本發(fā)明涉及抗腫瘤藥物制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及化合物stemphol在制備抗腫瘤藥物中的新用途。

背景技術(shù)：

海洋環(huán)境的多樣性造就了海洋微生物的多樣性，海洋微生物的多樣性又使其具有多種多樣的代謝作用，且海洋共生真菌是長(zhǎng)期與宿主共同生活的一大類群的特殊微生物，因此，海洋共生真菌能提供多種多樣結(jié)構(gòu)類型的生物活性產(chǎn)物。

目前，癌癥是引起人類死亡的主要原因之一。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，2020年癌癥患病例將增至3000萬(wàn)，且新增癌癥患者主要集中在發(fā)展中國(guó)家。

在癌癥的各種治療手段中，藥物治療占重要地位。因此，抗癌藥物仍是多數(shù)藥企及科研機(jī)構(gòu)的研究熱點(diǎn)。海洋環(huán)境的特殊性及海洋微生物的多樣性，使得海洋微生物具有更大的潛力幫助人類發(fā)現(xiàn)新型的抗腫瘤活性天然藥物先導(dǎo)化合物。

文獻(xiàn)[shingomarumo,hiroyukihattori,masatokatayama.stempholfrompleosporaherbarumasaself-inhibitor.agric.bioi.chem.,1985,49(5),1521-1522]公開(kāi)了從枯葉格孢腔菌中制備化合物stemphol的方法以及其自我抑制功能。

公開(kāi)號(hào)為cn102372630a公開(kāi)了從矮莖紫金牛的根莖中分離得到了具有抗腫瘤活性的間苯二酚衍生物，結(jié)構(gòu)式為通式i所示，其中r為碳原子數(shù)目從十到十五之間的飽和或不飽和長(zhǎng)鏈取代基。體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)表明，所述間苯二酚衍生物對(duì)人前列腺癌pc-3、人肺癌a549、人胃癌sgc7901、人乳腺癌mcf-7、人胰腺癌panc-1、人肝癌smmc-7721、人神經(jīng)膠質(zhì)瘤u251等多種腫瘤細(xì)胞株有明顯的抑制作用，可制備成抗腫瘤藥物。

雖然公開(kāi)號(hào)為cn1954805a間苯二酚類化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用也公開(kāi)了間苯二酚類化合物具有抗腫瘤活性，但是該申請(qǐng)并沒(méi)有任何試驗(yàn)方法和數(shù)據(jù)證明二烷基間苯二酚類化合物stemphol具有抗腫瘤活性，且由于化學(xué)結(jié)構(gòu)，極性等因素影響，并不是任意取代基團(tuán)均具有相同的藥理活性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供化合物stemphol(2-丁基,5-戊基間苯二酚)的新用途，將其應(yīng)用于制備抗腫瘤藥物。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

本發(fā)明從海洋節(jié)肢動(dòng)物共生真菌po4中分離提取到活性化合物stemphol，結(jié)構(gòu)式如下：

所述化合物stemphol除了從上述途徑獲得，還可以通過(guò)化學(xué)合成或按照背景技術(shù)中提到的從枯葉格孢腔菌中制備得到。

體外試驗(yàn)表明，化合物stemphol在微克濃度(μg/ml)水平對(duì)人肺腺癌細(xì)胞株a549、人乳腺癌細(xì)胞株mcf-7具有強(qiáng)烈的細(xì)胞毒作用，有效抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。化合物stemphol具有作為抗腫瘤藥物的潛在用途。

本發(fā)明提供了化合物stemphol在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。所述腫瘤為肺腺癌或乳腺癌。

本發(fā)明在機(jī)理研究中發(fā)現(xiàn)，化合物stemphol在單獨(dú)作用時(shí)或與配體9-cis聯(lián)用時(shí)均能抑制維甲酸x受體(rxra)的轉(zhuǎn)錄活性，表明化合物stemphol可能是與rxra相互作用的小分子。

本發(fā)明提供了化合物stemphol在制備維甲酸x受體抑制劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了一種抗腫瘤藥物組合物，包含作為有效成分的化合物stemphol。

所述抗腫瘤藥物組合物，以有效劑量的化合物stemphol作為活性成分，添加藥學(xué)上可接受的輔料。

所述藥學(xué)上可接受的輔料包括淀粉、蔗糖、微晶纖維素等填充劑，淀粉漿、羥丙纖維素、明膠、聚乙二醇等粘合劑，硬脂酸鎂、微粉硅膠、聚乙二醇類等濕潤(rùn)劑，聚山梨脂、卵磷脂等吸收促進(jìn)劑，伯洛沙姆、脂肪酸山梨坦、聚山梨脂等表面活性劑，還可以加入香味劑、甜味劑等其它輔劑。

藥物的劑型可以是片劑、丸劑、粉劑、分散片、小藥囊劑、酏劑、混懸劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑、氣霧劑、膠囊、注射液、搽劑、栓劑等。上述各種劑型可采用常規(guī)方法進(jìn)行制備。

給藥途徑為腸內(nèi)給藥或非腸內(nèi)給藥，包括口服、肌肉注射、皮下注射、靜脈注射等。

本發(fā)明具備的有益效果：

本發(fā)明提供了化合物stemphol(2-丁基,5-戊基間苯二酚)在抑制腫瘤細(xì)胞增殖方面以及抑制維甲酸x受體轉(zhuǎn)錄活性方面的新用途，為研究開(kāi)發(fā)新型抗腫瘤藥物提供了一種先導(dǎo)化合物。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述，但本發(fā)明的實(shí)施不僅限于此。

實(shí)施例所用材料：海洋節(jié)肢動(dòng)物共生真菌po4。

人肺腺癌細(xì)胞株a549、人乳腺癌細(xì)胞株mcf-7。

實(shí)施例1

1、菌種的采集、分離及鑒定

2013年5月從浙江省舟山市朱家尖鎮(zhèn)東沙海域(e122°22'54”,n29°56'28”)采集活的海蟑螂(ligiaoceanic)，將其活體用無(wú)菌海水浸泡后解剖，將腸道截面接種于1/2pda培養(yǎng)基平板，待真菌生長(zhǎng)后，挑取各真菌群落平板劃線，置于28℃培養(yǎng)5～7天，根據(jù)菌落大小、形狀、顏色等培養(yǎng)形態(tài)差異進(jìn)行初步篩選并純化。將多次純化后的菌株接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面，接到20％甘油中，-80℃保存在浙江大學(xué)海洋學(xué)院海洋生物研究所。選取真菌po4作為研究對(duì)象，經(jīng)26srdna鑒定為格孢腔菌屬(pleosporasp.)。

2、海洋節(jié)肢動(dòng)物共生真菌po4的發(fā)酵培養(yǎng)

使用pdb培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵，每500ml錐形瓶中裝200ml的培養(yǎng)液，從28℃培養(yǎng)的pda培養(yǎng)基上取適量菌體，接種于2瓶pdb液體培養(yǎng)基中，于28℃靜置培養(yǎng)7天后作為種子液，適當(dāng)搖勻取4ml菌液接種于50瓶pdb培養(yǎng)液中，28℃靜置培養(yǎng)30天。

3、活性化合物的分離提取

將完成發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程的菌體和菌液混合物使用八層醫(yī)用脫棉紗布過(guò)濾，得到菌液和菌體，分別用乙酸乙酯萃取其菌液部分，用甲醇提取其菌體部分，提取物經(jīng)tlc和hplc分析顯示組分大致相同，合并得到7.8g的粗提物。將粗提物用10g柱層析硅膠拌樣，干法上樣至550g硅膠柱，采用梯度洗脫，洗脫順序?yàn)榄h(huán)己烷/乙酸乙酯100:1-1:1，然后二氯甲烷/甲醇90:10-1:1，每個(gè)比例用4l溶劑洗脫，利用tlc分析合并后，最終得到14個(gè)組分。從組分3分離得到目標(biāo)化合物stemphol(7.09mg)。

利用波譜、核磁等方法對(duì)目標(biāo)化合物結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，經(jīng)查閱文獻(xiàn)，確定該化合物為stemphol，結(jié)構(gòu)為：

實(shí)施例2化合物stemphol的抗腫瘤活性測(cè)定

采用mtt法進(jìn)行體外抗腫瘤活性測(cè)定。

細(xì)胞株：肺腺癌細(xì)胞株a549和乳腺癌細(xì)胞株mcf-7。

化合物stemphol對(duì)肺腺癌細(xì)胞株a549和乳腺癌細(xì)胞株mcf-7的抑制作用見(jiàn)表1。

表1：合物stemphol對(duì)肺腺癌細(xì)胞株a549和乳腺癌細(xì)胞株mcf-7的抑制作用

由表1可知，化合物stemphol對(duì)mcf-7和a549腫瘤細(xì)胞的ic50值分別為5.46和15.8μg/ml，由此可得，化合物stemphol對(duì)mcf-7和a549腫瘤細(xì)胞的增殖均有良好的抑制作用。

實(shí)施例3化合物stemphol抑制rxra轉(zhuǎn)錄活性的測(cè)定

化合物stemphol對(duì)rxra轉(zhuǎn)錄活性的抑制作用見(jiàn)表2。

表2：化合物stemphol對(duì)rxra轉(zhuǎn)錄活性的抑制作用

由表2可知，化合物stemphol在單獨(dú)作用和聯(lián)合9-cis時(shí)均能抑制rxra的轉(zhuǎn)錄活性，是潛在的可能與rxra相互作用的小分子。