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合生素產品的制作方法

文檔序號:11504803閱讀:675來源:國知局
合生素產品的制造方法與工藝
本申請是申請日為2011年8月19日和發明名稱為“合生素產品”的201180039648.4號發明專利申請的分案申請。相關申請的交叉引用本申請要求2010年8月25日提交的美國臨時專利申請號61/376,888的權益,所述臨時專利申請以引用的方式整體并入本文。關于聯邦資助研究或開發的聲明不適用。背景本發明涉及新型合生素產品,其包含孢子形成益生素細菌與益生元化合物的組合,所述益生元化合物能夠向益生素細菌提供養分和/或能夠促進胃腸道中存在的常駐有益細菌(如乳桿菌屬(lactobacillus)或雙歧桿菌屬(bifodobacterium))的生長。這些合生素產品組合物可增強含有這些合生素組合物的食物產品的健康益處。對用于人和動物消耗的功能食物成分的需求在日益增加,所述功能食物成分遞送除營養之外的健康益處。這些健康相關食物成分中的一類稱為“益生元(prebiotic)”化合物。目前用于食物產品中的益生元化合物的代表性實例包括多種碳水化合物,如各種糖和淀粉。許多具有熱值的碳水化合物在人的上胃腸道(例如口腔、胃和小腸)中被消化成單糖或短鏈寡糖并且易于吸收到血流中。除這些易于代謝的碳水化合物外,一些碳水化合物也充當食物產品中的膳食“纖維”。在上胃腸道中,纖維化合物一般不分解或僅部分被消化,并且大量相對完整地進入結腸。纖維對人健康的益處是公認的并且受到全世界營養科學家所的認定,例如像美國政府的膳食推薦。研究已表明富含膳食纖維的膳食可降低心血管疾病、癌癥、胃腸問題和肥胖癥的風險。參看campos等,nutrhosp.2005年1月-2月;20(1):18-25(提出結腸直腸癌出現與低纖維膳食之間的聯系);kendall等,curratherosclerrep.2004年11月;6(6):492-8(提出富纖維膳食可減少ldl膽固醇);kendall等,jaoacint.2004年5月-6月;87(3):769-74(提出高纖維膳食可降低慢性疾病風險);cernea等,actadiabetol.200340增刊2:s389-400(提出高纖維膳食可降低心血管疾病風險)。日益增加的證據表明膳食纖維的許多促健康作用是歸因于這些碳水化合物通過大腸中微生物的復雜聚生體(微生物區)的發酵(gibson,glenn,“dietarymodulationofthehumangutmicroflorausingprebiotics,”journalofnutrition,80(2):s209-s212(1998))。已報道的碳水化合物纖維的一個子類,即“益生元”碳水化合物,在促進和維持正常人的健康方面特別有益。具有公認益生元活性的膳食纖維碳水化合物的代表性實例是菊粉(inulin)和果糖-寡糖(roberfroid等,“thebifidogenicnatureofchicoryinulinanditshydrolysisproducts,”journalofnutrition,128,1,11-19,1998.gibson,“dietarymodulationofthehumangutmicroflorausingtheprebioticsoligofructoseandinulin,”journalofnutrition,129,7增刊,1438s-1441s,1999);乳果糖(tuohy等,“ahumanvolunteerstudytodeterminetheprebioticeffectoflactuloseonhumancolonicmicrobiota,”micro.ecol.healthdisease14,165-173(2002));和可溶性玉米纖維(scf)(美國專利申請號:12/124,364)。除“益生元”成分外,配制有“益生素”細菌的食品和動物飼料的市場正在增長。舉例來說,對將益生素有機體用作動物的飼料添加劑(主要是用作抗生素的可能替代物)的關注日益增長。許多被視為具有有益益生素性質的細菌是健康的人或動物腸道微生物區中存在的正常共生細菌。最常使用的人益生素包括乳桿菌屬和雙歧桿菌屬。然而,使用這些細菌群中任一個來作為益生素食物或飼料添加劑都存在困難。為了有益起見,細菌必須在制造過程中以活細胞形式存活,并且被配制成穩定的產品(即,在長期且有時在不利條件下存放時,沒有顯著的活力損失)。另外,細菌必須在通過胃部極端酸度并且在上部小腸中暴露于膽汁鹽后存活。假設益生素的有益作用是歸因于小腸和/或結腸的短暫定殖,從而必定與每克內腔內容物(luminalcontent)總計有大約107至1011個活細菌的現存微生物區成功競爭。幾種類型的孢子形成芽孢桿菌屬細菌目前是作為用于人和動物應用的益生素來出售。舉例來說,已報道了枯草芽孢桿菌(b.subtilis)以非處方藥(over-the-counter)形式出售來用于多種腸問題(casula和cutting(2002),appliedenvironmentalmicrobiology,2002年5月,第2344-2352頁;green,dh等(1999)appl.env.microbiol.65,第4288-4291頁)并且用于治療腹瀉(mazza,p(1994)boll.chim.farm.133,第3-18頁)。例如,marseglia等(2007)以及canani等(2007).marseglia,gl等(1997)ther.clin.riskmanag.3,第13-17頁;canani,rb等(2007)bmj,8月18日,335(7615):340還已報道了對克勞氏芽孢桿菌(b.clausii)的商業制劑的研究。人使用歷史最長的益生素菌株之一是凝結芽孢桿菌(bacilluscoagulans),其首次于1930年代被描述為孢子乳酸菌(lactobacillussporogenes)((devechihi,e.和drago,l.(2006)int.j.probioticsprebiotics1,第3-10頁))。這種菌株被給予了特別的關注,因為它是少數所研究的從糖產生大量乳酸而不產生氣體的孢子形成菌株之一。所報道的凝結芽孢桿菌(b.coagulans)益生素菌株產生端生孢子,并且營養細胞是兼性厭氧菌并且是能動的(devechihi和drago,2006)。duc等評估了五種由芽孢桿菌屬孢子的菌株組成的商業產品。已證實,三種蠟狀芽孢桿菌(b.cereus)菌株存留在小鼠胃腸道中18天,這被視為是定殖證據(duc,lh等(2004)appl.environ.microbiol.70,第2161-2171頁)。leser等描述向豬喂食枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌(b.licheniform)孢子(leser,td等(2008)j.appl.microbiol.104,第1025-1033頁)。在開始喂食這些益生素的兩周內,在豬胃腸道的所有區域中都發現孢子。估計70-90%孢子發芽并且在胃腸道中存在有限且短暫的營養生長。發明概述本發明涉及某些共生產品,其包含至少一種益生元碳水化合物和至少一種益生素孢子形成芽孢桿菌屬細菌。本發明也可被描述為一種共生產品,其包含益生元碳水化合物組分和益生素孢子組分,所述益生元碳水化合物組分包含益生元碳水化合物,所述益生素孢子組分包含益生素孢子形成芽孢桿菌屬細菌。適合的益生元碳水化合物的代表性實例包括阿糖基木聚糖、阿糖基木聚糖寡糖、木糖、可溶性纖維糊精、可溶性玉米纖維和聚葡萄糖。在合生素產品的某些實施方案中,益生元碳水化合物是阿糖基木聚糖、阿糖基木聚糖寡糖、木糖、可溶性纖維糊精、可溶性玉米纖維、聚葡萄糖或這些碳水化合物的混合物。適合孢子形成芽孢桿菌屬細菌的代表性實例包括枯草芽孢桿菌、凝結芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、克勞氏芽孢桿菌和短小芽孢桿菌(b.pumilis)。在合生素產品的某些實施方案中,孢子形成芽孢桿菌屬細菌是枯草芽孢桿菌、凝結芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、克勞氏芽孢桿菌、短小芽孢桿菌或這些細菌的混合物。本發明的合生素產品可用作食物產品中的成分或組分。在某些實施方案中,食物產品包含本發明的合生素產品。本發明還涉及一種通過施用合生素產品來提高哺乳動物腸道中孢子形成芽孢桿菌屬細菌的效價的方法。據信施用合生素產品可提供某些健康益處。在某些實施方案中,通過消耗包含合生素產品的食物產品來施用合生素產品。在某些實施方案中,哺乳動物是人,并且在某些實施方案中,哺乳動物是非人哺乳動物。特別地,本申請涉及以下各項1.一種合生素產品,其包含選自由以下組成的組的益生元碳水化合物:阿糖基木聚糖、阿糖基木聚糖寡糖、木糖、可溶性纖維糊精、可溶性玉米纖維、聚葡萄糖和其混合物,以及至少一種益生素孢子形成芽孢桿菌屬細菌。2.如第1項所述的合生素產品,其中所述益生元碳水化合物選自由以下組成的組:阿糖基木聚糖、阿糖基木聚糖寡糖、木糖和其混合物。3.如第1或2項所述的合生素產品,其中所述孢子形成芽孢桿菌屬細菌選自由以下組成的組:枯草芽孢桿菌、凝結芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、克勞氏芽孢桿菌、短小芽孢桿菌和其混合物。4.一種食物產品,其包含如第1至3項中任一項所述的合生素產品。5.一種提高哺乳動物腸道中孢子形成芽孢桿菌屬細菌的效價的方法,所述方法包括向所述哺乳動物施用有效量的如第1至3項中任一項所述的合生素產品。6.如第5項所述的方法,其中施用所述合生素產品以使得任何一天的益生元碳水化合物的量都為約1g至約25g,并且任何一天的益生素孢子形成芽孢桿菌屬細菌的量都為約104cfu至約1010cfu。7.如第6項所述的方法,其中施用所述合生素產品以使得任何一天的益生元碳水化合物的量都為約2.5g至約10g,并且任何一天的益生素孢子形成芽孢桿菌屬細菌的量都為約106cfu至約108cfu。8.如第5至7項中任一項所述的方法,其中每天都施用所述合生素產品。9.如第5至8項中任一項所述的方法,其中通過消耗包含所述合生素產品的食物產品來施用所述合生素產品。10.如第9項所述的方法,其中所消耗的所述食物產品是食品并且所述哺乳動物是人。11.如第9項所述的方法,其中所消耗的所述食物產品是動物飼料并且所述哺乳動物是非人哺乳動物。12.如第11項所述的方法,其中所述哺乳動物選自包含馬、牛、豬、綿羊、山羊、公牛、美洲駝、羊駝和野牛的組。13.如第11項所述的方法,其中所述哺乳動物是貓或狗。14.如第11至13項中任一項所述的方法,其中不向所述非人哺乳動物施用抗生素。15.一種合生素產品,其包含益生元碳水化合物組分和益生素孢子組分,其中所述益生元碳水化合物組分包含至少一種選自由以下組成的組的益生元碳水化合物:阿糖基木聚糖、阿糖基木聚糖寡糖、木糖、可溶性纖維糊精、可溶性玉米纖維、聚葡萄糖和其混合物,并且所述益生素孢子組分包含至少一種益生素孢子形成芽孢桿菌屬細菌。16.如第15項所述的合生素產品,其中所述益生元碳水化合物選自由阿糖基木聚糖、阿糖基木聚糖寡糖、木糖和其混合物組成的組。17.如第15或16項所述的合生素產品,其中所述孢子形成芽孢桿菌屬細菌選自由枯草芽孢桿菌、凝結芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、克勞氏芽孢桿菌、短小芽孢桿菌和其混合物組成的組。18.如第15至17項中任一項所述的合生素產品,其中所述益生素孢子組分每克干重包含最多約1011個存活孢子。19.如第15至17項中任一項所述的合生素產品,其中所述益生素孢子組分每克干重包含約109個至約1011個存活孢子。20.如第15至17項中任一項所述的合生素產品,其中所述合生素產品每克干重包含至少約105個存活益生素孢子。21.如第15至17項中任一項所述的合生素產品,其中所述合生素產品每克干重包含約105至約107個存活益生素孢子。22一種食物產品,其包含如第15至21項中任一項所述的合生素產品。23.一種提高哺乳動物腸道中孢子形成芽孢桿菌屬細菌的效價的方法,所述方法包括向所述哺乳動物施用有效量的如第15至21項中任一項所述的合生素產品。24.如第23項所述的方法,其中施用所述合生素產品以使得任何一天的益生元碳水化合物的量都為約1g至約25g,并且任何一天的益生素孢子形成芽孢桿菌屬細菌的量都為約104cfu至約1010cfu。25.如第24項所述的方法,其中施用所述合生素產品以使得任何一天的益生元碳水化合物的量都為約2.5g至約10g,并且任何一天的益生素孢子形成芽孢桿菌屬細菌的量都為約106cfu至約108cfu。26.如第23至25項中任一項所述的方法,其中每天都施用所述合生素產品。27.如第23至26項中任一項所述的方法,其中通過消耗包含所述合生素產品的食物產品來施用所述合生素產品。28.如第27項所述的方法,其中所消耗的所述食物產品是食品且所述哺乳動物是人。29.如第27項所述的方法,其中所消耗的所述食物產品是動物飼料且所述哺乳動物是非人哺乳動物。30.如第29項所述的方法,其中所述哺乳動物選自包含馬、牛、豬、綿羊、山羊、公牛、美洲駝、羊駝和野牛的組。31.如第29項所述的方法,其中所述哺乳動物是貓或狗。32.如第29至31項中任一項所述的方法,其中不向所述非人哺乳動物施用抗生素。附圖簡述圖1.圖1展示四種商業性孢子形成益生素芽孢桿菌屬菌株在益生元碳水化合物上的生長。圖2.圖2展示凝結芽孢桿菌益生素菌株gbi-30在阿糖基木聚糖、木糖和葡萄糖上的最大生長的比較。詳細描述i.定義本文所用的“益生元”化合物定義為:“...一種非存活食物組分,其向宿主賦予與調節微生物區相關的健康益處”(fao益生元技術會議(faotechnicalmeetingonprebiotics),2007年9月15-16日。段落3.1.食物質量和標準服務(foodqualityandstandardsservice;agns)、聯合國糧農組織(foodandagricultureorganizationoftheunitednations;fao))。本文所用的“益生素”細菌是:“...存活微生物食物(或飼料)補充物,其有利地影響人(或動物)健康。”(歐洲國際生命科學學會(internationallifescienceinstituteeurope),歐洲功能食物科學研究項目(functionalfoodscienceineuropeproject;fufose),功能食物工作小組)。除非另有說明,否則本文所用的“食物產品”是指意圖用于人或動物消耗的可食用產品,包括飲料。具體來說,“食品”意圖用于人消耗,而“飼料”意圖用于動物消耗?!昂仙禺a品”是一種包含益生元組分與益生素組分的組合的組合物。合生素組合物在施用(“有效量”)碳水化合物組分(克/天)和益生素細菌的存活細菌效價(cfu/天)的某些范圍內有效。產品中存活細菌的效價可以cfu/克碳水化合物劑量來表示。ii.概述本文提供包含益生素孢子形成細菌與益生元化合物的組合的新型合生素產品組合物,其可增強含有這些合生素組合物的食物成分、食品、飼料添加劑、動物飼料等的健康益處。本發明的合生素產品增強益生素的發芽、生長和活性,因此提高宿主腸道中孢子形成益生素細菌的效價。在不受理論束縛的情況下,據信合生素產品組合物在人和動物健康、安康和生產力方面提供改善的益處,具體來說是通過以下來實現:罹病率較低使得壓力減小、免疫狀態改善、飼料轉化效率提高,以及增強食品/飼料配制、食品/飼料處理和存放的容易性以及食品/飼料遞送的靈活性。組合物也可能在相比目前已知的益生素產品來說的更小劑量下有效。iii.益生元碳水化合物除如菊粉、果糖-寡糖、乳果糖和可溶性玉米纖維(scf)的益生元碳水化合物外,有證據表明許多在上胃腸道中消化或吸收有限的其它化合物也可傳到下胃腸道中并且通過常駐微生物區來發酵。在不受理論束縛的情況下,認為孢子形成芽孢桿菌屬菌株的益處來自:孢子在經過制造方法并且通過胃后仍存活,并且所述孢子在腸中發芽,所述孢子在腸中具有活性并且是有益的。這些芽孢桿菌屬菌株以營養方式在葡萄糖和氨基酸上活體外生長,而在上胃腸道中需要活體內生長來與宿主動物對這些養分的需要進行競爭。目前使用的益生素孢子粉末是與麥芽糊精一起包裝,因為宿主動物也快速消化和吸收麥芽糊精,所以作為在上部腸中使孢子發芽的可能食物來源,麥芽糊精倒不如葡萄糖。相反地,已發現某些植物源性碳水化合物,如阿糖基木聚糖(“ax”)(植物半纖維素形式,特別是來源于玉米和玉米纖維的植物半纖維素)、阿糖基木聚糖寡糖(“axos”)(ax的經過處理的形式,其中高分子量聚合物裂解成較小片段)和木糖(“x”)(ax和axos的單糖取代基之一,它們是通過這些聚合物的酸或酶促水解而釋放)可能特別適合作為益生元碳水化合物來與孢子形成芽孢桿菌屬菌株結合用于合生素產品組合物(實施例1和實施例2)中。在本發明的某些實施方案中,益生元碳水化合物選自由阿糖基木聚糖、阿糖基木聚糖寡糖、木糖和其混合物組成的組。適用于本發明的其它益生元碳水化合物包括可溶性纖維糊精(sfd)、可溶性玉米纖維(scf)和/或聚葡萄糖(pdx)。在某些實施方案中,益生元碳水化合物選自由以下組成的組:阿糖基木聚糖、阿糖基木聚糖寡糖、木糖、可溶性纖維糊精、可溶性玉米纖維、聚葡萄糖和其混合物。本領域技術人員也應了解,存在眾多可適于與以下組合使用的其它益生元碳水化合物:阿糖基木聚糖、阿糖基木聚糖寡糖、木糖、可溶性纖維糊精、可溶性玉米纖維和聚葡萄糖,其代表性實例包括菊粉、果糖-寡糖、乳果糖、葡萄糖和麥芽糊精。a.阿糖基木聚糖(ax)ax是可通過水萃取從玉米纖維溶解出的半纖維素。b.木糖(x)木糖是構成玉米纖維半纖維素聚合物阿糖基木聚糖的木聚糖聚合物骨架的單糖。它通過半纖維素的酸或酶促水解來產生。木糖是高度可溶性結晶干粉。它是豐富的相對便宜的甜味天然化合物,其在一些國家是作為低熱量甜味劑出售。c.阿糖基木聚糖寡糖(axos)ax是可通過水萃取從玉米纖維溶解出的半纖維素。ax是一批可通過例如用內木聚糖酶進行消化來轉化為寡糖(axos)的高分子量聚合物。基于高分子量ax上至少四種已知益生素芽孢桿菌屬的有限但陽性的生長,以及木糖上四種相同菌株中至少兩種的強烈生長,據信axos也將通過這些和其它益生素芽孢桿菌屬菌株來代謝。本領域技術人員已知用于獲得阿糖基木聚糖、木糖和阿糖基木聚糖寡糖的方法。舉例來說,木糖和/或阿糖基木聚糖寡糖可通過化學和/或酶促處理來自木料和其它植物物質的半纖維素而獲得。這些木質纖維基質包含纖維素、半纖維素和木質素??墒沟眠@些類型的基質易于通過蒸汽和/或弱酸或堿處理來水解。因為半纖維素一般比纖維素易于水解成糖,所以優選的是首先預水解半纖維素物質以及將可溶性戊糖和可溶性阿糖基木聚糖寡糖與不溶性含纖維素殘余物分離。例如,可使用酶(半纖維素酶),或化學處理(例如通過酸處理)或這兩種的組合來進行水解。舉例來說,如美國專利號6,942,754中所述,木寡糖是如下從木質纖維素漿料制得:用半纖維素酶進行酶處理、過濾所得反應混合物以從酶處理的漿料中分離液體部分、通過分離膜對所分離的液體部分進行滲透處理以從滲透部分中分離含有高濃度木寡糖-木質素復合物的未滲透部分、收集未滲透部分,以及從所收集的未滲透部分中分離和回收木寡糖。舉例來說,如shibanuma,k.等(1999)j.appl.glycosci.46,249-56中所述,單子葉植物的半纖維素的單糖木糖和阿拉伯糖可通過植物物質的弱酸水解來獲得。水解產物的所得可溶部分可使用上述方法來分餾,以得到單糖以及阿糖基木聚糖寡聚物混合物。iv.益生素細菌益生素是當攝取時對人和/或動物具有有益作用的活微生物。目前在人的食物中,益生素是乳桿菌屬或雙岐桿菌屬的最常見物種。這些類型的細菌中沒有一個形成孢子。然而已報道,某些具有益生素性質的微生物包括能夠形成耐熱且極穩定孢子的細菌。這些孢子形成細菌的代表性實例包括各種孢子形成芽孢桿菌屬種類,包括(但不限于)枯草芽孢桿菌、凝結芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、短小芽孢桿菌和克勞氏芽孢桿菌。在許多情況下,孢子在暴露于超過100℃的熱后存活。這種耐熱性使孢子在甚至極端的制造方法中仍能存活。一般來說,孢子可在工業規模的純培養物發酵中以良好產率產生。孢子的耐熱性和耐氧性傾向于比營養細菌大得多,因此在處理條件下的存活情況好于不形成孢子的細菌。呈干燥粉末形式時,孢子可存活數十年。一般來說,干燥孢子商業產品在密封包裝中歷經兩年時期后僅稍微損失生存力。已報道了芽孢桿菌屬孢子可在通過胃后存活,對膽汁鹽暴露具有抗性,以及在回腸中發芽。casula,g和cutting,sm(2002)appliedenvironmentalmicrobiology,2002年5月,第2344-2352頁。在廉價的基本培養基(minimalmedia)上,在熟知的需氧發酵條件下,使用沒有特別改進的現有設備,許多芽孢桿菌屬菌株都生長良好并且有效形成孢子。在本發明的某些實施方案中,細菌是具有益生素作用的孢子形成芽孢桿菌屬種類。在某些實施方案中,益生素孢子形成芽孢桿菌屬菌株選自由以下組成的組:枯草芽孢桿菌、凝結芽孢桿菌、克勞氏芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、短小芽孢桿菌和其混合物。本發明的孢子形成益生素芽孢桿菌種不需要超出本領域技術人員熟知范圍的任何特別制備(如制造、處理、包裝等)方法。用于制備益生素孢子的方法使用所屬領域中熟知的發酵和回收方法。舉例來說,將各個細菌物種從標準儲備物中接種至反應器中,并且使其在標準化培養基中生長直至達到預定cfu/克濃度并且已出現孢子形成為止。接著從反應器排出主體物質并且通過多種標準方法之一(如噴霧干燥)來干燥。這些本領域的已知方法的其它代表性實例包括深層發酵(submergedfermentation)、通過過濾進行的回收和濃縮,以及包裝于防潮系統中。v.合生素產品本發明的合生素產品是益生素活孢子形成細菌與益生元化合物的新型組合,據信這種組合達到協同效應。在本發明的某些實施方案中,共生產品是至少一種益生素孢子形成芽孢桿菌屬菌株與至少一種益生元碳水化合物的組合。這些合生素產品可用作食品和動物飼料中的成分。在某些實施方案中,合生素產品包含至少一種選自由以下組成的組的益生素孢子形成芽孢桿菌屬菌株:枯草芽孢桿菌、凝結芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、克勞氏芽孢桿菌、短小芽孢桿菌和其混合物。在某些實施方案中,合生素產品包含至少一種選自由以下組成的組的益生元碳水化合物:阿糖基木聚糖(“ax”)、阿糖基木聚糖寡糖(“axos”)、木糖(“x”)、可溶性纖維糊精(“sfd”)、可溶性玉米纖維(“scf”)、聚葡萄糖(“pdx”)和其混合物。還涵蓋的是,在某些實施方案中,共生產品也包含菊粉、果糖-寡糖、乳果糖、葡萄糖和麥芽糊精。本領域技術人員將認識到存在涵蓋至少一種益生素孢子形成芽孢桿菌屬菌株與至少一種益生元碳水化合物的不同組合的眾多實施方案,所有所述實施方案都涵蓋在本文中。在某些實施方案中,孢子形成芽孢桿菌屬菌株與益生元碳水化合物的合生素產品組合物是干粉。在某些實施方案中,干粉是可流動粉末,如通過美國測試和材料學會(americansoc.fortestingandmaterials)的astm標準d6128-97(1998):“使用jenike剪切單元對散裝固體作的標準剪切測試(standardshear-testingmethodforbulksolidsusingthejenikeshearcell).”來測量。在某些實施方案中,合生素產品的水分含量小于約10%。在某些實施方案中,合生素產品的水分含量小于約9%。在某些實施方案中,合生素產品的水分含量小于約8%。在某些實施方案中,生素產品的水分含量小于約7%。在某些實施方案中,生素產品的水分含量小于約6%。在某些實施方案中,生素產品的水分含量小于約5%。在某些實施方案中,合生素產品的水分含量是約1%至約10%。在某些實施方案中,合生素產品的水分含量是約5%至約10%。通過以下來測量本文所用的水分含量:美國測試和材料學會的astm標準d6869:“卡爾-費休(karlfisher)”滴定。本發明的合生素產品是至少一種益生素孢子形成芽孢桿菌屬菌株與至少一種益生元碳水化合物的組合,其也可描述為包含益生元碳水化合物組分和益生素孢子組分,其中所述益生元碳水化合物組分包含至少一種益生元碳水化合物,并且所述益生素孢子組分包含至少一種益生素孢子形成芽孢桿菌屬菌株。合生素產品組合物可通過摻合一定量的干燥孢子組分與一定量的干燥益生元組分來制備?;蛘?,液體形式的益生元組分可與液體形式的益生素孢子組分混合,并且混合物可如通過噴霧干燥來加以干燥。本領域技術人員將認識到,對于商業制造常見的其它替代方法是實用和適用的??商砑尤鐚π袠I來說適當且已知的用于食物和飼料產品的其它成分(如但不限于惰性填料、分散物質、防腐劑、著色劑和養分),以便在最終產品中達到所需產品特征和活孢子的所需最終范圍。在某些實施方案中,合生素產品的益生素孢子組分每克干重將含有最多約1011個存活孢子。在某些實施方案中,益生素孢子組分每克干重將含有大于約109個存活孢子。在某些實施方案中,益生素孢子組分每克干重將含有約109個至約1011個存活孢子。在某些實施方案中,益生素孢子組分每克干重將含有約109個至約1010個存活孢子。在某些實施方案中,益生素孢子組分每克干重將含有約1010個至約1011個存活孢子。如本文所用,使用常用“傾倒板(pourplate)”方法為存活孢子計數,所述方法的一個說明性實施例描述于實施例3中。在某些實施方案中,最終合生素產品組合物每克產品干重將包含大于約105個存活益生素孢子。在某些實施方案中,最終共生產品組合物每克產品干重將包含最多約107個存活益生素孢子。在某些實施方案中,最終合生素產品組合物每克產品干重將含有約105個至約107個存活益生素孢子。在某些實施方案中,最終合生素產品組合物每克產品干重將含有約105個至約106個存活益生素孢子。在某些實施方案中,最終合生素產品組合物每克產品干重將含有約106個至約107個存活益生素孢子。為達到說明目的,通過摻合1克干燥孢子組分與100克包括益生元碳水化合物的其它干燥成分,使存活效價為每克干重109個益生素孢子的益生素孢子組分與其它干燥成分摻合來達到每克產品干重例如107個存活孢子的最終效價。vi.食物產品本發明的合生素產品可用作食物產品(如人的食品或動物飼料)的成分或組分。這些食物產品含有一定量的合生素產品,以使得食物產品可以提供合生素產品有效量的量來消耗。將成分并入食物產品中是本領域已知的并且將根據所制備食物產品的類型而變化。盡管存在某些已在傳統上以含有益生元或益生素的形式銷售的食物產品,但本文涵蓋的食物產品類型不限于一種具體類型的食物產品。含有合生素產品的食物產品的某些實施方案的代表性非限制性實例包括補充物、營養棒(nutritionalbar)、永久性臨床營養制劑(eternalclinicalnutritionpreparation)、嬰兒食物和干燥食品的包衣(如烘焙物品或口香糖的包衣)。實施例中提供這些食品的預知性實例。vii.提高孢子形成芽孢桿菌屬菌株效價的方法本發明的某些實施方案是針對提高哺乳動物腸道中孢子形成芽孢桿菌屬菌株效價的方法。據信施用有效量的合生素產品可向人和非人哺乳動物提供某些健康益處以使得其健康得到改善。一般來說,據信益生素的消耗有助于維持和調節正常健康個體的胃腸道。益生素的消耗也可有助于緩解某些胃腸道疾病,例如腹瀉。控制試驗已表明,益生素可縮短嬰兒和兒童傳染性腹瀉的病程。益生素的消耗還可幫助患有克隆氏病(crohn′sdisease)和腸易激綜合征的人。一些研究表明,某些益生素可有助于維持緩和潰瘍性結腸炎以及預防克隆氏病復發和結腸袋炎復發(治療潰瘍性結腸炎的手術的并發癥)。益生素也可用于維持泌尿生殖器健康。如同腸道一樣,陰道是精細平衡的生態系統。然而,所述系統可因許多因素(包括抗生素、殺精劑和避孕丸)而失去平衡?;謴臀⑸飬^平衡的益生素治療可有助于這些常見的雌性泌尿生殖器問題,如細菌性陰道病、酵母感染和尿路感染。涵蓋的是,口服和經陰道施用益生素可有助于治療細菌性陰道病和尿路感染。由動物來消耗益生素可提供類似益處,并且可能特別有益地作為用抗生素治療動物的一種成本有效且“天然”的替代方案。非人哺乳動物的代表性實例包括一般被認為是家畜的動物,如但不限于:馬、牛、豬、綿羊、山羊、公牛、美洲駝、羊駝和野牛。非人哺乳動物的代表性實例也包括嚙齒動物,如但不限于:小鼠、大鼠、兔、倉鼠、沙鼠和天竺鼠。非人哺乳動物的代表性實例也包括哺乳動物伴侶動物,如但不限于:貓和狗。通常向如家畜的哺乳動物施用抗生素來改善其健康。在某些實施方案中,在不向非人哺乳動物施用抗生素的情況下,施用本發明的合生素產品可向這些哺乳動物提供健康益處。在某些實施方案中,以提高腸道中孢子形成芽孢桿菌屬菌株效價的有效量施用含有足夠量的益生元碳水化合物和益生素細菌組分的合生素產品,以便提供益生元和/或益生素活性,限制條件是由于不易消化性碳水化合物的滲透作用,所述量不會極大地超過耐受性限制。對人來說,大于約20克/天的益生元碳水化合物的劑量可能引起不適的作用。對動物來說,本領域技術人員將認識到:調整所施用的合生素產品的量,如與體重成比例地調整,從而達到益生元碳水化合物和/或益生素細菌的有效量。可不太頻繁地施用合生素產品,如一周或一個月僅一天,或每幾個月或幾年,等??奢^頻繁地施用合生素產品,如一周2天到6天,或用類似頻率在較長時間期限內施用。可每天施用合生素產品,意思是連續施用天數超過至少五天時間。在某些實施方案中,施用合生素產品以使得任何單天的益生元碳水化合物的量都為約1g至約25g碳水化合物。在某些實施方案中,以這些量每天施用合生素產品。在某些實施方案中,施用合生素產品以使得任何單天的益生元碳水化合物的量都為約1g至約10g碳水化合物。在某些實施方案中,以這些量每天施用合生素產品。在某些實施方案中,施用合生素產品以使得任何單天的益生元碳水化合物的量都為約1g至約20g碳水化合物。在某些實施方案中,以這些量每天施用合生素產品。在某些實施方案中,施用合生素產品以使得任何單天的益生元碳水化合物的量都為約2.5g至約10g碳水化合物。在某些實施方案中,以這些量每天施用合生素產品。在某些實施方案中,施用合生素產品以使得任何單天的益生元碳水化合物的量都為約2.5g至約20g碳水化合物。在某些實施方案中,以這些量每天施用合生素產品。在某些實施方案中,施用合生素產品以使得任何單天的益生元碳水化合物的量都為約5g至約10g碳水化合物。在某些實施方案中,以這些量每天施用合生素產品。在某些實施方案中,施用合生素產品以使得任何單天的益生元碳水化合物的量都為約5g至約20g碳水化合物。在某些實施方案中,以這些量每天施用合生素產品。在某些實施方案中,施用合生素產品以使得任何單天的益生元碳水化合物的量都為約2.5g至約25g碳水化合物。在某些實施方案中,以這些量每天施用合生素產品。在某些實施方案中,施用合生素產品以使得任何單天的益生元碳水化合物的量都為約5g至約25g碳水化合物。在某些實施方案中,以這些量每天施用合生素產品。在某些實施方案中,施用合生素產品以使得任何單天的益生元碳水化合物的量都為約10g至約25g碳水化合物。在某些實施方案中,以這些量每天施用合生素產品。在某些實施方案中,施用合生素產品以使得任何單天的益生元碳水化合物的量都為約10g至約20g碳水化合物。在某些實施方案中,以這些量每天施用合生素產品。在某些實施方案中,施用合生素產品以使得任何單天的益生素細菌的量都為約104cfu至約1010cfu。在某些實施方案中,以這些量每天施用合生素產品。在某些實施方案中,施用合生素產品以使得任何單天的益生素細菌的量都為約106cfu至約108cfu。在某些實施方案中,以這些量每天施用合生素產品。在某些實施方案中,施用合生素產品以使得任何單天的益生素細菌的量都為每日約104cfu至約106cfu。在某些實施方案中,以這些量每天施用合生素產品。在某些實施方案中,施用合生素產品以使得任何單天的益生素細菌的量都為每日約104cfu至約108cfu。在某些實施方案中,以這些量每天施用合生素產品。在某些實施方案中,施用合生素產品以使得任何單天的益生素細菌的量都為每日約106cfu至約1010cfu。在某些實施方案中,以這些量每天施用合生素產品。在某些實施方案中,施用合生素產品以使得任何單天的益生素細菌的量都為每日約108cfu至約1010cfu。在某些實施方案中,以這些量每天施用合生素產品。因為據信合生素產品的組分在胃腸道內提供其益處,所以施用合生素產品可涉及使合生素產品暴露于胃腸道的施用。在某些實施方案中,合生素產品是可食用食物產品(如食品或動物飼料)的成分或組分。施用合生素產品是通過消耗包含合生素產品的食物產品來實現。包含所消耗合生素產品的食物產品的量是含有合生素產品有效量的量。在某些實施方案中,所消耗食物產品的量是含有一定量合生素產品以使得任何單天的益生元碳水化合物的量都為約1g至約25g碳水化合物的量。在某些實施方案中,以這些量每天消耗食物產品。在某些實施方案中,所消耗食物產品的量是含有一定量合生素產品以使得任何單天的益生元碳水化合物的量都為約1g至約10g碳水化合物的量。在某些實施方案中,以這些量每天消耗食物產品。在某些實施方案中,所消耗食物產品的量是含有一定量合生素產品以使得任何單天的益生元碳水化合物的量都為約1g至約20g碳水化合物的量。在某些實施方案中,以這些量每天消耗食物產品。在某些實施方案中,所消耗食物產品的量是含有一定量合生素產品以使得單天的益生元碳水化合物組分的量為約2.5g至約10g碳水化合物的量。在某些實施方案中,以這些量每天消耗食物產品。在某些實施方案中,t所消耗食物產品的量是含有一定量合生素產品以使得單天的益生元碳水化合物組分的量為約2.5g至約20g碳水化合物的量。在某些實施方案中,以這些量每天消耗食物產品。在某些實施方案中,所消耗食物產品的量是含有一定量合生素產品以使得任何單天的益生元碳水化合物的量都為約5g至約10g碳水化合物的量。在某些實施方案中,以這些量每天消耗食物產品。在某些實施方案中,所消耗食物產品的量是含有一定量合生素產品以使得任何單天的益生元碳水化合物的量都為約5g至約20g碳水化合物的量。在某些實施方案中,以這些量每天消耗食物產品。在某些實施方案中,所消耗食物產品的量是含有一定量合生素產品以使得任何單天的益生元碳水化合物的量都為約2.5g至約25g碳水化合物的量。在某些實施方案中,以這些量每天消耗食物產品。在某些實施方案中,所消耗食物產品的量是含有一定量合生素產品以使得任何單天的益生元碳水化合物組分的量都為約5g至約25g碳水化合物的量。在某些實施方案中,以這些量每天消耗食物產品。在某些實施方案中,所消耗食物產品的量是含有一定量合生素產品以使得任何單天的益生元碳水化合物的量都為約10g至約25g碳水化合物的量。在某些實施方案中,以這些量每天消耗食物產品。在某些實施方案中,所消耗食物產品的量是含有一定量合生素產品以使得任何單天的益生元碳水化合物的量都為約10g至約20g碳水化合物的量。在某些實施方案中,以這些量每天消耗食物產品。在某些實施方案中,所消耗食物產品的量是含有一定量合生素產品以使得任何單天的益生素細菌的量都為約104cfu至約1010cfu的量。在某些實施方案中,以這些量每天消耗食物產品。在某些實施方案中,所消耗食物產品的量是含有一定量合生素產品以使得任何單天的益生素細菌的量都為約106cfu至約108cfu的量。在某些實施方案中,以這些量每天消耗食物產品。在某些實施方案中,所消耗食物產品的量是含有一定量合生素產品以使得任何單天的益生素細菌的量都為約104cfu至約106cfu的量。在某些實施方案中,以這些量每天消耗食物產品。在某些實施方案中,所消耗食物產品的量是含有一定量合生素產品以使得任何單天的益生素細菌的量都為約104cfu至約108cfu的量。在某些實施方案中,以這些量每天消耗食物產品。在某些實施方案中,所消耗食物產品的量是含有一定量合生素產品以使得任何單天的益生素細菌的量都為約106cfu至約1010cfu的量。在某些實施方案中,以這些量每天消耗食物產品。在某些實施方案中,所消耗食物產品的量是含有一定量合生素產品以使得任何單天的益生素細菌的量都為約108cfu至約1010cfu的量。在某些實施方案中,以這些量每天消耗食物產品。viii.實施例以下公開的實施方案僅僅是本發明的代表,本發明可以各種形式實施。因此,以下實施例中公開的特定結構細節、功能細節和程序細節不意圖被視為限制性的。實施例1:益生素芽孢桿菌屬在各種益生元碳水化合物上的生長使四種商業性孢子形成益生素芽孢桿菌屬菌株以10g/l在益生元碳水化合物上生長。(參看圖1)。四種菌株是短小芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和凝結芽孢桿菌。益生元碳水化合物是高分子量阿糖基木聚糖(ax)、木糖(x)、可溶性纖維糊精(蠟狀)(sfdw)、可溶性玉米纖維(85)(scf)和聚葡萄糖(pdx)。作為圖1中所示數據的顯著性度量,表1指示出凝結芽孢桿菌數據的p值。表1.相對于“無”(未添加碳水化合物)條件下的最大生長來說,凝結芽孢桿菌在各種益生元基質上的最大生長。阿糖基木聚糖(高分子量)(ax)p<0.01木糖(x)p<0.01可溶性纖維葡聚糖(蠟狀)(sfdw)p>0.75可溶性玉米纖維(85)(scf)p<0.02聚葡萄糖(pdx)p<0.01在五種益生元基質的四種上存在凝結芽孢桿菌的顯著生長。在sfdw上未觀察到顯著生長。這項研究中的凝結芽孢桿菌對益生元的顯著反應提供用于判定其它益生素菌株的顯著生長的比較??扇苄岳w維葡聚糖(sfdw)。三種來自envera(coatesville,pa)的商業性益生素芽孢桿菌屬菌株-即短小芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌-在sfdw上強烈生長。然而,凝結芽孢桿菌不在sfdw上生長。可溶性玉米纖維(scf)和聚葡萄糖(pdx)。短小芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌在scf和pdx上適度生長至強烈生長。阿糖基木聚糖(ax)。所有四種所測試的益生素芽孢桿菌屬菌株-短小芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和凝結芽孢桿菌-都在ax上具有有限但顯著的生長。在不受理論束縛的情況下,據信這些菌株可從ax汲取有限量的養分。已報道了芽孢桿菌屬菌株具有β-木糖聚糖酶、阿拉伯糖苷酶和阿魏酸酯酶活性,所述活性可從作為養分的高分子量ax聚合物消減(trim)糖和/或阿魏酸。木糖(x)。凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌在木糖上生長。地衣芽孢桿菌顯示在木糖上有限生長。短小芽孢桿菌顯示出不能夠在木糖上生長。概述。此實施例1說明已知的孢子形成益生素細菌能夠在益生元碳水化合物(如可溶性纖維糊精、可溶性玉米纖維、聚葡萄糖、高分子量阿糖基木聚糖和木糖)上生長。益生素芽孢桿菌屬菌株中的每一種都顯示稍微不同的基質偏好。然而,無一顯示出受限于僅單一種所測試的益生元候選物。實施例2.凝結芽孢桿菌在各種碳水化合物上的最大生長的比較比較了在碳水化合物阿糖基木聚糖、木糖和葡萄糖上約10g/l的益生素凝結芽孢桿菌菌株gbi-30(atcc指定編號pta-6086;美國專利號6,849,256)(ganedenbiotech公司;mayfieldheights,oh)的最大生長,并且與未添加碳水化合物的情況進行比較(圖2)。結果證明已知的孢子形成益生素細菌能夠在益生元碳水化合物(如木糖)上強烈生長。實施例3.用于測定存活孢子計數的傾倒板方法為避免誤差的可能性,優選的是在不少于三個孢子濃縮物樣本中進行孢子計數,因為孢子具有凝塊在一起并且沉降的傾向。凝塊應通過充分攪拌(如震蕩)來分散,隨后進行抽樣計數。方案:a.將8根試管置于測試架中,對其編號,并且將9ml生理鹽水溶液加入每一個管中。b.通過移液管或結核菌素注射器將1ml孢子混懸液轉移至1號管中。c.通過使用新鮮的結核菌素注射器或移液管來混合第一稀釋液數次并且將1ml轉移至下一管中。以相同方式制備其余十倍稀釋液,每次稀釋都使用新鮮注射器或移液管。d.從最高稀釋度開始,用移液管從10-8、10-7和10-6的各稀釋液移取1ml至皮氏培養皿(petridish)中。對于各稀釋液,使用五個直徑10cm的皮氏培養皿。e.將約20ml的冷卻至45℃的熔融營養瓊脂倒入各個皮氏培養皿中。通過旋轉這些板使接種體立即與瓊脂混合。將板保持在室溫下以使瓊脂定型。f.在37℃下將板孵育24小時。g.對所有五塊具有具體稀釋度的板中的菌落都進行計數。將每個板的平均數乘以稀釋因子來得出在原始混懸液中的每毫升活菌數。計算各稀釋液(10-6至10-8)的平均計數。為得出原始儲備混懸液中的平均活菌數,取三個稀釋液的平均值。實施例4.補充物以每克粉末含有至少109個存活孢子的凝結芽孢桿菌(bc)冷凍干燥孢子粉末的混懸液開始。木糖粉末(x)可從sigma-aldrich(st.louis,mo,usa)獲得。以100/1的x/bc比率混合兩種粉末直至獲得均質產品為止。取決于劑量方案(例如每天一個5g藥囊或每天兩個3g藥囊),以2-5g這種混合物來填充藥囊。一個藥囊的內容物可例如被混合在一杯橙汁或牛奶中。實施例5.合生素營養棒由4.0g燕麥片、4.0g小麥片、3.0g爆米花、1.0g碎榛果、0.25g蜂蜜、3.0g葡萄干、1.5g麥芽糊精、1.0g冷凍干燥凝結芽孢桿菌(bc;每克粉末>109個存活孢子)和5.0g木糖粉末來制備23g棒。實施例6.用于與完全腸內臨床營養(completeenteralclinicalnutrition)混合的合生素混合物根據實施例4的方法制備粉末混合物形式的合生素產品。將5g粉末混合物放入藥囊中。可將這個藥囊的內容物加入標準腸內臨床營養中。為得到最好結果,優選的是在使用之前不超過30分鐘來添加藥囊的內容物。實施例7.用于加強嬰兒食物的合生素粉末混合物根據實施例4的方法制備粉末混合物形式的合生素產品。將5g粉末混合物放入藥囊中。可將這個藥囊的內容物加入標準嬰兒配方或嬰兒食物中。為得到最好結果,優選的是在使用之前不超過30分鐘來添加藥囊的內容物。實施例8.干燥食品的甜粉末包衣可制備甜粉末包衣,如用于干燥食品(包括烘焙物品等)的粉末狀包衣。另一實施例是具有合生素混合物的干粉包衣的口香糖,所述合生素混合物用根據實施例4制備的粉末混合物形式的合生素產品來制備。使用適度甜味的非生齲粉末來涂布口香糖棒。口香糖棒可使用標準包裝方法來包裝成單獨包裹的膠棒。當前第1頁12
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