專利名稱：納米止血貼的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其涉及一種新型納米止血貼。
背景技術(shù)：
目前，局部止血劑多為模仿或放大凝血過程的一個(gè)或多個(gè)步驟，臨床常用的有明膠海綿、氧化纖維素和氧化再生纖維素、纖維蛋白膠和殼聚糖等。明膠海綿通過吸附創(chuàng)面血液，破壞血小板形成凝血的網(wǎng)架，封閉血管裂口或創(chuàng)面；由于需要機(jī)體的凝血因子參與才能獲得最后的止血結(jié)果，故對凝血機(jī)制障礙者效果欠佳。氧化纖維素和氧化再生纖維素則通過與血紅蛋白發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，凝結(jié)成血凝塊樣的物質(zhì)，覆蓋于出血創(chuàng)面而達(dá)止血目的；但是這兩種纖維的酸性能破壞凝血酶的止血作用。纖維蛋白膠因其優(yōu)良的組織相容性及止血效果，在臨床上得到廣泛的應(yīng)用。但是纖維蛋白膠成本高、儲存及使用較復(fù)雜，并且止血速度慢，對大血管出血止血成功率低，還可能帶來人體或動物血源性疾病感染。
針對當(dāng)前局部止血劑的缺點(diǎn)，申請人曾經(jīng)嘗試研制出了纖維蛋白帖，雖然克服了纖維蛋白膠等止血劑的上述缺點(diǎn)，以適應(yīng)手術(shù)及急救止血的需要。但是動物實(shí)驗(yàn)及臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)前的纖維蛋白帖有以下不足1.臨床應(yīng)用中力學(xué)性能較差、易降解，因而影響止血效果和使用的安全性；2.纖維蛋白貼中蛋白穩(wěn)定性較弱，常溫下不能儲存；3.不能用作藥物載體，如在腫瘤切除術(shù)中不能用作局部化療的載體等。
因上述原因而限制了其在臨床上的推廣使用。
殼聚糖為天然生物材料，可以在體內(nèi)降解為安全無毒的氨基葡萄糖，無抗原性，具有優(yōu)良的生物相容性；殼聚糖是自然界中唯一帶正電荷的氨基葡萄糖，因其獨(dú)特的理化結(jié)構(gòu)，使得殼聚糖能通過與紅細(xì)胞膜之間的電荷作用凝集紅細(xì)胞而止血，而且止血機(jī)理不依賴于凝血因子及血小板，能介導(dǎo)肝素化病人血液的凝固，對血小板功能不佳患者亦有效。在凝血酶的酶固定化方面，殼聚糖因有N末端的α-氨基，可用交聯(lián)劑將之與凝血酶形成希夫堿，從而顯示出特殊的固定化效應(yīng)。
隨著納米技術(shù)的發(fā)展研究，納米級殼聚糖等有N末端的α-氨基的材料現(xiàn)已被認(rèn)為是一類極具應(yīng)用前景的藥物控釋載體，特別適用于具有生物活性大分子藥物的包埋和釋放；同時(shí)，殼聚糖納米微粒具有附著在生物體粘膜表面的特性；殼聚糖制成納米微粒后，可固定化凝血酶，還可作為化療藥物、抗菌藥物、生長因子等藥物的載體，起到降低生物制品的保存條件、減小抗原性及藥物緩釋作用。
如何將納米技術(shù)及現(xiàn)代生物技術(shù)相結(jié)合，運(yùn)用酶固定化技術(shù)，制備新型的納米級多功能止血貼便成為當(dāng)前該領(lǐng)域亟待研究和探索的重要課題。

實(shí)用新型內(nèi)容本實(shí)用新型的主要目的在于提供一種操作方便、無需繁瑣的準(zhǔn)備工作、使用安全可靠、能起到快速止血、加速創(chuàng)面愈合、并且可作為藥物載體的多功能止血材料的制備方法。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本實(shí)用新型采用如下技術(shù)方案本實(shí)用新型納米止血貼，包括支撐層和止血層，止血層附著在支撐層的一面，其中，所述止血層包括凝血酶和聯(lián)結(jié)物的止血混合物，所述聯(lián)結(jié)物呈納米級大小。
所述支撐層的另一面還設(shè)置有載藥層，該載藥層包括有所述呈納米級大小的聯(lián)結(jié)物與治療藥物的治療混合物。
所述聯(lián)結(jié)物為殼聚糖、甲殼素、明膠顆?；蛭⒛z原蛋白中任意一種。
所述支撐層為膠原海綿、殼聚糖海綿或氧化纖維素。
所述支撐層的厚度為0.4～1cm。
所述止血層與支撐層的密度大致均為載藥層密度的1/2。
所述止血層每平方厘米至少存在10～15mg的止血混合物。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實(shí)用新型具有如下優(yōu)點(diǎn)1.按本實(shí)用新型與機(jī)體生物相容性好、無毒副作用，在體內(nèi)可徹底降解；撕開包裝即可應(yīng)用，使用方便、快捷；凝血酶為納米級聯(lián)結(jié)物尤其是殼聚糖所固定化，物理及化學(xué)穩(wěn)定性大為提高，可于常溫下儲存運(yùn)輸，價(jià)格低廉；2.內(nèi)層(止血層)及中層(支撐層)疏松(如密度為0.004-0.008g/cm2)，外層相對致密(如密度為0.008-0.0015g/cm2)，形成特殊的內(nèi)密外疏的結(jié)構(gòu)，可增強(qiáng)止血貼的虹吸作用，快速吸收組織滲液；并有較好的黏附性，可用于相對濕潤及蠕動器官的手術(shù)創(chuàng)面；
以下結(jié)合附圖，對本實(shí)用新型的具體實(shí)施方式
作進(jìn)一步的說明。

圖1為應(yīng)用本實(shí)用新型方法所生產(chǎn)的產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)示意圖，其中黑點(diǎn)表示該層的密度，黑點(diǎn)越多表明其密度越大，反之則越小。
具體實(shí)施方式請參閱圖1，本實(shí)用新型納米止血貼，包括支撐層和止血層1，止血層附著在支撐層2的正面，止血層1包括凝血酶和聯(lián)結(jié)物的止血混合物，所述聯(lián)結(jié)物呈納米級大小。支撐層2的反面則設(shè)置有載藥層3，該載藥層3包括有所述呈納米級大小的聯(lián)結(jié)物與治療藥物的治療混合物。
所述聯(lián)結(jié)物為殼聚糖、甲殼素、明膠顆粒或微膠原蛋白中任意一種。
所述支撐層2為膠原海綿、殼聚糖海綿或氧化纖維素。
所述支撐層2的厚度為0.4～1cm。止血層1與支撐層2的密度大致均為載藥層3密度的1/2。
下面說明本實(shí)用新型的制作方法1.用聚電解質(zhì)的離子凝膠反應(yīng)制作納米級殼聚糖固定化凝血酶殼聚糖作為聯(lián)結(jié)物，其具有N末端的α-氨基。將凝血酶與殼聚糖共混、溶解，加入三聚磷酸鈉作為交聯(lián)劑并進(jìn)行攪拌，嚴(yán)格控制溫度于10℃以下，pH值在4-7.3之間，或者更精確地控制在4.2-4.8之間，制備納米級殼聚糖固定化凝血酶；2.將從動物肌腱中提取的膠原蛋白溶液(膠原的量為溶液重量的4％)倒入平底托盤中，液體高0.4-1cm，真空冷凍干燥，得厚度呈0.4-1cm左右的膠原海綿作為支撐層2，所述支撐層2亦可用明膠海綿、殼聚糖海綿、氧化纖維素等生物相容性及止血效果好的材料代替；3.按步驟1制作殼聚糖載藥納米粒，分別包封抗菌藥物、抗癌藥物、生長因子等，加入葡萄糖酸鈣或氯化鈣等交聯(lián)劑，制備藥物-納米粒載藥懸浮液；4.將藥物-納米粒載藥溶液倒入平底盤中，使支撐層2即膠原海綿的一面如反面與懸浮液接觸，對其迅速于低溫下真空干燥，消毒便形成附著或滲浸入膠原海綿的載藥層3；5.將纖維蛋白原、殼聚糖固定化凝血酶干粉溶解于無水乙醇攪拌成均勻的懸浮液，每1毫升無水乙醇中加入10～15mg混合干粉，震蕩使懸浮顆粒均勻分布；6.將均勻分布的懸浮液倒入平底盤中，使膠原海綿的一面與懸浮液接觸，懸浮液中的顆粒黏附在膠原海綿上，每平方厘米的膠原海綿上黏附有10～15mg混合干粉顆粒，對粘附有混合干粉顆粒的膠原海綿抽真空干燥即可在支撐層2即膠原海綿的正面形成止血層1，從而形成具體的產(chǎn)品。
實(shí)際應(yīng)用中，也可只將止血層1生成于支撐層2上，不必增設(shè)載藥層3，如此所生成的產(chǎn)品便只具有止血功效，而不具備治療功效。
上述制作殼聚糖納米粒是殼聚糖季銨鹽納米體系，該體系制作工藝成熟，產(chǎn)物生物相容性好，有一定的黏附性，且可作為多種藥物的載體。同時(shí)，隨著舊材料的改型及新材料的研發(fā)，殼聚糖納米粒亦可為甲殼素、明膠顆粒、微膠原蛋白等材料所替代。
上述凝血酶、纖維蛋白原、膠原蛋白來自豬，制備方法如下(1)以豬血為原料，經(jīng)過高速離心，過濾、冷凍得到固體目的蛋白，再經(jīng)過純化水溶解，添加輔助物質(zhì)，去病毒、無菌過濾獲得纖維蛋白原溶液。
(2)以豬血為原料，經(jīng)過高速離心，硫酸鋇沉淀、鹽溶液洗脫、脫鹽、氯化鈣激活濃縮，加保護(hù)劑，去病毒、無菌過濾、得到凝血酶溶液。
(3)以豬肌腱為原料，清洗去油脂 破碎，獲得膠原，酸性水溶液溶解離心獲得膠原蛋白溶液。
由于膠原海綿的外面與內(nèi)面分別與藥物-納米粒載藥交聯(lián)懸浮液及纖維蛋白原、殼聚糖固定化凝血酶無水乙醇懸浮液冷凍干燥，形成了特殊的分層結(jié)構(gòu)內(nèi)層較疏松，由纖維蛋白原、殼聚糖固定化凝血酶及膠原蛋白構(gòu)成，起止血作用；外層是藥物-納米粒載藥交聯(lián)層，可作為藥物載體攜帶藥物。
下面以殼聚糖為例介紹幾種利用本實(shí)用新型的方法制造形成相應(yīng)產(chǎn)品的過程過程一(1)將殼聚糖季銨鹽0.1g，加入0.1g的氧氟沙星及生理鹽水10ml制成溶液，然后將4ml的濃度為0.5mg/ml三聚磷酸鈉水溶液加入到溶液中，嚴(yán)格控制反應(yīng)條件，攪拌生成納米粒子(粒徑50～200nm)懸浮液。純化后加入1％氯化鈣溶液1ml，裝入平底盤中；(2)使膠原海綿的一面與懸浮液接觸，對其迅速于低溫下真空干燥，消毒；(3)將殼聚糖季銨鹽0.5g，加入50ml生理鹽水中，再將凝血酶500UI溶于殼聚糖季按鹽溶液中，然后將20ml的濃度為0.5mg/ml三聚磷酸鈉水溶液加入到殼聚糖季銨鹽溶液中，溫度控制在10℃以下，pH值控制在4.2-4.8之間，攪拌條件下生成納米粒子，顆粒直徑50～200nm，純化并真空干燥成干粉；(4)纖維蛋白原1000mg和殼聚糖固定化凝血酶250UI，加入研缽中充分研細(xì)；加入無水乙醇100毫升攪拌成均勻的懸浮液，震蕩使懸浮顆粒均勻分布；(6)將均勻分布的懸浮液倒入10×20平方厘米的平底托盤中，使膠原海綿的另一面與懸浮液接觸，懸浮液中的顆粒黏附在膠原海綿上；對粘附有混合干粉顆粒的膠原海綿抽真空干燥。
過程二(1)將殼聚糖季銨鹽0.1g，加入0.1g的甲氨蝶吟及生理鹽水10ml制成溶液，然后將4ml的濃度為0.5mg/ml三聚磷酸鈉水溶液加入到溶液中，嚴(yán)格控制反應(yīng)條件，攪拌生成納米粒子(粒徑50～200nm)懸浮液。純化后加入1％氯化鈣溶液1ml，裝入平底盤中；(2)使膠原海綿的一面與懸浮液接觸，對其迅速于低溫下真空干燥，消毒；(3)將殼聚糖季銨鹽0.5g，加入50ml生理鹽水中，再將凝血酶500UI溶于殼聚糖季按鹽溶液中，然后將20ml的濃度為0.5mg/ml三聚磷酸鈉水溶液加入到殼聚糖季銨鹽溶液中，溫度控制在10℃以下，pH值控制在4.2-4.8之間，攪拌條件下生成納米粒子，顆粒直徑50～200nm，純化并真空干燥成干粉；(4)纖維蛋白原1000mg和殼聚糖固定化凝血酶250UI，加入研缽中充分研細(xì)；加入無水乙醇100毫升攪拌成均勻的懸浮液，震蕩使懸浮顆粒均勻分布；(5)將均勻分布的懸浮液倒入10×20平方厘米的平底托盤中，使膠原海綿的另一面與懸浮液接觸，懸浮液中的顆粒黏附在膠原海綿上；對粘附有混合干粉顆粒的膠原海綿抽真空干燥。
過程三(1)將殼聚糖季銨鹽0.1g，加入10ml的500000U/ml堿性成纖維細(xì)胞生長因子制成溶液，然后將4ml的濃度為0.5mg/ml三聚磷酸鈉水溶液加入到溶液中，嚴(yán)格控制反應(yīng)條件，攪拌生成納米粒子(粒徑50～200nm)懸浮液。純化后加入1％氯化鈣溶液1ml，裝入平底盤中；(2)使膠原海綿的一面與懸浮液接觸，對其迅速于低溫下真空干燥，消毒；(3)將殼聚糖季銨鹽0.5g，加入50ml生理鹽水中，再將凝血酶500UI溶于殼聚糖季按鹽溶液中，然后將20ml的濃度為0.5mg/ml三聚磷酸鈉水溶液加入到殼聚糖季銨鹽溶液中，溫度控制在10℃以下，pH值控制在4.2-4.8之間，攪拌條件下生成納米粒子，顆粒直徑50～200nm，純化并真空干燥成干粉；(4)纖維蛋白原1000mg和殼聚糖固定化凝血酶250UI，加入研缽中充分研細(xì)；加入無水乙醇100毫升攪拌成均勻的懸浮液，震蕩使懸浮顆粒均勻分布；(5)將均勻分布的懸浮液倒入10×20平方厘米的平底托盤中，使膠原海綿的另一面與懸浮液接觸，懸浮液中的顆粒黏附在膠原海綿上；對粘附有混合干粉顆粒的膠原海綿抽真空干燥。
綜上所述，本實(shí)用新型相對現(xiàn)有技術(shù)具有較大的改進(jìn)，應(yīng)該本實(shí)用新型的方法所生產(chǎn)的產(chǎn)品可廣泛應(yīng)用于普通外科、神經(jīng)外科、心胸外科、泌尿外科、婦產(chǎn)科、口腔科、微創(chuàng)外科(如腹腔鏡、胸腔鏡、盆腔鏡)等需要止血、堵漏(瘺)的手術(shù)中，縮短手術(shù)時(shí)間，降低手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)，加速創(chuàng)傷愈合，縮短住院時(shí)間。亦可用于戰(zhàn)傷、事故中的急救止血。
權(quán)利要求1.一種納米止血貼，包括支撐層和止血層，止血層附著在支撐層的一面，其特征在于所述止血層包括凝血酶和聯(lián)結(jié)物的止血混合物，該聯(lián)結(jié)物呈納米級大小。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米止血貼，其特征在于所述支撐層的另一面還設(shè)置有載藥層，該載藥層包括有所述呈納米級大小的聯(lián)結(jié)物與治療藥物的治療混合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的納米止血貼，其特征在于所述聯(lián)結(jié)物為殼聚糖、甲殼素、明膠顆?；蛭⒛z原蛋白中任意一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任意一項(xiàng)所述的納米止血貼，其特征在于所述支撐層為膠原海綿、殼聚糖海綿或氧化纖維素。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的納米止血貼，其特征在于所述支撐層的厚度為0.4～1cm。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的納米止血貼，其特征在于所述止血層與支撐層的密度大致均為載藥層密度的1/2。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的納米止血貼，其特征在于所述止血層每平方厘米至少存在10～15mg的止血混合物。
專利摘要本實(shí)用新型納米止血貼，包括支撐層和止血層，止血層附著在支撐層的正面，其中，止血層包括凝血酶和聯(lián)結(jié)物的止血混合物，所述聯(lián)結(jié)物呈納米級大小。支撐層的反面則設(shè)置有載藥層，該載藥層包括有所述呈納米級大小的聯(lián)結(jié)物與治療藥物的治療混合物。本實(shí)用新型產(chǎn)品止血材料與機(jī)體生物相容性好、無毒副作用，在體內(nèi)可徹底降解；且使用方便快捷；物理及化學(xué)穩(wěn)定性大為提高，可于常溫下儲存運(yùn)輸，價(jià)格低廉，可廣泛應(yīng)用于多種需要止血的場合。
文檔編號A61F13/00GK2920163SQ20062005798
公開日2007年7月11日 申請日期2006年4月20日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月20日
發(fā)明者陳汝福 申請人:中山大學(xué)附屬第二醫(yī)院