本發明屬于飼料添加劑技術領域，具體涉及一種緩解斷奶仔豬嘔吐毒素中毒的功能性復方添加劑。
背景技術：
嘔吐毒素，又名脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(don)，能對人和動物產生廣泛的損傷，嚴重影響人和牲畜健康，其主要產毒菌為禾谷鐮孢菌，廣泛存在于溫熱地區的飼料中(payrosd,etal.toxicologyofdeoxynivalenolanditsacetylatedandmodifiedforms.archivesoftoxicology[j].2016,90,2931-2957)。雖然don的毒性比其它霉菌毒素小，但分布范圍廣，對谷物的污染率與污染水平居霉菌毒素之首(pestkajj,deoxynivalenol:mechanismsofaction,humanexposure,andtoxicologicalrelevance.archivesoftoxicology[j].2010,84,663-679.)。2008年采集于我國15個省份飼料中don的檢出率高達95.2％，超標率達17.7％(甄陽光等，我國主要飼料原料及產品中嘔吐毒素污染分布規律研究.中國畜牧雜志.2009，4,21-24.)。腸道是嘔吐毒素攻擊的第一靶標，它能通過氧化應激途徑，引起動物體內許多炎性細胞因子釋放，降低動物機體免疫力，導致動物厭食、生長性能下降、免疫力降低與腸道功能氧化損傷等綜合中毒癥狀而實現其毒性作用機制(pestkajj,deoxynivalenol:mechanismsofaction,humanexposure,andtoxicologicalrelevance.archivesoftoxicology[j].2010,84,663-679)。目前，飼料原料及產品因don的廣泛污染對畜禽造成的毒害作用一直是養殖業關注的主要問題。
近年來，利用物理吸附、化學處理、生物發酵等去除飼料或原料中的don雖具有一定效果，但都有其優缺點，導致最終去除don的效果不令人滿意，無法大規模推廣應用(kabakb,dobsonad,vari.strategiestopreventmycotoxincontaminationoffoodandanimalfeed:areview.criticalreviewsinfoodscienceandnutrition[j].200646,593-619.)。物理吸附是市場上應用最多的一種去除don的方法，但是市場上吸附類產品質量參差不齊，加上吸附劑本身廣譜性差，導致其對飼料中一種或兩種霉菌毒素有良好的吸附效果，同時也會吸附飼料中的某些微量營養成份。其次，化學處理去除don的方法操作過程繁瑣、效果不穩定、營養成分損傷大，以及影響飼料適口性等缺點，導致難以實現大規模推廣應用。此外，酶解和微生物發酵去除飼料中don的方法具有效率高，特異性指向強和環境污染少等優點備受研究者關注，但是這兩種方法都具有環境與設備要求高、去除成本不易控制，以及酶解或發酵產物的生物安全問題有待研究等缺點，限制了其大規模推廣應用。最重要的是，對于嘔吐毒素進入動物體內引起中毒的情況下，以上嘔吐毒素脫毒等方法是無法緩解中毒綜合癥狀的。因此，目前急需開發一種從嘔吐毒素毒性機制著手的安全、有效的復合添加劑。
余冰等人用12.6-17％丁酸鈉、3-4％谷氨酰胺、3-4％黃芪多糖、0.1-0.4％乳酸桿菌、9.17-10％枯草芽孢桿菌和58.6-63％的載體統糠，用來緩解霉菌毒素中毒后的腸道營養劑，表明該產品能通過營養調控手段針對多種霉菌毒素中毒癥狀具有較好的改善效果(專利申請公開號：cn104957433a)。余冰等人用1-2％維生素a、3.23-4％維生素c、5.11-6％維生素e、3-4％酵母硒、2-3％葡萄籽原花青素、9.17-10％枯草芽孢桿菌和58.6-63％的載體統糠用來緩解霉菌毒素中毒后的抗氧化功能復合飼料添加劑，表明該產品能緩解多種霉菌毒素中毒癥狀(專利申請公開號：cn104970258a)。總的來說，上述產品確實對多種霉菌毒素的中毒癥狀起到了一定的緩解作用，但是功能性緩解產品的成分過于單一、缺乏特異性針對嘔吐毒素的功能性復合飼料添加劑。因嘔吐毒素能導致動物機體產生一系列的綜合中毒癥狀(如厭食、生長性能下降、免疫力降低與腸道氧化損傷等)，因此必須綜合使用多種營養成分為原料進行合理組合來緩解其中毒癥狀。更有甚者，組合使用精氨酸、谷氨酸、蛋氨酸、黃芩苷硒絡合物、黃芩苷鋅絡合物、黃芩苷銅絡合物、黃芩苷、朝鮮薊提取物、紫錐菊多糖與屎腸球菌來緩解嘔吐毒素也未見報道。因此，功能性營養成分的多重組合是緩解嘔吐毒素中毒的一項營養、安全與簡捷的有效措施。
技術實現要素：
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本發明的目的在于針對現有的技術不足，從嘔吐毒素的毒性機制出發，提供一種緩解嘔吐毒素中毒癥狀、提高免疫力、抗氧化能力與調控腸道菌群、促進斷奶仔豬生長的功能性復方飼料添加劑。
為實現上述目的，本發明是通過以下技術方案來實現的：
一種緩解斷奶仔豬嘔吐毒素中毒的功能性復方飼料添加劑，其組分和質量比含量為：
優選的，上述的緩解斷奶仔豬嘔吐毒素中毒的功能性復方飼料添加劑，其組分與質量百分比含量為：精氨酸0.7％，谷氨酸0.5％，蛋氨酸0.5％，黃芩苷硒3.0％、黃芩苷鋅1.5％、黃芩苷銅1.0％，黃芩苷2.0％、葡萄籽原花青素1.2％、朝鮮薊提取物1.3％，維生素a1.0％，維生素c1.0％，維生素e3.0％，酵母多糖4.0％，黃芪多糖5.0％，紫錐菊多糖3.3％，乳酸桿菌0.5％，枯草芽孢桿菌4.0％，屎腸球菌0.5％，沸石粉66％。
上述功能性復方飼料添加劑在緩解斷奶仔豬嘔吐毒素中毒的應用方法：其在飼料中的添加量為3.2-3.7千克/噸。從實施例1至實施例3應用試驗的結果來看，與4mg/kg嘔吐毒素對照組相比，本發明所述的添加劑對嘔吐毒素誘導的腸道氧化損傷、免疫力降低與生長性能抑制具有很好的緩解作用。
下述各營養素對提高斷奶仔豬腸道的抗氧化能力、提高免疫力與調控腸道菌群、促進斷奶仔豬生長具有重要的作用，具體如下：
功能性氨基酸類。精氨酸：是新生仔豬的必需氨基酸，促進仔豬小腸細胞增殖與分化、促進蛋白質合成，有效緩解嘔吐毒素引起的蛋白質合成降低與免疫力抑制。谷氨酸：可刺激蛋白質合成與增強免疫力、提高生產性能，有效緩解嘔吐毒素引起的蛋白質合成降低。蛋氨酸：是新生仔豬必須氨基酸，能為機體提供活性甲基，參與蛋白質代謝與合成機體蛋白，提高免疫力，有效緩解嘔吐毒素引起的免疫力抑制。
功能性微量元素類。黃芩苷-金屬絡合物具有清除自由基，抗氧化的生理作用，能夠有效緩解嘔吐毒素引起的氧化應激損傷與細胞凋亡。
中藥提取物。黃芩苷：作為一種具有活性的黃酮類天然物質，可通過直接清除自由基與氧自由基來抑制氧化酶活性，最終提高機體抗氧化能力；還能夠提高機體免疫力。葡萄籽原花青素：是一種具有活性的酚羥基結構的天然物質，可通過酚羥基直接結合自由基，緩解氧化應激。朝鮮薊提取物：是一種具有活性的酚類天然物質，可通過清除自由基來抑制氧化應激；還具有改善胃腸道功能。
維生素類。維生素a：參與糖蛋白的合成，維持上皮的正常形成與發育，促進細胞增殖與生長，能有效緩解嘔吐毒素氧化應激損傷情況下的腸道上皮細胞修復損傷；促進免疫球蛋白的合成，提高機體免疫力，能有效緩解嘔吐毒素誘導的免疫抑制。維生素e：是一種脂溶性維生素，在細胞內能與自由基結合保護亞細胞器免受攻擊，與維生素c具有協同作用。維生素c：是一種傳統的天然抗氧化劑，有很強的還原作用，將維生素e自由基還原成還原型維生素e，清除體內自由基，可有效緩解嘔吐毒素導致的機體氧化應激對動物機體的損傷。
功能性多糖類。酵母多糖：是酵母細胞壁的重要組成部分，可顯著提高機體的抗病和抗應激能力，能夠有效緩解嘔吐毒素導致的免疫抑制，還能給腸道中的乳酸桿菌提供能量，促進乳酸桿菌數量明顯增加。黃芪多糖：是中藥黃芪的主要活性成分，能改善動物小腸的形態結構，提高小腸消化能力與提高小腸消化功能，有效緩解嘔吐毒素導致的腸道營養吸收不良，還能改善動物機體免疫力，有效緩解嘔吐毒素導致的免疫抑制，還能促進腸道中乳酸桿菌、芽孢桿菌的數量增加。紫錐菊多糖：是從紫錐菊中提取出的一種活性物質，能刺激機體免疫系統而提高機體免疫力，有效緩解嘔吐毒素導致免疫抑制。
益生菌類。乳酸桿菌：是普遍存在于動物腸道內的一類益生菌，能通過抑菌活性來增強動物的免疫功能，有效緩解嘔吐毒素導致的免疫抑制。枯草芽孢桿菌：是一種可形成芽孢的好氧革蘭氏陽性菌，提高機體免疫，能有效緩解嘔吐毒素導致的免疫抑制。屎腸球菌：是腸道中的一種益生菌，能在腸道中迅速形成優勢菌群與增強機體免疫力，促進動物生長性能，有效緩解嘔吐毒素導致的免疫抑制與生長性能降低。
所述的沸石粉作為起填充作用的載體。
與現有技術相比，本發明具有以下優點及有益效果：
本發明從嘔吐毒素的毒性機理出發，選用能夠提高斷奶仔豬抗氧化能力與免疫力的原料，采用合理的組分配比并結合相應的豬場應用試驗。從實施例1至實施例3的應用結果來看，與4mg/kg嘔吐毒素對照組相比，添加本實施例的3.5千克/噸復方組合添加劑后，斷奶仔豬的平均日增重提高了6.49-8.41％，平均日采食量提高了1.88-3.53％，料肉比提高了3.64-4.50％，血清免疫球蛋白a含量提高了36.49-84.3％，血清免疫球蛋白g含量提高了21.43-39.42％，血清免疫球蛋白m含量提高了31.37-40.91％，血清丙二醛含量提高了23.44-25.76％，血清總抗氧化能力提高了30.51-41.27％，血清超氧化物歧化酶含量提高了44.86-49.43％，血清谷胱甘肽過氧化物酶含量提高了24.93-30.38％，結腸內容物中的大腸桿菌數量下降了10.64-14.46％，結腸內容物中乳酸桿菌數量提高了11.68-16.24％，空腸的溶質轉運載體家族7成員1slc7a1基因表達量提高了37.50-47.74％，空腸的溶質轉運載體家族7成員7slc7a7基因表達量提高了54.39-67.92％，空腸的鈉葡萄糖共轉運載體sglt1基因表達量提高了54.22-72.22％。可見，本發明對嘔吐毒素誘導的腸道氧化損傷，免疫力降低與生長性能抑制具有很好的緩解作用。同時，本發明的抗氧化與提高免疫力的飼料添加劑對于生產實際中的嘔吐毒素具有較好的緩解效果。本發明中所述的飼料添加劑成分同時具備安全與營養的特點，不會吸附飼料中其它微量營養物質，能提高養殖效益。
具體實施方式
下面結合實施例對發明作進一步說明。
實施例1
一種緩解斷奶仔豬嘔吐毒素中毒的功能性復方飼料添加劑，其組分和質量百分比含量如下：功能性氨基酸類(精氨酸:0.6％、谷氨酸:0.3％、蛋氨酸:0.2％)、功能性微量元素(黃芩苷硒:2.0％、黃芩苷鋅:0.6％、黃芩苷銅:0.5％)、中藥提取物(黃芩苷：1.5％、葡萄籽原花青素：1.3％、朝鮮薊提取物：1.2％)、維生素類(維生素a：0.4％、維生素c：0.6％、維生素e：1.7％)、功能性多糖(酵母多糖：2.8％、黃芪多糖：4.5％、紫錐菊多糖：2.5％)、益生菌類(乳酸桿菌：0.2％、枯草芽孢桿菌：2.7％、屎腸球菌：0.4％)、沸石粉：76％。制備方法：按比例稱取上述各原料，攪拌混合均勻。
所述的功能性微量元素可參考“黃芩苷金屬配合物及其制備方法和應用”(專利申請公開號：cn102516341a)，稍做修改后合成；所述的益生菌類產品購自芯來旺生物科技(南京)有限公司，其中乳酸桿菌菌粉活性菌總數≥2×1011cfu/g(2000億/克)，枯草芽孢桿菌活性菌總數≥1×1011cfu/g(1000億/克)，屎腸球菌的活性菌總數≥6×1011cfu/g(6000億/克)；所述的中藥提取物黃芩苷等均購買自西安奧晶科技發展有限公司，所述的功能性氨基酸類產品由廣州天科生物科技發展有限公司提供；所述的功能性多糖，其中酵母多糖購自安琪酵母股份有限公司，黃芪多糖和紫錐菊多糖購自河南中冠健業生物科技有限公司。
為了驗證上述添加劑的應用效果，在湖南豬場進行如下應用試驗：
1.1試驗材料
試驗選用156頭體況良好、體重一致(6.70kg)的28日齡杜×長×大三元雜交斷奶仔豬(公母各半)，隨機分為2個處理組，每個處理組6個重復，每個重復13頭豬，試驗為期14天。
1.2試驗方法
嘔吐毒素組為斷奶仔豬日糧(長沙新起點生物科技有限公司，101a+b教槽料)中添加4mg/kg的嘔吐毒素(xiaoh,etal.effectsofcompositeantimicrobialpeptidesinweanlingpigletschallengedwithdeoxynivalenol:i.growthperformance,immunefunction,andantioxidationcapacity[j].journalofanimalscience,2013,91(10):4772-4780)；添加劑組(0.35％添加劑+4mg/kgdon)為斷奶仔豬日糧添加質量百分比0.35％實施例1所述的添加劑。
在試驗開始前與結束后對斷奶仔豬進行空腹稱重，同時前腔靜脈采血用于后續血清免疫指標與抗氧化指標檢測，記錄各組加料量，每天稱整個組余料量和損失料量，用于測定斷奶仔豬生長性能，包括平均日增重、平均日采食量和料肉比。血清免疫指標與抗氧化指標檢測方法參照發表的文獻進行檢測(xiaoh,etal.effectsofcompositeantimicrobialpeptidesinweanlingpigletschallengedwithdeoxynivalenol:i.growthperformance,immunefunction,andantioxidationcapacity[j].journalofanimalscience,2013,91(10):4772-4780)。飼養試驗結束后屠宰所有試驗的斷奶仔豬，采集結腸后迅速于無菌操作臺采集內容物用于腸道微生物培養的檢測，采集空腸中腸斷1厘米后迅速液氮速凍后用于空腸營養素轉運載體的熒光定量pcr檢測。結腸內容物微生物培養計數方法參照文獻進行(于文雅.日糧碳水化合物/油脂比對斷奶仔豬腸道微生物區系的影響[d].吉林農業大學,2015)，其中大腸桿菌培養采用伊紅美蘭瓊脂培養基于37℃培養48小時后進行菌落計數，乳酸菌則采用lbs培養基于37℃培養48小時后進行菌落計數。空腸營養素轉運載體的熒光定量pcr檢測方法參照已發表文獻進行(wul,etal.dietaryl-argininesupplementationprotectsweanlingpigsfromdeoxynivalenol-inducedtoxicity[j].toxins(basel),2015,7:1341-1354)。
試驗結果(見表1)表明，與4mg/kg嘔吐毒素對照組相比，添加本實施例的0.35％復方組合添加劑后，斷奶仔豬的平均日增重提高了6.49％，平均日采食量提高了2.62％，料肉比提高了3.64％，血清免疫球蛋白a含量提高了36.49％，血清免疫球蛋白g含量提高了21.43％，血清免疫球蛋白m含量提高了35.90％，血清丙二醛含量提高了23.70％，血清總抗氧化能力提高了30.51％，血清超氧化物歧化酶含量提高了49.43％，血清谷胱甘肽過氧化物酶含量提高了24.93％，結腸內容物中的大腸桿菌數量下降了10.64％，結腸內容物中乳酸桿菌數量提高了11.68％，空腸的溶質轉運載體家族7成員1slc7a1基因表達量提高了37.50％，空腸的溶質轉運載體家族7成員7slc7a7基因表達量提高了54.39％，空腸的鈉葡萄糖共轉運載體sglt1基因表達量提高了72.22％。因此，實施例1的試驗結果表明，添加本實施例的添加劑后，斷奶仔豬的生長性能、空腸的免疫能力、空腸的抗氧化能力、結腸中微生物含量與空腸營養素轉運載體(氨基酸轉運載體和葡萄糖轉運載體)等腸道健康指標均比4mg/kg的嘔吐毒素組好。
表1實施例1產品對斷奶仔豬生長性能等的改善效果
實施例2
一種緩解斷奶仔豬嘔吐毒素中毒的功能性復方飼料添加劑，其組分和質量百分比含量如下：功能性氨基酸類(精氨酸:0.8％、谷氨酸:0.4％、蛋氨酸:0.3％)、功能性微量元素(黃芩苷硒:2.5％、黃芩苷鋅:0.7％、黃芩苷銅:0.8％)、中藥提取物(黃芩苷：1.7％、葡萄籽原花青素：0.6％、朝鮮薊提取物：1.6％)、維生素類(維生素a：0.7％、維生素c：0.8％、維生素e：2.4％)、功能性多糖(酵母多糖：3.3％、黃芪多糖：4.6％、紫錐菊多糖：3.1％)、益生菌類(乳酸桿菌：0.3％、枯草芽孢桿菌：3.2％、屎腸球菌：0.2％)、沸石粉：72％。
該飼料添加劑的制備方法、應用試驗方法及試驗指標的檢測同實施例1，試驗結果見表2。與4mg/kg嘔吐毒素對照組相比，添加本實施例的0.35％復方組合添加劑后，斷奶仔豬的平均日增重提高了6.66％，平均日采食量提高了1.88％，料肉比提高了4.48％，血清免疫球蛋白a含量提高了42.11％，血清免疫球蛋白g含量提高了39.42％，血清免疫球蛋白m含量提高了40.91％，血清丙二醛含量提高了23.44％，血清總抗氧化能力提高了41.27％，血清超氧化物歧化酶含量提高了44.86％，血清谷胱甘肽過氧化物酶含量提高了28.67％，結腸內容物中的大腸桿菌數量下降了14.46％，結腸內容物中乳酸桿菌數量提高了12.55％，空腸的溶質轉運載體家族7成員1slc7a1基因表達量提高了40.18％，空腸的溶質轉運載體家族7成員7slc7a7基因表達量提高了67.92％，空腸的鈉葡萄糖共轉運載體sglt1基因表達量提高了65.06％。因此，實施例2的試驗結果表明，添加本實施例的添加劑后，斷奶仔豬的生長性能、空腸的免疫能力、空腸的抗氧化能力、結腸中微生物含量與空腸營養素轉運載體(氨基酸轉運載體和葡萄糖轉運載體)等腸道健康指標均比4mg/kg的嘔吐毒素組好。
表2實施例2產品對斷奶仔豬生長性能等的改善效果
實施例3
一種緩解斷奶仔豬嘔吐毒素中毒的功能性復方飼料添加劑，其組分和質量百分比含量如下：功能性氨基酸類(精氨酸:0.7％、谷氨酸:0.5％、蛋氨酸:0.5％)、功能性微量元素(黃芩苷硒:3.0％、黃芩苷鋅:1.5％、黃芩苷銅:1.0％)、中藥提取物(黃芩苷：2.0％、葡萄籽原花青素：1.2％、朝鮮薊提取物：1.3％)、維生素類(維生素a：1.0％、維生素c：1.0％、維生素e：3.0％)、功能性多糖(酵母多糖：4.0％、黃芪多糖：5.0％、紫錐菊多糖：3.3％)、益生菌類(乳酸桿菌：0.5％、枯草芽孢桿菌：4.0％、屎腸球菌：0.5％)、沸石粉：66％。
表3實施例3產品對斷奶仔豬生長性能等的改善效果
該飼料添加劑的制備方法、應用試驗方法及試驗指標的檢測同實施例1，試驗結果見表3。與4mg/kg嘔吐毒素對照組相比，添加本實施例的0.35％復方組合添加劑后，斷奶仔豬的平均日增重提高了8.41％，平均日采食量提高了3.53％，料肉比提高了4.50％，血清免疫球蛋白a含量提高了84.34％，血清免疫球蛋白g含量提高了31.29％，血清免疫球蛋白m含量提高了31.37％，血清丙二醛含量提高了25.76％，血清總抗氧化能力提高了40.30％，血清超氧化物歧化酶含量提高了47.46％，血清谷胱甘肽過氧化物酶含量提高了30.38％，結腸內容物中的大腸桿菌數量下降了11.68％，結腸內容物中乳酸桿菌數量提高了16.24％，空腸的溶質轉運載體家族7成員1slc7a1基因表達量提高了47.71％，空腸的溶質轉運載體家族7成員7slc7a7基因表達量提高了62.83％，空腸的鈉葡萄糖共轉運載體sglt1基因表達量提高了54.22％。因此，實施例3的試驗結果表明，添加本實施例的添加劑后，斷奶仔豬的生長性能、空腸的免疫能力、空腸的抗氧化能力、結腸中微生物含量與空腸營養素轉運載體(氨基酸轉運載體和葡萄糖轉運載體)等腸道健康指標均比4mg/kg的嘔吐毒素組好。
本發明所述的功能性復方飼料添加劑在仔豬飼料的添加量為3.2-3.7千克/噸，優選量為3.5千克/噸。從實施例1至實施例3的結果綜合來看，本發明涉及的復方添加劑成份中，功能性氨基酸、功能性微量元素、維生素類與中藥提取物均能提高斷奶仔豬的抗氧化能力與免疫能力，而功能性多糖與益生菌能提高調節腸道有益菌群的含量，緩解嘔吐毒素導致的腸道菌群紊亂，尤其以實施例3的效果最佳。從嘔吐毒素的毒性機理作用過程來說：嘔吐毒素隨著飼料進入斷奶仔豬的腸道后，能導致斷奶仔豬腸道與腸黏膜結構的氧化損傷與免疫機能降低，而日糧中添加本發明的添加劑后其中的功能性氨基酸類、功能性微量元素、中藥提取物、維生素類能促進斷奶仔豬腸道上皮細胞產生三磷酸腺苷來阻遏嘔吐毒素導致的氧化損傷與免疫機能下降，而功能性多糖與益生菌能幫助斷奶仔豬腸道內有益菌數量增加而調節嘔吐毒素導致的腸道菌群紊亂與腸道黏膜的免疫機能，以此調控腸道細胞內氧化應激、免疫機能與營養物質吸收轉運等信號通路的變化，促使斷奶仔豬腸道上皮細胞加速能量代謝、免疫機能恢復與營養物質吸收合成來緩解嘔吐毒素誘導的氧化損傷、免疫機能降低與腸道菌群紊亂，以此實現本發明添加劑對斷奶腸道與腸黏膜結構與功能緩解作用，最終促進斷奶仔豬生長性能的增加。