專利名稱：一種具有護肝作用的復合劑及制備方法
技術領域：
本發明涉及醫藥保健品領域，具體涉及一種具有護肝作用的復合劑及制備方法。
背景技術：
目前，具有化學性肝損傷保護作用的保健食品主要為昂立系列的昂立多邦，九鹿回等產品，而這類產品的組方或以益生菌加少量中藥，或配以適量地維生素類，尚未有中藥與核酸配伍，適用范圍廣泛的護肝保健制劑。

發明內容
本發明所要解決的技術問題是充分發揮中藥的傳統優勢，與核酸配伍，制備一種劑量小，安全性大、適用于各種肝病防治和化學性肝損傷，功效顯著的護肝保健品。
本發明公開的具有護肝作用復合劑由重量百分比為40～100％的中藥活性成分、0～60％核酸類物質和0～20％藥用輔料組成，其中中藥活性成分由重量百分比為15～40％丹參提取物、5～30％枸杞提取物、5～30％茯苓提取物、5～20％桃仁提取物、5～20％山梔子提取物和5～10％陳皮提取物組成，中藥活性成份中丹參素的鑒別試驗結果為陽性。
丹參提取物含有活性成分丹參素，枸杞和茯苓提取物含有活性成分多糖，桃仁提取物含有活性成分苦杏仁甙，山梔子提取物含有活性成分梔子甙，陳皮提取物含有活性成分陳皮甙。
本發明所述核酸類物質為核酸、核酸降解產物或核酸復合物。核酸可以為DNA、RNA及其相應的鈉鹽；核酸降解產物可以為相應的核苷酸、核苷及其衍生物；核酸復合物可以為相應的核酸與蛋白質、核酸與氨基酸的復合物。
本發明所述的復合劑是指各類人體可接受的口服制劑，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、口服液等。
本發明所要解決的另一技術問題是提供上述護肝復合劑的制備方法。
本發明公開的護肝復合劑的制備方法包括下列步驟
1.丹參提取物制備
取丹參原藥材或飲片，加水5～15倍量，浸泡過夜，第二天于70～80℃溫浸提取2～5小時，過濾，保存濾液；
藥渣再加水6～10倍量，于70～80℃溫浸提取2小時，過濾，保存濾液；
合并二次濾液，于40℃減壓濃縮至相對密度1.10～1.15(40℃)，加95％乙醇至含量為60％，冷藏24小時；
取上層清液回收乙醇至無醇味(40℃)，繼續濃縮至相對密度1.20～1.25，于50℃真空烘箱中減壓干燥，取出干燥物，粉碎，即得丹參提取物，提取物相當于生藥的10～15％。
2.山梔、桃仁、陳皮提取物的制備
(1)取山梔、桃仁、陳皮，分別加6～10倍量、4～8倍量水，提取兩次，每次1～2小時，過濾，保存濾液，藥渣棄去；
(2)合并兩次濾液，減壓濃縮至相對密度1.25～1.30(70℃)，加乙醇至含醇量為60％，靜置24小時后過濾，收集濾液，減壓濃縮至相對密度1.30～1.35(60℃)，進行真空干燥，得到干浸膏后粉碎成干浸膏粉，分別得山梔、桃仁、陳皮提取物，提取物相當于生藥的10～15％。
3.枸杞子、茯苓提取物的制備
(1)取枸杞子、茯苓等分別加6～10倍量、4～8倍量水，提取兩次，每次0.5～2小時，過濾，保存濾液，藥渣棄去；
(2)合并兩次濾液，減壓濃縮至相對密度1.10～1.15(50℃)，加乙醇至含醇量為60％，靜置24小時后過濾，收集沉淀物，經真空干燥后粉碎成干粉，分別得枸杞、茯苓提取物，提取物相當于生藥的10～15％。
4.制劑的制備
按處方量分別加入上述中藥提取物、核酸類物質和藥用輔料，混勻，按常規方法制成口服制劑。
本發明所要解決的另一技術問題是公開上述復合劑在制備護肝保健品中的應用。
本發明公開的護肝保健品具有預防化學性肝損傷作用和一定的抗肝細胞脂質過氧化作用，可用于防治各型肝炎，脂肪肝，肝纖維化、早期肝硬化，還可增強免疫力，對肝癌的防治也有一定的作用。
本發明公開的護肝保健品可預防因化學性肝損傷的進一步發展所導致的肝纖維化，從而提高了化學性肝損傷保護作用的層次。從前瞻性研究而言，其具有更積極的意義。
本發明公開的護肝保健品口服劑量為每天1500～3000mg，以復合劑計。
本發明處方中丹參苦，微寒，入心，心包，肝經。功效活血化瘀，涼血消癰，養血安神。中藥藥理證實“丹參具有保肝作用實驗可見丹參可保護CCl4引起的肝損傷。主要通過增加肝臟血流量，改善肝臟微循環，以防止和減輕肝細胞病變和壞死。對于部分肝切除的動物，丹參能促進肝臟再生時的DNA合成和細胞分裂增值過程，具有促肝再生作用。”丹參的護肝作用不僅為學術界所普遍肯定，而且其研究正在不斷深入。本配方將丹參中的主要成分丹參素作為本產品的一個鑒別依據。
茯苓甘，淡，平；入心，脾，腎經。功效利水滲濕，健脾安神。藥理與應用認為“茯苓對四氯化碳所致的大鼠肝損傷有保護作用。”中藥藥理認為茯苓“對肝損傷有保護作用，可明顯降低ALT活性，防止肝細胞壞死。”
枸杞子甘，平，歸肝，腎經。功效養陰補血，益精明目。藥理與應用認為“枸杞子具有保肝作用對四氯化碳引起的肝損害有明顯的保護作用。”《本草御荒》指出“枸杞，子微寒，無毒。一云味甘平，子紅熟時亦可食。”
桃仁辛，苦，平，入肝，肺。大腸經。功效活血祛瘀，潤腸通便。著名老中醫王玉潤指出“實驗證明，桃仁提取物對提高肝組織膠原酶活性，促進肝內膠原的分解代謝以致血清中Pro-N-P含量增加，并使膠原代謝的分解產物從尿中排泄量增多；并能改善肝臟的血供狀態，具有抗纖維化的作用。”
山梔苦，寒，入心，肺，胃，肝經。功效清熱瀉火，燥濕除煩，涼血止血。藥理與應用認為山梔“其提取物有保肝，利膽，瀉下作用。”中藥藥理認為梔子還能減輕四氯化碳，半乳糖胺引起的肝損害，具有保護作用。
橘皮又名廣陳皮。辛，苦，溫，入脾，肺經。功效理氣健脾、燥濕化痰。《本草備要》中有陳皮“辛能散，苦能燥能瀉，溫能補能和，同補藥能補，同瀉藥能瀉，同升藥能升，同降藥能降，為脾肺氣分之藥，調中快膈，導滯消痰，利水破癥，宣通五臟”的記載，可以說概括了陳皮的功用。”
核酸在體內可降解為核苷與核苷酸，從而被人體所吸收和利用，核酸在保護肝臟、增強免疫等方面的功效已為有關專家所認可。在奶粉中加入核苷酸已為人們所接受，同樣，有關實驗證明在一組具有護肝作用的中藥配方中加入一定量的核酸有利于增強配方的護肝作用。
本制劑的中藥處方的組方理論是基于祖國醫學的治肝理論，采用養血柔肝、化瘀解毒、健脾理氣的治療原則，其組方為作者在長期臨床實踐中所創造的驗方。處方由丹參、枸杞子、茯苓、桃仁、山梔子為佐，陳皮為使。丹參具養血安神、活血化瘀。枸杞子養陰補血、益精明目。茯苓健脾滲濕。丹參配茯苓、枸杞子可養血柔肝，以扶其正。桃仁活血化瘀，以佐丹參祛瘀之功，山梔子苦寒，清熱瀉火，燥濕除煩，涼血止血。既可直接清利肝經濕熱蘊毒，又可佐丹參、桃仁化瘀而無出血之憂、止血又無留瘀之慮。陳皮健脾理氣以為諸藥之使。諸藥合用活血祛瘀而不傷正、清熱解毒而不損脾胃、柔肝養血健脾而不戀邪。可廣泛應用于肝病的各個階段。
本制劑運用現代中藥藥理學理論，重點提取每一味中藥的有效成分，并同時保留其他成分，以保證其完整性。方中主藥丹參提取丹參素，枸杞子、茯苓均提多糖，山梔子提取梔子甙，桃仁提取苦杏仁甙，陳皮提取陳皮甙，由于所提有效部位準確，提高配方功效有著十分顯著的作用。
本制劑成功地將運用祖國醫學理論創制的中藥處方與核酸兩者有機結合，使之產生良好的協同作用，增強功效。
本發明所用各中藥均為藥食兩用，安全無毒，可長期服用。
用本發明保肝制劑進行有關藥效學試驗，結果如下1.材料和方法1.1受試物
#1為本發明制劑，其中中藥提取物為50％，核酸為50％；
#2為本發明制劑，其中中藥提取物為80％，核酸為20％；
#3為本發明制劑，其中中藥提取物為100％，核酸為0％。1.2實驗動物
清潔級昆明種雄性小鼠，體重18～22g，由復旦大學醫學院實驗動物部提供，合格證號醫動字02-22-1。實驗期間，小鼠自由攝食、飲水，室溫保持在20±2℃。1.3實驗步驟
小鼠隨機分組，每組10只。每個樣品設2個劑量組，分別為300mg/kg.bw和900mg/kg.bw。各樣品組小鼠每日灌胃給予受試物，肝損傷對照組和陰性對照組小鼠給予蒸餾水，連續30天。動物每周稱重一次，以調整受試物灌胃量。于實驗第31天將各組動物隔夜禁食16小時，肝損傷對照組及各樣品組一次腹腔注射給予0.1％CCl410ml/kg.bw(分析純CCl4，以食用植物油稀釋)，陰性對照組給予等量植物油，各樣品組繼續給予受試物。24小時后動物眼眥靜脈取血，離心分離血清，并取肝臟0.5g，以生理鹽水制備10％肝勻漿，進行各項指標的檢測。同時留取肝臟左葉作病理組織學檢查。1.4檢測指標1.4.1血清谷丙轉氨酶(ALT)、血清谷草轉氨酶(AST)，用自動生
化分析儀測定。1.4.2肝組織中丙二醛(MDA)含量、肝組織中還原型谷胱甘肽
(GSII)含量，用南京建成生物工程研究所試劑盒測定。1.4.3肝臟病理組織學檢查。1.5數據處理
實驗數據用SPSS軟件和CPEPI軟件作統計分析。2.實驗結果2.1#1、#2、#3樣品對小鼠ALT和AST的影響
由表1可見，#1樣品300mg/kg.bw組小鼠的ALT明顯低于肝損傷對照組，差異具有統計學意義(P＜0.05)。
#1較#2、#3的ALT指標好，說明核酸具有提高中藥功效的作用。
表1 #1、#2、#3樣品各劑量組小鼠的ALT和AST(X±SD)
組別 動物數 ALT(U/L) AST(U/L) 肝損傷對照組 10 257±100 582±148#1300mg/kg組10 117±62*415±140#1900mg/kg組10 129±70 459±197#2300mg/kg組10 142±121 457±198#2900mg/kg組10 175±98 498±362#3300mg/kg組10 168±154 495±230#3900mg/kg組10 210±72 467±149
陰性對照組 10 42±10* 77±34*
*與肝損傷對照組相比，P＜0.05
用同一方法對#1樣品重復實驗一次，得到相似結果，見表2。
表2 #1樣品各劑量組小鼠的ALT和AST(X±SD)
組別 動物數 ALT(U/L) AST(U/L)
肝損傷對照組 10 318±128 654±193
90mg/kg組 10 322±152 544±404
300mg/kg組10 144±99* 409±208
900mg/kg組10 237±198 500±227
陰性對照組10 48±14* 82±44*
*與肝損傷對照組相比，P＜0.052.2#1、#2、#3樣品對小鼠GSII、MDA的影響
谷胱甘肽(GSII)是組織中主要的非蛋白質巰基化合物，其含量被認為是反映機體抗氧化能力的指標。而丙二醛(MDA)是細胞膜脂質過氧化的終產物之一，檢測其含量可間接估計脂質過氧化的程度。
由表3可見，#1、#2樣品900mg/kg.bw組小鼠的GSII高于肝損傷對照組，且MDA低于肝損傷對照組，差異具有統計學意義(P＜0.05)，提示#1、#2樣品具有一定的抗肝細胞脂質過氧化作用。
由表3對比#1、#2、#3 900mg/kg組可見核酸有一定的增強中藥組方功效的作用。
表3 #1、#2、#3樣品各劑量組小鼠的GSII、MDA(X±SD)
組別 動物數 GSII(mg/g prot.) MDA(μmol/g prot.) 肝損傷對照組 10 24.1±8.9 7.17±2.25#1300mg/kg組10 30.0±7.9 5.27±2.37#1900mg/kg組10 40.2±14.7* 4.56±1.10*#2300mg/kg組10 33.1±15.4 5.01±2.06#2900mg/kg組10 40.3±14.5* 4.48±1.51*#3300mg/kg組10 33.8±6.0 5.45±2.97#3900mg/kg組10 39.6±16.1 5.14±1.36 陰性對照組 10 64.4±19.0* 3.49±0.93*
*與肝損傷對照組相比，P＜0.05
用同一方法對#1樣品重復實驗一次。得到相似結果，見表4。
表4 #1樣品各劑量組小鼠的GSII、MDA(X±SD)
組別 動物數 GSII(U/L) MDA(U/L)
肝損傷對照組 10 28.1±12.0 8.27±2.61
90mg/kg組 10 22.0±6.3 6.51±3.29
300mg/kg組 10 38.4±13.8 7.12±4.34
900mg/kg組 10 43.2±17.2* 4.77±1.66*
陰性對照組 10 55.0±14.1* 3.78±1.17*
*與肝損傷對照組相比，P＜0.05
由表4可見，隨著劑量增加，抗脂質過氧化作用增強。2.3病理組織學變化
CCl4中毒可導致肝小葉中心性肝細胞的退行性病變和壞死，以肝細胞退行性病變為主。主要病變類型有氣球樣變、脂肪變性、胞漿凝聚和肝細胞壞死等。由表5、表6可見，#1樣品能減輕CCl4導致的氣球樣變和肝細胞壞死(P＜0.05)。
表5 實驗小鼠病理組織學檢查結果(1)
*與肝損傷對照組相比
表6 實驗小鼠病理組織學檢查結果(2)
*與肝損傷對照組相比2.4動物體重
小鼠實驗前后體重變化見表7。可見各組小鼠之間實驗前后的體重均無顯著性差異(P＞0.05)。
表7 #1、#2、#3樣品各劑量組小鼠實驗前后體重(X±SD)
組別 動物數 實驗前體重(g) 實驗后體重(g) 肝損傷對照組 10 20.2±2.5 33.1±3.8#1300mg/kg組10 20.9±1.5 33.6±4.2#1900mg/kg組10 20.3±1.6 33.7±4.4#2300mg/kg組10 20.5±1.7 35.7±5.3#2900mg/kg組10 20.5±1.5 33.3±3.7#3300mg/kg組10 20.1±2.1 34.0±4.7#3900mg/kg組10 20.3±1.8 33.8±4.4
陰性對照組 10 20.5±1.9 34.2±3.13.小結
四氯化碳(CCl4)在機體內可受肝微粒體酶活化成為三氯甲烷自由基(CCl3·)，后者與蛋白質共價結合可導致蛋白合成障礙、脂質分解代謝紊亂。CCl3·也能迅速與O2結合轉化為過氧化三氯甲烷自由基(CCl3O2·)導致脂質過氧化，從而引起細胞膜的損傷，致使酶滲漏以及各種類型的細胞變性和壞死。故肝損傷對照組小鼠的血清ALT、AST含量升高，肝組織中GSII含量降低、MDA含量上升，肝組織發生病理改變。
本實驗結果表明，#1樣品300mg/kg.bw組小鼠的ALT明顯低于肝損傷對照組，900mg/kg.bw組小鼠的GSH高于肝損傷對照組，且MDA低于肝損傷對照組，差異均具有統計學意義(P＜0.05)。病理組織學檢查結果顯示，#1樣品能減輕CCl4導致的氣球樣變和肝細胞壞死。上述結果提示，#1樣品具有預防化學性肝損傷作用。且核酸的加入具有提高中藥功效的作用。
經上述試驗證明本發明制劑具有下列作用(1)降低四氯化碳對肝損傷所致的血清ALT、AST含量的升高；(2)抗肝細胞脂質過氧化作用；(3)減輕四氯化碳導致的氣球樣變和肝細胞壞死。經統計學處理治療組與肝損傷對照組相比差異均具有統計學意義(P＜0.05)。
本發明護肝制劑還可加入其他中藥成分，如綠豆、五味子、何首烏、女貞子；或加入其他具有促進吸收和利用的協調物質，包括各類酶、維生素、礦物質、表面活性劑、酵母中提取的活性成分等等，制成各類制劑以增加或提高本發明制劑的作用。
本發明充分發揮中藥的傳統優勢，與營養素核酸配伍處方合理，功效確切，安全性大，適用于各種肝病防治，為肝病患者提供了一種可靠的保健品。
具體實施方式
實施例1中藥提取物制備(A)丹參提取物制備
取丹參原藥材或飲片，加水10倍，浸泡12小時后于70～80℃浸泡提取3小時，過濾，留取濾液。
藥渣再用8倍量水，于70～80℃浸泡提取2小時，過濾，留取濾液。合并兩次濾液，于40℃減壓濃縮至相對密度1.40～1.15(40℃)。加95％乙醇至含量為60％，冷藏24小時。取上清液回收乙醇至無醇味(40℃)，繼續濃縮至相對密度1.20～1.25，于50℃真空烘箱中減壓干燥，取出干燥物，粉碎，即得丹參提取物。(B)山梔、桃仁、陳皮提取物制備
取山梔、桃仁、陳皮，分別加8倍量、6倍量水，提取二次，每次1小時，過濾，留取濾液，藥渣去之。合并二次濾液，減壓濃縮至相對密度1.25～1.30(70℃)，加乙醇至醇含量為60％，靜止24小時后過濾，收集濾液，減壓濃縮至相對密度1.30～1.35(60℃)，真空干燥，取出干燥物粉碎，分別得到山梔、桃仁、和陳皮提取物。(C)枸杞子、茯苓提取物制備
取枸杞子、茯苓，分別加8倍量、6倍量水，提取二次，每次0.5小時，過濾，留取濾液，藥渣棄去。合并二次濾液，減壓濃縮至相對密度1.10～1.15(50℃)，加乙醇至醇含量為60％，靜止24小時后過濾，收集沉淀物。經真空干燥后粉碎成干粉。分別得到枸杞子和茯苓提取物。實施例2膠囊劑制備
配比
茯苓提取物20g
丹參提取物30g
枸杞子提取物 20g
桃仁提取物15g
山梔提取物10g
陳皮提取物5g
核酸 100g
二氧化硅 2g
微晶纖維素6g
硬脂酸鎂 2g
稱取實施例1制得的各味中藥提取物在混合器內混合均勻即得中藥總提取物，加入核酸及輔料，在混合器內混合20分鐘，裝入膠殼中即得。實施例3片劑的制備配比
茯苓提取物25g
丹參提取物20g
枸杞子提取物 30g
桃仁提取物10g
山梔提取物5g
陳皮提取物10g
核酸 20g
二氧化硅 2g
微晶纖維素6g
硬脂酸鎂 2g
制備方法同實施例2，混合后的原料直接壓片即得。實施例4顆粒劑制備
茯苓提取物 15g
丹參提取物 35g
枸杞子提取物 15g
桃仁提取物 5g
山梔提取物 20g
陳皮提取物 10g
二氧化硅 2g
微晶纖維素 6g
硬脂酸鎂 2g
制備方法同實施例2，混合后的原料直接制粒即得。
權利要求
1、一種具有護肝作用的復合劑，其特征在于該復合劑是由重量百分比為40～100％的中藥活性成分、0～60％核酸類物質和0～20％藥用輔料組成。
2、一種如權利要求1所述的具有護肝作用的復合劑，其特征在于其中所述的中藥活性成分由重量百分比為15～40％丹參提取物、5～30％枸杞提取物、5～30％茯苓提取物、5～20％桃仁提取物、5～20％山梔子提取物和5～10％陳皮提取物組成，中藥活性成份中丹參素的鑒別試驗結果為陽性。
3、一種如權利要求1所述的具有護肝作用的復合劑，其特征在于其中所述的核酸類物質為核酸、核酸降解產物或核酸復合物，核酸為DNA、RNA及其相應的鈉鹽，核酸降解產物為相應的核苷酸、核苷及其衍生物，核酸復合物為相應的核酸與蛋白質、核酸與氨基酸的復合物。
4、一種如權利要求1所述的具有護肝作用的復合劑，其特征在于該復合劑是指各類人體可接受的口服制劑。
5、一種如權利要求1所述的具有護肝作用的復合劑的制備方法，其特征在于該復合劑的制備包括下列步驟
A.丹參提取物制備
取丹參原藥材或飲片，加水5～15倍量，浸泡過夜，第二天于70～80℃溫浸提取2～5小時，過濾，保存濾液；藥渣再加水6～10倍量，于70～80℃溫浸提取2小時，過濾，保存濾液；合并二次濾液，于40℃減壓濃縮至相對密度1.10～1.15，40℃，加95％乙醇至含量為60％，冷藏24小時；取上層清液回收乙醇至無醇味，40℃，繼續濃縮至相對密度1.20～1.25，于50℃真空烘箱中減壓干燥，取出干燥物，粉碎，即得丹參提取物，提取物相當于生藥的10～15％；
B.山梔、桃仁、陳皮提取物的制備
(1)取山梔、桃仁、陳皮，分別加6～10倍量、4～8倍量水，提取兩次，每次1～2小時，過濾，保存濾液，藥渣棄去；
(2)合并兩次濾液，減壓濃縮至相對密度1.25～1.30，70℃，加乙醇至含醇量為60％，靜置24小時后過濾，收集濾液，減壓濃縮至相對密度1.30～1.35，60℃，進行真空干燥，得到干浸膏后粉碎成干浸膏粉，分別得山梔、桃仁、陳皮提取物，提取物相當于生藥的10～15％；
C.枸杞子、茯苓提取物的制備
(1)取枸杞子、茯苓等分別加6～10倍量、4～8倍量水，提取兩次，每次0.5～2小時，過濾，保存濾液，藥渣棄去；
(2)合并兩次濾液，減壓濃縮至相對密度1.10～1.15，50℃，加乙醇至含醇量為60％，靜置24小時后過濾，收集沉淀物，經真空干燥后粉碎成干粉，分別得枸杞、茯苓提取物，提取物相當于生藥的10～15％；
D.制劑的制備
按處方量分別加入上述中藥提取物、核酸類物質和藥用輔料，混勻，按常規方法制成口服制劑。
6、一種如權利要求1所述的復合劑在制備護肝保健品中的應用。
7、一種如權利要求6所述的復合劑在制備護肝保健品中的應用，其特征在于該復合劑具有預防化學性肝損傷作用和一定的抗肝細胞脂質過氧化作用，可用于防治各型肝炎，脂肪肝，肝纖維化，早期肝硬化，還可增強免疫力，對肝癌的防治也有一定的作用。
8、一種如權利要求6所述的復合劑在制備護肝保健品中的應用，其特征在于該復合劑口服劑量為每天1500～3000mg，以復合劑計。
全文摘要
本發明涉及一種具有護肝作用的復合劑及制備方法。本發明公開的具有護肝作用復合劑由重量百分比為40～100％的中藥活性成分、0～60％核酸類物質和0～20％藥用輔料組成，其中中藥活性成分為丹參、枸杞、茯苓、桃仁、山梔子和陳皮的提取物。本發明還公開了該復合劑的制備方法。本發明產品充分發揮中藥的傳統優勢，與核酸配伍，制備了一種劑量小，安全性大、適用于各種肝病防治和化學性肝損傷，功效顯著的護肝保健品。
文檔編號A61P1/00GK1416842SQ0113205
公開日2003年5月14日 申請日期2001年10月30日 優先權日2001年10月30日
發明者涂象毅, 張仲瑜, 祝其榮, 陳文亮, 徐春妹, 陸軍 申請人:上海中西藥業股份有限公司