專利名稱：知母提取物用于制備防治前列腺增生藥物的用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及醫藥技術領域，具體是知母提取物在制備防治前列腺增生的藥物或食品中的應用。
背景技術：
知母為百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bunge的根莖，具有滋陰降火，潤燥滑腸的功效，臨床多用于消渴癥。目前知母藥用時主要為單位知母飲片或與其他中藥配伍煎湯后服用。
知母的化學成分主要為皂苷和黃酮類成分其中已報道的黃酮類成分主要有寶藿苷-I，淫羊藿苷-I，芒果苷、異芒果苷和新芒果苷(1.沈陽藥科大學學報，1995，13(1)34；2.沈陽藥學院學報，1993，10(2)141；自然雜質，2003，25(4)191；3.Naokata norita，Mineo Shimizu，et al.Studies on the medicalresources.Chimonin inAnemarthense Rhizoma[J].[日]藥學雜質，1965，5(4)374)已報道的皂苷類成分有二十多種，例如知母皂苷BII，知母皂苷BIII，知母皂苷BIV，知母皂苷BV，知母皂苷BVI，西陵皂苷B，知母皂苷C，知母皂苷C1，知母皂苷C2，知母皂苷D，知母皂苷D1，知母皂苷D2，知母皂苷E1，知母皂苷E2，知母皂苷F，知母皂苷G，知母皂苷H1，知母皂苷H2，知母皂苷I1，知母皂苷I2，知母皂苷Ia，薩爾薩皂苷元，嗎爾考皂苷元，新吉托皂苷元等。(1.藥學學報，1992；27(1)26-32；2.藥學學報，1996，31(4)271-277；3.沈陽藥科大學學報，1996；13(1)34-40；4.藥學學報，1997；32(6)473-475；5.中國藥物化學雜志，1998；8(2)135-136，140；6.沈陽藥科大學學報，1998；15(4)254-256；7.藥學學報，1998；33(9)693-696；8.沈陽藥科大學學報，1998；15(2)130-1319.中國藥物化學雜志，1999；9(4)294-298；10.藥學學報，1999；34(7)514-517；11.藥學學報，1991；26(8)619-21；12.PlantaMedica，1991；5726-32；13.Chem Pharm Bull，1994；42(11)2342-5；14.Planta Med，1997；63(4)376-9；15.Planta Med，1999；65(7)661-3；16.天然產物研究與開發，2001；13(5)16-21)。
知母黃酮類成分的的藥理作用已經有報道，主要有知母水提取物及其活性成分芒果苷及其糖苷具有抗糖尿病的作用。(國外醫學中醫中藥分冊，2002，24(6)353；中國發明專利ZL03115509.X)知母提取物具有抗菌作用。(植物病理學報，2006，36(3)267-272；中國發明專利ZL200410037779.0)前列腺增生癥(BPH)是中老年男性常見病，資料顯示，前列腺增生在40歲以前發病率很低，50歲以上占40％，80歲者近90％，90歲時幾乎100％患有該病[1]。因此，研究治療該病的有效藥物，是醫藥界面臨的迫切任務，有著重要臨床意義。目前，中藥治療前列腺增生具有良好效果。
但至今未見到知母提取物用于治療前列腺增生的報道。

發明內容
本發明的目的在于提供知母提取物在制備防治前列腺增生的藥物或食品中的應用。
本發明將知母提取物用于防治前列腺增生的藥物或食品。本發明所說的知母提取物，其為主要成分芒果苷和新芒果苷的含量之和≥50％的知母黃酮混合物。
本發明的知母提取物的制備方法為知母粉碎后，用20-95％含水乙醇加熱提取或浸泡提取，提取液濃縮后離心或過濾，棄沉淀，上清液或過濾液備用；將上述上清液或過濾液進行聚苯乙烯多孔性吸附樹脂吸附，水淋去雜質后，用上樣生藥質量的5～15倍量體積的15～25％含水的C1～C5低級醇洗脫；洗脫液濃縮至無醇，靜置，析出沉淀，離心或過濾，得沉淀提取物1，上清液或過濾液備用；在上清液或過濾液中加入乙醇醇沉，乙醇終濃度為70-95％，棄沉淀，將醇沉后的上清濃縮至干，得固體物為提取物2；或將上清濃縮后，噴霧干燥，也得提取物2；合并提取物1與提取物2并混合均勻，即得知母提取物。
獲得的知母提取物成分分析經硅膠，sephadexLH-20，ODS等反相色譜擔體柱色譜獲得2個化合物，用化學，波譜法測定了結構，分別為芒果苷(mangiferin)和新芒果苷(neomangiferin)。
其中芒果苷的R基團為H新芒果苷的R基團為Glu(葡萄糖)所以，本發明的知母提取物主要是芒果苷與新芒果苷的混合物，用HPLC檢測定量分析表明，知母提取物中芒果苷和新芒果苷含量之和≥50％，且芒果苷與新芒果苷的含量比為1∶1～5∶1。
用本發明的知母提取物進行藥理實驗知母提取物對SD(Sprague-Dawley)去勢(大鼠手術摘除睪丸)大鼠前列腺增生模型的增生抑制作用。
實驗方法1)給藥組各成分比例確定根據知母的臨床常用劑量，及知母主要有效成分，知母提取物的得率，設計知母提取物的給藥劑量。
2)動物處理動物模型造模。將SD大鼠隨機分組知母提取物給藥組，模型對照和空白對照組。除空白對照組外，其他組每只大鼠皮下注射丙酸睪酮注射液3mg/(kg·d)，正常對照組皮下注射精制麻油。知母提取物給藥組用相應提取物灌胃，空白對照組和模型模型對照組給以等量蒸餾水，連續灌胃4周。
SD大鼠去勢前列腺增生模型(制備方法詳見《西藥新藥臨床前研究指導原則》的藥理學部分，中華人民共和國衛生部藥政管理局，1993；《藥理試驗方法學》第三版，人民衛生出版社)采取大鼠雙側睪丸摘除，在灌胃給藥四周后，處死，取前列腺，稱量濕重，計算前列腺增生指數，組織作病理切片作進一步觀察。
3)前列腺濕重及指數的測定最后一次灌胃24h后，頸椎脫臼處死大鼠，剖取前列腺，仔細分離各葉前列腺，用電子天平稱大鼠前列腺濕重，并計算前列腺指數。10％福爾馬林溶液固定前列腺，石蠟包埋，切片，常規HE染色，鏡下進行組織病理學觀察。
前列腺指數＝前列腺濕重(g)/大鼠體重(g)×1004)數據及統計學處理各項參數均以x±S表示，顯著性差異采用軟件spss10.0進行方差分析。
實驗結果對丙酸睪丸素所致的前列腺增生大鼠的作用模型組大鼠前列腺增生明顯，前列腺指數增加，與空白組比較具有統計學意義(P＜0.01)，知母提取物組可減輕前列腺增生程度，明顯減輕腹葉前列腺系數，與模型組比較差異具有統計學意義(P＜0.05)。
病理結果顯示空白組正常前列腺組織，腺上皮單層或復層，無明顯乳頭；模型組前列腺組織重度增生，腺泡顯著增多，腺上皮增生形成大量乳頭狀結構；知母提取物組皆具有減輕前列腺增生作用。知母提取物組前列腺組織輕度增生，上皮增生，可見乳頭狀結構。
以上試驗結果說明，知母提取物可明顯治療丙酸睪酮引起的大鼠前列腺增生，前列腺重量級前列腺增生指數與模型組比均有明顯改善，病理結果顯示，服用知母提取物組的前列腺增生較輕。這些作用都有利于防止和治療前列腺增生。因此，知母提取物可用于制備防治前列腺增生的藥物或食品。實驗結果證明，經知母提取物治療后，可使前列腺增生大鼠的前列腺濕重和前列腺指數(前列腺指數＝前列腺濕重(g)/大鼠體重(g)×100)降低，給藥組前列腺組織給藥后增生抑制明顯。因此，知母提取物可用于制備防治前列腺增生的藥品和食品。
本發明對知母提取物拓展了新的醫藥用途，也為防治前列腺增生提供了一種新的藥物來源。知母提取物安全低毒，藥理作用較強，其原料來源豐富，價格低廉，制備工藝簡單，可用于制備防治前列腺增生(肥大)的藥物或食品。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明作進一步說明，但本發明的實施不限于此。
實施例1知母提取物制備100公斤粉碎后的知母藥材，投入提取罐，在90～100℃依次用70％乙醇400升加熱提取3次，每次提取時間為90分鐘，合并3次提取液，濃縮至80升，過濾，將濾液用蒸餾水調節至100升。再緩緩通過有350升ZTC-1型大孔樹脂(天津正天成澄清技術有限公司生產)的吸附柱，用500升蒸餾水淋洗出去雜質；再用1000升20％乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮至10升，靜置24小時，沉淀析出，過濾，干燥粉碎后得淺黃色沉淀0.4公斤，為提取物1；再將濾液再攪拌下緩緩加入100升95％乙醇，靜置12小時，離心，并沉淀上清液濃縮至干，干燥粉碎后得黃色粉末1.6公斤，為提取物2；合并提取物1與提取物2混合均勻，即為本發明的知母提取物，共重2.0公斤，按生藥量計得率為2.0％。
實施例2藥理活性試驗試驗材料1.動物SD大鼠，由上海斯萊克實驗動物有限公司提供，清潔級(動物合格證號SCXK(滬)2002-0010)2.藥物知母提取物均按實施例1中具體制備方法制備。
3.試劑丙酸睪酮注射液(上海通用藥業股份有限公司，1ml/支，批號國藥準字H31020524)方法與結果方法1)動物處理動物模型參考上文試驗方法部分造模。將SD大鼠隨機分組(每組10只)知母提取物給藥組，模型對照和空白對照組。除空白組外，其他組每只大鼠皮下注射丙酸睪酮注射液3mg/(kg·d)，正常對照組皮下注射精制麻油。給藥組分別用相應的藥材或提取物灌胃，空白對照組和模型對照組給以等量蒸餾水，連續灌胃4周。
2)前列腺濕重及指數的測定最后一次灌胃24h后，頸椎脫臼處死大鼠，剖取前列腺，仔細分離各葉前列腺，用電子天平稱大鼠前列腺濕重，并計算前列腺指數。10％福爾馬林溶液固定前列腺，石蠟包埋，切片，常規HE染色，鏡下進行組織學觀察。
前列腺指數＝前列腺濕重(g)/大鼠體重(g)×1003)數據及統計學處理各項參數均以X±S表示，顯著性差異采用軟件spss10.0進行方差分析。
結果對丙酸睪丸素所致的前列腺增生大鼠的作用模型對照組大鼠前列腺增生明顯，前列腺指數增加，與空白對照組比較具有統計學意義(P＜0.01)，知母提取物給藥組明顯減輕腹葉前列腺系數，與模型對照組比較差異具有統計學意義(P＜0.05)，實驗結果見表1。
表1知母黃柏有效成分對前列腺增生的影響(x±S，n＝10)

△△P＜0.01vs空白對照組，*P＜0.05，**P＜0.01vs模型對照組病理結果顯示空白組正常前列腺組織，腺上皮單層或復層，無明顯乳頭；模型組前列腺組織重度增生，腺泡顯著增多，腺上皮增生形成大量乳頭狀結構；知母提取物組具有減輕前列腺增生作用，前列腺組織輕度增生，上皮增生，可見較多乳頭狀結構。
權利要求
1.知母提取物在制備防治前列腺增生的藥物或食品中的應用，所述的知母提取物中芒果苷和新芒果苷的含量之和≥50％，它是用如下方法制得的知母粉碎后，用20-95％含水乙醇加熱提取或浸泡提取，提取液濃縮后離心或過濾，棄沉淀，上清液或過濾液備用；將上述上清液或過濾液進行聚苯乙烯多孔性吸附樹脂吸附，水淋去雜質后，用上樣生藥質量的5～15倍量體積的15～25％含水的C1～C5低級醇洗脫；洗脫液濃縮至無醇，靜置，析出沉淀，離心或過濾，得沉淀提取物1，上清液或過濾液備用；在上清液或過濾液中加入乙醇醇沉，乙醇終濃度為70-95％，棄沉淀，將醇沉后的上清濃縮至干，得固體物為提取物2；或將上清濃縮后，噴霧干燥，也得提取物2；合并提取物1與提取物2并混合均勻，即得知母提取物。
2.根據權利要求1所述的知母提取物，其特征在于知母提取物中芒果苷與新芒果苷的含量比為1∶1～5∶1。
全文摘要
本發明涉及醫藥技術領域。知母的化學成分主要為皂苷和黃酮類成分，已知有抗糖尿病的藥用和抗菌作用。本發明的目的在于提供知母提取物在制備防治前列腺增生的藥物或食品中的應用，本發明的知母提取物是指芒果苷和新芒果苷的含量之和≥50％的知母黃酮混合物，本發明還提供了上述知母提取物的具體制備方法。本發明經動物實驗證明知母提取物可明顯治療丙酸睪酮引起的大鼠前列腺增生，因此，知母提取物可用于制備防治前列腺增生的藥品和食品。本發明對知母提取物拓展了新的醫藥用途，也為防治前列腺增生提供了一種新的藥物來源。
文檔編號A61P13/08GK101062250SQ20071004099
公開日2007年10月31日 申請日期2007年5月22日 優先權日2007年5月22日
發明者陳萬生, 孫赫, 孫連娜, 李鐵軍 申請人:中國人民解放軍第二軍醫大學