一種甘露醇卵黃培養基及其應用的制作方法
【專利摘要】本發明為微生物領域，特別涉及一種甘露醇卵黃培養基，所述培養基的組分包括20.1g/L7.5％氯化鈉肉湯、8.0g/LD-甘露醇、0.032g/L酚紅、0.5g/L磷酸二氫鉀、65.2g/L卵黃乳液，pH值為7.2-7.6；所述7.5％氯化鈉肉湯為每升7.5％氯化鈉肉湯中含有胰蛋白胨10.0g、牛肉粉5.0g、氯化鈉75.0g、磷酸氫二鉀2.0g。本發明培養基組方簡單，制備操作方便，成本低，利于推廣應用；菌生長迅速，變異率低；便于觀察，分析。
【專利說明】一種甘露醇卵黃培養基及其應用

【技術領域】
[0001] 本發明為微生物領域，特別涉及一種甘露醇卵黃培養基及其應用。

【背景技術】
[0002] 金黃色葡萄球菌，也稱"金葡菌"，細胞壁含90%的肽聚糖和10%的磷壁酸。其肽 聚糖的網狀結構比革蘭氏陰性菌致密，染色時結晶紫附著后不被酒精脫色故而呈現紫色， 相反，陰性菌的細胞壁肽聚糖層薄、交聯度差，脂類含量高，所以紫色復合物被酒精沖掉然 后附著了沙黃的紅色。金黃色葡萄球菌與青霉素的發現有很大的淵源。當年弗萊明就是在 他的金黃色葡萄球菌的培養皿中發現有些球菌被殺死了，于是發現了青霉素。而研究也表 明青霉素只對以金黃色葡萄球菌為代表的革蘭氏陽性菌作用明顯。這也是由肽聚糖層的厚 度和結構造成的。新出現的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌，被稱作超級細菌，幾乎能抵抗人類 所有的藥物，但是萬古霉素可以對付它。典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑〇. Sym左右， 顯微鏡下排列成葡萄串狀。
[0003] 金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛，大多數無莢膜，革蘭氏染色陽性。金黃色葡萄球菌 營養要求不高，在普通培養基上生長良好，需氧或兼性厭氧，最適生長溫度37°c，最適生長 pH7. 4,干燥環境下可存活數周。平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起，直徑0.5?1.0mm。血平 板菌落周圍形成透明的溶血環。金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在10?15% NaCl肉湯 中生長?？煞纸馄咸烟恰Ⅺ溠刻?、乳糖、蔗糖，產酸不產氣。甲基紅反應陽性，VP反應弱陽性。 許多菌株可分解精氨酸，水解尿素，還原硝酸鹽，液化明膠。金黃色葡萄球菌具有較強的抵抗 力，對磺胺類藥物、青霉素、紅霉素、土霉素、新霉素等抗生素敏感，但易產生耐藥性，原因是由 于這些菌株產生青霉素酶等。對堿性染料敏感，十萬分之一的龍膽紫液即可抑制生長。
[0004] 目前還不能完全從生化反應的基本原理來推斷和計算出適合某一菌種的培養基 配方，只能用生物化學、細胞生物學、微生物學等的基本理論，參照前人所使用的較適合某 一類菌種的經驗配方，再結合所用菌種和產品的特性，采用搖瓶、玻璃罐等小型發酵設備， 按照一定的實驗設計和實驗方法選擇出較為適合的培養基。
[0005] 培養基設計的基本步驟是：
[0006] 根據前人的經驗和培養基成分確定時一些必須考慮的問題，初步確定可能的培養 基成分
[0007] 通過單因子實驗最終確定出最為適宜的培養基成分
[0008] 當培養基成分確定后，剩下的問題就是各成分最適的濃度，由于培養基成分很多， 為減少實驗次數常采用一些合理的實驗設計方法。這些實驗往往基于多因子實驗，包含均 勻設計、正交實驗設計、響應面分析等。


【發明內容】

[0009] 本發明克服現有技術中的不足，提供一種甘露醇卵黃培養基及其應用。
[0010] 本發明運用生物化學，微生物學及無機、有機、分析化學和熒光技術的原理，對不 同的碳源、氮源、無機鹽類、維生素、生長促進劑等諸類營養組分的組合進行篩選，對培養基 的PH值、離子強度、氧化-還原電勢、表面張力、氣體環境等物化因子進行了比較，研究出了 本發明的培養基。
[0011] 本發明所采用的技術方案為：
[0012] 一種甘露醇卵黃培養基，所述培養基的組分包括20. lg/L7. 5%氯化鈉肉湯、8. Og/ LD-甘露醇、0. 032g/L酚紅、0. 5g/L磷酸二氫鉀、65. 2g/L卵黃乳液，pH值為7. 2-7. 6 ;
[0013] 在以上方案的基礎上，所述7. 5%氯化鈉肉湯為每升7. 5%氯化鈉肉湯中含有胰 蛋白胨10. 0g、牛肉粉5. 0g、氯化鈉75. 0g、磷酸氫二鉀2. 0g。
[0014] 本發明還公開了所述的甘露醇卵黃培養基的應用，用于金黃色葡萄球菌的選擇性 分離培養。
[0015] 蛋白胨和牛肉粉提供氮源、維生素和生長因子；D-甘露醇為可發酵糖類；氯化鈉 維持均衡的滲透壓；瓊脂是培養基的凝固劑；酚紅為PH指示劑。
[0016] 稱取本品112. 5g，溶解于IOOOml蒸餾水中，煮沸1分鐘，121°C高壓滅菌15分鐘， 冷卻至45-50°C時，無菌操作加入卵黃乳液3,搖勻，傾入無菌平皿。
[0017] 本發明的有益效果：
[0018] 1、培養基組方簡單，制備操作方便，成本低，利于推廣應用；
[0019] 2、菌生長迅速，變異率低；
[0020] 3、便于觀察，分析。

【具體實施方式】
[0021] 實施例1 :
[0022] -種甘露醇卵黃培養基，所述培養基的組分包括20. lg/L7. 5%氯化鈉肉湯、8. Og/ LD-甘露醇、0. 032g/L酚紅、0. 5g/L磷酸二氫鉀、65. 2g/L卵黃乳液，pH值為7. 2-7. 6。
[0023] 所述7. 5 %氯化鈉肉湯為每升7. 5 %氯化鈉肉湯中含有胰蛋白胨10. 0g、牛肉粉 5. 0g、氯化鈉75. 0g、磷酸氫二鉀2. 0g。
[0024] 蛋白胨和牛肉粉提供氮源、維生素和生長因子；D-甘露醇為可發酵糖類；氯化鈉 維持均衡的滲透壓；瓊脂是培養基的凝固劑；酚紅為PH指示劑。
[0025] 稱取本品112. 5g，溶解于1000ml蒸餾水中，煮沸1分鐘，121°C高壓滅菌15分鐘， 冷卻至45_50°C時，無菌操作加入卵黃乳液3,搖勻，傾入無菌平皿。
[0026] 在 36 ±1°C 培養 18-24 小時

【權利要求】
1. 一種甘露醇卵黃培養基，其特征在于所述培養基的組分包括20. lg/L7. 5%氯化鈉 肉湯、8. Og/LD-甘露醇、0. 032g/L酚紅、0. 5g/L磷酸二氫鉀、65. 2g/L卵黃乳液，pH值為 7. 2-7. 6。
2. 根據權利要求1所述的甘露醇卵黃培養基，其特征在于所述7. 5%氯化鈉肉湯為每 升7. 5%氯化鈉肉湯中含有胰蛋白胨10. 0g、牛肉粉5. 0g、氯化鈉75. 0g、磷酸氫二鉀2. 0g。
3. -種根據權利要求1所述的甘露醇卵黃培養基的應用，其特征在于用于金黃色葡萄 球菌的選擇性分離培養。
【文檔編號】C12R1/445GK104293713SQ201410521271
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年9月30日 優先權日:2014年9月30日
【發明者】王玉靜, 劉永祥 申請人:青島康合偉業商貿有限公司