專利名稱：一種化合物升麻酰胺的制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種煙草香味改良劑的制備方法和應用，具體涉及一種從煙葉中分離得到的具有改善煙草香味的糖苷化合物升麻酰胺的制備方法和應用。
背景技術：
隨著“反吸煙”運動的高漲，吸煙與健康越來越受到社會關注，人們對低焦油低危害卷煙的需求日益迫切。卷煙香吃味是煙草品質的重要體現，但在降低焦油的同時會伴隨卷煙香味的損失。隨著減害降焦的深入推進，煙草行業對減害降焦帶來的香氣補償要求日益突出，因此，尋找提升卷煙香味的添加劑補償低焦油卷煙的香味損失是煙草行業急待解決的問題。目前，關于改善煙草吸食香味的有效物質種類較多，但大部分化合物的揮發性較強，在卷煙生產或儲存期間會因揮發逸出導致香氣損失。因此，尋找儲放穩定和釋香持續的煙草香味改善劑，特別是煙草本身含有的香味改善劑，對補償低焦油卷煙的香味損失、提高卷煙的香吃味品質具有十分重要的意義。上世紀70年代末，Green和Heckman等人發現煙草中非揮發性香味前體以糖苷形式存在，并且Anderson和Gunn , Kodama和Heckman分離出煙草中的糖苷類化合物并對其進行了描述。糖苷類化合物不具揮發性或揮發性很低，在加工和儲放條件下一般不會揮發損失，但在燃吸的劇烈條件下苷鍵斷裂釋放出香味成分，從而對煙氣香味產生貢獻，這些煙草糖苷化合物能與煙草本身的吸食香味調和，可以避免因直接添加增香劑造成的香味損失和破壞卷煙的煙草自然香韻，是煙草重要的香味來源和香味改善劑。1998年，日本專利 JP10-42846公開了一種從煙草中分離得到的糖苷化合物黑麥草內酯P -D-葡萄糖苷與煙香協調，具有使香氣圓潤、加強煙香、抑制刺激和釋香持續的效果。目前，關于煙草中糖苷結合態香味成分研究不多，這可能是一方面煙草中糖苷香味前體對煙草香吃味的影響沒有引起重視，另一方面，糖苷化合物作為煙草次生代謝產物，種類繁多，并且與寡糖、果膠、氨基酸、色素等物質性質非常接近，難與獲得標樣，因此，煙草糖苷定量分析、應用研究開發難度較大。因此，本發明以烤煙煙葉中的糖苷類化合物為研究對象，通過提取和分離，首次從煙葉中分離得到了具有改善煙草香味的糖苷化合物升麻酰胺，從而為改善卷煙香味品質提供了可實施的依據。

發明內容
鑒于此，本發明的目的在于為煙草提供一種具有提高煙香、圓潤煙氣和改善余味的煙草香味改良劑升麻酰胺及其制備方法和應用。為解決上述技術問題，本發明提供的技術方案是，提供一種化合物升麻酰胺的制備方法，具體內容包括升麻酰胺的提取分離，結構鑒定，改善煙草香味研究。(I)提取分離
步驟I. I)以烤煙煙葉為原料，經水或有機溶劑或它們的混合溶劑提取得到提取液；步驟I. 2)上述提取液經減壓濃縮后溶于水中，用石油醚萃取，石油醚萃取液用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取液用正丁醇萃取，上述萃取液均減壓濃縮；步驟I. 3)將正丁醇萃取物經大孔吸附樹脂、硅膠和C-18硅膠柱層析分離得到化合物。進一步地，步驟I. I)中提取時間為60分鐘至180分鐘。進一步地，步驟I. I)中有機溶劑用量為煙葉重量的8 12倍。
進一步地，所述有機溶劑為乙醇、甲醇或正丁醇。進一步地，所述硅膠為30-60目、60-100目、100-200目、200-300目或300目以上型號。將煙葉用95%乙醇熱提取三次，熱提取溫度為50°C 70°C，95%乙醇用量分別為煙葉重量的12、10和8倍，提取時間分別為180、120和90分鐘，提取液減壓濃縮后加水溶解，再依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，各部分萃取液減壓濃縮，正丁醇萃取液濃縮物經樹脂粗分后，再經300目硅膠和C-18反相硅膠柱層析分離后得到升麻酰胺。將煙葉用甲醇熱提取三次，熱提取溫度為50°C 70°C，甲醇用量分別為煙葉重量的12、10和8倍，提取時間分別為120、90和60分鐘，提取液減壓濃縮后加水溶解，再分別用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，萃取液減壓濃縮。正丁醇萃取物經樹脂粗分后，再經150 目硅膠和C-18反相硅膠柱層析分離后得到27毫克升麻酰胺。將煙葉用95%乙醇水溶液加熱提取，提取液經減壓濃縮后得到乙醇提取物。此提取物再溶于水制成混懸液，將上述混懸液用石油醚萃取，得到石油醚萃液，經減壓濃縮得到石油醚萃取物，將石油醚萃取物用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯萃取液，經減壓濃縮得到乙酸乙酯萃取物，將乙酸乙酯萃取物用正丁醇萃取得到正丁醇萃取液，經減壓濃縮得到正丁醇萃取物，取正丁醇萃取物利用大孔吸附樹脂進行粗分離，再利用硅膠和C-18硅膠進行進一步分離、純化，最終從煙草中得到化合物。(2)結構鑒定化合物升麻酰胺為白色粉末，熔點167 169°C，由HRESIMS譜即高分辨電噴霧電離質譜圖中的準分子離子峰m/z 528. 1846[M+Na]+和13C NMR譜即核磁共振圖中給出的25 個碳信號確定其分子式為C25H31NOltl，不飽和度為Il151H NMR圖譜低場苯環信號區域共有8個氫，其中 6 個氫 8 h7. 50 (1H，d，J = 8. 4Hz)，7. 17 (1H，d，J = 7. 9Hz)，7. 14 (1H，d，J = I. 5Hz)， 7. ll(lH，dd，J = 8. 4，I. 5Hz) ,6. 98(lH，d，J = I. 5Hz)和 6. 90(lH，dd，J = 7. 0，I. 5Hz)，其偶合裂分特征提示該結構中含有兩個ABX三旋體系，另外2個氫SH8.04(H，d，J= 15.6Hz) 和6.89(1H，d，J= 15.6Hz)為典型的一對反式雙鍵烯氫信號，同時在S H3. 66 (3H，s)和
3.71(3H，s)表明含有兩個甲氧基。13C NMR譜圖中位于S H102. 2,79. 2,78. 8,75. 1、71. 5和 62. 7的信號提示化合物結構中含有葡萄糖基團。13C NMR譜圖中剩余的信號8。164. 3，42.6 和36. 9提示該化合物為酰胺糖苷類化合物。該化合物的1h-nmr、13c-nmr、ms譜與文獻[相宇，李友賓，張健，李萍，姚源璋，豬毛菜中一新生物堿，藥學學報，2007，42 ￠) :618-620]報道一致，確定此化合物為該化合物為升麻酰胺3-[4-( P-D-吡喃葡糖氧基)-3-甲氧基苯基]-N-[2-(4-羥基-3-甲氧基苯基)
權利要求
1.一種化合物升麻酰胺的制備方法，其特征在于，包括以下步驟步驟I. I)以烤煙煙葉為原料，經水或有機溶劑或它們的混合溶劑提取得到提取液；步驟I. 2)上述提取液經減壓濃縮后溶于水中，用石油醚萃取，石油醚萃取液用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取液用正丁醇萃取，各部分萃取液均減壓濃縮；步驟I. 3)將正丁醇萃取物經大孔吸附樹脂、硅膠和C-18硅膠柱層析分離得到化合物； 該化合物為升麻酰胺3-[4-(β-D-吡喃葡糖氧基)-3-甲氧基苯基]-N-[2-(4-羥基-3-甲氧基苯基)乙基]-2-丙烯酰胺，其化學結構式如下
2.根據權利要求I所述的一種化合物升麻酰胺的制備方法，其特征在于，步驟I.I)中提取時間為60分鐘至180分鐘。
3.根據權利要求I所述的一種化合物升麻酰胺的制備方法，其特征在于，步驟I.I)中有機溶劑用量為煙葉重量的8 12倍。
4.根據權利要求I所述的一種化合物升麻酰胺的制備方法，其特征在于，所述有機溶劑為乙醇、甲醇或正丁醇。
5.根據權利要求I所述的一種化合物升麻酰胺的制備方法，其特征在于，所述硅膠為 30-60 目、60-100 目、100-200 目、200-300 目或 300 目以上型號。
6.根據權利要求I 5任一權利要求所述的一種化合物升麻酰胺的制備方法，其特征在于，將煙葉用95%乙醇熱提取三次，熱提取溫度為50°C 70°C，95%乙醇用量分別為煙葉重量的12、10和8倍，提取時間分別為180、120和90分鐘，提取液減壓濃縮后加水溶解， 再依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，各部分萃取液減壓濃縮，正丁醇萃取液濃縮物經樹脂粗分后，再經300目硅膠和C-18反相硅膠柱層析分離后得到升麻酰胺。
7.根據權利要求I 5任一權利要求所述的一種化合物升麻酰胺的制備方法，其特征在于，將煙葉用甲醇熱提取三次，熱提取溫度為50°C 70°C，甲醇用量分別為煙葉重量的 12、10和8倍，提取時間分別為120、90和60分鐘，提取液減壓濃縮后加水溶解，再分別用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，萃取液減壓濃縮。正丁醇萃取物經樹脂粗分后，再經150目硅膠和C-18反相硅膠柱層析分離后得到27毫克升麻酰胺。
8.根據權利要求I所述的化合物升麻酰胺在煙草中的改善香味的添加應用，其特征在于，用水、乙醇或水和乙醇的混合溶劑將升麻酰胺溶解稀釋后，均勻地噴灑加到煙絲、煙葉、 膨脹煙絲、薄片煙絲中。
9.根據權利要求8所述的化合物升麻酰胺在煙草中的改善香味的添加應用，其特征在于，將升麻酰胺添加到煙絲中時，其用量為煙絲重量的O. 0001% O. 1%。
10.根據權利要求9所述的化合物升麻酰胺在煙草中的改善香味的添加應用，其特征在于，將升麻酰胺添加到煙絲中時，其用量為煙絲重量的0.001% O. 01%。
全文摘要
本發明提供了一種化合物升麻酰胺的制備方法以及化合物升麻酰胺作為煙草香味改良劑的應用。以烤煙煙葉為原料，經水、有機溶劑或水和有機溶劑的混合溶劑提取，提取液經減壓濃縮后溶于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，萃取液減壓濃縮，將正丁醇萃取物經大孔吸附樹脂、硅膠和C-18硅膠柱層析分離得到該化合物。該化合物添加到煙絲、煙葉、膨脹煙絲、薄片煙絲中，能夠明顯提高煙香、圓潤煙氣和改善余味，提高煙草內在品質。本發明首次將升麻酰胺從煙草中提出，升麻酰胺化合物揮發性低，常溫下沒有香氣，只有在卷煙點燃時，該化合物糖苷健發生裂解后，釋放出香味成分，具有釋香持續的特點。
文檔編號A24B3/12GK102617663SQ201210059378
公開日2012年8月1日 申請日期2012年3月8日 優先權日2012年3月8日
發明者馮廣林, 周容, 李東亮, 李國友, 楊杰, 汪顯軍 申請人:川渝中煙工業有限責任公司