雞抗病新品系的培育方法及與雞抗病能力相關的snp標記的制作方法
【專利摘要】本發明提供了一種雞抗病新品系的培育方法及與雞抗病能力相關的SNP標記。所述SNP標記多態性與異嗜性粒細胞/淋巴細胞的比值顯著相關，可應用于雞抗病新品系育種，通過異嗜性粒細胞/淋巴細胞的比值表型選擇與SNP標記基因型輔助選擇相結合，建立雞抗病新品系選育技術。
【專利說明】雞抗病新品系的培育方法及與雞抗病能力相關的SNP標記
【技術領域】
[0001] 本發明涉及SNP分子標記及家禽育種，具體地說，涉及雞抗病新品系的培育方法 及與雞抗病能力相關的SNP標記。
【背景技術】
[0002] 禽病每年給家禽養殖業造成的經濟損失十分巨大。采用遺傳改良方法從本質上提 高雞對病原的抗性，進行抗病育種，是禽病防治的有效途徑之一。
[0003] 與雞抗病性有關的生化指標較多，包括抗體含量、血清介質水平、淋巴細胞轉化率 等。有些指標與特定病原有關，代表性較差，有些指標受環境、品種和營養等因素影響，變異 范圍大，很難應用于抗病雞的新品系選育中。因此，抗病家禽新品系選育始終是育種中的一 個難題。
[0004] 異嗜性粒細胞在細胞免疫中起到抵抗外間微生物入侵第一道屏障的作用。淋巴細 胞和異嗜性粒細胞在雞體液免疫、細胞免疫反應中均起到重要作用。異嗜性粒細胞/淋巴 細胞的比值（heterophil/lymphocyte，H/L)已知與家禽抗應激程度相關（Gross和Siegel, 1986)。H/L值越低指示雞抗應激能力較強。但目前尚未見到在DNA分子水平上與異嗜性粒 細胞/淋巴細胞比率相關的報道。
【發明內容】
[0005] 為了解決現有技術中存在的問題，本發明的目的是提供一種與雞抗病能力相關的 SNP標記及其應用。
[0006] 為了實現本發明目的，本發明首先提供一種與雞抗病能力相關的SNP標記，其核 苷酸序列如序列表SEQ ID No. 1所示，在第1832位有1個A1832-G1832堿基突變，所述SNP 標記的多態性與異嗜性粒細胞/淋巴細胞的比值顯著相關，并與雞抗病能力相關。
[0007] 本發明還提供了用于檢測所述SNP標記的引物對，所述引物對含有正向引物F : 5' -TGAACTTCCTGAAATGGGT-3' 和反向引物 R:5' -GGTGTGTGGCATATCATTG-3'。
[0008] 本發明還提供了所述SNP標記在選擇抗病能力強的雞品系（種）中的應用。
[0009] 進一步地，所述應用包括以下步驟：
[0010] ⑴提取待測雞的基因組DNA ;
[0011] ⑵以待測雞的基因組DNA為模版，利用引物F和R，通過PCR反應擴增出雞Toll 樣受體4基因（TLR4) 73bp片段（如SEQ ID No. 2所示），其中，
[0012] F: 5 ' -TGAACTTCCTGAAATGGGT-3 ' ；
[0013] R: 5，-GGTGTGTGGCATATCATTG-3，；
[0014] (3)檢測PCR擴增產物，如果擴增產物序列中43bp處的堿基為A，則待測雞屬于抗 病能力強的個體。
[0015] 其中，PCR反應體系以50 μ 1計為：
[0016]
[0017] PCR 反應條件為：94 °C IOmin,
【權利要求】
1. 一種與雞抗病能力相關的SNP標記，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID No. 1所 示，在第1832位有1個A1832-G1832堿基突變，所述SNP標記的多態性與雞抗病能力相關。
2. 用于檢測權利要求1所述的SNP標記的引物對，其特征在于，所述引物對含有正向引 物 F :5' -TGAACTTCCTGAAATGGGT-3' 和反向引物 R :5' -GGTGTGTGGCATATCAITG-3'。
3. 權利要求1所述的SNP標記在鑒定抗病力強的雞品系中的應用。
4. 根據權利要求3所述的應用，其特征在于，包括以下步驟： (1)提取待測雞的基因組DNA ; ⑵以待測雞的基因組DNA為模版，利用引物F和R，通過PCR反應擴增出雞Toll樣受 體4基因73bp片段，其中， F:5, -TGAACTTCCTGAAATGGGT-3,； R:5' -GGTGTGTGGCATATCATTG-3' ； (3)檢測PCR擴增產物，如果擴增產物序列中43bp處的堿基為A，則待測雞屬于異嗜性 粒細胞/淋巴細胞的比值低，抗病力強的個體。
5. 權利要求1所述的SNP標記在雞抗病新品系育種中的應用。
6. 根據權利要求5所述的應用，其特征在于，包括以下步驟： (一） 采用聚合酶鏈式反應和測序技術篩選到與雞抗病能力相關的SNP標記； (二） 檢測待測雞的SNP標記基因型； (三） 根據基因型進行抗病能力優勢品系的選育。
7. -種雞抗病新品系的培育方法，其特征在于，通過候選個體血液中異嗜性粒細胞/ 淋巴細胞的比值與權利要求1所述SNP標記共同對抗病能力優勢個體進行選育。
8. 根據權利要求7所述的方法，其特征在于，包括以下步驟： (a) 對候選個體采血，測定血液中異嗜性粒細胞/淋巴細胞的比值，同時采血提取基因 組DNA，測定SNP標記1832bp位點的堿基狀態； (b) 留種時，首先利用異嗜性粒細胞/淋巴細胞的比值進行優勢雙親個體的選擇，其次 查看SNP A1832G的多態性，避免選擇GG型個體； (c) 按照每個世代不低于30只公雞，公母比例不低于1:3的留種數量組建新的家系和 繁種。
9. 根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述候選個體數量不小于500只，所述優 勢個體的選擇為由低到高選擇異嗜性粒細胞/淋巴細胞的比值較低的個體。
10. 根據權利要求9所述的方法，其特征在于，包括以下步驟： (a) 對55-60日齡的候選個體翅下靜脈采血，制作血液涂片，測定異嗜性粒細胞/淋巴 細胞的比值；同時取靜脈血，制成抗凝血，提取基因組DNA，測定SNP標記1832bp位點的堿 基狀態； (b) 留種時，首先利用異嗜性粒細胞/淋巴細胞的比值進行優勢雙親個體的選擇；其次 查看SNP A1832G的多態性，避免選擇GG型個體； (c) 按照每個世代不低于30只公雞，公母比例1:3的留種數量組建新的家系和繁種。
【文檔編號】C12N15/11GK104404037SQ201410654722
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年11月17日 優先權日:2014年11月17日
【發明者】趙桂蘋, 文杰, 劉冉冉, 鄭麥青, 李鵬, 李慶賀 申請人:中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所