專利名稱：一種青蒿素脂肪乳劑及其制備方法與應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及藥物制劑領域，具體涉及一種抗癌藥物青蒿素及其衍生物二氫青蒿素的脂肪乳劑。
背景技術：
青蒿素及其衍生物作為抗瘧為主要作用的藥物，現上市品種主要是作為片劑服用，以其療效確切、毒副作用低而廣為應用。隨著青蒿素及其衍生物的研究深入，青篙素及其衍生物的神奇的抗癌作用被發現，國內外大量實驗研究已表明，青蒿素及其衍生物對多種動物和人體腫瘤細胞有確切的抗癌作用。1991年中國科學院上海藥物研究所鄧定安首先報道了青蒿酸衍生物對小鼠白血病P388細胞有殺傷活性，并發現除對P388細胞有活性外，對人肝癌細胞SMMC7721和人胃癌細胞SGC7901均有活性，但對正常人胚肺細胞W138作用輕微，提示青蒿素衍生物有選擇性殺傷癌細胞的作用。鑒于青蒿素及其衍生物的確切抗癌作用，美國國家癌癥研究所已把其納入抗癌藥物篩選與抗癌活性研究計劃。美國華盛頓賴亨利教授公布了關于青篙素具有神奇的殺死癌細胞作用的信息。通過用患有嚴重骨癌的狗作試驗，用藥16小時后，幾乎所有癌細胞均死亡。
研究表明，動物口服青蒿素有較強的首過效應，與肌肉注射其油混懸劑比，相對生物利用度只有30％，生物效價低。因此我國科學家合成了大量的衍生物，如二氫青蒿素、蒿甲醚、青蒿琥酯等，提高了口服藥物的臨床療效。但同時也大大增加了青蒿素的原料成本。由于所有青蒿素及其衍生物都是通過在體內代謝成二氫青蒿素而發揮作用，而且通過臨床試驗證明，青蒿素的抗瘧效價在病人體內與體外試驗結果截然不同等劑量的青蒿素與雙氫青蒿素在病人體內的殺蟲效果無明顯區別，表明青蒿素進入體內后迅速轉化為雙氫青蒿素而發揮作用。因此如果作為注射給藥，青蒿素和二氫青蒿素在保證相同療效的前提下，相對其它青蒿素衍生物在原料來源和經濟成本上有較大的優勢。
由于青蒿素及其脂溶性衍生物不溶于水，在臨床作為注射制劑應用時需采用聚氧乙烯蓖麻油和無水乙醇(50∶50)作為助溶載體，易導致組織胺釋放使患者產生嚴重的過敏反應與毒副作用。另外由于青蒿素轉化成二氫青蒿素后在體內的半衰期短，作用時間維持時間較短。現雖有青蒿素及其脂溶性衍生物的乳劑的制備方法(專利申請號200410023737.1)的專利申請，但該申請的專利為微乳，其配方和制備方法脫離藥劑學的常理，按其專利范圍中的配方和制備方法進行試驗，也難以制備出其專利所描述的乳劑或微乳。

發明內容
本發明的目的在于克服現有青蒿素及其衍生物在治療上存在的問題，將青蒿素及其衍生物溶于脂肪乳油相中，并使其穩定地包封于脂肪乳油相中，使制成長期放置后藥物不析出、且不產生分層、穩定性好、符合靜脈注射用標準的脂肪乳劑。
本發明的另一個目的是提供上述脂肪乳劑的制備方法。
本發明的進一步目的是提供上述脂肪乳劑在制備用于治療癌癥或惡性瘧疾的藥物中的應用。
為了實現上述目的，本發明采用下述技術方案一種脂肪乳劑，含有青蒿素或其衍生物二氫青蒿素或兩者的混合物。該脂肪乳劑具體由如下組分及重量百分數組成青蒿素或二氫青蒿素或其混合物 0.01％～0.5％注射用油 5～30％乳化劑 1～10％增溶劑 1～20％等滲劑 0.5～6％水 余量。
上述注射用油為大豆油、茶油、麻油中長鏈脂肪酸酯、橄欖油中的一種或幾種的混合物。
上述乳化劑為磷脂、普羅流尼中的一種或二種的混合物；所述磷脂為大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂或合成磷脂。
上述增溶劑為聚乙二醇、聚維酮、羥丙基3-環糊精中的一種或幾種的混合物。
上述等滲劑為甘油、葡萄糖或木糖醇。
該脂肪乳劑的制備方法，包括如下步驟(1)取注射用油、青蒿素或二氫青蒿素于40～60℃混合并使青蒿素或二氫青蒿素溶解，加入乳化劑，混合形成混合液A；
(2)將注射用水、等滲調節劑于40～80℃與增溶劑混合，形成水相B；(3)將水相B與混合液A混合，在40～80℃高速分散后機械攪拌0.5～2小時制成初乳，調節pH至4～8后，再進行高壓勻質，制得含青蒿素或二氫青蒿素的脂肪乳劑。
所得青蒿素靜脈注射脂肪乳劑中的乳劑粒徑分布范圍為10％的乳劑粒徑＜100nm；25％的乳劑粒徑＜200nm、50％的乳劑粒徑＜350nm、99％的乳劑粒徑＜500nm。產品性狀為白色乳狀液體，含藥量為0.1～5mg/ml，可用于靜脈注射，產品規格為20～200ml/瓶。可靜脈注射。
本發明制成的載藥脂肪乳可以延長半衰期，并有一定的靶向性。增強了青蒿素及其衍生物二氫青蒿素對癌組織的靶向性，減少對人體正常細胞造成的毒副作用，為廣大癌癥患者提供一種療效確切、毒副作用小的青蒿素及其衍生物的載藥靜脈注射脂肪乳劑，既可靜脈注射用藥也可作口服用藥。主要用于白血病、乳腺癌，也可用于肺、肝、淋巴等系統腫瘤的和惡性瘧疾的治療。
本發明與現有技術相比，具有如下有益效果1、既能發揮青蒿素抗腫瘤的效果，也加入適量的脂肪油作為營養補充劑，適用于危重腫瘤病人急救和腫瘤病人術后營養補充。
2、藥物直接進入人體血液，起效快，吸收較完全。避免了藥物的首過效應，提高了青蒿素及二氫青蒿素的生物利用度，較大限度的發揮藥物的療效，可以與體液(特別是血液)相混合，有效增加了藥物的穩定性；
3、由于青蒿素和二氫青蒿素不溶于水，因此青蒿素和二氫青蒿素作為抗癌藥物，較適宜制備成靜脈注射乳劑，藥物可被動定向濃集在富含吞噬細胞的肝、脾、淋巴系統等部位，不僅可實現靶向給藥，并且具有潛在的緩釋作用，由于r＜1000nm而不易被網狀皮質系統攝取，達到“長循環”的功效。
4、在青蒿素及其系列衍生中以青蒿素和二氫青蒿素的原料易得，生產成本較低，其中又以青蒿素的成本最低，并且工藝簡單，原料易得。可用常規的生產設備和工藝制備，適合于具GMP生產注射劑的藥廠大規模地投入批量生產，有較大的市場開發價值。
具體實施例方式
實施例1將注射用大豆油20g、青蒿素160mg投入到容器中，將該容器置于水浴中，加熱至50℃，攪拌至藥物分散溶解，降溫至40℃，投入卵磷脂2.5g攪拌至磷脂溶解，混和均勻；將注射用水170ml置于另一容器中，甘油2.5g于50℃攪拌溶解形成水相；將含有青蒿素、大豆油和卵磷脂的混和液在40℃、機械攪拌下與含有甘油的水相混和，加注射用水至200ml，并在40℃下繼續高速攪拌1個小時制成初乳，調節pH值至6；將制得的初乳移入高壓均質機，勻化到乳滴粒徑檢查合格為止；將乳液灌裝，通氮、壓蓋；用旋轉高壓滅菌器進行121℃，F0為20的條件下滅菌。即制成80mg./100ml的青蒿素脂肪乳靜脈注射液制劑。
實施例2
將注射用大豆油150g、青蒿素1200mg投入到容器中，將該容器置于水浴中，加熱至55℃，攪拌至藥物分散澄清，降溫至50℃，投入卵磷脂25g攪拌至磷脂溶解，混合均勻。將注射用水750ml置于另一容器中聚乙二醇15g、甘油25g于50℃攪拌溶解形成水相。將含有青蒿素、大豆油和卵磷脂的混和液在50℃、機械攪拌下與含有甘油、聚乙二醇的水相混和，加注射用水至1000ml并在50℃下繼續高速攪拌1個小時制成初乳。將制得的初乳移入高壓均質機，勻化到乳滴粒徑檢查合格為止；再將乳液灌裝，通氮、熔封；用旋轉高壓滅菌器進行滅菌。即制成120mg/100ml的青蒿素脂肪乳靜脈注射液制劑。
實施例3將注射用大豆油200g、青蒿素1600mg投入到容器中，將該容器置于水浴中，加熱至60℃，攪拌至藥物分散澄清，降溫至50℃，投入25g卵磷脂攪拌至磷脂溶解形成均勻混和相。將注射用水700ml置于另一容器中，羥丙基β-環糊精30g、甘油25g于60℃攪拌溶解形成水相。將含有青蒿素、大豆油和卵磷脂的混和液在60℃、機械攪拌下與含有甘油、羥丙基β-環糊精的水相混和，加注射用水至1000ml，并在55℃下繼續機械攪拌1個小時制成初乳。將制得的初乳移入高壓均質機，勻化到乳滴粒徑檢查合格為止；再將乳液灌裝，通氮、熔封；用旋轉高壓滅菌器進行121℃，F0為20的條件下滅菌。即制成160mg/100ml的青蒿素脂肪乳靜脈注射液制劑。
實施例4將注射用大豆油300g、青蒿素4600mg投入到容器中，將該容器置于水浴中，加熱至60℃左右，攪拌至藥物分散澄清，降溫至50℃，投入35g卵磷脂攪拌至磷脂溶解形成均勻混和相。將注射用水600ml置于另一容器中，羥丙基β-環糊精35g、甘油25g于70℃攪拌溶解形成水相。將含有青蒿素大豆油和卵磷脂的混和液在60℃、機械攪拌下與含有甘油、羥丙基β-環糊精和卵磷脂的水相混和，加注射用水至1000ml，并在55℃下繼續機械攪拌1個小時制成初乳。將制得的初乳經高速分散機分散，移入高壓均質機，勻化到乳滴粒徑檢查合格為止；再將乳液灌裝，通氮、熔封；用旋轉高壓滅菌器進行121℃，F0為20的條件下滅菌。即制成460mg/100ml的青蒿素脂肪乳靜脈注射液制劑。
實施例5將注射用大豆油100g、二氫青蒿素900mg投入到容器中，將該容器置于水浴中，加熱至55℃左右，攪拌至藥物分散，降溫至45℃.投入15g卵磷脂攪拌至磷脂溶解形成均勻混和相。將注射用水800ml置于另一容器中甘油25g、羥丙基β-環糊精24g于45℃攪拌溶解形成水相。將含有二氫青蒿素、大豆油和卵磷脂的混和液在45℃機械攪拌下與上述水相混和，加注射用水至1000ml并在45℃下繼續機械攪拌1個小時制成初乳。將制得的初乳移入高壓均質機，勻化到乳滴粒徑檢查合格為止；再將乳液灌裝，通氮、熔封；用旋轉高壓滅菌器進行滅菌。即制成90mg/100ml的二氫青蒿素脂肪乳靜脈注射液制劑。
實施例6 對本發明脂肪乳劑進行安全性試驗1、血管刺激性實驗
試驗方法每日給家兔靜脈注射2.3ml/Kg供試品(按臨床用藥量折算)，連續三次后，解剖動物血管作病理切片觀察，無組織變性或壞死等顯著刺激反應。
2、溶血性實驗按新藥研究安全性試驗指導原則的方法進行，無溶血現象出現。
3、全身過敏性實驗按《中華人民共和國藥典》的方法規定進行試驗，試驗結果第14天及21天動物后未出現豎毛、噴嚏、干嘔、咳嗽、呼吸困難、啰音、抽搐、虛脫等現象，表明青蒿素脂肪乳豚鼠全身過敏性試驗結果為陰性，本品無致敏性。
4、熱原檢查試驗方法參照中國藥典2000版附錄XIIIA熱原檢查法進行試驗結果表明青蒿素注射脂肪乳對家兔血管和肌肉均無刺激性，對豚鼠試驗無過敏性，對大鼠無被動皮膚皮膚過敏性，無溶血性與家兔熱原檢查符合藥典規定的標準。表明注射用載藥青蒿素靜脈脂肪乳(50mg/ml)符合安全性指標的要求。
5、青蒿素靜脈乳劑的穩定性試驗采取新鮮制備的脂肪乳，置于具塞離心管中，4000rpm離心15min后，未發現分層，也未見藥物沉淀析出。室溫陰涼處貯存一年，乳劑外觀、粒徑、Zeta電位等理化性質以及含量均未發生明顯變化，表明乳劑穩定。
實施例7 本發明的體外抗腫瘤實驗實驗材料人白血病細胞株K562，陽性對照藥阿霉素。
試劑青蒿素，純度99.18％，配制5mmol/L儲存液，避光4℃保存。用前由RPMI21640稀釋至所需濃度。Fluo23/AM(Sigma)。RPMI21640培養基含10％的新生牛血清，青霉素、鏈霉素各100U/ml。
實驗方法細胞培養細胞株K562，培養液，37℃、5％CO2孵箱中，常規傳代培養。24h后進入實驗。
實驗結果表1、青蒿素脂肪乳體外對腫瘤細胞K562生長抑制試驗

實施例8 本發明的體內抗腫瘤實驗實驗方法分別取生長旺盛的小鼠肝癌(QGY)腫瘤、小鼠肉瘤180，用生理鹽水勻漿制備成不同濃度的細胞懸液，接種于裸鼠右腋部皮下，0.2ml～5ml/鼠，于接種后次日隨機分組并開始給藥。接種后約10～30d解剖動物，取瘤稱重，計算瘤重抑制率。
陽性對照組給予環磷酰胺，取藥液20ml加注射用水20ml，稀釋成2.5mg/ml的藥液。小鼠陽性對照組的用量為體重30mg/kg。
試驗樣給予注射用青蒿素脂肪乳劑和二氫青蒿素。規格0.1mg/ml，設2個劑量組。
表2、青蒿素脂肪乳對人體肝癌(QGY)瘤的抑瘤率比較

表3、二氫青蒿素脂肪乳對小鼠肉瘤180的抑瘤率比較

權利要求
1.一種脂肪乳劑，其特征在于含有青蒿素或其衍生物二氫青蒿素或兩者的混合物。
2.根據權利要求1所述的脂肪乳劑，其特征在于所述脂肪乳劑由如下組分及重量百分數組成青蒿素或二氫青蒿素或其混合物0.01％～0.5％注射用油 5～30％乳化劑1～10％增溶劑1～20％等滲劑0.5～6％水余量。
3.根據權利要求2所述的脂肪乳劑，其特征在于所述注射用油為大豆油、茶油、麻油中長鏈脂肪酸酯、橄欖油中的一種或幾種的混合物。
4.根據權利要求2所述的脂肪乳劑，其特征在于所述乳化劑為磷脂、普羅流尼中的一種或二種的混合物。
5.根據權利要求2所述的脂肪乳劑，其特征在于所述增溶劑為聚乙二醇、聚維酮、羥丙基β-環糊精中的一種或幾種的混合物。
6.根據權利要求4所述的乳化劑，其特征在于所述磷脂為大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂或合成磷脂。
7.根據權利要求2的脂肪乳劑，其特征在于所述等滲劑為甘油、葡萄糖或木糖醇。
8.一種權利要求2所述脂肪乳劑的制備方法，包括如下步驟(1)取注射用油、青蒿素或二氫青蒿素于40～60℃混合并使青蒿素或二氫青蒿素溶解，加入乳化劑，混合形成混合液A；(2)將注射用水、等滲調節劑于40～80℃與增溶劑混合，形成水相B；(3)將水相B與混合液A混合，在40～80℃高速分散后機械攪拌0.5～2小時制成初乳，調節pH至4～8后，再進行高壓勻質，制得含青蒿素或二氫青蒿素的脂肪乳劑。
9.權利要求1所述脂肪乳劑在制備用于治療癌癥或惡性瘧疾的藥物中的應用。
10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于所述脂肪乳劑在制備用于治療白血病、乳腺癌，肺、肝、淋巴腫瘤的藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種青蒿素脂肪乳劑及其制備方法與應用。本發明的青蒿素脂肪乳劑包括注射用油、乳化劑、增溶劑、增溶劑、等滲劑，使得青蒿素或二氫青蒿素在脂肪油相中溶解，使其包封于脂肪乳油相中，穩定性好，藥效增強，起到緩釋和靶向給藥作用，藥物在血液中的駐留時間延長，生物效價顯著提高。
文檔編號A61K31/357GK1771909SQ20051010050
公開日2006年5月17日 申請日期2005年10月26日 優先權日2005年10月26日
發明者裴蕾, 李啟燕 申請人:裴蕾