以獲得與每一種干細胞(如圖17A所示,共有5種干細 胞)有關的細胞數C1、細胞數C2和干細胞百分比SP,其分別顯示在圖17A中的第(B)欄、 第(C)欄和第(E)欄。透過對3毫升處理過樣本的第二部分進行步驟15至步驟18,可以獲 得多個第二測試樣本(或稱"流式細胞儀樣本")。在本范例中,步驟19中的流式細胞儀會 不斷分析每一個第二測試樣本,直到對應的細胞數C1達到一百萬或是對應的細胞數C2達 到2500為止。在完成每個第二測試樣本的分析之后,可以獲得與該些第二測試樣本(其是 透過對3毫升處理過樣本的第二部分進行步驟15至步驟18而獲得)有關的多組數據(一 個第二測試樣本可以獲得一組數據)。
[0219] 在從步驟14獲得> 1微米細胞在3毫升處理過樣本中每毫升的數量以及從步驟 19獲得與上述每一種干細胞有關的細胞數C1、細胞數C2和干細胞百分比SP之后,接著在 步驟20中獲得有關此位男性在食用或攝取褐藻糖膠補充品之后第1. 5小時的干細胞數據。 該干細胞數據包括每一種干細胞(如圖17A所示,共有5種干細胞)在此位男性食用或攝取 褐藻糖膠補充品之后第1. 5小時的周邊血液中每毫升的數量。以下將以CD24(+)先驅干細 胞為范例進行說明,請參閱圖17A所示,CD24(+)先驅干細胞在此位男性食用或攝取褐藻糖 膠補充品之后第1. 5小時的周邊血液中每毫升的數量可以透過下列的計算獲得:(1)將第 (1)列第(C)欄所示的2,500(其為細胞核/細胞質之比為較高的區域P4中的細胞數C2) 除以第(1)列第(B)欄所示的995, 918 (其為細胞尺寸大于或等于1微米的特定區域中的細 胞數C1),然后將相除的結果(也就是0. 0025)乘以100% (其為了將相除的結果轉換成百 分比數字),因而獲得第⑴列第⑶欄所示的0. 25% (其為細胞數C2占細胞數C1的百 分比);(2)將第(1)列第⑶欄所示的0. 25%乘以第(1)列第(E)欄所示的46% (其為 CD24(+)先驅干細胞的數量占細胞數C2的百分比),然后將相乘的結果(也就是0.00115) 乘以100% (其為了將相乘的結果轉換成百分比數字),因而獲得第(1)列第(F)欄所示的 0· 1150% (其為CD24⑴先驅干細胞的數量占細胞數C1的百分比);(3)將第⑴列第(F) 欄所示的0. 1150%乘以第(1)列第(A)欄所示的1. 77E+08(其為彡1微米細胞在3毫升處 理過樣本中每毫升的數量),因而獲得第(1)列第(G)欄所示的203, 550 (其為CD24(+)先 驅干細胞在3毫升處理過樣本中每毫升的數量);(4)將3毫升(其為處理過樣本的體積) 除以10毫升(其為血液樣本的體積),因而獲得0. 3這個數值(其為上述的體積改變(或 樣本準備)系數);以及(5)將第(1)列第(G)欄所示的203, 550 (其為CD24(+)先驅干細 胞在3毫升處理過樣本中每毫升的數量)乘以0. 3 (其為上述的體積改變(或樣本準備) 系數),因而獲得第(1)列第(H)欄所示的61,065 (其為CD24 (+)先驅干細胞在10毫升血 液樣本中每毫升的數量),其可代表CD24 (+)先驅干細胞在此位男性食用或攝取褐藻糖膠 補充品之后第1. 5小時的周邊血液中每毫升的數量。另外,用上述的計算方式,也可以從相 關的數值計算出其它種干細胞在此位男性食用或攝取褐藻糖膠補充品之后第1. 5小時的 周邊血液中每毫升的數量,在此不再詳加敘述。
[0220] 圖17B為流式細胞儀的一熒光分布圖,其顯示出在細胞核/細胞質之比為較高的 區域中細胞的熒光光強度分布。在熒光分布圖中的細胞被一條垂直線77分成左右兩部分。 在垂直線77右邊的細胞會對CD24表現出陽性反應,所以屬于CD24(+)先驅干細胞。在垂 直線77左邊的細胞則對⑶24表現出陰性反應。因此,流式細胞儀可以透過垂直線77識別 CD24(+)先驅干細胞,進而獲得圖17A中第(1)列第(E)欄所提及的CD24(+)先驅干細胞的 數量。
[0221] 圖18描述一種獲得一實驗對象(例如前面所述的個體(S))在四個特定時間點的 干細胞數據的方法,藉以確認實驗對象在進行或接受一種或多種的行為或刺激(X)(其可 包括一系列選自行為或刺激(X)的行為)之后的一理想(或最佳)干細胞收獲時間,所收 獲的一種或多種干細胞是從實驗對象或是與實驗對象相同生物分類的一個體的一組織樣 本(其可是本發明在"個體(S)以及組織樣本(P)"的描述里所提及的組織樣本)獲得。請 參閱圖18所示,在步驟21中,將實驗對象在第一特定時間點的周邊血液取出,并放到一采 血管(例如乙二胺四乙酸(EDTA)試管)中,以獲得第一血液樣本。第一血液樣本的體積可 以是大于或等于5毫升或10毫升。接著,在步驟22中,對第一血液樣本進行前面所述的測 量方法MT,進而獲得實驗對象在第一特定時間點的第一干細胞數據。此第一干細胞數據可 包括一種特定干細胞在第一特定時間點的實驗對象的周邊血液中每單位體積(如每毫升) 的數量,也就是與該種特定干細胞在實驗對象的周邊血液中每單位體積(如每毫升)的數 量有關的第一獲取數據。該種特定干細胞可以是本發明在"干細胞定義"里所提及的任何 一種干細胞,或是以本發明在"干細胞定義"里所提及的一種或多種細胞(表面)標記(例 如〇0349(+)、1^沾(+)或00666(+))描述其特征的干細胞。圖14八-圖14(:所述的方法可以 用來處理和估算第一血液樣本。在對第一血液樣本進行步驟22中的測量方法MT之前,第 一血液樣本可以存放在溫度介于1°C至30°C之間(例如介于1°C至10°C之間、介于10°C至 20°C之間或是介于20°C至30°C之間)的環境中。從步驟21獲得第一血液樣本到步驟22 對第一血液樣本進行測量方法MT的時間間隔可以是等于或小于30分鐘、60分鐘、12小時、 24小時、48小時、72小時或是1星期,例如是介于10分鐘到30分鐘之間、介于30分鐘到 60分鐘之間、介于0. 5小時到2小時之間、介于2小時到12小時之間、介于12小時到24小 時之間、介于24小時到48小時之間或是介于48小時到72小時之間。此外,本實施例也可 以透過上述的整合系統、裝置、儀器或工具(AD)或上述的單一系統、儀器、工具或裝置(TD) 來獲得第一干細胞數據。
[0222] 在獲得步驟21所述的第一血液樣本之后,接著進行步驟23。在步驟23中,實驗對 象進行或接受一種或多種的行為或刺激(X),其可包括一系列選自行為或刺激(X)的行為。 例如,實驗對象可以口服30顆褐藻糖膠補充品(其可是前面第一實驗和圖11所述的褐藻 糖膠補充品),所以實驗對象在步驟23中服用了 3克(也就是超過2克)的褐藻糖膠。或 者,實驗對象也可以注射一種含有褐藻糖膠或小分子褐藻糖膠的物質或物品(如營養品或 補充品)。步驟21所述的第一特定時間點可以在步驟23之前的一時間點。在實驗對象進 行或接受一種或多種的行為或刺激(X)之后,將進行含有下列步驟24至步驟26的第一方 法、含有下列步驟27至步驟29的第二方法以及含有下列步驟30至步驟32的第三方法。
[0223] 關于第一方法,在步驟24中,在實驗對象進行或接受步驟23所述的一種或多種的 行為或刺激(X)之后,讓實驗對象等待第一段時間(也就是一段第一預定時間),例如1. 5 小時、30分鐘至3小時、1小時至2小時或是45分鐘至12小時。接著,在步驟25中,取出 實驗對象在第二特定時間點的周邊血液,并將取出的周邊血液放到一采血管(例如乙二胺 四乙酸(EDTA)試管)中,以獲得第二血液樣本。第二血液樣本的體積可以是大于或等于5 毫升或10毫升,而且也可以與第一血液樣本的體積相同。第二特定時間點為第一段時間結 束的時間點。接著,在步驟26中,對第二血液樣本進行前面所述的測量方法MT,進而獲得 實驗對象在第二特定時間點的第二干細胞數據。此第二干細胞數據可包括該種特定干細胞 在第二特定時間點的實驗對象的周邊血液中每單位體積(如每毫升)的數量,也就是與該 種特定干細胞在實驗對象的周邊血液中每單位體積(如每毫升)的數量有關的第二獲取數 據。圖14A-圖14C所述的方法可以用來處理和估算第二血液樣本。在對第二血液樣本進 行步驟26中的測量方法MT之前,第二血液樣本可以存放在一受控制的環境中,此環境的溫 度與用來存放進行步驟22之測量方法MT前的第一血液樣本的溫度相同。從步驟25獲得 第二血液樣本到步驟26對第二血液樣本進行測量方法MT的時間間隔可以等于從步驟21 獲得第一血液樣本到步驟22對第一血液樣本進行測量方法MT的時間間隔。此外,本實施 例也可以透過上述的整合系統、裝置、儀器或工具(AD)或上述的單一系統、儀器、工具或裝 置(TD)來獲得第二干細胞數據。
[0224] 關于第二方法,在步驟27中,在實驗對象進行或接受步驟23所述的一種或多種的 行為或刺激(X)之后,讓實驗對象等待第二段時間(也就是一段第二預定時間),例如24小 時、12小時至36小時或是3小時至36小時。接著,在步驟28中,取出實驗對象在第三特定 時間點的周邊血液,并將取出的周邊血液放到一采血管(例如乙二胺四乙酸(EDTA)試管) 中,以獲得第三血液樣本。第三血液樣本的體積可以是大于或等于5毫升或10毫升,而且 也可以與第一血液樣本的體積和第二血液樣本的體積相同。第三特定時間點為第二段時間 結束的時間點。接著,在步驟29中,對第三血液樣本進行前面所述的測量方法MT,進而獲得 實驗對象在第三特定時間點的第三干細胞數據。此第三干細胞數據可包括該種特定干細胞 在第三特定時間點的實驗對象的周邊血液中每單位體積(如每毫升)的數量,也就是與該 種特定干細胞在實驗對象的周邊血液中每單位體積(如每毫升)的數量有關的第三獲取數 據。圖14A-圖14C所述的方法可以用來處理和估算第三血液樣本。在對第三血液樣本進 行步驟29中的測量方法MT之前,第三血液樣本可以存放在一受控制的環境中,此環境的溫 度與用來存放進行步驟22之測量方法MT前的第一血液樣本的溫度相同。從步驟28獲得 第三血液樣本到步驟29對第三血液樣本進行測量方法MT的時間間隔可以等于從步驟21 獲得第一血液樣本到步驟22對第一血液樣本進行測量方法MT的時間間隔。此外,本實施 例也可以透過上述的整合系統、裝置、儀器或工具(AD)或上述的單一系統、儀器、工具或裝 置(TD)來獲得第三干細胞數據。
[0225] 關于第三方法,在步驟30中,在實驗對象進行或接受步驟23所述的一種或多種的 行為或刺激(X)之后,讓實驗對象等待第三段時間(也就是一段第三預定時間),例如48小 時、36小時至60小時、60小時至84小時或是超過84小時。接著,在步驟31中,取出實驗 對象在第四特定時間點的周邊血液,并將取出的周邊血液放到一采血管(例如乙二胺四乙 酸(EDTA)試管)中,以獲得第四血液樣本。第四血液樣本的體積可以是大于或等于5毫升 或10毫升,而且也可以與第一血液樣本的體積、第二血液樣本的體積和第三血液樣本的體 積相同。第四特定時間點為第三段時間結束的時間點。接著,在步驟32中,對第四血液樣 本進行前面所述的測量方法MT,進而獲得實驗對象在第四特定時間點的第四干細胞數據。 此第四干細胞數據可包括該種特定干細胞在第四特定時間點的實驗對象的周邊血液中每 單位體積(如每毫升)的數量,也就是與該種特定干細胞在實驗對象的周邊血液中每單位 體積(如每毫升)的數量有關的第四獲取數據。圖14A-圖14C所述的方法可以用來處理 和估算第四血液樣本。在對第四血液樣本進行步驟32中的測量方法MT之前,第四血液樣 本可以存放在一受控制的環境中,此環境的溫度與用來存放進行步驟22之測量方法MT前 的第一血液樣本的溫度相同。從步驟31獲得第四血液樣本到步驟32對第四血液樣本進行 測量方法MT的時間間隔可以等于從步驟21獲得第一血液樣本到步驟22對第一血液樣本 進行測量方法MT的時間間隔。此外,本實施例也可以透過上述的整合系統、裝置、儀器或工 具(AD)或上述的單一系統、儀器、工具或裝置(TD)來獲得第四干細胞數據。
[0226] 利用步驟22、26、29和32所獲得的第一至第四干細胞數據可得到與每單位體積 的該種特定干細胞的數量有關的變化量,其包括:(1)第二干細胞數據中該種特定干細胞 在第二特定時間點的實驗對象的周邊血液中每單位體積的數量相對于第一干細胞數據中 該種特定干細胞在第一特定時間點的實驗對象的周邊血液中每單位體積的數量的變化量 Λ 1 ;(2)第三干細胞數據中該種特定干細胞在第三特定時間點的實驗對象的周邊血液中 每單位體積的數量相對于第一干細胞數據中該種特定干細胞在第一特定時間點的實驗對 象的周邊血液中每單位體積的數量的變化量Λ2;以及(3)第四干細胞數據中該種特定干 細胞在第四特定時間點的實驗對象的周邊血液中每單位體積的數量相對于第一干細胞數 據中該種特定干細胞在第一特定時間點的實驗對象的周邊血液中每單位體積的數量的變 化量△ 3。也就是說,對步驟22所獲得的第一獲取數據和步驟26所獲得的第二獲取數據進 行第一分析運算可以獲得變化量△ 1,此第一分析運算包括對第一獲取數據和第二獲取數 據進行比較;對步驟22所獲得的第一獲取數據和步驟29所獲得的第三獲取數據進行第二 分析運算可以獲得變化量Λ 2,此第二分析運算包括對第一獲取數據和第三獲取數據進行 比較;對步驟22所獲得的第一獲取數據和步驟32所獲得的第四獲取數據進行第三分析運 算可以獲得變化量Λ 3,此第三分析運算包括對第一獲取數據和第四獲取數據進行比較。
[0227] 對變化量Λ 1、Λ 2和Λ 3中的每兩個變化量進行比較(例如對變化量Λ 1和變化 量Λ2進行比較),可以獲知或找出與該種特定干細胞有關的變化量Λ1、Λ2和Λ3中的 最大變化量,進而確定、找出或得到適合用在實驗對象的該種特定干細胞的最佳收獲時間 (例如第一段時間、第二段時間或第三段時間)以及/或是最佳收獲時間點(例如第二至第 四特定時間點的其中一個)。當變化量△ 1、△ 2和△ 3中的最大變化量是變化量△ 1的時 候,最佳收獲時間為第一段時間,最佳收獲時間點為第二特定時間點。當變化量Λ 1、Λ2和 Λ3中的最大變化量是變化量Λ2的時候,最佳收獲時間為第二段時間,最佳收獲時間點為 第三特定時間點。當變化量Λ 1、Λ2和Λ3中的最大變化量是變化量Λ3的時候,最佳收 獲時間為第三段時間,最佳收獲時間點為第四特定時間點。因此,欲從某一個體(其可是實 驗對象或是與實驗對象相同生物分類的一個體)取得該種特定干細胞的時候,可以在該個 體進行或接受步驟23所述的一種或多種的行為或刺激(X)后的最佳收獲時間點從該個體 取得一組織樣本(其可是本發明在"個體(S)以及組織樣本(P)"的描述里所提及的組織樣 本),然后再從取得的組織樣本中取得該種特定干細胞。另外,在實驗對象進行或接受步驟 23所述的一種或多種的行為或刺激(X)(藉以在體內培養或培育該種特定干細胞)之后,圖 18所述的方法(其包括步驟21至步驟32)可以用來監測該種特定干細胞在實驗對象的周 邊血液中的增加數量。
[0228] 此外,本發明也可以分別對復數個相同生物分類的實驗對象進行圖18所述的方 法,進而獲得與每一個實驗對象有關的第一至第四干細胞數據(詳細說明可參閱圖18所述 的第一至第四干細胞數據)。利用從這些實驗對象獲得的第一至第四干細胞數據可得到與 每單位體積的該種特定干細胞的數量有關的變化量,其包括:(1)關于每一位實驗對象的 該種特定干細胞在第二特定時間點的周邊血液中每單位體積的數量(其屬于第二干細胞 數據)相對于該種特定干細胞在第一特定時間點的周邊血液中每單位體積的數量(其屬于 第一干細胞數據)的變化量Λ1 ;(2)關于每一位實驗對象的該種特定干細胞在第三特定時 間點的周邊血液中每單位體積的數量(其屬于第三干細胞數據)相對于該種特定干細胞在 第一特定時間點的周邊血液中每單位體積的數量(其屬于第一干細胞數據)的變化量Λ2 ; 以及(3)關于每一位實驗對象的該種特定干細胞在第四特定時間點的周邊血液中每單位 體積的數量(其屬于第四干細胞數據)相對于該種特定干細胞在第一特定時間點的周邊血 液中每單位體積的數量(其屬于第一干細胞數據)的變化量Λ 3。
[0229] 對從這些實驗對象獲得且與該種特定干細胞有關的變化量Λ 1、Λ 2和Λ 3的分布 中的每兩個變化量分布進行比較(例如對與SB-1細胞有關的變化量△ 1的分布和與SB-1 細胞有關的變化量Λ2的分布進行比較),可以得知或找出與該種特定干細胞有關的變化 量分布中最具統計意義的變化量分布,進而確定、找出或得到適合用在這些實驗對象的該 種特定干細胞的最佳收獲時間(例如第一段時間、第二段時間或第三段時間)以及/或是 最佳收獲時間點(例如第二至第四特定時間點的其中一個)。
[0230] 當與該種特定干細胞有關的變化量分布中最具統計意義的變化量分布是與該種 特定干細胞有關的變化量Λ1的分布的時候,最佳收獲時間為第一段時間,最佳收獲時間 點為第二特定時間點。當與該種特定干細胞有關的變化量分布中最具統計意義的變化量分 布是與該種特定干細胞有關的變化量△ 2的分布的時候,最佳收獲時間為第二段時間,最 佳收獲時間點為第三特定時間點。當與該種特定干細胞有關的變化量分布中最具統計意義 的變化量分布是與該種特定干細胞有關的變化量△ 3的分布的時候,最佳收獲時間為第三 段時間,最佳收獲時間點為第四特定時間點。因此,欲從某一個體(其可是與這些實驗對象 相同生物分類的一個體或是這些實驗對象的其中一個)取得該種特定干細胞的時候,可以 在該個體進行或接受步驟23所述的一種或多種的行為或刺激(X)后的最佳收獲時間點從 該個體取得一組織樣本(其可是本發明在"個體(S)以及組織樣本(Ρ)"的描述里所提及的 組織樣本),然后再從取得的組織樣本中取得該種特定干細胞。
[0231] 圖19描述一種獲得一對照者(例如前面所述的個體(S))在四個特定時間點的干 細胞數據的方法。利用此方法所獲得的干細胞數據可以用來與圖18所述的實驗對象所獲 得的干細胞數據(也就是利用圖18所述的方法而獲得的干細胞數據)進行比較,藉以確認 與實驗對象在兩個不同時間點(其為實驗對象在進行或接受步驟23所述的一種或多種的 行為或刺激(X)之后的兩個不同時間點)有關的兩組干細胞數據之間的變化是來自步驟23 所述的一種或多種的行為或刺激(X)。除了對照者沒有進行或者接受實驗對象在圖18步 驟23所進行或接受的一種或多種的行為或刺激(X)之外,圖19所述的用于對照者的方法 是與圖18所述的用于實驗對象的方法相同。從圖19所述的用于對照者的方法所獲得的干 細胞數據,可以作為評估圖18所述的變化量(其與"從圖18所述的用于實驗對象的方法所 獲得的干細胞數據"有關)的標準。
[0232] 請參閱圖19所示,在步驟33中,將對照者(或稱對照組參與者)在第五特定時間 點的周邊血液取出,并放到一采血管(例如乙二胺四乙酸(EDTA)試管)中,以獲得第五血 液樣本。第五血液樣本的體積可以是大于或等于5毫升或10毫升,而且也可以與圖18步 驟21所述的第一血液樣本的體積相同。第五特定時間點為開始進行圖19所述的用于對照 者的方法的時間點。接著,在步驟34中,對第五血液樣本進行前面所述的測量方法MT,進 而獲得對照者在第五特定時間點的第五干細胞數據。此第五干細胞數據可包括一種特定干 細胞在第五特定時間點的對照者的周邊血液中每單位體積(如每毫升)的數量,也就是與 該種特定干細胞在對照者的周邊血液中每單位體積(如每毫升)的數量有關的第五獲取數 據。圖14A-圖14C所述的方法可以用來處理和估算第五血液樣本。敘述在圖19的該種特 定干細胞可以與敘述在圖18的該種特定干細胞相同。在對第五血液樣本進行步驟34中的 測量方法MT之前,第五血液樣本可以存放在一受控制的環境中,此環境的溫度與用來存放 進行步驟22的測量方法MT前的第一血液樣本的溫度相同。從步驟33獲得第五血液樣本 到步驟34對第五血液樣本進行測量方法MT的時間間隔可以等于從步驟21獲得第一血液 樣本到步驟22對第一血液樣本進行測量方法MT的時間間隔。在取得步驟33所述的第五 血液樣本之后,將會進行含有下列步驟35至步驟37的第四方法、含有下列步驟38至步驟 40的第五方法以及含有下列步驟41至步驟43的第六方法。
[0233] 關于第四方法,在步驟35中,在取得步驟33所述的第五血液樣本之后,讓對照者 等待第四段時間(也就是一段第四預定時間),例如1. 5小時、30分鐘至3小時、1小時至2 小時或是45分鐘至12小時。在時間長度上,第四段時間可以等于圖18步驟24所述的第 一段時間。接著,在步驟36中,取出對照者在第六特定時間點的周邊血液,并將取出的周邊 血液放到一采血管(例如乙二胺四乙酸(EDTA)試管)中,以獲得第六血液樣本。第六血液 樣本的體積可以是大于或等于5毫升或10毫升,而且也可以與第五血液樣本的體積相同。 第六特定時間點為第四段時間結束的時間點。接著,在步驟37中,對第六血液樣本進行前 面所述的測量方法MT,進而獲得對照者在第六特定時間點的第六干細胞數據。此第六干細 胞數據可包括該種特定干細胞在第六特定時間點的對照者的周邊血液中每單位體積(如 每毫升)的數量,也就是與該種特定干細胞在對照者的周邊血液中每單位體積(如每毫升) 的數量有關的第六獲取數據。圖14A-圖14C所述的方法可以用來處理和估算第六血液樣 本。在對第六血液樣本進行步驟37中的測量方法MT之前,第六血液樣本可以存放在一受 控制的環境中,此環境的溫度與用來存放進行步驟22的測量方法MT前的第一血液樣本的 溫度相同。從步驟36獲得第六血液樣本到步驟37對第六血液樣本進行測量方法MT的時 間間隔可以等于從步驟21獲得第一血液樣本到步驟22對第一血液樣本進行測量方法MT 的時間間隔。
[0234] 關于第五方法,在步驟38中,在取得步驟33所述的第五血液樣本之后,讓對照者 等待第五段時間(也就是一段第五預定時間),例如24小時、12小時至36小時或是3小時 至36小時。在時間長度上,第五段時間可以等于圖18步驟27所述的第二段時間。接著, 在步驟39中,取出對照者在第七特定時間點的周邊血液,并將取出的周邊血液放到一采血 管(例如乙二胺四乙酸(EDTA)試管)中,以獲得第七血液樣本。第七血液樣本的體積可以 是大于或等于5毫升或10毫升,而且也可以與第五血液樣本的體積和第六血液樣本的體積 相同。第七特定時間點為第五段時間結束的時間點。接著,在步驟40中,對第七血液樣本 進行前面所述的測量方法MT,進而獲得對照者在第七特定時間點的第七干細胞數據。此第 七干細胞數據可包括該種特定干細胞在第七特定時間點的對照者的周邊血液中每單位體 積(如每毫升)的數量,也就是與該種特定干細胞在對照者的周邊血液中每單位體積(如 每毫升)的數量有關的第七獲取數據。圖14A-圖14C所述的方法可以用來處理和估算第 七血液樣本。在對第七血液樣本進行步驟40中的測量方法MT之前,第七血液樣本可以存 放在一受控制的環境中,此環境的溫度與用來存放進行步驟22的測量方法MT前的第一血 液樣本的溫度相同。從步驟39獲得第七血液樣本到步驟40對第七血液樣本進行測量方法 MT的時間間隔可以等于從步驟21獲得第一血液樣本到步驟22對第一血液樣本進行測量方 法MT的時間間隔。
[0235] 關于第六方法,在步驟41中,在取得步驟33所述的第五血液樣本之后,讓對照者 等待第六段時間(也就是一段第六預定時間),例如48小時、36小時至60小時、60小時至 84小時或是超過84小時。在時間長度上,第六段時間可以等于圖18步驟30所述的第三段 時間。接著,在步驟42中,取出對照者在第八特定時間點的周邊血液,并將取出的周邊血液 放到一采血管(例如乙二胺四乙酸(EDTA)試管)中,以獲得第八血液樣本。第八血液樣本 的體積可以是大于或等于5毫升或10毫升,而且也可以與第五血液樣本的體積、第六血液 樣本的體積和第七血液樣本的體積相同。第八特定時間點為第六段時間結束的時間點。接 著,在步驟43中,對第八血液樣本進行前面所述的測量方法MT,進而獲得對照者在第八特 定時間點的第八干細胞數據。此第八干細胞數據可包括該種特定干細胞在第八特定時間點 的對照者的周邊血液中每單位體積(如每毫升)的數量,也就是與該種特定干細胞在對照 者的周邊血液中每單位體積(如每毫升)的數量有關的第八獲取數據。圖14A-圖14C所 述的方法可以用來處理和估算第八血液樣本。在對第八血液樣本進行步驟43中的測量方 法MT之前,第八血液樣本可以存放在一受控制的環境中,此環境的溫度與用來存放進行步 驟22的測量方法MT前的第一血液樣本的溫度相同。從步驟42獲得第八血液樣本到步驟 43對第八血液樣本進行測量方法MT的時間間隔可以等于從步驟21獲得第一血液樣本到步 驟22對第一血液樣本進行測量方法MT的時間間隔。
[0236] 利用步驟22、26、29和32所獲得的第一至第四干細胞數據以及步驟34、37、40和 43所獲得的第五至第八干細胞數據可得到與該種特定干細胞的數量有關的變化量,其包 括:(1)第二干細胞數據中該種特定干細胞在第二特定時間點的實驗對象的周邊血液中 每單位體積的數量相對于第一干細胞數據中該種特定干細胞在第一特定時間點的實驗對 象的周邊血液中每單位體積的數量的變化量Δ1 ;(2)第三干細胞數據中該種特定干細胞 在第三特定時間點的實驗對象的周邊血液中每單位體積的數量相對于第一干細胞數據中 該種特定干細胞在第一特定時間點的實驗對象的周邊血液中每單位體積的數量的變化量 Λ2 ; (3)第四干細胞數據中該種特定干細胞在第四特定時間點的實驗對象的周邊血液中 每單位體積的數量相對于第一干細胞數據中該種特定干細胞在第一特定時間點的實驗對 象的周邊血液中每單位體積的數量的變化量Δ3; (4)第六干細胞數據中該種特定干細胞 在第六特定時間點的對照者的周邊血液中每單位體積的數量相對于第五干細胞數據中該 種特定干細胞在第五特定時間點的對照者的周邊血液中每單位體積的數量的變化量S1 ; (5)第七干細胞數據中該種特定干細胞在第七特定時間點的對照者的周邊血液中每單位體 積的數量相對于第五干細胞數據中該種特定干細胞在第五特定時間點的對照者的周邊血 液中每單位體積的數量的變化量S 2 ;以及(6)第八干細胞數據中該種特定干細胞在第八 特定時間點的對照者的周邊血液中每單位體積的數量相對于第五干細胞數據中該種特定 干細胞在第五特定時間點的對照者的周邊血液中每單位體積的數量的變化量S 3。
[0237] 對步驟22所獲得的第一獲取數據和步驟26所獲得的第二獲取數據進行第一分析 運算可以獲得變化量Λ 1,此第一分析運算包括對第一獲取數據和第二獲取數據進行比較。 對步驟22所獲得的第一獲取數據和步驟29所獲得的第三獲取數據進行第二分析運算可 以獲得變化量Λ 2,此第二分析運算包括對第一獲取數據和第三獲取數據進行比較。對步 驟22所獲得的第一獲取數據和步驟32所獲得的第四獲取數據進行第三分析運算可以獲得 變化量Λ3,此第三分析運算包括對第一獲取數據和第四獲取數據進行比較。對步驟34所 獲得的第五獲取數據和步驟37所獲得的第六獲取數據進行第四分析運算可以獲得變化量 S 1,此第四分析運算包括對第五獲取數據和第六獲取數據進行比較。對步驟34所獲得的 第五獲取數據和步驟40所獲得的第七獲取數據進行第五分析運算可以獲得變化量δ 2,此 第五分析運算包括對第五獲取數據和第七獲取數據進行比較。對步驟34所獲得的第五獲 取數據和步驟43所獲得的第八獲取數據進行第六分析運算可以獲得變化量δ 3,此第六分 析運算包括對第五獲取數據和第八獲取數據進行比較。
[0238] 對變化量Δ 1、Δ 2和Δ 3中的每兩個變化量進行比較,可以獲知或找出與該種特 定干細胞有關的變化量Λ 1、Λ 2和Λ 3中的最大變化量,然后將變化量Λ 1、Λ 2和Λ 3中 的最大變化量和變化量S1、δ 2和δ 3中對應的變化量進行比較,以判斷變化量Λ 1、Λ 2 和Λ3中的最大變化量是否由步驟23所述的一種或多種的行為或刺激(X)所引起。如果 變化量Λ 1、Λ 2和Λ 3中的最大變化量(在統計上)明顯優于變化量δ 1、δ 2和δ 3中對 應的變化量,則可以確認(或確定)變化量△ 1、△ 2和△ 3中的最大變化量是由步驟23所 述的一種或多種的行為或刺激(X)所引起的。當變化量Λ 1、Λ2和Λ3中的最大變化量是 變化量Λ 1的時候,變化量δ 1、δ 2和δ 3中對應的變化量為變化量δ 1。當變化量Λ 1、 Λ2和Λ3中的最大變化量是變化量Λ2的時候,變化量δ 1、δ 2和δ 3中對應的變化量為 變化量3 2。當變化量Λ 1、Λ2和Λ3中的最大變化量是變化量Λ3的時候,變化量δ 1、 δ 2和δ 3中對應的變化量為變化量δ 3。因此,透過上述的方法,可以獲得適合用在該種 特定干細胞的最佳收獲時間。當變化量Λ1、Λ2和Λ3中的最大變化量是變化量Λ1,而 且變化量△ 1 (在統計上)明顯優于變化量S 1的時候,適合用在該種特定干細胞的最佳收 獲時間為步驟24所述的第一段時間。當變化量Λ1、Λ2和Λ3中的最大變化量是變化量 Λ 2,而且變化量Λ 2(在統計上)明顯優于變化量δ 2的時候,適合用在該種特定干細胞的 最佳收獲時間為步驟27所述的第二段時間。當變化量Λ 1、Λ2和Λ3中的最大變化量是 變化量Λ 3,而且變化量Λ 3 (在統計上)明顯優于變化量δ 3的時候,適合用在該種特定干 細胞的最佳收獲時間為步驟30所述的第三段時間。另外,透過上述的方法,也可以獲得適 合用在該種特定干細胞的最佳收獲時間點。當變化量Λ1、Λ2和Λ3中的最大變化量是變 化量Λ 1,而且變化量Λ 1 (在統計上)明顯優于變化量δ 1的時候,適合用在該種特定干細 胞的最佳收獲時間點為步驟25所述的第二特定時間點。當變化量△ 1、△ 2和△ 3中的最 大變化量是變化量Λ 2,而且變化量Λ 2 (在統計上)明顯優于變化量δ 2的時候,適合用在 該種特定干細胞的最佳收獲時間點為步驟28所述的第三特定時間點。當變化量Λ1、△ 2 和Λ3中的最大變化量是變化量Λ 3,而且變化量Λ 3(在統計上)明顯優于變化量δ3的 時候,適合用在該種特定干細胞的最佳收獲時間點為步驟31所述的第四特定時間點。如果 變化量Λ 1、Λ 2和Λ 3中的最大變化量(在統計上)沒有明顯優于變化量δ 1、δ 2和δ 3 中對應的變化量,則無法確認(或確定)變化量Λ1、Λ2和Λ3中的最大變化量是由步驟 23所述的一種或多種的行為或刺激(X)所引起的。
[0239] 因此,欲從某一個體(其可是實驗對象或是與實驗對象相同生物分類的一個體) 取得該種特定干細胞的時候,可以在該個體進行或接受步驟23所述的一種或多種的行為 或刺激(X)后的最佳收獲時間點從該個體取得一組織樣本(其可是本發明在"個體(S)以 及組織樣本(Ρ) "的描述里所提及的組織樣本),然后再從取得的組織樣本中取得該種特定 干細胞。
[0240] 此外,本發明也可以分別對復數個相同生物分類的對照者進行圖19所述的方法, 進而獲得與每一個對照者有關的第五至第八干細胞數據(詳細說明可參閱圖19所述的第 五至第八干細胞數據),以及分別對復數個相同生物分類的實驗對象進行圖18所述的方 法,進而獲得與每一個實驗對象有關的第一至第四干細胞數據(詳細說明可參閱圖18所述 的第一至第四干細胞數據)。利用從這些實驗對象獲得的第一至第四干細胞數據以及從這 些對照者獲得的第五至第八干細胞數據可得到與該種特定干細胞的數量有關的變化量,其 包括:(1)關于每一位實驗對象的該種特定干細胞在第二特定時間點的周邊血液中每單位 體積的數量(其屬于第二干細胞數據)相對于該種特定干細胞在第一特定時間點的周邊血 液中每單位體積的數量(其屬于第一干細胞數據)的變化量Λ1 ;(2)關于每一位實驗對 象的該種特定干細胞在第三特定時間點的周邊血液中每單位體積的數量(其屬于第三干 細胞數據)相對于該種特定干細胞在第一特定時間點的周邊血液中每單位體積的數量(其 在第一干細胞數據中)的變化量Λ2; (3)關于每一位實驗對象的該種特定干細胞在第四 特定時間點的周邊血液中每單位體積的數量(其屬于第四干細胞數據)相對于該種特定干 細胞在第一特定時間點的周邊血液中每單位體積的數量(其屬于第一干細胞數據)的變化 量Λ3; (4)關于每一位對照者的該種特定干細胞在第六特定時間點的周邊血液中每單位 體積的數量(其屬于第六干細胞數據)相對于該種特定干細胞在第五特定時間點的周邊血 液中每單位體積的數量(其屬于第五干細胞數據)的變化量S 1 ;(5)關于每一位對照者的 該種特定干細胞在第七特定時間點的周邊血液中每單位體積的數量(其屬于第七干細胞 數據)相對于該種特定干細胞在第五特定時間點的周邊血液中每單位體積的數量(其在第 五干細胞數據中)的變化量S 2;以及(6)關于每一位對照者的該種特定干細胞在第八特 定時間點的周邊血液中每單位體積的數量(其屬于第八干細胞數據)相對于該種特定干細 胞在第五特定時間點的周邊血液中每單位體積的數量(其屬于第五干細胞數據)的變化量 δ 3〇
[0241] 對從這些實驗對象獲得且與該種特定干細胞有關的變化量Λ 1、Λ 2和Λ 3的分布 中的每兩個變化量分布進行比較(例如對與SB-1細胞有關的變化量△ 1的分布和與SB-1 細胞有關的變化量△ 2的分布進行比較),可以得知或找出與該種特定干細胞有關的變化 量分布中最具統計意義的變化量分布。然后,將與該種特定干細胞有關的變化量分布中最 具統計意義的變化量分布和與該種特定干細胞有關的變化量S 1、δ 2和δ 3的分布中對應 的變化量分布進行比較(例如當與SB-1細胞有關的變化量分布中最具統計意義的變化量 分布是與SB-1細胞有關的變化量Λ 1的分布的時候,將與SB-1細胞有關的變化量δ 1的 分布和與SB-1細胞有關的變化量△ 1的分布進行比較),以判斷與該種特定干細胞有關的 變化量分布中最具統計意義的變化量分布(例如與SB-1細胞有關的變化量△ 1的分布) 是否由步驟23所述的一種或多種的行為或刺激(X)所引起。如果與該種特定干細胞有關 的變化量分布中最具統計意義的變化量分布(例如與SB-1細胞有關的變化量△ 1的分布) 在統計上明顯優于與該種特定干細胞有關的變化量3 1、δ 2和δ 3的分布中對應的變化 量分布(例如與SB-1細胞有關的變化量δ 1的分布),則可以確認(或確定)與該種特定 干細胞有關的變化量分布中最具統計意義的變化量分布(例如與SB-1細胞有關的變化量 Λ 1的分布)是由步驟23所述的一種或多種的行為或刺激(X)所引起的。在與該種特定 干細胞有關的變化量Λ 1、Λ2和Λ3的分布中,如果變化量Λ 1的分布是最具統計意義的 變化量分布,則在與該種特定干細胞有關的變化量3 1、δ 2和δ 3的分布中,與其對應的 變化量分布為與該種特定干細胞有關的變化量δ 1的分布。在與該種特定干細胞有關的變 化量Λ 1、Λ 2和Λ 3的分布中,如果變化量Λ 2的分布是最具統計意義的變化量分布,則在 與該種特定干細胞有關的變化量δ 1、δ 2和δ 3的分布中,與其對應的變化量分布為與該 種特定干細胞有關的變化量S 2的分布。在與該種特定干細胞有關的變化量Λ1、Λ2和 Λ 3的分布中,如果變化量△ 3的分布是最具統計意義的變化量分布,則在與該種特定干細 胞有關的變化量3 1、δ 2和δ 3的分布中,與其對應的變化量分布為與該種特定干細胞有 關的變化量S3的分布。如果與該種特定干細胞有關的變化量分布中最具統計意義的變化 量分布在統計上沒有明顯優于與該種特定干細胞有關的變化量S1、δ 2和δ 3的分布中 對應的變化量分布,則無法確認(或確定)與該種特定干細胞有關的變化量分布中最具統 計意義的變化量分布是由步驟23所述的一種或多種的行為或刺激(X)所引起的。因此,透 過上述的方法,可以獲得適合用在這些實驗對象的該種特定干細胞的最佳收獲時間和最佳 收獲時間點。當與該種特定干細胞有關的變化量分布中最具統計意義的變化量分布是與該 種特定干細胞有關的變化量Λ1的分布,而且與該種特定干細胞有關的變化量Λ1的分布 在統計上明顯優于與該種特定干細胞有關的變化量S 1的分布的時候,適合用在這些實驗 對象的該種特定干細胞的最佳收獲時間和最佳收獲時間點分別是步驟24所述的第一段時 間和步驟25所述的第二特定時間點。當與該種特定干細胞有關的變化量分布中最具統計 意義的變化量分布是與該種特定干細胞有關的變化量△ 2的分布,而且與該種特定干細胞 有關的變化量△ 2的分布在統計上明顯優于與該種特定干細胞有關的變化量δ2的分布的 時候,適合用在這些實驗對象的該種特定干細胞的最佳收獲時間和最佳收獲時間點分別是 步驟27所述的第二段時間和步驟28所述的第三特定時間點。當與該種特定干細胞有關的 變化量分布中最具統計意義的變化量分布是與該種特定干細胞有關的變化量△ 3的分布, 而且與該種特定干細胞有關的變化量△ 3的分布在統計上明顯優于與該種特定干細胞有 關的變化量S3的分布的時候,適合用在這些實驗對象的該種特定干細胞的最佳收獲時間 和最佳收獲時間點分別是步驟30所述的第三段時間和步驟31所述的第四特定時間點。因 此,欲從某一個體(其可是與這些實驗對象相同生物分類的一個體或是這些實驗對象的其 中一個)取得該種特定干細胞的時候,可以在該個體進行或接受步驟23所述的一種或多種 的行為或刺激(X)后的最佳收獲時間點從該個體取得一組織樣本(其可是本發明在"個體 (S)以及組織樣本(P)"的描述里所提及的組織樣本),然后再從取得的組織樣本中取得該 種特定干細胞。
[0242] 在接下來的內容中,將以一種獲得各個人體每毫升周邊血液的干細胞數量的方法 作為范例,敘述第二實驗并顯示相關的干細胞數據。在第二實驗中,挑選五位人類受試者作 為第二實驗中的實驗組,并讓這五位人類受試者進行圖18所述的方法。另外,還挑選一位 人類受試者(以下稱"受試者CP")作為第二實驗中的對照組,并讓受試者CP進行圖19所 述的方法。實驗組中的這五位人類受試者是:(1)受試者E1:-位五十五歲左右的男性,其 干細胞數據顯示在圖20A和圖20B ; (2)受試者E2 :-位四十歲出頭的男性,其干細胞數據 顯示在圖20C和圖20D ; (3)受試者E3 :-位五十五歲左右的男性,其干細胞數據顯示在圖 20E和圖20F ;(4)受試者E4 :-位三十五歲左右的男性,其干細胞數據顯示在圖20G和圖 20H ;以及(5)受試者E5 :-位二十五歲左右的女性,其干細胞數據顯示在圖201和圖20J。 受試者CP是一位二十五歲左右的女性,其干細胞數據顯示在圖20K和圖20L。
[0243] 受試者E1-E4中的每一位都會進行圖18步驟21至步驟32所述的方法,藉以獲得 每一位受試者在四個特定時間點的干細胞數據。受試者E5則進行圖18所述的步驟21至 步驟29,因而獲得受試者E5在三個特定時間點的干細胞數據。在每一位實驗對象(也就 是受試者E1-E5)所進行的方法中,受試者E1-E5中的每一位都會在圖18的步驟23中口服 30顆褐藻糖膠補充品(可與圖11和圖12所述的褐藻糖膠補充品相同)。也就是說,受試 者E1-E5中的每一位都會在圖18的步驟23中服用3克(也就是超過2克)的褐藻糖膠。 另外,這五位受試者E1-E5每一位的體重大約是65公斤。這意味著褐藻糖膠的劑量是每公 斤體重約46毫克。或者,褐藻糖膠的劑量也可以是每公斤體重超過20毫克、30毫克、40毫 克或是50毫克。
[0244] 圖20A和圖20B顯示受試者E1在四個特定時間點的每一種干細胞(共有23種干 細胞)在周邊血液中每毫升的數量。圖20C和圖20D顯示受試者E2在四個特定時間點的 每一種干細胞(共有23種干細胞)在周邊血液中每暈升的數量。圖20E和圖20F顯不受 試者E3在四個特定時間點的每一種干細胞(共有23種干細胞)在周邊血液中每毫升的數 量。圖20G和圖20H顯示受試者E4在四個特定時間點的每一種干細胞(共有23種干細胞) 在周邊血液中每毫升的數量。上述用在這四位受試者E1-E4的四個特定時間點分別是:(1) 第一時間點,其為食用或攝取褐藻糖膠補充品前的一個時間點,也就是圖18步驟21所述的 第一特定時間點;(2)第二時間點,其為食用或攝取褐藻糖膠補充品之后的第1.5小時,也 就是圖18步驟24所述的第一段時間結束的時間點;(3)第三時間點,其為食用或攝取褐藻 糖膠補充品之后的第24小時,也就是圖18步驟27所述的第二段時間結束的時間點;以及 (4)第四時間點,其為食用或攝取褐藻糖膠補充品之后的第48小時,也就是圖18步驟30所 述的第三段時間結束的時間點。
[0245] 圖201和圖20J顯示受試者E5在三個特定時間點的每一種干細胞(共有23種干 細胞)在周邊血液中每毫升的數量。用在受試者E5的三個特定時間點分別是:(1)第一時 間點,其為食用或攝取褐藻糖膠補充品前的一個時間點,也就是圖18步驟21所述的第一特 定時間點;(2)第二時間點,其為食用或攝取褐藻糖膠補充品之后的第1.5小時,也就是圖 18步驟24所述的第一段時間結束的時間點;以及(3)第三時間點,其為食用或攝取褐藻糖 膠補充品之后的第24小時,也就是圖18步驟27所述的第二段時間結束的時間點。
[0246] 另外,受試者CP是進行圖19步驟33至步驟43所述的方法來獲得受試者CP在四 個特定時間點的干細胞數據。過程中,受試者CP沒有服用任何的褐藻糖膠補充品。圖20K 和圖20L顯示受試者CP在四個特定時間點的每一種干細胞(共有23種干細胞)在周邊血 液中每毫升的數量。用在受試者CP的四個特定時間點分別是:(1)第五時間點,其為從受試 者CP取得一個血液樣本的時間點(也就是圖19步驟33所述的第五特定時間點);(2)第 六時間點,其為第五時間點之后的第1. 5小時(也就是圖19步驟35所述的第四段時間結 束的第六特定時間點);(3)第七時間點,其為第五時間點之后的第24小時(也就是圖19 步驟38所述的第五段時間結束的第七特定時間點);以及(4)第八時間點,其為第五時間 點之后的第48小時(也就是圖19步驟41所述的第六段時間結束的第八特定時間點)。
[0247] 根據圖20A至圖20L的干細胞數據顯示,對某些特定種類的干細胞(如下面所列 舉的干細胞)而言,最佳的收獲時間點是在體內培育干細胞之后的第1.5小時或是在食用 (或攝取)褐藻糖膠補充品之后的第1. 5小時。在受試者E1-E5食用(或攝取)褐藻糖膠 補充品之后的第1. 5小時取得的周邊血液中,每毫升的數量有2倍以上增加的干細胞列舉 如下:SB-1細胞、SB-2細胞、類卵裂球干細胞、SSEA4(+)多功能干細胞、⑶13(+)多潛能干 細胞、⑶90 (+)多潛能干細胞、⑶105(+)多潛能干細胞、⑶34 (+)造血干細胞、⑶150(+)造 血干細胞、CD24(+)先驅干細胞、SSEA1(+)先驅干細胞、CD45(+)先驅干細胞、CD33(+)先驅 干細胞、CD10(+)先驅干細胞以及CXCR1(+)干細胞。
[0248] 另外,根據圖20A至圖20L的干細胞數據顯示,服用褐藻糖膠補充品(如第一實驗 和圖11所述的褐藻糖膠補充品)可以導致、引起或造成某些種類的干細胞在人或動物食用 (或攝取)褐藻糖膠補充品之后第24小時的周邊血液中每毫升的數量至少有兩倍的增加。 此處所述的"兩倍增加"是指「某種干細胞在一個體(如人體或動物體)食用或攝取褐藻糖 膠補充品前的周邊血液中每毫升的數量」和「該種干細胞在該個體食用或攝取褐藻糖膠補 充品之后第1. 5小時的周邊血液中每毫升的數量」的比例。除此之外,圖20A至圖20L的干 細胞數據也顯示,某些種類的干細胞在受試者El、E2、E3、E4或E5食用或攝取褐藻糖膠補 充品之后第1. 5小時的周邊血液中每毫升的數量有1. 5倍、3倍或4倍的增加。因此,口服 褐藻糖膠(一種褐藻的主要成分)可以是一種使人類或動物的周邊血液增加干細胞的有效 方法。綜上所述,一種行為,例如口服3克(也就是超過2克)的褐藻糖膠(其可來自上述 的褐藻糖膠補充品)或是一種或多種的行為或刺激(X),可以導致、引起、活化或催化人類 或動物周邊血液中的干細胞至少有1. 5倍(或以上)、2倍(或以上)、3倍(或以上)或4 倍(或以上)的增加。
[0249] 歸納起來,本發明提供了許多種方法,分別簡述如下。
[0250] -種從第一個體(例如一人體或一動物體)收獲(或獲取)和儲存干細胞的方法, 其包括下列步驟:(1)讓該第一個體進行或接受一行為,例如服用4. 5克(或超過3. 5克) 的一沖繩褐藻補充品,該沖繩褐藻補充品含有重量百分比為80% (或是超過70%)的水云 粉,其中該4. 5克的該沖繩褐藻補充品含有3克(或是超過2克)的褐藻糖膠或是含有重 量百分比超過60%的褐藻糖膠,該行為可經過事先評估,以確認能有效增加該第一個體體 內的一種或多種選定的干細胞(例如SB-1細胞以及/或是SB-2細胞)的數量;(2)在該 第一個體進行或接受該行為之后,讓該第一個體等待一段(預定的)時間,例如15分鐘至 60分鐘、20分鐘至100分鐘、30分鐘至2小時、0. 5小時至3小時、1小時至12小時、12小 時至36小時或是36小時至50小時;(3)在該第一個體等待該段(預定的)時間之后,從該 第一個體取得一組織樣本(例如該人體或該動物體的周邊血液);(4)從該組織樣本收獲、 收集或取得該種或該些種選定的干細胞;以及(5)將該種或該些種選定的干細胞存放(或 儲存)在溫度低于攝氏〇度(例如低于攝氏負30度或低于攝氏負80度)的一設施(如 冰箱)中一段時間(例如1個月以上或一年以上),其中該設施是由一機構(如細胞銀行) 所提供。在一范例中,在存放(或儲存)該種或該些種選定的干細胞之后,該種或該些種選 定的干細胞可以透過一個適當的方法(例如注射或涂抹)而被用在該第一個體上。在另一 范例中,在存放(或儲存)該種或該些種選定的干細胞之后,該種或該些種選定的干細胞可 以透過一個適當的方法(例如注射或涂抹)而被用在第二個體(例如另一人體或另一動物 體)上。
[0251] 一種儲存第一個體(例如人體或動物體)的干細胞的方法,其包括下列步驟:(1) 讓該第一個體進行或接受一行為,例如服用4. 5克(或超過3. 5克)的沖繩褐藻補充品,該 沖繩褐藻補充品含有重量百分比為80% (或是超過70%)的水云粉,其中該4. 5克的該沖 繩褐藻補充品含有3克(或是超過2克)的褐藻糖膠或是含有重量百分比超過60%的褐藻 糖膠,該行為可經過事先評估,以確認能有效增加該第一個體體內的一種或多種選定的干 細胞(例如SB-1細胞以及/或是SB-2細胞)的數量;(2)在該第一個體進行或接受該行 為之后,讓該第一個體等待一段(預定的)時間,例如15分鐘至60分鐘、20分鐘至100分 鐘、30分鐘至2小時、0. 5小時至3小時、1小時至12小時、12小時至36小時或是36小時 至50小時;(3)在該第一個體等待該段(預定的)時間之后,從該第一個體取得一組織樣 本(例如該人體或該動物體的周邊血液);以及⑷將含有該種或該些種選定的干細胞的 該組織樣本存放(或儲存)在溫度低于攝氏〇度(例如低于攝氏負30度或低于攝氏負80 度)的一設施(如冰箱)中一段時間(例如1個月以上或一年以上),其中該設施是由一機 構(如細胞銀行)所提供。在一范例中,在存放(或儲存)含有該種或該些種選定的干細 胞的該組織樣本之后,含有該種或該些種選定的干細胞的該組織樣本可以透過一個適當的 方法(例如注射或涂抹)而被用在該第一個體上。在另一范例中,在存放(或儲存)含有 該種或該些種選定的干細胞的該組織樣本之后,含有該種或該些種選定的干細胞的該組織 樣本可以透過一個適當的方法(例如注射或涂抹)而被用在第二個體(例如另一人體或另 一動物體)上。
[0252] -種從第一個體(例如一人體或一動物體)收獲或獲取干細胞的方法,其包括下 列步驟:(1)讓該第一個體進行或接受一行為,例如服用4. 5克(或超過3. 5克)的一沖繩 褐藻補充品,該沖繩褐藻補充品含有重量百分比為80% (或是超過70%)的水云粉,其中 該4. 5克的該沖繩褐藻補充品含有3克(或是超過2克)的褐藻糖膠或是含有重量百分比 超過60%的褐藻糖膠,該行為可經過事先評估,以確認能有效增加該第一個體體內的一種 或多種選定的干細胞(例如SB-1細胞以及/或是SB-2細胞)的數量;(2)在該第一個體進 行或接受該行為之后,讓該第一個體等待一段(預定的)時間,例如15分鐘至60分鐘、20 分鐘至100分鐘、30分鐘至2小時、0. 5小時至3小時、1小時至12小時、12小時至36小時 或是36小時至50小時;(3)在該第一個體等待該段(預定的)時間之后,從該第一個體取 得一組織樣本(例如該人體或該動物體的周邊血液);以及(4)從該組織樣本收獲或取得 該種或該些種選定的干細胞。在一范例中,在從該組織樣本收獲或取得該種或該些種選定 的干細胞之后(在這之后沒有或是略過下列步驟:將該種或該些種選定的干細胞存放(或 儲存)在溫度低于攝氏〇度(例如低于攝氏負30度或低于攝氏負80度)的一設施(如冰 箱)中一段時間,例如1個月以上或一年以上),該種或該些種選定的干細胞可以透過一個 適當的方法(例如注射或涂抹)而被用在該第一個體上。在另一范例中,在從該組織樣本 收獲或取得該種或該些種選定的干細胞之后(在這之后沒有或是略過下列步驟:將該種或 該些種選定的干細胞存放(或儲存)在溫度低于攝氏0度(例如低于攝氏負30度或低于 攝氏負80度)的一設施(如冰箱)中一段時間,例如1個月以上或一年以上),該種或該些 種選定的干細胞可以透過一個適當的方法(例如注射或涂抹)而被用在第二個體(例如另 一人體或另一動物體)上。
[0253] -種儲存第一個體(例如一人體或一動物體)的干細胞的方法,其包括下列步驟: (1)讓該第一個體進行或接受一行為,例如服用4. 5克(或超過3. 5克)的沖繩褐藻補充品, 該沖繩褐藻補充品含有重量百分比為80% (或是超過70%)的水云粉,其中該4. 5克的該 沖繩褐藻補充品含有3克(或是超過2克)的褐藻糖膠或是含有重量百分比超過60%的褐 藻糖膠,該行為可經過事先評估,以確認能有效增加該第一個體體內的一種或多種選定的 干細胞(例如SB-1細胞以及/或是SB-2細胞)的數量;(2)在該第一個體進行或接受該 行為之后,讓該第一個體等待一段(預定的)時間,例如15分鐘至60分鐘、20分鐘至100 分鐘、30分鐘至2小時、0. 5小時至3小時、1小時至12小時、12小時至36小時或是36小 時至50小時;以及(3)在該第一個體等待該段(預定的)時間之后,從該第一個體取得一 組織樣本(例如該人體或該動物體的周邊血液),其中該組織樣本含有該種或該些種選定 的干細胞。在一范例中,在從該第一個體取得含有該種或該些種選定的干細胞的該組織樣 本之后(在這之后沒有或是略過下列步驟:將含有該種或該些種選定的干細胞的該組織樣 本存放(或儲存)在溫度低于攝氏〇度(例如低于攝氏負30度或低于攝氏負80度)的一 設施(如冰箱)中一段時間,例如1個月以上或一年以上),含有該種或該些種選定的干細 胞的該組織樣本可以透過一個適當的方法(例如注射或涂抹)而被用在該第一個體上。在 另一范例中,在從該第一個體取得含有該種或該些種選定的干細胞的該組織樣本之后(在 這之后沒有或是略過下列步驟:將含有該種或該些種選定的干細胞的該組織樣本存放(或 儲存)在溫度低于攝氏〇度(例如低于攝氏負30度或低于攝氏負80度)的一設施(如冰 箱)中一段時間,例如1個月以上或一年以上),含有該種或該些種選定的干細胞的該組織 樣本可以透過一個適當的方法(例如注射或涂抹)而被用在第二個體(例如另一人體或另 一動物體)上。
[0254] -種從第一個體(例如一人體或一動物體)儲存和收獲(或獲取)干細胞的方法, 其包括下列步驟:(1)讓該第一個體進行或接受一行為,例如服用4. 5克(或超過3. 5克) 的沖繩褐藻補充品,該沖繩褐藻補充品含有重量百分比為80% (或是超過70%)的水云 粉,其中該4. 5克的該沖繩褐藻補充品含有3克(或是超過2克)的褐藻糖膠或是含有重 量百分比超過60%的褐藻糖膠,該行為可經過事先評估,以確認能有效增加該第一個體體 內的一種或多種選定的干細胞(例如SB-1細胞以及/或是SB-2細胞)的數量;(2)在該第 一個體進行或接受該行為之后,讓該第一個體等待一段(預定的)時間,例如15分鐘至60 分鐘、20分鐘至100分鐘、30分鐘至2小時、0. 5小時至3小時、1小時至12小時、12小時至 36小時或是36小時至50小時;(3)在該第一個體等待該段(預定的)時間之后,從該第一 個體取得一組織樣本(例如該人體或該動物體的周邊血液),其中該組織樣本含有該種或 該些種選定的干細胞;(4)將含有該種或該些種選定的干細胞的該組織樣本存放(或儲存) 在溫度低于攝氏〇度(例如低于攝氏負30度或低于攝氏負80度)的一設施(如冰箱)中 一段時間(例如1個月以上或一年以上),其中該設施是由一機構(如細胞銀行)所提供; 以及(5)在存放(或儲存)含有該種或該些種選定的干細胞的該組織樣本之后,從該組織 樣本收獲或取得該種或該些種選定的干細胞。在一范例中,在從該組織樣本收獲或取得該 種或該些種選定的干細胞之后,該種或該些種選定的干細胞可以透過一個適當的方法(例 如注射或涂抹)而被用在該第一個體上。在另一范例中,在從該組織樣本收獲或取得該種 或該些種選定的干細胞之后,該種或該些種選定的干細胞可以透過一個適當的方法(例如 注射或涂抹)而被用在第二個體(例如另一人體或另一動物體)上。
[0255] -種發現新種類干細胞(為一種尚未被發現的干細胞)的方法,其包括下列步驟: (1)讓一個體(例如一人體或一動物體)進行或接受一行為,例如服用4. 5克(或超過3. 5 克)的一沖繩褐藻補充品,該沖繩褐藻補充品含有重量百分比為80% (或是超過70%)的 水云粉,其中該4. 5克的該沖繩褐藻補充品含有3克(或是超過2克)的褐藻糖膠或是含有 重量百分比超過60%的褐藻糖膠,該行為可經過事先評估,以確認能有效增加體內一種或 多種干細胞的數量;(2)在該個體進行或接受該行為之后,讓該個體等待一段(預定的)時 間,例如15分鐘至60分鐘、20分鐘至100分鐘、30分鐘至2小時、0. 5小時至3小時、1小 時至12小時、12小時至36小時或是36小時至50小時;(3)在該個體等待該段(預定的) 時間之后,從該個體取得一組織樣本(例如該人體或該動物體的周邊血液);以及(4)利 用一種用于偵測新種類干細胞的分析方法來處理該組織樣本,其中該種分析方法包括偵測 該組織樣本中的細胞是否含有細胞核的步驟以及該組織樣本中的細胞是否可以表達以及/ 或是無法表達一種或多種選定的細胞(表面)標記的步驟,該種分析方法包括使用流式細 胞儀。
[0256] 一種評估一行為(例如服用4. 5克(或超過3. 5克)的沖繩褐藻補充品,該沖繩 褐藻補充品含有重量百分比為80% (或是超過70%)的水云粉,其中該4.5克的該沖繩褐 藻補充品含有3克(或是超過2克)的褐藻糖膠或是含有重量百分比超過60 %的褐藻糖 膠)對于治療患有疾病(如癌癥、帕金森氏癥或阿茲海默病)的一個體(例如一人體或一 動物體)的效果的方法,其包括下列步驟:(1)從該個體獲得第一組織樣本(例如周邊血液 樣本);(2)利用一分析或測量方法(例如前面所述的測量方法MT)或是裝置、儀器或設備 (例如前面所述的整合系統、裝置、儀器或工具(AD)或是前面所述的單一系統、儀器、工具 或裝置(TD))從該第一組織樣本中獲得與一種或多種選定的干細胞(例如SB-1細胞以及 /或是SB-2細胞)之信息有關的第一干細胞數據;(3)在獲得該第一組織樣本或是該第一 干細胞數據之后,讓該個體進行或接受該行為;(4)在該個體進行或接受該行為之后,讓該 個體等待一段(預定的)時間,例如15分鐘至60分鐘、20分鐘至100分鐘、30分鐘至2小 時、0. 5小時至3小時、1小時至12小時、12小時至36小時或是36小時至50小時;(5)在 該個體等待該段(預定的)時間之后,從該個體獲得第二組織樣本(例如周邊血液樣本); (6)利用該分析或測量方法或是該裝置、儀器或設備從該第二組織樣本中獲得與該種或該 些種選定的干細胞之信息有關的第二干細胞數據;以及(7)對該第一干細胞數據和該第二 干細胞數據進行分析,其中該分析可以包括將該第一干細胞數據和該第二干細胞數據進行 比較。該種或該些種選定的干細胞可以是本發明在"干細胞定義"里所提及的一種或多種 干細胞。該第一干細胞數據可包括該種或該些種選定的干細胞在該第一組織樣本中每單位 體積(例如每毫升)的數量,也就是在該第一組織樣本中該種或該些種選定的干細胞每單 位體積(例如每毫升)的數量。該第二干細胞數據可包括該種或該些種選定的干細胞在該 第二組織樣本中每單位體積(例如每毫升)的數量,也就是在該第二組織樣本中該種或該 些種選定的干細胞每單位體積(例如每毫升)的數量。該第一干細胞數據可以更包括與該 第一組織樣本有關的第一百分比,該第一百分比為該種或該些種選定的干細胞的數量在顆 粒尺寸大于或等于一門坎尺寸的一區域中的百分比。該第二干細胞數據可以更包括與該第 二組織樣本有關的第二百分比,該第二百分比為該種或該些種選定的干細胞的數量在顆粒 尺寸大于或等于該門坎尺寸的一區域中的百分比。該門坎尺寸可以是〇. 5微米、0. 8微米、 1微米、1. 5微米、2微米或3微米。
[0257] 一種評估一行為(例如服用4. 5克(或超過3. 5克)的沖繩褐藻補充品,該沖繩 褐藻補充品含有重量百分比為80% (或是超過70%)的水云粉,其中該4.5克的該沖繩褐 藻補充品含有3克(或是超過2克)的褐藻糖膠或是含有重量百分比超過60 %的褐藻糖 膠)對于治療患有疾病(如癌癥、帕金森氏癥或阿茲海默病)的一個體(例如一人體或一動 物體)的效果的方法,其包括下列步驟:(1)從該個體獲得第一組織樣本(例如周邊血液樣 本);(2)利用分析或測量方法(例如前面所述的測量方法MT)或是裝置、儀器或設備(例 如前面所述的整合系統、裝置、儀器或工具(AD)或是前面所述的單一系統、儀器、工具或裝 置(TD))從該第一組織樣本中獲得與一種或多種選定的干細胞(例如SB-1細胞以及/或 是SB-2細胞)有關的第一干細胞數據;(3)在獲得該第一組織樣本或是該第一干細胞數據 之后,讓該個體進行或接受該行為;(4)在該個體進行或接受該行為之后,讓該個體等待一 段第一(預定的)時間,例如15分鐘至60分鐘、20分鐘至100分鐘、30分鐘至2小時、0. 5 小時至3小時、1小時至12小時、12小時至36小時或是36小時至50小時;(5)在該個體等 待該段第一(預定的)時間之后,從該個體獲得第二組織樣本(例如周邊血液樣本);(6) 利用該分析或測量方法或是該裝置、儀器或設備從該第二組織樣本中獲得與該種或該些種 選定的干細胞有關的第二干細胞數據;(7)對該第二干細胞數據和該第一干細胞數據進行 第一分析,其中該第一分析可包括將該第二干細胞數據和該第一干細胞數據進行比較;(8) 在獲得該第二組織樣本或是該第二干細胞數據之后,讓該個體再次進行或接受該行為;(9) 在該個體再次進行或接受該行為之后,讓該個體等待一段第二(預定的)時間,例如15分 鐘至60分鐘、20分鐘至100分鐘、30分鐘至2小時、0. 5小時至3小時、1小時至12小時、12 小時至36小時或是36小時至50小時;(10)在該個體等待該段第二(預定的)時間之后, 從該個體獲得第三組織樣本(例如周邊血液樣本);(11)利用該分析或測量方法或是該裝 置、儀器或設備從該第三組織樣本中獲得與該種或該些種選定的干細胞有關的第三干細胞 數據;以及(12)對該第三干細胞數據和該第一或第二干細胞數據進行第二分析,其中該第 二分析可包括將該第三干細胞數據和該第一或第二干細胞數據進行比較。該種或該些種選 定的干細胞可以是本發明在"干細胞定義"里所提及的一種或多種干細胞。該第一干細胞數 據可包括該種或該些種選定的干細胞在該第一組織樣本中每單位體積(例如每毫升)的數 量,也就是在該第一組織樣本中該種或該些種選定的干細胞每單位體積(例如每毫升)的 數量。該第二干細胞數據可包括該種或該些種選定的干細胞在該第二組織樣本中每單位體 積(例如每毫升)的數量,也就是在該第二組織樣本中該種或該些種選定的干細胞每單位 體積(例如每毫升)的數量。該第三干細胞數據可包括該種或該些種選定的干細胞在該第 三組織樣本中每單位體積(例如每毫升)的數量,也就是在該第三組織樣本中該種或該些 種選定的干細胞每單位體積(例如每毫升)的數量。該第一干細胞數據可以更包括與該第 一組織樣本有關的第一百分比,該第一百分比為該種或該些種選定的干細胞的數量在顆粒 尺寸大于或等于一門坎尺寸的一區域中的百分比。該第二干細胞數據可以更包括與該第二 組織樣本有關的第二百分比,該第二百分比為該種或該些種選定的干細胞的數量在顆粒尺 寸大于或等于該門坎尺寸的一區域中的百分比。該第三干細胞數據可以更包括與該第三組 織樣本有關的第三百分比,該第三百分比為該種或該些種選定的干細胞的數量在顆粒尺寸 大于或等于該門坎尺寸的一區域中的百分比。該門坎尺寸可以是0. 5微米、0. 8微米、1微 米、1. 5微米、2微米或3微米。
[0258] 一種評估或測試一種或多種的上述行為或刺激(X)(例如服用4. 5克(或超過3. 5 克)的沖繩褐藻補充品,該沖繩褐藻補充品含有重量百分比為80% (或是超過70%)的水 云粉,其中該4. 5克的該沖繩褐藻補充品含有3克(或是超過2克)的褐藻糖膠或是含有 重量百分比超過60 %的褐藻糖膠)效果或效用的方法,其包括下列步驟:(1)從一個體(例 如一人體或一動物體)獲得第一組織樣本(例如周邊血液樣本);(2)利用分析或測量方法 (例如前面所述的測量方法MT)或是裝置、儀器或設備(例如前面所述的整合系統、裝置、儀 器或工具(AD)或是前面所述的單一系統、儀器、工具或裝置(TD))從該第一組織樣本中獲 得與一種或多種選定的干細胞(例如SB-1細胞以及/或是SB-2細胞)的信息有關的第一 干細胞數據;(3)在獲得該第一組織樣本或是該第一干細胞數據之后,讓該個體進行或接 受該種或該些種的上述行為或刺激(X) ; (4)在該個體進行或接受該種或該些種的上述行 為或刺激(X)之后,讓該個體等待一段(預定的)時間,例如15分鐘至60分鐘、20分鐘至 100分鐘、30分鐘至2小時、0. 5小時至3小時、1小時至12小時、12小時至36小時或是36 小時至50小時;(5)在該個體等待該段(預定的)時間之后,從該個體獲得第二組織樣本 (例如周邊血液樣本);(6)利用該分析或測量方法或是該裝置、儀器或設備從該第二組織 樣本中獲得與該種或該些種選定的干細胞有關的第二干細胞數據;以及(7)對該第一干細 胞數據和該第二干細胞數據進行一分析,其中該分析可包括將該第一干細胞數據和該第二 干細胞數據進行比較。該種或該些種選定的干細胞可以是本發明在"干細胞定義"里所提 及的一種或多種干細胞。該第一干細胞數據可包括該種或該些種選定的干細胞在該第一組 織樣本中每單位體積(例如每毫升)的數量,也就是在該第一組織樣本中該種或該些種選 定的干細胞每單位體積(例如每毫升)的數量。該第二干細胞數據可包括該種或該些種選 定的干細胞在該第二組織樣本中每單位體積(例如每毫升)的數量,也就是在該第二組織 樣本中該種或該些種選定的干細胞每單位體積(例如每毫升)的數量。該第一干細胞數據 可以更包括與該第一組織樣本有關的第一百分比,該第一百分比為該種或該些種選定的干 細胞的數量在顆粒尺寸大于或等于一門坎尺寸的一區域中的百分比。該第二干細胞數據可 以更包括與該第二組織樣本有關的第二百分比,該第二百分比為該種或該些種選定的干細 胞的數量在顆粒尺寸大于或等于該門坎尺寸的一區域中的百分比。該門坎尺寸可以是0. 5 微米、0. 8微米、1微米、1. 5微米、2微米或3微米。
[0259] -種監測一個體(例如前面所述的人體或是前面所述的非人體)周邊血液中一種 選定干細胞(例如SB-1細胞或SB-2細胞)數量的方法,其可用來監測該個體進行或接受 一種或多種的上述行為或刺激(X)后該種選定干細胞增加的數量,該個體可透過該種或該 些種的上述行為或刺激(X)在體內培養或培育該種選定干細胞,該種方法包括下列步驟: (1)從該個體獲得第一組織樣本(例如周邊血液樣本);(2)利用分析或測量方法(例如前 面所述的測量方法MT)或是裝置、儀器或設備(例如前面所述的整合系統、裝置、儀器或工 具(AD)或是前面所述的單一系統、儀器、工具或裝置(TD))從該第一組織樣本中獲得與每 單位體積(例如每毫升)的該種選定干細胞數量有關的第一數據;(3)在獲得該第一組織 樣本之后,讓該個體進行或接受該種或該些種的上述行為或刺激(X) ; (4)在該個體進行或 接受該種或該些種的上述行為或刺激(X)之后,讓該個體等待一段第一(預定的)時間,例 如15分鐘至60分鐘、20分鐘至100分鐘、30分鐘至2小時、0. 5小時至3小時、1小時至 12小時、12小時至36小時或是36小時至50小時;(5)在該個體等待該段第一(預定的) 時間之后,從該個體獲得第二組織樣本(例如周邊血液樣本);(6)利用該分析或測量方法 或是該裝置、儀器或設備從該第二組織樣本中獲得與每單位體積(例如每毫升)的該種選 定干細胞數量有關的第二數據;(7)對該第一數據和該第二數據進行第一分析,以獲得與 每單位體積(例如每毫升)的該種選定干細胞數量有關的第一變化量,其中該第一分析可 包括將該第一數據和該第二數據進行比較;(8)在該個體進行或接受該種或該些種的上述 行為或刺激(X)之后,讓該個體等待一段第二(預定的)時間,例如12小時至36小時或是 36小時至60小時,該段第二(預定的)時間與該段第一(預定的)時間不同;(9)在該個 體等待該段第二(預定的)時間之后,從該個體獲得第三組織樣本(例如周邊血液樣本); (10)利用該分析或測量方法或是該裝置、儀器或設備從該第三組織樣本中獲得與每單位體 積(例如每毫升)的該種選定干細胞數量有關的第三數據;以及(11)對該第一數據和該第 三數據進行第二分析,以獲得與每單位體積(例如每毫升)的該種選定干細胞數量有關的 第二變化量,其中該第二分析可包括將該第一數據和該第三數據進行比較。該第一、第二和 第三組織樣本可以由該個體的周邊血液獲得。該種選定干細胞可以是本發明在"干細胞定 義"里所提及的任何一種干細胞或是以本發明在"干細胞定義"里所提及的一種或多種細胞 (表面)標記(例如〇0349(+)、1^沾(+)或00666(+))描述其特征的干細胞。
[0260] 一種獲得一組織樣本(例如一周邊血液)之一干細胞數據(例如每單位體積的干 細胞數量)的方法,其包括下列步驟:(1)從一個體(例如一人體或一動物體)獲得該組織 樣本(其體積可以是10毫升);(2)處理該組織樣本,以獲得或制備出一測試樣本(其體積 可以是3毫升);(3)利用第一方法從該測試樣本的第一部分中獲得第一數據(例如每單位 體積(如每毫升)內第一群特定顆粒(其包含細胞)的數量),該第一方法包括使用一血 球計數器(hemocytometer)計算該第一部分中的顆粒數量;(4)利用第二方法從該測試樣 本的第二部分中獲得第二數據(例如一種特定干細胞的數量占第二群特定顆粒(其包含細 胞)的數量的百分比)與第三數據(例如該第二群特定顆粒的數量占第三群特定顆粒(其 包含細胞)的數量的百分比),該第二方法包括使用流式細胞儀(flow cytometer)計算該 第二部分中的顆粒數量,其中在該測試樣本是均勻且含有大致相同之內容物的情況下,該 第二部分假定含有與該第一部分大致上相同的內容物,該第一群特定顆粒與該第三群特定 顆粒大致上具有相同的性質或特性,該第一群特定顆粒的尺寸和該第三群特定顆粒的尺寸 是大于或等于一給定門坎尺寸(例如0. 5微米、0. 8微米、1微米、1. 5微米、2微米或3微 米);(5)對該第二數據和該第三數據進行第一運算或計算(例如將該第二數據乘以該第三 數據),以獲得與該測試樣本有關的第四數據(例如該種特定干細胞的數量占該第三群特 定顆粒的數量的百分比);(6)對該第一數據和該第四數據進行第二運算或計算(例如將該 第一數據乘以該第四數據),以獲得與該測試樣本有關的第五數據(例如該種特定干細胞 在該測試樣本中每單位體積(如每毫升)的數量);以及(7)對該第五數據和一體積改變 (或樣本準備)系數進行第三運算或計算(例如將該第五數據乘以該體積改變(或樣本準 備)系數),以獲得與該組織樣本(如該周邊血液)有關的第六數據(例如該種特定干細胞 在該組織樣本中每單位體積(如每毫升)的數量)。該種獲得該組織樣本的干細胞數據的 方法還可以包括下列步驟:對該測試樣本的體積和該組織樣本的體積進行第四運算或計算 (例如將該測試樣本的體積除以該組織樣本的體積),以獲得該體積改變(或樣本準備)系 數。
[0261] 該干細胞數據可包括該種特定干細胞在該個體的周邊血液中每單位體積(如每 毫升)的數量。該第三群特定顆粒包括該第二群特定顆粒以及其它群的顆粒和/或細胞 (其可包括微顆粒、粒細胞、紅血球、血小板、白血球(包含淋巴球))。該第二群特定顆粒包 括該種特定干細胞,但是幾乎不含有微顆粒、粒細胞、紅血球、血小板和白血球(包含淋巴 球)。(該第一群特定顆粒和該第三群特定顆粒的)該給定門坎尺寸可以是〇. 5微米、0. 8 微米、1微米、1. 5微米、2微米或3微米。在該第二群特定顆粒中,顆粒的尺寸可以是大于或 實質上等于1微米、1. 1微米、1. 5微米、2微米、2. 1微米或3微米。在該第一群特定顆粒、 該第二群特定顆粒和該第三群特定顆粒中,每一群特定顆粒可以是或可以包括一群細胞。 該種特定干細胞可以是本發明在"干細胞定義"里所提及的任何一種多功能干細胞、任何一 種多潛能干細胞或任何一種先驅干細胞。該組織樣本可以是血液、周邊血液或是其它組織。 該個體可以是人類或是動物。步驟(2)中所述的處理該組織樣本包括下列步驟:將紅血球 凝集劑和該組織樣本進行混合,并在將該紅血球凝集劑和該組織樣本進行混合之后,使來 自該組織樣本的顆粒重新懸浮于溶液或培養液中。該溶液或培養液可以是不含有鈣與鎂的 含鹽溶液或是含有牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液。根據該組織樣本制備成該測試樣本的方 式,可計算出或是獲得該體積改變(或樣本準備)系數。例如,將10毫升的該組織樣本處 理成3毫升的該測試樣本,則該體積改變(或樣本準備)系數為3/10 (其為該測試樣本的 體積與該組織樣本的體積的比率)。
[0262] 概括地說,血球計數器(連同顯微鏡)是用來獲得尺寸大于或等于該給定門坎尺 寸的顆粒(其是包括細胞)在該測試樣本(其由該組織樣本(例如周邊血液)經過處理而 成)中每單位體積(如每毫升)的數量,而流式細胞儀則是用來獲得該種特定干細胞在尺 寸大于或等于該給定門坎尺寸的顆粒(其包括細胞)中所占的百分比(其與該測試樣本有 關)。將上述獲得的尺寸大于或等于該給定門坎尺寸的顆粒在該測試樣本中每單位體積的 數量乘以上述獲得的該種特定干細胞在尺寸大于或等于該給定門坎尺寸的顆粒中所占的 百分比,可以獲得該種特定干細胞在該測試樣本中每單位體積(如每毫升)的數量。將該 種特定干細胞在該測試樣本中每單位體積的數量乘以該體積改變(或樣本準備)系數,可 以獲得該種特定干細胞在該組織樣本(如上述的周邊血液)中每單位體積(如每毫升)的 數量。因此,結合上述的細胞計數數據(也就是上述利用血球計數器獲得的數據)和上述 的該種特定干細胞的百分比(也就是上述利用流式細胞儀測量出來的數據),可以更準確 地獲得該種特定干細胞在周邊血液中的數量。
[0263] 本發明揭露一整合系統、裝置、儀器或工具,其可用來獲得與一個體(例如一人 體)的組織樣本(例如周邊血液)有關的干細胞數據(例如每單位體積的干細胞數量)。 該整合系統、裝置、儀器或工具包括:(1)第一裝置、儀器或工具,其是用來從該個體獲得或 取得該組織樣本(其體積可以是10毫升);(2)第二裝置、儀器或工具(其可包括離心機), 其是用來處理該組織樣本,以獲得或制備出一測試樣本(其體積可以是3毫升);(3)第三 裝置、儀器或工具(其可包括血球計數器、顯微鏡以及含有軟件的處理器或計算機),其是 用來從該測試樣本的第一部分獲得第一數據(例如每單位體積(如每毫升)內第一群特定 顆粒的數量);(4)第四裝置、儀器或工具(其可包括流式細胞儀和處理器或計算機),其是 用來從該測試樣本的第二部分獲得第二數據(例如一種特定干細胞的數量占第二群特定 顆粒的數量的百分比)和第三數據(例如該第二群特定顆粒的數量占第三群特定顆粒的數 量的百分比),其中在該測試樣本是均勻且含有大致相同的內容物的情況下,該第一部分假 定含有與該第二部分大致上相同的內容物,另外該第一群特定顆粒與該第三群特定顆粒大 致上具有相同的性質或特性,該第一群特定顆粒的尺寸和該第三群特定顆粒的尺寸是大于 或等于一給定門坎尺寸;以及(5)第五裝置、儀器或工具(例如一計算機或處理器),其是 用來進行下列的運算或計算:(a)對該第二數據和該第三數據進行第一運算或計算(例如 將該第二數據乘以該第三數據),以獲得與該測試樣本有關的第四數據(例如該種特定干 細胞的數量占該第三群特定顆粒的數量的百分比);(b)對該第一數據和該第四數據進行 第二運算或計算(例如將該第一數據乘以該第四數據),以獲得與該測試樣本有關的第五 數據(例如該種特定干細胞在該測試樣本中每單位體積(如每毫升)的數量);以及(c)對 該第五數據和一體積改變(或樣本準備)系數進行第三運算或計算(例如將該第五數據乘 以該體積改變(或樣本準備)系數),以獲得與該組織樣本有關的第六數據(例如該種特 定干細胞在該組織樣本中每單位體積(如每毫升)的數量)。該第五裝置、儀器或工具也 可以用來進行下列的運算或計算:對該測試樣本的體積和該組織樣本的體積進行第四運算 或計算(例如將該測試樣本的體積除以該組織樣本的體積),以獲得該體積改變(或樣本 準備)系數。另外,也可以將該第一、第二、第三、第四和第五裝置、儀器或工具中的任兩個 或以上的裝置、儀器或工具合并組成一個可以進行所述的任兩個或以上的裝置、儀器或工 具之功能的整合裝置、儀器或工具或是單一裝置、儀器或工具。例如,該第一和第二裝置、儀 器或工具可以合并組成一個可以進行該第一和第二裝置、儀器或工具的功能的第一整合裝 置、儀器或工具或是第一單一裝置、儀器或工具,而該第三、第四和第五裝置、儀器或工具可 以合并組成一個可以進行該第三、第四和第五裝置、儀器或工具的功能的第二整合裝置、儀 器或工具或是第二單一裝置、儀器或工具。或者,該第二、第三、第四和第五裝置、儀器或工 具可以合并組成一個可以進行該第二、第三、第四和第五裝置、儀器或工具的功能的整合裝 置、儀器或工具或是單一裝置、儀器或工具。或者,該第二、第三和第四裝置、儀器或工具可 以合并組成一個可以進行該第二、第三和第四裝置、儀器或工具的功能的整合裝置、儀器或 工具或是單一裝置、儀器或工具。或者,該第三和第四裝置、儀器或工具可以合并組成一個 可以進行該第三和第四裝置、儀器或工具的功能的整合裝置、儀器或工具或是單一裝置、儀 器或工具。或者,該第四和第五裝置、儀器或工具可以合并組成一個可以進行該第四和第五 裝置、儀器或工具的功能的整合裝置、儀器或工具或是單一裝置、儀器或工具。該干細胞數 據可包括該種特定干細胞在該個體的周邊血液中每單位體積(如每毫升)的數量。該第三 群特定顆粒包括該第二群特定顆粒以及其它群的顆粒和/或細胞(其可包括微顆粒、粒細 胞、紅血球、血小板、白血球(包含淋巴球))。該第二群特定顆粒包括該種特定干細胞,但是 幾乎不含有微顆粒、粒細胞、紅血球、血小板和白血球(包含淋巴球)。(該第一群特定顆粒 和該第三群特定顆粒的)該給定門坎尺寸可以是0. 5微米、0. 8微米、1微米、1. 5微米、2微 米或3微米。在該第二群特定顆粒中,顆粒的尺寸可以是大于或實質上等于1微米、1. 1微 米、1. 5微米、2微米、2. 1微米或3微米。在該第一群特定顆粒、該第二群特定顆粒和該第 三群特定顆粒中,每一群特定顆粒可以是或可以包括一群細胞。該種特定干細胞可以是本 發明在"干細胞定義"里所提及的任何一種多功能干細胞、任何一種多潛能干細胞或任何一 種先驅干細胞。該組織樣本可以是一周邊血液樣本。該個體可以是一人類或是一動物。在 該第二裝置、儀器或工具處理該組織樣本的時候,可包括下列步驟:將一紅血球凝集劑和該 組織樣本進行混合,并在將該紅血球凝集劑和該組織樣本進行混合之后,使來自該組織樣 本的顆粒重新懸浮于一溶液或培養液中。該溶液或培養液可以是一不含有鈣與鎂的含鹽溶 液或是一含有牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液。根據該組織樣本制備成該測試樣本的方式, 可以計算出或是獲得該體積改變(或樣本準備)系數。例如,將10毫升的該組織樣本處理 成3毫升的該測試樣本,則該體積改變(或樣本準備)系數為3/10 (其為該測試樣本的體 積與該組織樣本的體積的比率)。
[0264] 概括地說,該第三裝置、儀器或工具是用來獲得尺寸大于或等于該給定門坎尺寸 的顆粒(其包括細胞)在該測試樣本(其由該組織樣本(例如周邊血液)經過處理而成) 中每單位體積(如每毫升)的數量,而該第四和第五裝置、儀器或工具則是用來獲得該種特 定干細胞在尺寸大于或等于該給定門坎尺寸的顆粒(其包括細胞)中所占的百分比(其與 該測試樣本有關)。將上述獲得的尺寸大于或等于該給定門坎尺寸的顆粒在該測試樣本中 每單位體積的數量乘以上述獲得的該種特定干細胞在尺寸大于或等于該給定門坎尺寸的 顆粒中所占的百分比,可以獲得該種特定干細胞在該測試樣本中每單位體積(如每毫升) 的數量。將該種特定干細胞在該測試樣本中每單位體積的數量乘以該體積改變(或樣本準 備)系數,可以獲得該種特定干細胞在該組織樣本(如上述的周邊血液)中每單位體積(如 每毫升)的數量。因此,結合上述的細胞計數數據(其是由該第三裝置、儀器或工具提供) 和上述的該種特定干細胞的百分比(其由該第四與第五裝置、儀器或工具提供),可以更準 確地獲得該種特定干細胞在周邊血液中的數量。
[0265] 本發明還揭露單一系統、裝置、儀器或工具,其可提供或執行下列八種功能中任兩 個(或以上)的功能:(1)第一功能,其是用來從一個體獲得或取得一組織樣本(其體積可 以是10毫升);(2)第二功能,其是用來處理該組織樣本,以獲得或制備出一測試樣本(其 體積可以是3毫升);(3)第三功能,其是用來從該測試樣本的第一部分獲得第一數據(例 如每單位體積(如每毫升)內第一群特定顆粒的數量);(4)第四功能,其是用來從該測試 樣本的第二部分獲得第二數據(例如一種特定干細胞的數量占第二群特定顆粒的數量的 百分比)和第三數據(例如該第二群特定顆粒的數量占第三群特定顆粒的數量的百分比), 其中在該測試樣本是均勻且含有大致相同之內容物的情況下,該第一部分假定含有與該第 二部分大致上相同的內容物,另外該第一群特定顆粒與該第三群特定顆粒大致上具有相同 的性質或特性,該第一群特定顆粒的尺寸和該第三群特定顆粒的尺寸是大于或等于一給定 門坎尺寸;(5)第五功能,其是用來對該第二數據和該第三數據進行第一運算或計算(例如 將該第二數據乘以該第三數據),以獲得與該測試樣本有關的第四數據(例如該種特定干 細胞的數量占該第三群特定顆粒的數量的百分比);(6)第六功能,其是用來對該第一數據 和該第四數據進行第二運算或計算(例如將該第一數據乘以該第四數據),以獲得與該測 試樣本有關的第五數據(例如該種特定干細胞在該測試樣本中每單位體積(如每毫升)的 數量);(7)第七功能,其是用來對該測試樣本的體積和該組織樣本的體積進行第三運算或 計算(例如將該測試樣本的體積除以該組織樣本的體積),以獲得一體積改變(或樣本準 備)系數;以及(8)第八功能,其是用來對該第五數據和該體積改變(或樣本準備)系數進 行第四運算或計算(例如將該第五數據乘以該體積改變(或樣本準備)系數),以獲得與該 組織樣本有關的第六數據(例如該種特定干細胞在該組織樣本中每單位體積(如每毫升) 的數量)。該種特定干細胞在該組織樣本中每單位體積的數量可以是該種特定干細胞在該 個體的周邊血液中每單位體積的數量。該第三群特定顆粒包括該第二群特定顆粒以及其它 群的顆粒和/或細胞(其可包括微顆粒、粒細胞、紅血球、血小板、白血球(包含淋巴球))。 該第二群特定顆粒包括該種特定干細胞,但是幾乎不含有微顆粒、粒細胞、紅血球、血小板 和白血球(包含淋巴球)。(該第一群特定顆粒和該第三群特定顆粒的)該給定門坎尺寸 可以是0. 5微米、0. 8微米、1微米、1. 5微米、2微米或3微米。在該第二群特定顆粒中,顆 粒的尺寸可以是大于或實質上等于1微米、1. 1微米、1. 5微米、2微米、2. 1微米或3微米。 在該第一群特定顆粒、該第二群特定顆粒和該第三群特定顆粒中,每一群特定顆粒可以是 或可以包括一群細胞。該種特定干細胞可以是本發明在"干細胞定義"里所提及的任何一種 多功能干細胞、任何一種多潛能干細胞或任何一種先驅干細胞。該組織樣本可以是一周邊 血液樣本。該個體可以是一人類或是一動物。對于該第二功能而言,處理該組織樣本可包 括下列步驟:將一紅血球凝集劑和該組織樣本進行混合,并在將該紅血球凝集劑和該組織 樣本進行混合之后,使來自該組織樣本的顆粒重新懸浮于一溶液或培養液中。該溶液或培 養液可以是不含有鈣與鎂的含鹽溶液或是含有牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液。根據該組織 樣本制備成該測試樣本的方式,可以計算出或是獲得該體積改變(或樣本準備)系數。例 如,將10毫升的該組織樣本處理成3毫升的該測試樣本,則該體積改變(或樣本準備)系 數為3/10(其為該測試樣本的體積與該組織樣本的體積的比率)。
[0266] 在一范例中,該單一系統、裝置、儀器或工具可以提供或執行該第三和第四功能。 在另一范例中,該單一系統、裝置、儀器或工具可以提供或執行該第二、第三和第四功能。在 另一范例中,該單一系統、裝置、儀器或工具可以提供或執行該第三、第四、第五、第六和第 八功能。在另一范例中,該單一系統、裝置、儀器或工具可以提供或執行該第三至第八功能。 在另一范例中,該單一系統、裝置、儀器或工具可以提供或執行該第一至第八功能。
[0267] 概括地說,該單一系統、裝置、儀器或工具所提供的該第三功能是用來獲得尺寸大 于或等于該給定門坎尺寸的顆粒(其包括細胞)在該測試樣本(其由該組織樣本(例如周 邊血液)經過處理而成)中每單位體積(如每毫升)的數量,而該單一系統、裝置、儀器或 工具所提供的該第四和第五功能則是用來獲得該種特定干細胞在尺寸大于或等于該給定 門坎尺寸的顆粒(其包括細胞)中所占的百分比(其與該測試樣本有關)。將上述獲得的 尺寸大于或等于該給定門坎尺寸的顆粒在該測試樣本中每單位體積的數量乘以上述獲得 的該種特定干細胞在尺寸大于或等于該給定門坎尺寸的顆粒中所占的百分比,可以獲得該 種特定干細胞在該測試樣本中每單位體積(如每毫升)的數量。將該種特定干細胞在該測 試樣本中每單位體積的數量乘以該體積改變(或樣本準備)系數,可以獲得該種特定干細 胞在該組織樣本(如上述的周邊血液)中每單位體積(如每毫升)的數量。因此,結合上 述的細胞計數數據(其由該單一系統、裝置、儀器或工具的該第三功能提供)和上述的該種 特定干細胞的百分比(其由該單一系統、裝置、儀器或工具的該第四與第五功能提供),可 以更準確地獲得該種特定干細胞在周邊血液中的數量。
[0268] 以上所述是通過實施例說明本發明的特點,其目的在使本領域技術人員能了解本 發明的內容并據以實施,而非限定本發明的專利范圍,所以凡其他未脫離本發明所揭示的 精神所完成的等效修飾或修改,仍應包含在以下所述的申請專利范圍中。
【權利要求】
1. 一種獲得干細胞數據的方法,其包括下列步驟: (a) 處理從一個體獲得的一組織樣本,以獲得一測試樣本; (b) 計算該測試樣本的第一部分中第一群顆粒的數量,進而獲得第一數據; (c) 計算該測試樣本的第二部分中第二群顆粒里的一種干細胞的數量,進而獲得第二 數據;以及 (d) 根據該第一數據和該第二數據,獲得第三數據。
2. 如權利要求1所述的方法,其特征是步驟(b)包括利用一血球計數器計算該測試樣 本的該第一部分中該第一群顆粒的數量。
3. 如權利要求1所述的方法,其特征是步驟(c)包括利用一流式細胞儀計算該測試樣 本的該第二部分中該第二群顆粒里的該種干細胞的數量。
4. 如權利要求1所述的方法,其特征是該種干細胞包括一種多功能干細胞。
5. 如權利要求1所述的方法,其特征是該種干細胞包括一種多潛能干細胞。
6. 如權利要求1所述的方法,其特征是該組織樣本包括該個體的一周邊血液。
7. 如權利要求1所述的方法,其特征是該第一群顆粒的尺寸和該第二群顆粒的尺寸是 大于或實質上等于一門坎尺寸。
8. 如權利要求7所述的方法,其特征是該門坎尺寸為1微米。
9. 如權利要求1所述的方法,其特征是該第一數據包括該第一群顆粒在該測試樣本中 每單位體積的數量。
10. 如權利要求1所述的方法,其特征是該第二數據包括該種干細胞的數量占該第二 群顆粒的數量的百分比。
11. 如權利要求1所述的方法,其特征是該第三數據包括該種干細胞在該組織樣本中 每單位體積的數量。
12. 如權利要求1所述的方法,其特征是該第二群顆粒包括白血球、紅血球、血小板以 及粒細胞。
【文檔編號】C12N5/0789GK104232567SQ201410287637
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年6月24日 優先權日:2013年6月24日
【發明者】王俊麟, 陳寬仁, 林茂雄, 閻云 申請人:干細胞生物科技公司