一種蔬菜用有機肥料及其制備方法
【專利摘要】一種蔬菜用有機肥料的制備方法，包含以下步驟：(1)以質(zhì)量份數(shù)計，將質(zhì)量含量為5-8％的棕櫚樹精華溶液200份、質(zhì)量含量為5-8％的竹子精華溶液290份、竹子干細胞50份混合后，加水并發(fā)酵7-8天；(2)再次混合質(zhì)量含量為5-8％的莫蘭或印茄精華溶液100份以及莫蘭或印茄干細胞30份，加水并發(fā)酵7-9天；(3)將質(zhì)量含量為5-8％的布袋蓮或浮萍精華溶液180份以及布袋蓮或浮萍干細胞30份加入步驟(2)得到的混合物中，加水并發(fā)酵8-9天；(4)將質(zhì)量含量為5-8％的攀藤寄生植物精華100份以及攀藤寄生植物干細胞20份加入步驟(3)得到的混合物中，加水并發(fā)酵6-8天；(5)將步驟(4)制得的發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)15000轉(zhuǎn)/分的離心分離機旋轉(zhuǎn)分離兩小時，隨后30-35℃下發(fā)酵6-8天。
【專利說明】一種蔬菜用有機肥料及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
:
[0001]本發(fā)明屬于生物肥料【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種蔬菜用有機肥料及其制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002]肥料大體可以分為兩大類，即無機肥和有機肥兩大類。其中無機肥，就是我們平常所稱的化肥，具有養(yǎng)分含量高、元素單一、肥效快、清潔衛(wèi)生、施用方便等優(yōu)點，但是長期施用化肥，在增產(chǎn)的同時，也帶來了很多副作用:
[0003]1)從化肥原料開采到加工生產(chǎn)，不可避免地將一些重金屬元素或有毒物質(zhì)帶入化月巴，施用后被作物吸收，危害人體健康；同時無論是酸性土壤、微酸性土壤還是石灰性土壤，長期施用化肥會造成土壤中重金屬元素富集，被作物吸收，對人體造成危害。
[0004]2) 土壤微生物是個體小而能量大的活體，它們既是土壤有機質(zhì)轉(zhuǎn)化的執(zhí)行者，又是植物營養(yǎng)元素的活性庫，具有轉(zhuǎn)化有機質(zhì)、分解礦物和降解有毒物質(zhì)的作用。中科院南京土壤研究所的試驗表明，施用不同的肥料對微生物的活性有很大影響，土壤微生物數(shù)量、活性大小的順序為:有機肥配施無機肥>單施有機肥>單施無機肥。目前，中國施用的化肥以氮肥為主，而磷肥、鉀肥和有機肥的施用量低，降低土壤微生物的數(shù)量和活性。同時使土壤營養(yǎng)失調(diào)，加劇土壤中磷、鉀耗竭，導致N03-N累積。N03-N本身無毒，但若未被作物充分同化可使其含量迅速增加，攝入人體后被微生物還原為N02-，使血液的載氧能力下降，誘發(fā)高鐵血紅蛋白血癥，嚴重時可使人窒息死亡。同時，N03-N還可以在體內(nèi)轉(zhuǎn)變成強致癌物質(zhì)亞硝胺，誘發(fā)各種消化系統(tǒng)癌變，危害人體健康。在保護地栽培條件下，即使是以施用有機肥為主的100cm 土層中N03-N累積量也在240?740kg/hm2。
[0005]3)長期施用化肥會加速土壤酸化。一方面與氮肥在土壤中的硝化作用產(chǎn)生硝酸鹽的過程相關(guān)；銨先轉(zhuǎn)變成亞硝酸鹽，亞硝酸鹽再轉(zhuǎn)變成硝酸鹽，形成H+，導致土壤酸化。另一方面，一些生理酸性肥料，比如磷酸鈣、硫酸銨、氯化銨在植物吸收肥料中的養(yǎng)分離子后，使得土壤中H+增多，許多耕地土壤的酸化和生理性肥料長期施用有關(guān)。在作物選擇吸收造成土壤逐漸變酸的同時，大氣中的NH3、N2可經(jīng)過氧化與水解作用轉(zhuǎn)化成HN03降落到土壤中引起土壤酸化。但化肥施用促進土壤酸化現(xiàn)象在酸性土壤中最為嚴重，土壤酸化后可加速Ca、Mg從耕作層淋溶，從而降低鹽基飽和度和土壤肥力。
[0006]蔬菜是人們普遍食用的大眾化蔬菜，日常消費量大，但是近年來由于肥料的使用不當以及農(nóng)藥的過度使用，關(guān)于蔬菜安全隱患的問題時有發(fā)生，給人們的健康與環(huán)境帶來很大的傷害。為此專利公布號為CN103524250A的中國專利公開了一種綠色蔬菜專用肥料，由下列重量份的原料制成:污泥200-230、秸桿120-140、紅薯粉110-130、統(tǒng)糠100-120、糠醛渣70-90、糖蜜20-24、蓖麻根粉30-35、硝酸銨35-40、氯化鉀16-19、硫酸錳3_5、硫酸亞鐵3-4、碘化鉀1-2、硼砂4-5、乙二胺四乙酸二鈉1-2、EM菌劑6_9、土壤調(diào)理劑10-15、水適量。實際應用中發(fā)現(xiàn)，上述綠色蔬菜專用肥料與其他常用肥料一樣，均需直接施用在土壤中，肥料成分只有少部分能被蔬菜吸收，大量肥料會從土壤中流失，利用率低，增大了實際生產(chǎn)和使用成本，其次，上述綠色蔬菜專用肥料對蔬菜表面病蟲害防治效果非常有限，仍然需要使用一定量的農(nóng)藥來進行配合使用，人們在食用蔬菜時仍存在較高的風險，此外，該綠色蔬菜專用肥料種使用了硝酸銨、硫酸錳、碘化鉀等化學品，仍然會對土壤造成污染和破壞，在蔬菜生產(chǎn)中，該綠色蔬菜專用肥料仍不滿足現(xiàn)有蔬菜生產(chǎn)的需求。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]針對現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問題，本發(fā)明提供了一種蔬菜用有機肥料及其制備方法。
[0008]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
[0009]一種蔬菜用有機肥料的制備方法，包含以下步驟:
[0010](1)以質(zhì)量份數(shù)計，將質(zhì)量含量為5-8%的棕櫚樹精華溶液200份、質(zhì)量含量為5-8%的竹子精華溶液290份、竹子干細胞50份混合后，加入適量蒸餾水并攪拌均勻，35-40°C下發(fā)酵7-8天；
[0011](2)在步驟(1)得到發(fā)酵混合物中再次混合質(zhì)量含量為5-8%的莫蘭或印茄精華溶液100份以及莫蘭或印茄干細胞30份，加入適量蒸餾水并攪拌均勻，35-45°C下發(fā)酵7-9天;
[0012](3)將質(zhì)量含量為5-8 %的布袋蓮或浮萍精華溶液180份以及布袋蓮或浮萍干細胞30份加入步驟(2)得到的混合物中，再次加入適量蒸餾水并攪拌均勻，35-40°C下發(fā)酵8-9 天；
[0013](4)將質(zhì)量含量為5-8%的攀藤寄生植物精華100份以及攀藤寄生植物干細胞20份加入步驟(3)得到的混合物中，再次加入適量蒸餾水并攪拌均勻，30-35°C下發(fā)酵6-8天;
[0014](5)將步驟(4)制得的發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)15000轉(zhuǎn)/分的離心分離機旋轉(zhuǎn)分離兩小時，隨后30-35°C下發(fā)酵6-8天，產(chǎn)物即所述蔬菜用有機肥料。
[0015]進一步地，所述竹子干細胞的提取方法包括如下步驟:
[0016](1)提取竹子干細胞:選擇生長狀況良好的竹子的樹干、枝干，用無菌蒸餾水沖洗10分鐘，洗凈后，將竹子的樹干、枝干首先切割成長度10-20厘米的小塊，然后將整理后的竹子原料放入在攪拌設(shè)備中粉碎成細末；
[0017](2)將步驟(1)中粉碎制得的竹子細末原料，放入多個盛有固態(tài)培養(yǎng)基的培養(yǎng)器皿中，在受控暗室內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25±1度；
[0018](3)形成層細胞的誘導:在整個培養(yǎng)過程中保持25±1攝氏度的恒溫，培養(yǎng)器皿外空間濕度保持在86±1左右，培養(yǎng)20-30天后，竹子內(nèi)部組織的細胞系增量放大，形成層細胞系與韌皮組織分離，細胞系組織有大量的液泡存在，并且接觸后易碎；
[0019](4)將步驟(3)中形成層細胞群體用接種鏟輕輕將其移入盛有液態(tài)培養(yǎng)基的培養(yǎng)器皿中，在暗室中，用旋轉(zhuǎn)搖床，以100rpm、25±l度下培養(yǎng)，培養(yǎng)時間設(shè)定為20天，使液態(tài)培養(yǎng)基中的干細胞充分生長，在生長期內(nèi)始終保持極高的活力；
[0020](5)竹子干細胞的提取:首先，將培養(yǎng)液細胞系通過分子質(zhì)量截留值4萬的中空纖維超濾柱進行超濾，然后將過濾后的全部細胞混合液經(jīng)另一容器內(nèi)快速攪拌3小時，再進行經(jīng)旋轉(zhuǎn)式真空蒸發(fā)器，間接加熱80度進行旋轉(zhuǎn)吸空蒸發(fā)，濃縮至小于原體液5分之1時取出，在放入真空冷凍干燥機內(nèi)真空冷凍干燥，30小時后，在含水分小于3%以下時取出，粉碎100目，裝袋收藏備用。
[0021]進一步地，所述莫蘭或印茄干細胞的提取方法包括如下步驟:
[0022](1)提取莫蘭或印茄樹木枝干的干細胞:選擇生長狀況良好的莫蘭或印茄的樹干，用無菌蒸餾水沖洗10分鐘，洗凈后，將其切割成邊長小于20厘米的方塊，然后將所述方塊放入在攪拌設(shè)備中粉碎成細末；
[0023](2)將步驟(1)中粉碎制得的樹干細末原料，放入多個盛有固態(tài)培養(yǎng)基的培養(yǎng)器皿中，在受控暗室內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25±1度；
[0024](3)形成層細胞的誘導:在整個培養(yǎng)過程中保持35±1度的恒溫，培養(yǎng)器皿外空間濕度保持在90±1左右，培養(yǎng)15-25天后，樹干內(nèi)部組織的細胞系增量放大，形成層細胞系與韌皮組織分離，細胞系組織有大量的液泡存在，并且接觸后易碎；
[0025](4)將形成層細胞群體用接種鏟輕輕將其移入盛有液態(tài)培養(yǎng)基的培養(yǎng)器皿中，在暗室中，用旋轉(zhuǎn)搖床，以100rpm、35±l度下培養(yǎng)，培養(yǎng)時間設(shè)定為16天，使液態(tài)培養(yǎng)基中的干細胞充分生長，在生長期內(nèi)始終保持極聞的活力；
[0026](5)莫蘭或印茄干細胞的提取:首先，將培養(yǎng)液細胞系通過分子質(zhì)量截留值4萬的中空纖維超濾柱進行超濾，然后將過濾后的全部細胞混合液經(jīng)另一容器內(nèi)快速攪拌3小時，再進行經(jīng)旋轉(zhuǎn)式真空蒸發(fā)器，間接加熱80度進行旋轉(zhuǎn)吸空蒸發(fā)，濃縮至小于原體液5分之1時取出，再放入真空冷凍干燥機內(nèi)真空冷凍干燥，25-30小時后，在含水分小于3%以下時取出，粉碎100目，裝袋收藏備用。
[0027]進一步地，所述固態(tài)培養(yǎng)基成分的組成為:硝酸鉀1010mg/L,硫酸鎂120mg/L,硫酸猛9.5mg/L,硫酸鋅2mg/L,氯化|丐113mg/L,硫酸銅0.023mg/L,碘化鉀0.72mg/L,磷酸二氫鈉130mg/L，氯化鈷0.023mg/L,硼酸3.lmg/L,鑰酸鈉0.24mg/L,乙二胺四乙酸鐵鈉鹽 37mg/L ;肌醇 452mg/L,鹽酸噻胺(VB 1)2lmg/L,吡哆醇(VB6) 1.9mg/L，尼克酸 1.9mg/L, L-抗壞血酸110mg/L,朽1檬酸114mg/L ;光氨酸170mg/L,酪蛋白水解物510mg/L ;鹿糖30.100mg/L ;2，4-D2.5mg/L,赤霉素 0.6mg/L ;瓊脂 39.000mg/L ;活性碳 3000mg/L ;磁化水 1升。
[0028]進一步地，所述液態(tài)培養(yǎng)基成分的組成:硝酸鉀1010mg/L，硫酸鎂120mg/L，硫酸猛9.5mg/L,硫酸鋅2mg/L,氯化?丐113mg/L,硫酸銅0.023mg/L,碘化鉀0.72mg/L,磷酸二氫鈉130mg/L,氯化鈷0.023mg/L,硼酸3mg/L,鑰酸鈉0.24mg/L,乙二胺四乙酸鐵鈉鹽37mg/L，肌醇 200mg/L,鹽酸噻胺(VB1) 2lmg/L,吡哆醇(VB6) 1.9mg/L,尼克酸 1.9mg/L, L-抗壞血酸110mg/L,梓檬酸148mg/L,2,4-D2.5mg/L,赤霉素0.lmg/L,天冬氨酸134mg/L,精氨酸180mg/L,脯氨酸 118mg/L,甘氨酸 60mg/L,色氨酸 80mg/L,鹿糖 21.000mg/L,麥飯石 2000mg/L,鍺石2000mg/L,磁化水1升。
[0029]進一步地，布袋蓮或浮萍干細胞的提取方法包括如下步驟:
[0030](1)將布袋蓮或浮萍用無菌水沖洗10分鐘，洗凈；
[0031](2)制備固態(tài)培養(yǎng)基:硝酸鉀2500mg/L，硫酸鎂122mg/L，硫酸錳llmg/L，硫酸鋅2.5mg/L，硫酸銅0.025mg/L，硫酸胺135mg/L ;氯化鈣112mg/L，碘化鉀0.7mg/L，氯化鈷0.025mg/L,磷酸二氫鈉 132mg/L,硼酸 2.6mg/L,鑰酸鈉 0.23mg/L,煙酸 2.0mg/L,吡哆醇
2.lmg/L, L-抗壞血酸 53mg/L,梓檬酸 78mg/L, L-天冬氨酸 140mg/L, L-精氨酸 180mg/L,甘氨酸75mg/L,脯氨酸120mg/L ;a_萘乙酸2.2mg ;鹿糖10.200mg/L ;活性炭500mg/ ;瓊脂3800mg/L ;磁化水 0.7 升；
[0032](3)形成層分離培養(yǎng):將水生植物用小刀切碎后放進固態(tài)培養(yǎng)基中，在受控暗室內(nèi)培養(yǎng)15天，培養(yǎng)溫度25土1°C ;隨后將形成層細胞系用接種鏟輕輕將其移入另一同樣培養(yǎng)基培養(yǎng)器皿內(nèi)，在放大培養(yǎng)20天，最后將其放大培養(yǎng)的細胞系群體移入液態(tài)培養(yǎng)基中，在暗室內(nèi)用搖床旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)，在160rpm、25±l°C環(huán)境中培養(yǎng)，培養(yǎng)時間設(shè)定為20天；
[0033]所述液態(tài)培養(yǎng)基的成分為:硫酸鉀995mg/L，磷酸氫鉀160mg/L，硫酸鎂185mg/L，硫酸鋅9mg/L,硫酸猛22mg/L,硫酸銅0.25mg/L,氯化|丐7Omg/L,硝酸|丐480mg/L,鑰酸鈉0.26mg/L,硼酸6.5mg/L,硝酸胺420mg/L,乙二胺四乙酸鐵鈉鹽38mg/L,肌醇230mg/L,硫胺素22mg/L,煙酸2mg/L,批卩多醇2.5mg/L, L-抗壞血酸65mg/L,朽1檬酸72mg/L, L-天冬氨酸140mg/L, L-精氨酸180mg/L,甘氨酸80mg/L,脯氨酸120mg/L, a-萘乙酸2.2mg/L ;鹿糖31000mg/L ;麥飯石顆粒60000mg/L,鍺石顆粒60000mg/L,硒礦石顆粒主90000mg/L ;磁化水0.7升；
[0034](4)布袋蓮或浮萍干細胞的分離:將液態(tài)培養(yǎng)基用lum過濾器過濾，然后將過濾后的全部細胞混合液經(jīng)另一容器內(nèi)快速攪拌2-3小時，在進行經(jīng)旋轉(zhuǎn)式真空蒸發(fā)器，間接加熱60度進行旋轉(zhuǎn)吸空蒸發(fā)，濃縮至小于原體液5分之1時取出，再放入真空冷凍干燥機內(nèi)真空冷凍干燥，20-22小時后，在含水分小于3%以下時取出，粉碎100目，裝袋收藏備用。
[0035]進一步地，攀藤寄生植物干細胞的提取方法包括如下步驟:
[0036](1)將攀藤寄生植物用無菌蒸餾水沖洗15分鐘，洗凈；
[0037](2)固態(tài)培養(yǎng)基的制備:
[0038]固態(tài)培養(yǎng)基原料為:硝酸鉀2510mg，硫酸胺136mg，硫酸鎂123mg，硫酸錳10mg，硫酸鋅2.5mg,硫酸銅0.026mg,氯化|丐114mg,碘化鉀0.7mg,氯化鈷0.026mg,磷酸二氫鈉131mg,硼酸2.8mg,鑰酸鈉0.26mg,乙二胺四乙酸鐵鈉鹽37mg ;肌醇210mg,硫胺素21mg,煙酸2.2mg,批卩多醇2.2mg, L-抗壞血酸52mg,朽1檬酸74mg ；L-天冬氨酸135mg, L-精氨酸176mg,甘氨酸76mg,脯氨酸116mg, α -萘乙酸2.2mg,鹿糖10.lOOmg,活性炭200mg,瓊脂
3.lOOmg，磁化水 0.63 升;
[0039]所述固態(tài)培養(yǎng)基的制備過程:將無機鹽類各養(yǎng)分分別用20mL磁化水稀釋，將維生素類合并放入50mL無菌磁化水中稀釋，將氨基酸類合并放入50mL無菌磁化水中稀釋，將生長素放入10mL無菌磁化水中稀釋；然后將稀釋后的無機鹽類分別注入燒瓶磁化水中，邊注入邊攪拌，在將糖類、固化劑、活性炭放入，全部溶解后，封口，進行高壓滅菌30分鐘，降溫取出后，在將稀釋的維生素和氨基酸溶液、生長素溶液分別放入攪勻后，冷凝；
[0040](3)形成層分離培養(yǎng):將攀藤寄生植物的主干或葉子用刀切成l-2cm長的小段，移入固態(tài)培養(yǎng)基中，在受控的暗室內(nèi)避光培養(yǎng)28天，培養(yǎng)溫度25±1°C ;培養(yǎng)28天后，將形成層細胞群體用接種勺或接種鏟輕輕將其移入另一同樣培養(yǎng)基器皿內(nèi)在放大培養(yǎng)23天；
[0041](4)將其放大培養(yǎng)的細胞系群體移入液態(tài)培養(yǎng)基中，在暗室中，用旋轉(zhuǎn)搖床以100rpm，25±l°C培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為20天；
[0042]其中，液態(tài)培養(yǎng)基的組成為:硫酸鎂181mg，硫酸錳23mg，硫酸鋅8.9mg,硫酸銅0.23mg,硝酸I丐473mg,硝酸胺400mg,氯化I丐60mg,碘化鉀995mg,鑰酸鈉0.24mg,硼酸6mg,磷酸氫鈉170mg,乙二胺四乙酸鐵鈉鹽37mg,肌醇210mg,硫胺素21mg,煙酸2.2mg,卩比卩多醇2.2mg, L-抗壞血酸60mg,梓檬酸75mg ；L-天冬氨酸135mg, L-精氨酸178mg,甘氨酸75mg,脯氨酸116mg, α -萘乙酸2mg,鹿糖30.lOOmg,麥飯石顆粒50000mg,鍺石50000mg,磁化水1升;
[0043](5)攀藤寄生植物干細胞的提取:將液態(tài)培養(yǎng)基用1.5um過濾器過濾，然后將過濾后的全部細胞混合液經(jīng)另一容器內(nèi)快速攪拌2小時，再進行經(jīng)旋轉(zhuǎn)式真空蒸發(fā)器，間接加熱65度進行旋轉(zhuǎn)吸空蒸發(fā)，濃縮至小于原體液5分之1時取出，再放入真空冷凍干燥機內(nèi)真空冷凍干燥，20小時后，在含水分小于3%以下時取出，粉碎100目，裝袋收藏備用。
[0044]進一步地，所述棕櫚樹精華溶液是通過將棕櫚樹的種子在650-680°C的溫度下蒸2-2.5個小時，然后用15000轉(zhuǎn)/分的粉碎機粉碎，隨后注入蒸餾水并發(fā)酵10-20天，然后經(jīng)渣液分離器分離，隨后經(jīng)lum過濾器過濾，濾液間接加熱65-85度進行旋轉(zhuǎn)吸空蒸發(fā)，濃縮至礦物質(zhì)含量為5-8%蒸發(fā)完成，最終制得的溶液；所述布袋蓮或浮萍精華溶液是通過將布袋蓮或浮萍用15000轉(zhuǎn)/分的粉碎機將其粉碎后注入蒸餾水并發(fā)酵12-15天，然后經(jīng)lum過濾器過濾后間接加熱65-85度進行旋轉(zhuǎn)吸空蒸發(fā)，濃縮至礦物質(zhì)含量為5-8%制得的溶液；所述攀藤寄生植物精華溶液是通過將攀藤寄生植物用15000轉(zhuǎn)/分的粉碎機將其粉碎后注入蒸餾水并發(fā)酵15-18天，然后經(jīng)lum過濾器過濾，濾液間接加熱65-85度進行旋轉(zhuǎn)吸空蒸發(fā)，濃縮至礦物質(zhì)含量為5-8%制得的溶液；所述竹子精華溶液是通過將竹子的枝干和葉子燃燒后，注入蒸餾水并發(fā)酵14-16天，經(jīng)lum過濾器過濾后間接加熱65-85度進行旋轉(zhuǎn)吸空蒸發(fā)，濃縮至礦物質(zhì)含量為5-8%制得的溶液；所述莫蘭、印茄精華溶液是通過將莫蘭、印茄枝干用15000轉(zhuǎn)/分的粉碎機將其粉碎后注入蒸餾水并發(fā)酵10-15天，然后經(jīng)lum過濾器過濾后間接加熱65-85度進行旋轉(zhuǎn)吸空蒸發(fā)，濃縮至礦物質(zhì)含量為5-8%制得的溶液。
[0045]本發(fā)明還涉及一種蔬菜用有機肥料，該蔬菜用有機肥料由所述的一種蔬菜用有機肥料的制備方法制備而成。
[0046]本發(fā)明還涉及一種蔬菜用有機肥料的使用方法，其中將所述制得的蔬菜用有機肥料按照體積比例1: 10-30加入水分稀釋后，由機器或人工噴灑在蔬菜的葉子和枝干上。
[0047]本發(fā)明的蔬菜用有機肥料及其制備方法的技術(shù)效果是:
[0048]1.降低農(nóng)業(yè)成本，價格在市面各類蔬菜肥料中存在優(yōu)勢，食用簡便，蔬菜吸收利用率聞;
[0049]2.蔬菜產(chǎn)量增加30%以上，不需要使用其他農(nóng)藥或殺蟲劑；
[0050]3.綠色環(huán)保，符合有機食品，綠色食品的發(fā)展理念。
[0051]4.對土壤有改良和保護作用。
[0052]5.改善植物亞健康狀態(tài)，使不健康的變健康，并延長植物的壽命。

【具體實施方式】
:
[0053]本發(fā)明中的蔬菜用有機肥料制作方法主要包括以下幾個步驟:
[0054](1)將質(zhì)量含量為5-8%的棕櫚樹精華溶液200份、質(zhì)量含量為5_8%的竹子精華溶液290份、竹子干細胞50份混合后，然后加入適量蒸餾水并攪拌均勻，35-40 V下發(fā)酵7-8天。
[0055](2)在步驟(1)得到發(fā)酵混合物中再次混合質(zhì)量含量為5-8%的熱帶雨林樹木如莫蘭、印茄精華溶液100份以及熱帶雨林樹木如莫蘭、印茄干細胞30份，加入適量蒸餾水并攪拌均勻，35-45 °C下發(fā)酵7-9天。
[0056](3)將質(zhì)量含量為5-8%的水生植物如布袋蓮或浮萍精華180份以及水生植物如布袋蓮或浮萍干細胞30份加入步驟(2)得到的混合物中，再次加入適量蒸餾水并攪拌均勻，35-40°C下發(fā)酵8-9天。
[0057](4)將質(zhì)量含量為5-8%的攀藤寄生植物精華100份以及攀藤寄生植物干細胞20份加入步驟(3)得到的混合物中，再次加入適量蒸餾水并攪拌均勻，30-35°C下發(fā)酵6-8天。
[0058](5)將步驟(4)制得的發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)15000轉(zhuǎn)/分的離心分離機旋轉(zhuǎn)分離兩小時，隨后30-35°C下發(fā)酵6-8天，最終產(chǎn)物即本發(fā)明的蔬菜用有機肥料。
[0059]其中，竹子干細胞的提取方法為:
[0060](1)提取竹子干細胞:首先，選擇收集生長狀況良好的竹子的樹干、枝干或竹葉，用無菌蒸餾水沖洗10分鐘，洗凈后，將竹子的樹干或枝干首先切割成長度10-20厘米的小塊，然后將整理后的竹子原料放入在攪拌設(shè)備中粉碎成細末。
[0061](2)將步驟(1)中粉碎制得的竹子細末原料，放入多個盛有固態(tài)培養(yǎng)基的培養(yǎng)器皿中，在受控暗室內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25±1度。
[0062]其中，固態(tài)培養(yǎng)基成分的組成為:
[0063]硝酸鉀1010mg/L,硫酸鎂120mg/L,硫酸猛9.5mg/L,硫酸鋅2mg/L,氯化隹丐113mg/L，硫酸銅 0.023mg/L,碘化鉀 0.72mg/L,磷酸二氫鈉 130mg/L，氯化鈷 0.023mg/L,硼酸3.lmg/L,鑰酸鈉0.24mg/L,乙二胺四乙酸鐵鈉鹽37mg/L ;肌醇452mg/L,鹽酸噻胺(VB1) 21mg/L,卩比卩多醇(VB6) 1.9mg/L,尼克酸 1.9mg/L, L-抗壞血酸 110mg/L,梓檬酸 114mg/L ;光氨酸170mg/L,酪蛋白水解物51 Omg/L ;鹿糖30.100mg/L ;2,4-D2.5mg/L,赤霉素0.6mg/L ;瓊脂 39.000mg/L ;活性碳 3000mg/L ;磁化水 1 升。
[0064](3)形成層細胞的誘導:在初始培養(yǎng)的4-5天內(nèi)，可直觀的觀察到來自形成層細胞系的出現(xiàn)，并在14天后，通過去分化形成的無定形愈傷組織已開始從從內(nèi)皮上下組織構(gòu)成的形成層中被誘導。在整個培養(yǎng)過程中必須保持25±1度的恒溫，培養(yǎng)器皿外空間濕度保持在86±1左右。培養(yǎng)20-30天后，竹子內(nèi)部組織的細胞系增量放大，形成層細胞系與韌皮組織分離，細胞系組織有大量的液泡存在，并且接觸后易碎。
[0065](4)將形成層細胞群體用接種鏟輕輕將其移入盛有液態(tài)培養(yǎng)基的培養(yǎng)器皿中，在暗室中，用旋轉(zhuǎn)搖床，以100rpm、25±l度下培養(yǎng)，培養(yǎng)時間設(shè)定為20天，使液態(tài)培養(yǎng)基中的干細胞充分生長，在生長期內(nèi)始終保持極聞的活力。
[0066]通過在液態(tài)培養(yǎng)基中培養(yǎng)20天后，可以看到懸浮液培養(yǎng)時細胞系超過94%的細胞是以單細胞形式存在，而細胞系的形態(tài)特征存在大量的液泡，處在未分化狀態(tài)，竹子干細胞已經(jīng)充分分裂生長。通過觀察發(fā)現(xiàn)，在液態(tài)培養(yǎng)基中使用小分子磁化活性水、添加了具有內(nèi)含幾十種天然微量元素的麥飯石含有鍺元素的礦石對竹子干細胞的分裂和生長極為有效，小分子活性水能增強細胞活力，麥飯石、鍺石中固含幾十種天然的微量元素，經(jīng)液流不間斷的沖擊而沖刷下來溶于培養(yǎng)液中，使培養(yǎng)后期的細胞系細胞群得到天然、安全和足夠利用的微量元素的補充。
[0067]其中，液態(tài)培養(yǎng)基成分的組成:
[0068]硝酸鉀1010mg/L,硫酸鎂120mg/L,硫酸猛9.5mg/L,硫酸鋅2mg/L,氯化|丐113mg/L,硫酸銅0.023mg/L,碘化鉀0.72mg/L,磷酸二氫鈉130mg/L,氯化鈷0.023mg/L,硼酸3mg/L，鑰酸鈉0.24mg/L,乙二胺四乙酸鐵鈉鹽37mg/L，肌醇200mg/L，鹽酸噻胺(VB1) 2lmg/L,吡口多醇(VB6) 1.9mg/L,尼克酸 1.9mg/L, L-抗壞血酸 110mg/L,梓檬酸 148mg/L, 2,4-D2.5mg/L,赤霉素0.lmg/L,天冬氨酸134mg/L,精氨酸180mg/L,脯氨酸118mg/L,甘氨酸60mg/L,色氨酸80mg/L,鹿糖21.000mg/L,麥飯石2000mg/L,鍺石2000mg/L,磁化水1升。
[0069](5)竹子干細胞的提取:
[0070]首先，將培養(yǎng)液細胞系通過分子質(zhì)量截留值4萬的中空纖維超濾柱進行超濾，然后將過濾后的全部細胞、乙醇混合液經(jīng)另一容器內(nèi)快速攪拌3小時，在進行經(jīng)旋轉(zhuǎn)式真空蒸發(fā)器，間接加熱80度進行旋轉(zhuǎn)吸空蒸發(fā)，濃縮至小于原體液5分之一時取出，在放入真空冷凍干燥機內(nèi)真空冷凍干燥，30小時后，在含水分小于3%以下時取出，粉碎100目，裝袋收藏備用，即成為制作完成的竹子干細胞原料。
[0071]之所以采用植物干細胞來制作有機肥料，是因為植物干細胞是由多種植物及有機物營養(yǎng)，源經(jīng)獨特工藝超強發(fā)酵和長期熟化而成的，無毒、無害、無污染的活性微生物有機液體，不含任何化學物質(zhì)，不含改造基因物質(zhì)。含有效活菌富有益微生物菌群，活性有機物質(zhì)及多種微量元素。而且竹子干細胞具有抗病、重生的功效，利于作物生長。
[0072]熱帶雨林樹木如莫蘭、印茄干細胞的提取方法:
[0073](1)提取樹木枝干的干細胞:首先，選擇收集生長狀況良好的熱帶雨林樹木的樹干，用無菌蒸餾水沖洗10分鐘，洗凈后，將其數(shù)目切割成變長小于20厘米的方塊，然后將所述方塊放入在攪拌設(shè)備中粉碎成細末。
[0074](2)將步驟(1)中粉碎制得的樹干細末原料，放入多個盛有固態(tài)培養(yǎng)基的培養(yǎng)器皿中，在受控暗室內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25±1度。
[0075]其中，為了節(jié)約成本，簡化工藝，固態(tài)培養(yǎng)基采用竹子干細胞提取過程中同樣的培養(yǎng)基。
[0076](3)形成層細胞的誘導:在初始培養(yǎng)的3-5天內(nèi)，可觀察到來自形成層細胞系的出現(xiàn)，并在15天后，通過去分化形成的無定形愈傷組織已開始從從內(nèi)皮上下組織構(gòu)成的形成層中被誘導。在整個培養(yǎng)過程中必須保持35±1度的恒溫，培養(yǎng)器皿外空間濕度保持在90±1左右。培養(yǎng)15-25天后，樹干內(nèi)部組織的細胞系增量放大，形成層細胞系與韌皮組織分離，細胞系組織有大量的液泡存在，并且接觸后易碎。
[0077](4)將形成層細胞群體用接種鏟輕輕將其移入盛有液態(tài)培養(yǎng)基的培養(yǎng)器皿中，在暗室中，用旋轉(zhuǎn)搖床，以100rpm、35±l度下培養(yǎng)，培養(yǎng)時間設(shè)定為16天，使液態(tài)培養(yǎng)基中的干細胞充分生長，在生長期內(nèi)始終保持極聞的活力。
[0078]通過在液態(tài)培養(yǎng)基中培養(yǎng)16天后，可以看到懸浮液培養(yǎng)時細胞系超過91 %的細胞是以單細胞形式存在，而細胞系的形態(tài)特征存在大量的液泡，處在未分化狀態(tài)，樹干干細胞已經(jīng)充分分裂生長。
[0079]其中，液態(tài)培養(yǎng)基成分同樣適用竹子干細胞培養(yǎng)中使用的液態(tài)培養(yǎng)基。
[0080](5)熱帶雨林樹木干細胞的提取:
[0081]首先，將培養(yǎng)液細胞系通過分子質(zhì)量截留值4萬的中空纖維超濾柱進行超濾，然后將過濾后的全部細胞混合液經(jīng)另一容器內(nèi)快速攪拌3小時，在進行經(jīng)旋轉(zhuǎn)式真空蒸發(fā)器，間接加熱80度進行旋轉(zhuǎn)吸空蒸發(fā)，濃縮至小于原體液5分之一時取出，再放入真空冷凍干燥機內(nèi)真空冷凍干燥，25-30小時后，在含水分小于3%以下時取出，粉碎100目，裝袋收藏備用，即成為制作完成的熱帶雨林樹干干細胞原料。
[0082]熱帶雨林干細胞具有增加免疫力和自然抵抗力的功效。
[0083]水生植物如布袋蓮或浮萍干細胞的提取方法:
[0084](1)將水生植物用無菌水沖洗10分鐘，洗凈。
[0085](2)制備固態(tài)培養(yǎng)基:硝酸鉀2500mg/L，硫酸鎂122mg/L，硫酸錳llmg/L，硫酸鋅2.5mg/L,硫酸銅0.025mg/L,硫酸胺135mg/L。氯化?丐112mg/L,碘化鉀0.7mg/L,氯化鈷0.025mg/L,磷酸二氫鈉 132mg/L,硼酸 2.6mg/L,鑰酸鈉 0.23mg/L,煙酸 2.0mg/L,吡哆醇
2.lmg/L, L-抗壞血酸53mg/L,梓檬酸78mg/L, L-天冬氨酸140mg/L, L-精氨酸180mg/L,甘氨酸75mg/L,脯氨酸120mg/L。a_萘乙酸2.2mg。鹿糖10.200mg/L。活性炭500mg/L。瓊脂3800mg/L。磁化水0.7升。
[0086](3)形成層分離培養(yǎng):
[0087]將水生植物用小刀切碎后放進固態(tài)培養(yǎng)基中，在受控暗室內(nèi)培養(yǎng)15天，培養(yǎng)溫度25 ± 1 °C，隨后將形成層細胞系用接種鏟輕輕將其移入另一同樣培養(yǎng)基培養(yǎng)器皿內(nèi)，在放大培養(yǎng)20天，最后將其放大培養(yǎng)的細胞系群體移入液態(tài)培養(yǎng)基中，在暗室內(nèi)用搖床旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)，在160rpm、25±l°C環(huán)境中培養(yǎng)，培養(yǎng)時間設(shè)定為20天。
[0088]所述液態(tài)培養(yǎng)基的成分為:硫酸鉀995mg/L,磷酸氫鉀160mg/L,硫酸鎂185mg/L,硫酸鋅9mg/L,硫酸猛22mg/L,硫酸銅0.25mg/L,氯化|丐7Omg/L,硝酸|丐480mg/L,鑰酸鈉0.26mg/L,硼酸6.5mg/L,硝酸胺420mg/L,乙二胺四乙酸鐵鈉鹽38mg/L,肌醇230mg/L,硫胺素22mg/L,煙酸2mg/L,批卩多醇2.5mg/L, L-抗壞血酸65mg/L,朽1檬酸72mg/L, L-天冬氨酸140mg/L, L-精氨酸180mg/L,甘氨酸80mg/L,脯氨酸120mg/L, a-萘乙酸2.2mg/L。鹿糖31000mg/Lo麥飯石顆粒60000mg/L,鍺石顆粒60000mg/L,硒礦石顆粒主90000mg/L。磁化水0.7升。
[0089](4)水生植物干細胞的分離:將液態(tài)培養(yǎng)基用lum過濾器過濾，然后將過濾后的全部細胞混合液經(jīng)另一容器內(nèi)快速攪拌2-3小時，在進行經(jīng)旋轉(zhuǎn)式真空蒸發(fā)器，間接加熱60度進行旋轉(zhuǎn)吸空蒸發(fā)，濃縮至小于原體液5分之一時取出，再放入真空冷凍干燥機內(nèi)真空冷凍干燥，20-22小時后，在含水分小于3%以下時取出，粉碎100目，裝袋收藏備用，即成為制作完成的水生植物干細胞原料。
[0090]水生植物干細胞可促進植物的快速生長。
[0091]攀藤寄生植物干細胞的提取方法:
[0092](1)將攀藤寄生植物用無菌蒸餾水沖洗10分鐘，洗凈。
[0093](2)固態(tài)培養(yǎng)基的制備:
[0094]固態(tài)培養(yǎng)基原料為:硝酸鉀2510mg，硫酸胺136mg，硫酸鎂123mg，硫酸錳10mg，硫酸鋅2.5mg,硫酸銅0.026mg,氯化|丐114mg,碘化鉀0.7mg,氯化鈷0.026mg,磷酸二氫鈉131mg,硼酸2.8mg,鑰酸鈉0.26mg,乙二胺四乙酸鐵鈉鹽37mg。肌醇210mg,硫胺素21mg,煙酸2.2mg,批卩多醇2.2mg, L-抗壞血酸52mg,朽1檬酸74mg。L-天冬氨酸135mg, L-精氨酸176mg,甘氨酸76mg,脯氨酸116mg, α -萘乙酸2.2mg,鹿糖10.lOOmg,活性炭200mg,瓊脂
3.100mg，磁化水 0.63 升。
[0095]固態(tài)培養(yǎng)基的制備過程:將無機鹽類各養(yǎng)分分別用20mL磁化水稀釋，將維生素類合并放入50mL無菌磁化水中稀釋，將氨基酸類合并放入50mL無菌磁化水中稀釋，將生長素放入10mL無菌磁化水中稀釋。然后將稀釋后的無機鹽類分別注入燒瓶磁化水中，邊注入邊攪拌，在將糖類、固化劑、活性炭放入，全部溶解后，封口，進行高壓滅菌30分鐘，降溫取出后，在將稀釋的維生素和氨基酸溶液、生長素溶液分別放入攪勻后，冷凝。
[0096](3)形成層分離培養(yǎng):將攀藤寄生植物的主干或葉子用刀切成l-2cm長的小段，移入固態(tài)培養(yǎng)基中，在受控的暗室內(nèi)避光培養(yǎng)28天，培養(yǎng)溫度25± 1°C。培養(yǎng)28天后，將形成層細胞群體用接種勺或接種鏟輕輕將其移入另一同樣培養(yǎng)基器皿內(nèi)在放大培養(yǎng)23天。
[0097](4)將其放大培養(yǎng)的細胞系群體移入液態(tài)培養(yǎng)基中，在暗室中，用旋轉(zhuǎn)搖床以100rpm，25±l°C培養(yǎng)，傳代時間為20天。
[0098]其中，液態(tài)培養(yǎng)基的組成為:硫酸鎂181mg，硫酸錳23mg，硫酸鋅8.9mg,硫酸銅0.23mg,硝酸I丐473mg,硝酸胺400mg,氯化I丐60mg,碘化鉀995mg,鑰酸鈉0.24mg,硼酸6mg,磷酸氫鈉170mg,乙二胺四乙酸鐵鈉鹽37mg,肌醇210mg,硫胺素21mg,煙酸2.2mg,卩比卩多醇2.2mg, L-抗壞血酸60mg,梓檬酸75mg。L-天冬氨酸135mg, L-精氨酸178mg,甘氨酸75mg,脯氨酸116mg, α -萘乙酸2mg,鹿糖30.lOOmg,麥飯石顆粒50000mg,鍺石50000mg,磁化水1升°
[0099](5)攀藤寄生植物干細胞的提取:將液態(tài)培養(yǎng)基用1.5um過濾器過濾，然后將過濾后的全部細胞混合液經(jīng)另一容器內(nèi)快速攪拌2小時，在進行經(jīng)旋轉(zhuǎn)式真空蒸發(fā)器，間接加熱65度進行旋轉(zhuǎn)吸空蒸發(fā)，濃縮至小于原體液5分之一時取出，再放入真空冷凍干燥機內(nèi)真空冷凍干燥，20小時后，在含水分小于3%以下時取出，粉碎100目，裝袋收藏備用，即成為制作完成的攀藤寄生植物干細胞原料。
[0100]藤寄生植物干細胞具有強生和快速成長的作用效果。
[0101]竹子精華溶液的制備方法:
[0102]將竹子的主干和葉子燃燒后，注入蒸餾水并發(fā)酵14-16天，發(fā)酵溫度控制在35-45°C，然后用渣液分離器分離，隨后經(jīng)lum過濾器過濾，濾液間接加熱65-85度進行旋轉(zhuǎn)吸空蒸發(fā)，濃縮至礦物質(zhì)含量為5-8%蒸發(fā)完成，即為竹子精華溶液。
[0103]熱帶雨林樹木如莫蘭、印茄精華溶液的制備方法:
[0104]將熱帶雨林樹木如莫蘭、印茄切割成變長小于20厘米的方塊，隨后用15000轉(zhuǎn)/分的粉碎機將其粉碎，隨后注入蒸餾水并發(fā)酵10-15天，發(fā)酵溫度控制在40-45°C，然后經(jīng)渣液分離器分離，隨后經(jīng)lum過濾器過濾，濾液間接加熱65-85度進行旋轉(zhuǎn)吸空蒸發(fā)，濃縮至礦物質(zhì)含量為5-8%蒸發(fā)完成，即為熱帶雨林樹木精華溶液。
[0105]水生植物如布袋蓮或浮萍精華溶液的制備方法:
[0106]將布袋蓮或浮萍用15000轉(zhuǎn)/分的粉碎機將其粉碎，隨后注入蒸餾水并發(fā)酵12-15天，發(fā)酵溫度控制在26-33°C，然后經(jīng)渣液分離器分離，隨后經(jīng)lum過濾器過濾，濾液間接加熱65-85度進行旋轉(zhuǎn)吸空蒸發(fā)，濃縮至礦物質(zhì)含量為5-8%蒸發(fā)完成，即為水生植物精華溶液。
[0107]攀藤寄生植物精華溶液的制備方法:
[0108]將攀藤寄生植物用15000轉(zhuǎn)/分的粉碎機將其粉碎，隨后注入蒸餾水并發(fā)酵15-18天，發(fā)酵溫度控制在30-35°C，然后經(jīng)渣液分離器分離，隨后經(jīng)lum過濾器過濾，濾液間接加熱65-85度進行旋轉(zhuǎn)吸空蒸發(fā)，濃縮至礦物質(zhì)含量為5-8%蒸發(fā)完成，即為攀藤寄生植物精華溶液。
[0109]掠桐樹精華的制備:
[0110]選擇顆粒飽滿、質(zhì)量良好的棕櫚樹的種子，然后將棕櫚樹的種子在65-70°C的溫度下蒸2-2.5個小時，然后用15000轉(zhuǎn)/分的粉碎機粉碎，隨后注入蒸餾水并發(fā)酵10-20天，發(fā)酵溫度控制在35-40°C，然后經(jīng)渣液分離器分離，隨后經(jīng)lum過濾器過濾，濾液間接加熱65-85度進行旋轉(zhuǎn)吸空蒸發(fā)，濃縮至礦物質(zhì)含量為5-8%蒸發(fā)完成，即為棕櫚樹精華溶液。
[0111]本發(fā)明的蔬菜用有機肥料在使用過程中，使用前先搖勻產(chǎn)品，使用雨水或河水，因為無氯，如用自來水，隔一天后使用。
[0112]隨后根據(jù)體積比例1: 10-30加入水分來稀釋該蔬菜用有機肥料，然后由機器或人工噴灑在蔬菜的葉子和枝干上。
[0113]經(jīng)實際應用發(fā)現(xiàn)，使用本發(fā)明的蔬菜用有機肥料后，明顯改善植物長勢，根系生長旺盛，增強樹莖剛強性，抵抗倒伏，增強作物抗旱、抗寒性能，而且有益微生物菌群在植物根系形成優(yōu)勢菌群，使病原微生物難以繁殖，明顯減輕紋枯病、瘟病等病害發(fā)生。使用本發(fā)明的蔬菜用有機肥料后植物果實飽滿，明顯提高結(jié)實率，增加有效穗數(shù)，顯著增加農(nóng)作物的產(chǎn)量30%左右。而且使用本發(fā)明的蔬菜用有機肥料，避免了普通肥料對土壤的污染，利于土壤的恢復和綠色蔬菜的生產(chǎn)。
[0114]最后說明的是，以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管參照較佳實施例對本發(fā)明進行了詳細說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應當理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的宗旨和范圍，其均應涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當中。
【權(quán)利要求】
1.一種蔬菜用有機肥料的制備方法，其特征在于，包含以下步驟: (1)以質(zhì)量份數(shù)計，將質(zhì)量含量為5-8%的棕櫚樹精華溶液200份、質(zhì)量含量為5-8%的竹子精華溶液290份、竹子干細胞50份混合后，加入適量蒸餾水并攪拌均勻，35-40°C下發(fā)酵7-8天； (2)在步驟(I)得到發(fā)酵混合物中再次混合質(zhì)量含量為5-8%的莫蘭或印茄精華溶液100份以及莫蘭或印茄干細胞30份，加入適量蒸餾水并攪拌均勻，35-45°C下發(fā)酵7-9天； (3)將質(zhì)量含量為5-8%的布袋蓮或浮萍精華溶液180份以及布袋蓮或浮萍干細胞30份加入步驟(2)得到的混合物中，再次加入適量蒸餾水并攪拌均勻，35-40°C下發(fā)酵8-9天; (4)將質(zhì)量含量為5-8%的攀藤寄生植物精華100份以及攀藤寄生植物干細胞20份加入步驟(3)得到的混合物中，再次加入適量蒸餾水并攪拌均勻，30-35°C下發(fā)酵6-8天； (5)將步驟(4)制得的發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)15000轉(zhuǎn)/分的離心分離機旋轉(zhuǎn)分離兩小時，隨后30-35°C下發(fā)酵6-8天，產(chǎn)物即所述蔬菜用有機肥料。
2.如權(quán)利要求1所述的一種蔬菜用有機肥料的制備方法，其特征在于:所述竹子干細胞的提取方法包括如下步驟: (1)提取竹子干細胞:選擇生長狀況良好的竹子的樹干、枝干，用無菌蒸餾水沖洗10分鐘，洗凈后，將竹子的樹干、枝干首先切割成長度10-20厘米的小塊，然后將整理后的竹子原料放入在攪拌設(shè)備中粉碎成細末； (2)將步驟(I)中粉碎制得的竹子細末原料，放入多個盛有固態(tài)培養(yǎng)基的培養(yǎng)器皿中，在受控暗室內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25±1度； (3)形成層細胞的誘導:在整個培養(yǎng)過程中保持25±I攝氏度的恒溫，培養(yǎng)器皿外空間濕度保持在86± I左右，培養(yǎng)20-30天后，竹子內(nèi)部組織的細胞系增量放大，形成層細胞系與韌皮組織分離，細胞系組織有大量的液泡存在，并且接觸后易碎； (4)將步驟(3)中形成層細胞群體用接種鏟輕輕將其移入盛有液態(tài)培養(yǎng)基的培養(yǎng)器皿中，在暗室中，用旋轉(zhuǎn)搖床，以100rpm、25±l度下培養(yǎng)，培養(yǎng)時間設(shè)定為20天，使液態(tài)培養(yǎng)基中的干細胞充分生長，在生長期內(nèi)始終保持極聞的活力； (5)竹子干細胞的提取:首先，將培養(yǎng)液細胞系通過分子質(zhì)量截留值4萬的中空纖維超濾柱進行超濾，然后將過濾后的全部細胞混合液經(jīng)另一容器內(nèi)快速攪拌3小時，再進行經(jīng)旋轉(zhuǎn)式真空蒸發(fā)器，間接加熱80度進行旋轉(zhuǎn)吸空蒸發(fā)，濃縮至小于原體液5分之I時取出，在放入真空冷凍干燥機內(nèi)真空冷凍干燥，30小時后，在含水分小于3 %以下時取出，粉碎100目，裝袋收藏備用。
3.如權(quán)利要求1所述的一種蔬菜用有機肥料的制備方法，其特征在于:所述莫蘭或印茄干細胞的提取方法包括如下步驟: (1)提取莫蘭或印茄樹木枝干的干細胞:選擇生長狀況良好的莫蘭或印茄的樹干，用無菌蒸餾水沖洗10分鐘，洗凈后，將其切割成邊長小于20厘米的方塊，然后將所述方塊放入在攪拌設(shè)備中粉碎成細末； (2)將步驟(I)中粉碎制得的樹干細末原料，放入多個盛有固態(tài)培養(yǎng)基的培養(yǎng)器皿中，在受控暗室內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25±1度； (3)形成層細胞的誘導:在整個培養(yǎng)過程中保持35±I度的恒溫，培養(yǎng)器皿外空間濕度保持在90±1左右，培養(yǎng)15-25天后，樹干內(nèi)部組織的細胞系增量放大，形成層細胞系與韌皮組織分離，細胞系組織有大量的液泡存在，并且接觸后易碎； (4)將形成層細胞群體用接種鏟輕輕將其移入盛有液態(tài)培養(yǎng)基的培養(yǎng)器皿中，在暗室中，用旋轉(zhuǎn)搖床，以100rpm、35±l度下培養(yǎng)，培養(yǎng)時間設(shè)定為16天，使液態(tài)培養(yǎng)基中的干細胞充分生長，在生長期內(nèi)始終保持極高的活力； (5)莫蘭或印茄干細胞的提取:首先，將培養(yǎng)液細胞系通過分子質(zhì)量截留值4萬的中空纖維超濾柱進行超濾，然后將過濾后的全部細胞混合液經(jīng)另一容器內(nèi)快速攪拌3小時，再進行經(jīng)旋轉(zhuǎn)式真空蒸發(fā)器，間接加熱80度進行旋轉(zhuǎn)吸空蒸發(fā)，濃縮至小于原體液5分之1時取出，再放入真空冷凍干燥機內(nèi)真空冷凍干燥，25-30小時后，在含水分小于3%以下時取出，粉碎100目，裝袋收藏備用。
4.如權(quán)利要求2或3所述的一種蔬菜用有機肥料的制備方法，其特征在于:所述固態(tài)培養(yǎng)基成分的組成為:硝酸鉀1010mg/L，硫酸鎂120mg/L，硫酸錳9.5mg/L，硫酸鋅2mg/L，氯化鈣113mg/L，硫酸銅0.023mg/L，碘化鉀0.72mg/L，磷酸二氫鈉130mg/L，氯化鈷0.023mg/L,硼酸3.lmg/L,鑰酸鈉0.24mg/L,乙二胺四乙酸鐵鈉鹽37mg/L ;肌醇452mg/L,鹽酸噻胺(VB1) 21mg/L,卩比卩多醇(VB6) 1.9mg/L,尼克酸1.9mg/L, L-抗壞血酸110mg/L,梓檬酸114mg/L ;光氨酸 170mg/L,酪蛋白水解物 510mg/L ;鹿糖 30.100mg/L ；2,4~?2.5mg/L,赤霉素0.6mg/L ;瓊脂39.000mg/L ;活性碳3000mg/L ;磁化水1升。
5.如權(quán)利要求2或3所述的一種蔬菜用有機肥料的制備方法，其特征在于:所述液態(tài)培養(yǎng)基成分的組成:硝酸鉀1010mg/L，硫酸鎂120mg/L，硫酸錳9.5mg/L,硫酸鋅2mg/L，氯化鈣113mg/L，硫酸銅0.023mg/L，碘化鉀0.72mg/L，磷酸二氫鈉130mg/L，氯化鈷0.023mg/L,硼酸3mg/L,鑰酸鈉0.24mg/L,乙二胺四乙酸鐵鈉鹽37mg/L,肌醇200mg/L,鹽酸噻胺(VB1) 21mg/L,卩比卩多醇(VB6) 1.9mg/L,尼克酸 1.9mg/L, L-抗壞血酸 110mg/L,朽1 檬酸 148mg/L,2,4-D2.5mg/L,赤霉素 0.lmg/L,天冬氨酸 134mg/L,精氨酸 180mg/L,脯氨酸 118mg/L,甘氨酸60mg/L,色氨酸80mg/L,鹿糖21.000mg/L,麥飯石2000mg/L,鍺石2000mg/L,磁化水1升。
6.如權(quán)利要求1所述的一種蔬菜用有機肥料的制備方法，其特征在于:布袋蓮或浮萍干細胞的提取方法包括如下步驟: (1)將布袋蓮或浮萍用無菌水沖洗10分鐘，洗凈； (2)制備固態(tài)培養(yǎng)基:硝酸鉀2500mg/L,硫酸鎂122mg/L,硫酸錳1lmg/L,硫酸鋅2.5mg/L,硫酸銅0.025mg/L,硫酸胺135mg/L ;氯化隹丐112mg/L,碘化鉀0.7mg/L,氯化鈷0.025mg/L,磷酸二氫鈉 132mg/L,硼酸 2.6mg/L,鑰酸鈉 0.23mg/L,煙酸 2.0mg/L,吡哆醇2.lmg/L, L-抗壞血酸 53mg/L,梓檬酸 78mg/L, L-天冬氨酸 140mg/L, L-精氨酸 180mg/L,甘氨酸75mg/L,脯氨酸120mg/L ;a_萘乙酸2.2mg ;鹿糖10.200mg/L ;活性炭500mg/ ;瓊脂3800mg/L ;磁化水 0.7 升； (3)形成層分離培養(yǎng):將水生植物用小刀切碎后放進固態(tài)培養(yǎng)基中，在受控暗室內(nèi)培養(yǎng)15天，培養(yǎng)溫度25土1°C ;隨后將形成層細胞系用接種鏟輕輕將其移入另一同樣培養(yǎng)基培養(yǎng)器皿內(nèi)，在放大培養(yǎng)20天，最后將其放大培養(yǎng)的細胞系群體移入液態(tài)培養(yǎng)基中，在暗室內(nèi)用搖床旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)，在160rpm、25±l°C環(huán)境中培養(yǎng)，培養(yǎng)時間設(shè)定為20天； 所述液態(tài)培養(yǎng)基的成分為:硫酸鉀995mg/L，磷酸氫鉀160mg/L，硫酸鎂185mg/L，硫酸鋅9mg/L,硫酸猛22mg/L,硫酸銅0.25mg/L,氯化|丐70mg/L,硝酸|丐480mg/L,鑰酸鈉0.26mg/L,硼酸6.5mg/L,硝酸胺420mg/L,乙二胺四乙酸鐵鈉鹽38mg/L,肌醇230mg/L,硫胺素22mg/L,煙酸2mg/L,批卩多醇2.5mg/L, L-抗壞血酸65mg/L,朽1檬酸72mg/L, L-天冬氨酸140mg/L, L-精氨酸180mg/L,甘氨酸80mg/L,脯氨酸120mg/L, a-萘乙酸2.2mg/L ;鹿糖31000mg/L ;麥飯石顆粒60000mg/L,鍺石顆粒60000mg/L,硒礦石顆粒主90000mg/L ;磁化水0.7升； (4)布袋蓮或浮萍干細胞的分離:將液態(tài)培養(yǎng)基用Ium過濾器過濾，然后將過濾后的全部細胞混合液經(jīng)另一容器內(nèi)快速攪拌2-3小時，在進行經(jīng)旋轉(zhuǎn)式真空蒸發(fā)器，間接加熱60度進行旋轉(zhuǎn)吸空蒸發(fā)，濃縮至小于原體液5分之I時取出，再放入真空冷凍干燥機內(nèi)真空冷凍干燥，20-22小時后，在含水分小于3%以下時取出，粉碎100目，裝袋收藏備用。
7.如權(quán)利要求1所述的一種蔬菜用有機肥料的制備方法，其特征在于:攀藤寄生植物干細胞的提取方法包括如下步驟: (1)將攀藤寄生植物用無菌蒸餾水沖洗15分鐘，洗凈； (2)固態(tài)培養(yǎng)基的制備: 固態(tài)培養(yǎng)基原料為:硝酸鉀2510mg，硫酸胺136mg，硫酸鎂123mg，硫酸錳10mg，硫酸鋅2.5mg,硫酸銅0.026mg,氯化I丐114mg,碘化鉀0.7mg,氯化鈷0.026mg,磷酸二氫鈉131mg,硼酸2.8mg,鑰酸鈉0.26mg,乙二胺四乙酸鐵鈉鹽37mg ;肌醇210mg,硫胺素21mg,煙酸2.2mg,批口多醇2.2mg, L-抗壞血酸52mg,朽1檬酸74mg ；L-天冬氨酸135mg, L-精氨酸176mg,甘氨酸 76mg,脯氨酸 116mg, α -萘乙酸 2.2mg,鹿糖 10.lOOmg，活性炭 200mg,瓊脂 3.1OOmg, Wl化水0.63升; 所述固態(tài)培養(yǎng)基的制備過程:將無機鹽類各養(yǎng)分分別用20mL磁化水稀釋，將維生素類合并放入50mL無菌磁化水中稀釋，將氨基酸類合并放入50mL無菌磁化水中稀釋，將生長素放入1mL無菌磁化水中稀釋；然后將稀釋后的無機鹽類分別注入燒瓶磁化水中，邊注入邊攪拌，在將糖類、固化劑、活性炭放入，全部溶解后，封口，進行高壓滅菌30分鐘，降溫取出后，在將稀釋的維生素和氨基酸溶液、生長素溶液分別放入攪勻后，冷凝； (3)形成層分離培養(yǎng):將攀藤寄生植物的主干或葉子用刀切成l-2cm長的小段，移入固態(tài)培養(yǎng)基中，在受控的暗室內(nèi)避光培養(yǎng)28天，培養(yǎng)溫度25±1°C ;培養(yǎng)28天后，將形成層細胞群體用接種勺或接種鏟輕輕將其移入另一同樣培養(yǎng)基器皿內(nèi)在放大培養(yǎng)23天； (4)將其放大培養(yǎng)的細胞系群體移入液態(tài)培養(yǎng)基中，在暗室中，用旋轉(zhuǎn)搖床以lOOrpm，25±1°C培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為20天； 其中，液態(tài)培養(yǎng)基的組成為:硫酸鎂181mg，硫酸錳23mg，硫酸鋅8.9mg,硫酸銅0.23mg，硝酸韓473mg,硝酸胺400mg,氯化韓60mg,碘化鉀995mg,鑰酸鈉0.24mg,硼酸6mg,磷酸氫鈉170mg,乙二胺四乙酸鐵鈉鹽37mg,肌醇210mg,硫胺素21mg,煙酸2.2mg,卩比卩多醇2.2mg,L-抗壞血酸60mg,梓檬酸75mg ；L-天冬氨酸135mg, L-精氨酸178mg,甘氨酸75mg,脯氨酸116mg, α -萘乙酸2mg,鹿糖30.1OOmg,麥飯石顆粒50000mg,鍺石50000mg,磁化水I升； (5)攀藤寄生植物干細胞的提取:將液態(tài)培養(yǎng)基用1.5um過濾器過濾，然后將過濾后的全部細胞混合液經(jīng)另一容器內(nèi)快速攪拌2小時，再進行經(jīng)旋轉(zhuǎn)式真空蒸發(fā)器，間接加熱65度進行旋轉(zhuǎn)吸空蒸發(fā)，濃縮至小于原體液5分之I時取出，再放入真空冷凍干燥機內(nèi)真空冷凍干燥，20小時后，在含水分小于3%以下時取出，粉碎100目，裝袋收藏備用。
8.如權(quán)利要求1所述的一種蔬菜用有機肥料的制備方法，其特征在于:所述棕櫚樹精華溶液是通過將棕櫚樹的種子在650-680°C的溫度下蒸2-2.5個小時，然后用15000轉(zhuǎn)/分的粉碎機粉碎，隨后注入蒸餾水并發(fā)酵10-20天，然后經(jīng)渣液分離器分離，隨后經(jīng)Ium過濾器過濾，濾液間接加熱65-85度進行旋轉(zhuǎn)吸空蒸發(fā)，濃縮至礦物質(zhì)含量為5-8%蒸發(fā)完成，最終制得的溶液；所述布袋蓮或浮萍精華溶液是通過將布袋蓮或浮萍用15000轉(zhuǎn)/分的粉碎機將其粉碎后注入蒸餾水并發(fā)酵12-15天，然后經(jīng)Ium過濾器過濾后間接加熱65-85度進行旋轉(zhuǎn)吸空蒸發(fā)，濃縮至礦物質(zhì)含量為5-8%制得的溶液；所述攀藤寄生植物精華溶液是通過將攀藤寄生植物用15000轉(zhuǎn)/分的粉碎機將其粉碎后注入蒸餾水并發(fā)酵15-18天，然后經(jīng)Ium過濾器過濾，濾液間接加熱65-85度進行旋轉(zhuǎn)吸空蒸發(fā)，濃縮至礦物質(zhì)含量為5-8%制得的溶液；所述竹子精華溶液是通過將竹子的枝干和葉子燃燒后，注入蒸餾水并發(fā)酵14-16天，經(jīng)Ium過濾器過濾后間接加熱65-85度進行旋轉(zhuǎn)吸空蒸發(fā)，濃縮至礦物質(zhì)含量為5-8%制得的溶液；所述莫蘭、印茄精華溶液是通過將莫蘭、印茄枝干用15000轉(zhuǎn)/分的粉碎機將其粉碎后注入蒸餾水并發(fā)酵10-15天，然后經(jīng)Ium過濾器過濾后間接加熱65-85度進行旋轉(zhuǎn)吸空蒸發(fā)，濃縮至礦物質(zhì)含量為5-8%制得的溶液。
9.一種蔬菜用有機肥料，其特征在于:該蔬菜用有機肥料由權(quán)利要求1-8任一所述的一種蔬菜用有機肥料的制備方法制備而成。
10.一種蔬菜用有機肥料的使用方法，其特征在于:將權(quán)利要求9中制得的蔬菜用有機肥料按照體積比例1: 10-30加入水分稀釋后，由機器或人工噴灑在蔬菜的葉子和枝干上。
【文檔編號】C12N5/04GK104230403SQ201410505136
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年9月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月28日
【發(fā)明者】唐蘋, 邱明全 申請人:深圳前海萬物生生物科技控股有限公司