專利名稱：一氧化氮供體型糖皮質激素的制作方法
技術領域：
本發明涉及藥物化合物領域，具體涉及NO供體型糖皮質激素，本發明還公開了該衍生物的制備方法及其作為抗炎藥物的用途。

背景技術：
糖皮質激素因為其強大的藥理作用而被臨床廣泛地使用，但長期使用容易誘發高血壓、柯興氏綜合癥、骨質疏松、糖尿病等許多不良反應，為此近年來國際醫藥界一直在努力追求開發新的副作用更小，效果更好的糖皮質激素。
一氧化氮(NO)在體內參與眾多生理功能的調節，與心血管系統、神經系統、免疫系統、骨代謝系統等有著密切的關系，是研究較為深入的一種小分子化合物。NO供體型藥物近年來無論是在基礎研究方面還是應用研究方面都有了較顯著的發展。NO與某些藥物相連，可以增強藥效和/或降低毒副作用。法國NICOX公司申請的中國專利ZL 97180284.X公開了一類一氧化氮供體型糖皮質激素，通過一個二價連接的橋將甾體母核和—NO2連接起來，而公開的橋為亞烷氧基或亞環烷氧基，或者是如下幾個通式表示的橋，包括

和
以及

和
然而上述化合物，由于采用了不穩定的—NO2作為NO供體，所得的NO供體型糖皮質激素穩定性不佳，不但儲存時需要完全避光的環境，而且在常溫下分解較快，儲存時間較短。不利于推廣應用。
中國專利ZL 97180284.X公開了一種用呋咱氮氧化物作為一氧化氮供體的氫化可的松衍生物。雖然穩定性比—NO2供體的糖皮質激素好，但是由于氫化可的松是一種低效、低副作用的糖皮質激素所以制得的NO供體型糖皮質激素抗炎效果一般，降低糖皮質激素副作用的效果也不明顯。


發明內容
為解決上述技術問題，本發明提供了一種如下通式(II)的化合物 A—L—X 其中A與L相連的位置是通過A上取代基的羥基與L相連，優選可以通過A中的R”上的羥基，也可以通過17位上的羥基相連 其中A為甾體激素殘基，具有如下結構，在1-2位是雙鍵
其中，取代通式中所述的CH基中的H或CH2中的二個氫H2的取代基可如下 在2位，可以是F，Cl，Br 在3位，可以是，CO(酮基)，—O—CH2—CH2—Cl，OH 在4-5位，可以是雙鍵； 在5-6位，可以是雙鍵； 在6位，可以是Cl，F，CH3，—CHO； 在7位，可以是Cl，Br 在9位可以是Cl，F 在11位，可以是OH，CO，Cl； 在16位可以是CH3，OH，＝CH2 在17位，可以是OH，CH3，OCO(O)x(CH2)yCH3，或

即糠?；? 其中x為0或1的整數，y是0至4的整數， 在16-17位置，可以是下述基團；
其中，R2和R3可以相同或不同，并可以為氫或1至8個碳的飽和或不飽和烴基，可以為直鏈、支鏈，或環，優選R2為H，R3為正丙基、環己基. R和R’可以相同或不同，并且可以為氫或具有1至4個碳原子的直鏈或直鏈烷基。優選R和R’均為—CH3。
A為皮質甾類基團殘基，橋基團L可以與R”或17位上的羥基以酯鍵的形式相連 所述的R”是CO(CR4R5)O—T1，或CO(CR4R5)—T2T1是H，CO(O)x1(CH2)y1CH3或T2是H或Cl，其中x1為0或1的整數，y1是0至4的整數 當R”是所述的殘基所在時，為CO(CR4R5)O—，通過其中的羰基與17位相連，氧與橋基團L相連。
所述的殘基還可以在17位，為—O—，與橋基團L相連。
二價橋基團L選自—(CO)Ob1(CR’4R’5)na(CO)(R7)— 其中，na為0至4的整數，b1為0至1的整數，R4、R’4或R’5、R5相等或彼此不同并選自H，具有1至8個碳原子的飽和或不飽和烴基，可以為直鏈、支鏈或環，優選na＝2，b1為0，R4＝R5＝R’4＝R’5＝H。通過L中的羰基與甾類基團殘基A相連，通過R7與NO供體相連 R7 選自下列基團中的一種 —O(R8)O—，R8為C1～C4的亞烷基 —O(CH2)2O(CH2)2O—，—NHCH2CH2O—，或者 —OCH2C(Ph)O—，—O(CH2)2C(Ph)O—，Ph代表苯基。
—X是釋放一氧化氮的功能基團，選自
R6為C1～C8的飽和或不飽和的烴基，優選苯基。
根據上述定義 本發明的所述的化合物的皮質激素殘基A所代表皮質激素殘基中的H，H2，R，R’，R”的可以選自但不僅限于以下化合物的相應基團布地奈德、環索奈德、阿氯米松、阿爾孕酮、倍氯米松、倍他米松、氯潑尼松、氯倍他索、氯倍他松、氯可托龍、氯波尼醇、地夫可特、地奈德、去羥米松、地塞米松、二氟拉松、二氟可龍、二氟潑尼酯、氟氯奈德、氟米松、氟尼縮松、氟輕松、丁基氟可丁、氟可龍、氟米龍、氟培龍醋酸酯、氟潑尼定醋酸酯、氟潑尼松龍、氟氫縮松、哈西奈德、鹵倍他索丙酸酯、鹵米松、鹵潑尼松醋酸酯、氫可他酯、氯替潑諾、甲羥松、甲潑尼松、甲波尼松龍、莫米松糠酸酯、帕拉米松、潑尼卡酯、潑尼松龍、波尼松龍25—二乙基氨基醋酸酯、、潑尼松、強的松龍戊酸酯、波尼立定、利美索龍、曲安西龍、曲安奈德、21—乙酰氧基孕烯諾龍、可的伐唑、安西奈德、氟替卡松丙酸酯、馬潑尼酮、替可的松、曲安西龍六縮丙酮、 本發明所得的任一化合物其生理學上可接受的鹽或溶劑合物在生產治療人或哺乳動物，特別是人類的炎性、變應性或過敏性疾病的藥物中應用。其中炎性、變應性或過敏性疾病是指皮膚疾病如濕疹、牛皮癬、過敏性皮炎、神經性皮炎、疹癢和超敏性反應；鼻子、咽喉或肺部的炎性疾病如哮喘(包括過敏引起的哮喘反應)、鼻炎(包括枯草熱)、鼻息肉、慢性阻塞性肺病、間質性肺部疾病和纖維變性；眼部炎癥包括結膜和結膜炎；炎性腸疾病如潰瘍性結腸炎和節段性回腸炎；或自體免疫性疾病如風濕性關節炎。
上述任一項的化合物在制備類皮質激素藥物中的應用。
上述任一項的化合物在制備抗炎劑藥物中的應用。
上述任一項的化合物在制備免疫抑制類藥物中的應用。
上述任一項的化合物在制備血管生成抑制劑藥物中的應用。
上述任一項的化合物在制備治療呼吸道炎癥或變應性疾病藥物的應用。
上述任一項的化合物在制備治療皮膚病學疾病的藥物中的應用。
上述任一項的化合物在制備治療眼科疾病的藥物中的的應用。
上述任一項的化合物在制備治療腸部炎癥疾病的藥物中的應用。
上述任一項的化合物在制備治療心腦血管疾病中的應用。
上述任一項的化合物在制備治療心肌、血管局部缺血疾病中的應用。
上述任一項的化合物在制備治療腫瘤疾病中的應用。
一種藥用組合物，該組合物包含上述本發明所述的任一化合物或其生理學上可接受的鹽或溶劑合物，及其與一種或多種生理學上可接受的藥物輔料混合。該組合物還包含另一種治療炎性、變應性或過敏性疾病的藥物。另一種炎性、變應性或過敏性疾病的藥物可以為β2腎上腺素受體激動劑。該組合物還可以包含抑制或殺死微生物的藥物，抑制或殺死微生物的藥物是指抗菌素。
上述的藥用組合物，可以配制成液體制劑、滅菌制劑與無菌制劑、固體制劑、半固體制劑、氣霧劑、噴霧劑與粉霧劑。上述制劑類型的定義由藥劑學(第五版，崔福德主編，人民衛生出版社出版)中的相關劑型定義。
一種藥用粉霧劑制劑，該制劑含有上述任一項定義的式(II)化合物或其生理學上可接受的鹽或溶劑合物，以及作為載體的乳糖或氨基酸。
本發明的化合物可以由下列方法制備得到將作為皮質激素殘基A所代表的皮質激素即A—H(1)，H與A相應的O相連，與相應酰化劑二酸酐(2)反應得到中間體(3)，(3)再和NO供體(8)經酯化反應生成目標產物相應的一氧化氮供體型糖皮質激素(9)。
NO供體(8)是以R6—SH(4)為起始原料，與氯乙酸縮合、經過過氧化氫氧化、再與硝酸作用、再和H—R7—H反應得到。
具體工藝流程如下
由(1)到(2)的反應可以選用的溶媒A選自吡啶、DMF、DMSO、四氫呋喃、C1～C4的，酮類、醚類中的一種或幾種。優選吡啶。
由(4)到(5)的縮和反應可以選用的溶媒選自水、吡啶、DMF、DMSO、四氫呋喃、C1～C4的酮類、氯代烴類、醚類中的一種或幾種，優選C1～C4的，反應時加入適量的堿的水溶液，所述的堿為NaOH，KOH，碳酸鈉、碳酸鉀、優選NaOH和碳酸鉀。加入的堿與化合物(2)的摩爾比為1.5～31。反應溫度為0～50℃。
由(5)到(7)的反應中，將化合物(5)溶于2～10倍(重量體積比)溶媒中，所述的溶媒選自四氫呋喃、C1～C4酮類、酯類、氯代烴類、醚、羧酸類中的一種或幾種。加入1.5～5倍(摩爾比)的H2O2，攪拌反應1～10h，不經分離，向反應物中加入5～15倍(摩爾比)的發煙硝酸，升溫至50～110℃反應1～6h，冷卻過濾得到化合物(7)。
化合物(8)的制備將摩爾比2～61的H—R7—H和化合物(7)溶于適量溶媒中，所用溶媒選自水、吡啶、DMF、DMSO、四氫呋喃、C1～C4的醇類，酮類、酯類、氯代烴類、醚類中的一種或幾種，優選THF、吡啶、DMF、DMSO、C1～C4的氯代烴中的一種或幾種。加入10～50％的堿溶液，所述的堿選自NaOH、KOH、碳酸鈉、碳酸鉀中的一種或幾種、優選碳酸鈉，所用的堿溶液的與化合物(7)的摩爾比(以所用的堿計)為0.5～21，反應1～6小時后用水稀釋、溶媒萃取。干燥后用柱層析[(乙酸乙酯石油醚(60～90℃)＝12(V/V)]分離。
化合物(9)的制備，摩爾比為(0.5～1.5)(0.5～1.5)1的DCC、化合物(3)和(8)溶于適量溶媒中，加入DMAP適量(與化合物(8)摩爾比為0.01～0.1)所用溶媒選自吡啶、DMF、DMSO、四氫呋喃、C1～C4的酮類、酯類、氯代烴類、醚類中的一種或幾種，優選氯代烴，在0～40℃下反應2～10小時，過濾，濾液濃縮柱層析[(乙酸乙酯∶石油醚(60～90℃)＝12(V/V)]即得目標產物化合物(9) 本發明所制得的化合物及其生理學上可接受的鹽或溶劑合物與至少一種藥學上可接受的輔料制成各種適用于口服、局部(如滴鼻、滴眼、吸入、腔道)及各種注射液形式的藥物。可以制成片劑、膠囊劑、乳膏劑、軟膏劑、搽劑、膜劑、栓劑、吸入劑、注射液、脂質體注射液，液體制劑、滅菌制劑與無菌制劑，、固體制劑、半固體制劑、氣霧劑、噴霧劑與粉霧劑等藥劑。粉霧劑的載體為優選為乳糖或氨基酸。
上述任一所述式(II)的化合物在治療哺乳動物的疾病中的劑量以皮質激素殘基A所代表的皮質激素A—H計為0.001mg-1mg/kg/天。
上述任一所述式(II)化合物，在治療哺乳動物的疾病中的劑量以A—H的計為0.005mg-0.5mg/kg/天。
上述任一所述式(II)化合物或其生理學上可接受的鹽或溶劑合物在生產治療炎性、變應性或過敏性疾病中的劑量以皮質激素殘基A所代表的皮質激素A—H的計為0.001mg-1mg/kg/天 上述任一所述的式(II)化合物或其生理學上可接受的鹽或溶劑合物在生產治療炎性、變應性或過敏性疾病中的劑量以皮質激素殘基A所代表的皮質激素A—H的計為0.005mg-0.5mg/kg/天。
本發明所制得目標化合物，實質上是一種NO供體型糖皮質激素，即用化學合成的方法將糖皮質激素活性殘基與NO供體鍵合起來得到，在本發明中，采用了呋咱類化合物作為NO供體，與現有技術中如法國NICOX公司申請的中國專利ZL 97180284.X中公開的采用硝酸酯作為NO供體的技術方案相比，本發明采用的NO供體所制得的目標化合物更為穩定，能夠在常溫下長期儲存而不變質分解變質。而本發明由于采用了1，2位是雙鍵的甾體激素殘基，與中國專利CN20071009805.5公開的采用氫化可的松為甾體激素殘基的NO供體型糖皮質激素相比，抗炎作用有了顯著的提高的同時，更能夠顯著的降低糖皮質激素的副作用，我們驚奇的發現，在采用1，2位是雙鍵的糖皮質激素時，呋咱衍生物類NO供體的連接不但克服了糖皮質激素的副作用，而且產生了顯著的協同作用，達到了意想不到的技術效果。綜上所述，本發明中所選用的1，2位是雙鍵的甾體激素母核，在和采用呋咱類的NO供體制成NO供體型糖皮質激素時，與現有技術中的硝酸酯為供體的NO供體型糖皮質激素和以1，2位是飽和鍵的以氫化可的松為甾體激素母核的以呋咱衍生物為供體的NO供體型糖皮質激素相比，本發明所述的化合物既有NO供體型糖皮質激素對慢性炎癥的更好的抗炎效果，令人意外的是，呋咱衍生物與1，2位是雙鍵的甾體母核的結合還產生了令人意想不到的對慢性炎癥的抗炎效果。根據外國文獻Wallace JL(Nitric oxide as a regulator of inflammatory processes[J].MemInst Oswaldo Cruz.2005，100(S1)5—9.)報道NO供體型糖皮質激素對慢性炎癥模型的治療機理，其抗炎機制可能是由于在治療慢性炎癥時長時間的釋放釋放低水平的NO，血管平滑肌舒張使內皮層拉伸，變得更加緊密，阻礙了水和其他小分子的通透，從而抑制炎癥物質的滲出，對抗炎癥的作用。其具體的作用機制還有待于進一步研究，而在將本發明采用所選用的甾體激素母核和NO供體結合時，由于某種機制，使糖皮質激素和呋咱衍生物的NO供體產生了協同作用，出現意想不到的抗炎效果。產生這種效果的原因可能是由于在對比實施例4中的NO體外釋放曲線所表現出來本發明所得的化合物在釋放低劑量的NO時，釋放的速度更快，維持一定釋放水平的持續時間更長引起的。



圖1是NO體外釋放曲線圖
具體實施例方式 層析方法 層析柱的長度最少70cm，內部裝填254-硅膠，并將需要分離的有機物全溶于最少量的氯仿甲醇＝11中，用最少量254-硅膠將該溶液吸收后置于層析柱內硅膠的上部，使用流動相，洗脫流動相采用[乙酸乙酯石油醚(60～90℃)＝12(V/V)]，層析柱下用若干個10ml試管接經過柱層析得到的溶液，控制流速為10ml/3min，將每個試管的溶液用HPLC進行分析，將保留時間相同的試管溶液合并，取主點的化合物進行重結晶，得到相應的產物。
確定主點的方法將需要分離的有機物用HPLC進行分析，除原料外峰面積最大的點確定為主點，其保留時間為主點的保留時間。
HPLC的條件按照化合物1相應的AH的分析方法測定，如果沒有相應的測定方法也可以按照以下方法測定。
設備HP 1084B液相色譜儀，HP 79850BLC終端和UV檢測器 柱材料Supelcosil Lc-18，5um，150×4.6mm 檢測波長245nm 流動相乙腈水四氫呋喃＝36643 柱溫25℃ 流速約0.8ml/分 合成實施例中對化合物的編號沿用前述流程圖對通式的編號結合實施例號編成，如流程圖中通式(3)化合物，具體到實施例1中相應化合物為(3.1)，實施例2中相應化合物為(3.2) DCC是二環己基碳二酰亞胺 DMAP是4—N，N二甲基氨基吡啶，實施例中數粒指2～5粒，每粒20～50mg NO供體的合成 苯巰基乙酸(5.1)的合成 將苯硫酚(4.1)24.2g(0.22mol)，氫氧化鈉8.8g(0.22mol)溶于150ml乙醇中，加入由氯乙酸22.78g(0.24mol)和碳酸鈉12.7g(0.12mol)配成得200ml水溶液，室溫攪拌3h，回流1h。冷卻至室溫后加入6mol/L鹽酸調pH等于2，減壓蒸去乙醇，有白色沉淀生成，過濾，得白色棒狀晶體33.3g，收率90％，m.p.62—63℃。
3)3，4—二苯磺?；?，2，5—惡二唑—2—氧化物(7.1)的合成 將(5.1)20.16g(0.12mol)溶于90ml冰醋酸中，滴加24.3ml 30％H2O2，室溫攪拌3h，得(6.1)。產物不經分離。直接向反應液中緩慢滴加發煙硝酸48ml，內溫不超過40℃，1h內滴完。升溫至100℃反應，有大量紅棕色氣體產生，溶液從無色逐漸變為黃色，紅棕色。4h后反應液冷卻至室溫，有白色針狀晶體析出，過濾，干燥得16.8g，收率76％，m.p.153—155℃ 4.1)2-[2-(3-苯磺?；?，2，5—惡二唑—2—氧化物—4—氧—)乙氧基]乙醇(8.1)的合成 將二甘醇1.06g(10mmol)和(7.1)1g(2.7mmol)溶于10mlTHF中，滴入25％氫氧化鈉水溶液(0.5ml，3mol)，2小時后，反應液從淡黃色變為橙黃色。將反應液傾入20ml水中，用乙酸乙酪(3×20ml)萃取，有機層合并后加飽和食鹽水洗一次，用無水硫酸鈉干燥。過濾后將濾液濃縮。柱層析[乙酸乙酯石油醚(60—90℃)＝12(VV)]得油狀物0.32g，收率30％。ESLMS[M十H1’＝331。
4.2)2-[2-(3-苯磺?；?，2，5—惡二唑—2—氧化物—4—氧—)乙胺基]乙醇(8.2)的合成 將乙醇胺0.6g(10mmol)和(7.1)1g(2.7mmol)溶于10mlTHF中，滴入25％氫氧化鈉水溶液(0.5ml，3mmol)，2小時后，反應液從淡黃色變為橙黃色。將反應液傾入20ml水中，用乙酸乙酯(3×20ml)萃取，有機層合并后加飽和食鹽水洗一次，用無水硫酸鈉干燥。過濾后將濾液濃縮。柱層析[乙酸乙酯石油醚(60—90℃)＝12(VV)]得淡黃色油狀物0.26g，收率35％。ESLMS[M十H]’＝331。
實施例1 呋咱甲潑尼龍的合成 1)4-(甲潑尼龍-21-氧-)-4-氧代-丁酸(3.1)的合成 將5.62g(15mmol)甲潑尼龍溶于80ml吡啶中，加入3g(30mmol)丁二酸酐，加熱回流10小時后停止反應，冷卻后倒入200ml飽和冰鹽水中，用鹽酸調pH＝5，靜止析出白色固體，過濾、水洗，得到產物6.01g，收率84.4％。
2)4-(甲潑尼龍-21-氧-)-4-氧代—丁酸—2—[2-(3-苯磺?；?，2，5—惡二唑—2—氧化物—4—氧—)乙氧基]乙酯(9.1)的合成 將化合物(3.1)0.6g(1mmol)溶于20ml無水二氯甲烷中，加入(8.1)1mmol，DCC0.206g(1mmol)，DMAP數粒，室溫下反應20h，至反應液中有白色絮狀產物生成，過濾，濃縮柱層析乙酸乙酯石油醚(60～90℃)＝12(VV)]，得到固體0.45g即(9.2)收率50％。結構式如下
元素分析計算值(％)C，58.00；H，5.89；N，3.56；O，28.47；S，4.08元素分析實測值(％)C38H46N2O14S C，58.17；H，5.93；N，3.63；O，28.18；S，4.09 13C-NMR(CDCl2)1位至38位碳的數值 實施例2 呋咱地塞米松 1)2-(地塞米松-21-氧-)-2-氧代-乙酸(3.2)的合成 將5.89g(15mmol)地塞米松溶于80ml吡啶中，加入2.58g(30mmol)乙二酸酐，加熱回來8小時后停止反應，冷卻后倒入200ml飽和冰鹽水中，用鹽酸調pH＝5靜止析出白色固體，過濾水洗得到產物4.69g，收率65.3％IR 2)2-(地塞米松-21-氧-)-2-氧代—乙酸—2—[2-(3-苯磺?；?，2，5—惡二唑—2—氧化物—4—氧—)乙氧基]乙酯(9.2)的合成 將化合物(3.2)0.5g(1mmol)溶于20ml無水二氯甲烷中，加入(8.1)1mmol，DCC 0.206g(1mmol)，DMAP數粒，室溫下反應20h，至反應液中有白色絮狀產物生成，過濾，濃縮柱層析乙酸乙酯石油醚(60～90℃)＝12(VV)]，得到固體0.35g即(9.2)收率50％。結構式如下
元素分析計算值(％)C，55.66；H，5.32；F，2.45；N，3.61；O，28.84；S，4.13 元素分析實測值(％)C36H41FN2O14S C，55.51；H，5.26；F，2.57；N，3.58；O，28.63；S，4.45 13C-NMR(CDCl2)1位至36位碳的數值 實施例3 呋咱環索奈德 1)4—(去異丁酰環索奈德-21-氧)-4-氧代-丁酸(3.3)的合成 將7.62g(15mmol)去異丁酰-環索奈德溶于80ml吡啶中，加入3g(30mmol)丁二酸酐，加熱回流10小時后停止反應，冷卻后倒入200ml飽和冰鹽水中，用鹽酸調pH＝5，靜止析出白色固體，過濾、水洗，得到產物5.5g，收率55％。
2)4—(去異丁酰環索奈德-21-氧)-4-氧代-丁酸[2-(3-苯磺?；?，2，5—惡二唑—2—氧化物—4—氧—)乙氧基]乙酯(9.3)的合成 將0.7g(1mmol)化合物(3.3)溶于無水二氯甲烷中加入(8.1)1mmol，DCC 0.206g(1mmol)，DMAP數粒，室溫下反應20h，至反應液中有白色絮狀產物生成，過濾，濃縮柱層析乙酸乙酯石油醚(60～90℃)＝12(VV)]，得到固體0.40g即(9.3)收率35％。結構式如下
元素分析計算值(％)C，59.85；H，6.16；N，3.17；O，27.18；S，3.63 元素分析實測值(％)C44H54N2O15S C，59.63；H，6.04；N，3.21；O，27.41；S，3.71 13C-NMR(CDCl2)1位至44位碳的數值 實施例4 呋咱曲安西龍 1)6—(曲安西龍-21-氧)-6-氧代-己酸(3.4)的合成 將曲安西龍5.9g(15mmol)溶于80ml吡啶中，加入3.84g(30mmol)己二酸酐，加熱回流10小時后停止反應，冷卻后倒入200ml飽和冰鹽水中，用鹽酸調pH＝5，靜止析出白色固體，過濾、水洗，得到產物5.1g，收率53％。
2)將6—(曲安西龍-21-氧)-6-氧代-己酸-[2-(3-苯磺酰基—1，2，5—惡二唑—2—氧化物—4—氧—)乙胺基]—乙酯(9.3)的合成 將化合物(3.4)0.1mmol溶于無水二氯甲烷中加入(8.2)1mmol，DCC 0.206g(1mmol)，DMAP數粒，室溫下反應20h，至反應液中有白色絮狀產物生成，過濾，濃縮柱層析乙酸乙酯石油醚(60～90℃)＝12(VV)]，得到固體0.3g即(9.4)收率30％。結構式如下
元素分析計算值(％)C，56.17；H，5.80；F，2.28；N，5.04；O，26.86；S，3.85 元素分析實測值(％)C39H48FN3O14S C，56.28；H，5.88；F，2.31；N，4.97；O，26.71；S，3.85 13C-NMR(CDCl2)1位至39位碳的數值 實施例5 外用制劑 以下實施例用于詳細解釋說明本發明配伍組方，但不受限于下述實施例，以下實施例制劑的制備按相應制劑的常規制備方法制成。
活性成分實施例1制得4-(甲潑尼龍-21-氧-)-4-氧代—丁酸—2—[2-(3-苯磺?；?，2，5—惡二唑—2—氧化物—4—氧—)乙氧基]乙酯，按甲潑尼龍計1g 藥用輔料 環糊精 20g 羧甲基纖維素50g 丙二醇 200g 尼泊金乙酯 5g 蒸餾水 加至1000ml 制備工藝 將活性成分與環糊精分別過100目篩，按照處方量稱取，混勻，加入適量無菌蒸餾水充分研磨；將羧甲基纖維素與丙二醇混勻，然后加入適量熱蒸餾水，放置待溶脹成凝膠后，再加入含有研磨后的活性成分和環糊精與尿素和尼泊金乙酯的水溶液，加水至足量即可。
其活性成分中還可以增加抗菌素如紅霉素、氟康唑等藥物 實施例6 吸入制劑 活性成分4—(去異丁酰環索奈德-21-氧)-4-氧代-丁酸[2-(3-苯磺?；?，2，5—惡二唑—2—氧化物—4—氧—)乙氧基]乙酯，以環索奈德計為2g 輔料 乳糖 1000g 制備工藝 將活性成分和乳糖分別粉碎成99％粒徑為2-5μm的固體，混勻后，裝填如膠囊即可。
其活性成份還可以增加β2腎上腺素受體激動劑如馬來酸福美特羅、沙美特羅。
實施例7 口服制劑-分散片 活性成分2-(地塞米松-21-氧-)-2-氧代—乙酸—2—[2-(3-苯磺?；?，2，5—惡二唑—2—氧化物—4—氧—)乙氧基]乙酯，按地塞米松計5g 藥用輔料 羥丙基γ-環糊精 10g 預膠化淀粉 300g 制備工藝主藥過100目篩，羥丙基γ-環糊精和預膠化淀粉過80目篩，稱取處方量的主藥，與羥丙基γ-環糊精充分混勻后研磨，再與預膠化淀粉混合均勻，直接壓片即得。每片活性成分以地塞米松計為5mg 實施例8 口服制劑—膠囊 活性成分6—(曲安西龍-21-氧)-6-氧代-己酸-[2-(3-苯磺?；?，2，5—惡二唑—2—氧化物—4—氧—)乙胺基]—乙酯，以曲安西龍計為10g 二甲基β-環糊精40g 羥乙酸纖維素 300g 瓜耳膠50g 10％淀粉漿適量 制備工藝 先將所有的固體輔料過100目篩，按處方量稱取，將活性成分和二甲基β-環糊精混勻，加入適量蒸餾水充分研磨后，加入羥乙酸纖維素、瓜耳膠和10％淀粉漿適量制粒，60℃以下烘干，18目篩整粒，膠套充填即可，每粒膠囊含活性成分以甲基潑尼松龍計算為10mg。
實施例9. 17-呋咱莫米松的合成 1)4—(莫米松-17-氧)-4-氧代-丁酸(3.9)的合成 將莫米松6.1g(15mmol)溶于80ml吡啶中，加入3g(30mmol)丁二酸酐，加熱回流10小時后停止反應，冷卻后倒入200ml飽和冰鹽水中，用鹽酸調pH＝5，靜止析出白色固體，過濾、水洗，得到產物5.1g，收率53％。
2)4-(莫米松-17-氧-)-4-氧代—丁酸—2—[2-(3-苯磺?；?，2，5—惡二唑—2—氧化物—4—氧—)乙氧基]乙酯(9.1)的合成 將化合物(3.9)0.6g(1mmol)溶于20ml無水二氯甲烷中，加入(8.1)1mmol，DCC 0.206g(1mmol)，DMAP數粒，室溫下反應20h，至反應液中有白色絮狀產物生成，過濾，濃縮柱層析乙酸乙酯石油醚(60～90℃)＝12(VV)]，得到固體0.45g即(9.9)收率50％。結構式如下
元素分析計算值(％)C，54.35；H，5.28；Cl，8.44；N，3.34；O，24.77；S，3.82 元素分析實測值(％)C38H44Cl2N2O13S C，54.22；H，5.21；Cl，8.51；N，3.36；O，24.86；S，3.84 13C-NMR(CDCl2)1位至39位碳的數值 試驗實施例1 穩定性對比試驗 參考中國藥典2005原料藥和藥物制劑穩定性試驗指導原則，分別在常溫、高溫條件下進行穩定性試驗 對照品1～3 采用中國專利CN 97180284.X公開的以甲潑尼龍、地塞米松、曲安西龍為甾體激素母核的NO供體型糖皮質激素，分別為 甲基潑尼松龍21-(3-硝基氧)丙酸酯、 地塞米松-21-(3-硝基氧)丙酸酯 曲安西龍-21-(3-硝基氧)丙酸酯 并按照實施例8的方法制成膠囊為對照品1、2、3，活性成分以相應的甾體激素母核計均為10mg/粒。
實驗品1～3 分別采用實施例1、2、4所制得的活性成分(9.1)、(9.2)、(9.4)按照實施例8的方法制成膠囊為實驗品1、2、3，活性成分含量以相應的甾體激素母核計也均為10mg/粒 取實驗品1～3與對照品1～3膠囊各60粒，在不同的條件下，即常溫(25℃±2℃/60％RH±10％)下放置0天，1個月，3個月，分別在高溫(60℃±2℃)下放置5天，10天，每次分別取實驗品1、2、3，對照品1，2，3的膠囊各10粒，進行含量分析。其中不同的條件，參考中國藥典2005原料藥和藥物制劑穩定性試驗指導原則，RH代表相對濕度，±后面的數代表可以浮動的數值范圍。
表1 穩定性數據對比

穩定性對照試驗表明，與對照品相比，各個儲存條件下實驗品組的含量均具顯著性差異(P<0.05)，而且實驗組與對照組相比，隨著儲存時間的增長，活性成分含量的差距越來越大，更說明采用本發明所得化合物為活性成分的實驗品制得的膠囊的穩定性要優于現有技術。
試驗實施例2 藥理實驗 1.皮質激素藥理活性 藥理活性可以采用糖皮質激素激動劑活性的功能體外試驗進行評價。
依據K.P.Ray等(Biochem J.(1997)，328，707—715)描述的功能試驗，給出一種糖皮質激素激動劑的反式抑制活性測試方法。在37℃下，用適當劑量的受試化合物處理穩定轉染有報告基因的A549細胞1小時，該報告基因含來自ELAM啟動子連接sPAP(分泌性磷酸脂酶)基因的響應NF-КB元件。然后用腫瘤壞死因子(TNF，10ng/ml)刺激該細胞16小時，并用標準的比色法測試此時產生的堿性磷酸酶含量。構建劑量響應曲線，并可通過曲線估算EC50值。
依據R.J.H.Austin等(Eur Resp J.(2002)，20，1386-1392)描述的功能試驗，測試化合物立接反式激活基因表達的能力。在37℃下，用適當劑量的受試化合物處理穩定轉染有報告基因的A549細胞6個小時，該報告基因含小鼠乳腺瘤病毒長末端重復系列(MMTV-LTR)的糖皮質激素響應區連接renilla熒光素酶基因。通過將細胞酶與適合的底物一起孵育后，通過測量所發出的光來測定熒光素酶活性。構建劑量響應曲線，并通過曲線估算EC50值，其中最大響應值是相對于地塞米松值(100％)來計算的。
實施例1的化合物在該試驗中的最大響應值小于70％。
實施例2的化合物在該試驗中的最大響應值小于50％。
實施例3的化合物在該試驗中的最大響應值小于30％ 實施例4的化合物在該試驗中的最大響應值小于50％ 孕酮受體活性的篩選 已經有報道稱人乳癌細胞系T47D對孕酮有上調內源性堿性磷酸酯酶的反應(Di Lorenzo等人，Cancer Research(1991)51，4470—4475)。將T47D細胞以每孔1 X 105個細胞的密度接種到96孔板中并使其在37℃下生長一夜。將甾族化合物溶解于DMSO中，將其加入到細胞中(最終DMSO濃度為0.7％)，然后將其在37℃下培養24小時。然后將該細胞用PBS洗滌并用RIPA緩沖劑(在磷酸鹽緩沖液中包含1％IGEPAL，0.5％脫氧膽酸鈉，0.1％SDS)進行溶解。用溶解于1M二乙醇胺、0.28M NaCl、0.5mMMgCl2中的作為底物的對-硝基苯磷酸酯(1.5mg/ml)用分光光度法(405nm)來對堿性磷酸酯酶的活性進行測定。劑量響應曲線是由所評估的EC50值得出的。
實施例2 的化合物在該試驗中的EC50值大于100nM。
通過以上實驗證明，實施例1到4的化合物具有明顯的藥理活性。
試驗實施例3 實施例制得的化合物與對照品相比，對骨質、血壓的影響 1.材料和方法 1.1 材料4月齡雌性SD大鼠70只，重量200±10g。隨機分為7組，每組10只，對照組10只和服藥組60組。采用試驗實施例1中的實驗組與對照品組分組(給藥采用實施例6制成的膠囊內容物)，所用劑量為以原甾體激素計。
1.2 飼養各組任其自由活動，統一條件喂養。
2、給藥與對比 2.1、給藥情況如下表對照組給與安慰劑(按照實施例8的方法得到的不含活性成分的膠囊的內容物)，服藥組分別給與的情況如下。
安慰劑按照實施例8的方法得到的不含活性成分的膠囊內容物。
2.2、觀察指標90天后進行血壓測定，在進行骨檢驗 (1)全身BMD(骨密度)XR-36型雙能x線骨密度儀掃描測量各組大鼠BMD(美國Norland公司)； (2)大鼠股骨干重、灰重及灰分鈣含量測定采用陶永輝等(陶永輝，譚成，蔡剛明.去勢雌性大鼠骨質疏松癥的藥物干預療效的評價.中國骨質疏松雜志，2002，847-50)的方法。
(3)血壓測量切開頸部皮膚，分離出左頸總動脈后，進行插管固定，連接八導生理記錄儀，穩定10min后，記錄血壓，測出收縮壓、舒張壓。
2.3 統計學處理數據用x±s表示，在SPSS10.0軟件下處理，所有數據方差分析兩兩比較t檢驗。
2.4 結論 1 各組收縮壓、舒張壓的變化 通過上述實驗證明，相應組別的實驗品組與對照品組的血壓對比具有顯著性(P<0.01)，而各個組別的實驗品組與采用安慰劑的對照品組的血壓相比，均無顯著性。說明與能夠引起高血壓的傳統糖皮質激素相比，采用本發明制備的NO供體型糖皮質激素能夠明顯抑制現有引起高血壓的副作用，甚至將其抑制到與安慰劑相同 2 各組骨的生理數據的變化 1-3組與其它組BMD的分析結果 通過上述實驗證明，作為NO供體型糖皮質激素的1-3組的化合物與安慰組對BMD的影響無顯著性差異，而與相應的糖皮質激素相比具有顯著性差異，由此說明本發明制得的NO供體型糖皮質激素能夠顯著的克服傳統糖皮質激素致BMD降低的副作用。
1-3組與其它組股骨干重的分析結果 通過上述實驗證明，作為NO供體型糖皮質激素的1-3組的化合物與安慰組對股骨干重的影響無顯著性差異，而與相應的糖皮質激素相比，能夠限制的克服股骨干重降低的副作用 1-3組與其它組股骨灰重的分析結果 通過上述實驗證明，與對股骨干重的影響相似，作為NO供體型糖皮質激素的1-3組的化合物與安慰組對股骨干重的影響無顯著性差異，而與相應的糖皮質激素相比，能夠限制的克服股骨干重降低的副作用。
對比實施例4 體外NO釋放試驗 按照馮曉春等(ZLR-8對大鼠胃潰瘍愈合的影響及體外一氧化氮的釋放，中國藥科大學學報，2004，35(4)357-360)和趙蕊等(生理溶液中硝普鈉釋放一氧化氮巰基通路的動力學研究.中國藥學雜志，2003，38(2)104—105)公開的方法進行測驗 1 Greiss試劑的配制 氨苯磺胺4g、N—萘乙烯二胺鹽酸鹽0.2g和85％磷酸10mL用蒸餾水稀釋至100mL。
2 標準曲線的制備 配制0.01，0.03，0.05，0.07，0.09，0.20，0.40μg/mL的亞硝酸鹽 2 標準曲線的制備 配制0.01，0.03，0.05，0.07，0.09，0.20，0.40μg/mL的亞硝酸鹽氮系列標準溶液，分別取10mL與Greiss試劑2.5mL充分混勻，室溫放置10min后，于540nm測定其吸收度。得線性回歸方程A＝2.3908c+0.0013，R2＝0.9995。其中A代表吸收度， c 代表亞硝酸鹽濃度(μg/mL) 3 目標化合物NO釋放量的測定化合物先溶于0.01mol/L二甲亞砜中，再用磷酸緩沖液稀釋。緩沖液里含有過量的半胱氨酸(5mmol/L)，混勻，受試物終濃度為10-4mol/L。將溶液置于37℃水浴，于不同時間點取溶液2mL與Greiss試劑500μL混合，室溫放置10min，于540nm處測吸收度。從給藥起每15分鐘為一個時間點，每個時間點取3個樣本，NO釋放量以其相當于氧化產物——亞硝酸鹽的量(μg/mL)表示。
測定的釋放度曲線見圖1 從圖1的NO體外釋放度曲線圖中可以看出，本發明的實施例1～4制得的化合物和現有技術中的相應NO供體型糖皮質激素相比，NO釋放更為迅速，能夠更快的達到釋藥高峰，穩定的維持在較高的釋放度上。由此說明本發明所選用的NO供體在制成NO供體型糖皮質激素后，NO的釋放更快，更穩定。
對比實施例4 對大鼠棉球肉芽腫抗炎效果對比動物試驗 1.試驗動物與分組，SD大鼠130只，雌雄不限體重200g±10g，分為，實驗1～3組，對照1～5組，對照1’～4’組，以及陽性對照組。分別以采用實施例1、2、4所制得的活性成分(9.1)、(9.2)、(9.4)為實驗組1～3所用藥物，以采用中國專利CN 97180284.X公開的以甲潑尼龍、地塞米松、曲安西龍、氫化可的松為甾體激素母核的NO供體型糖皮質激素 甲基潑尼松龍21-(3-硝基氧)丙酸酯、 地塞米松-21-(3-硝基氧)丙酸酯 曲安西龍-21-(3-硝基氧)丙酸酯 氫化可的松-21-(3-硝基氧)丙酸酯 為對照組1～4所用藥物，以中國專利CN 200710019806.5公開的NO供體型氫化可的松為對照組5 以甲潑尼龍、地塞米松、曲安西龍、氫化可的松為對照組1’～4’組所用藥物，以上各組的劑量以原糖皮質激素計分別為 氫化可的松 20mg/kg 甲潑尼龍 1mg/kg 地塞米松 0.5mg/kg 曲安西龍 0.5mg/kg 2.實驗方法 根據外國文獻Intahphuak S(Intahphuak S，Panthong A，Kanjanapothi D，etal.Anti-inflammatory and analgesic activities of Mallotus spodocarpus Airy Shaw[J].JEthnopharmacol，2004，9069—72)等人公開的方法，將上述隨機分組的大鼠用20％烏拉坦以5mL/kg的劑量麻醉后，手術植入棉球，棉球的重量為50±1mg，手術后第二天開始灌胃給藥，連續7d。給藥容量為10ml/kg，以總容量5％DMSO溶解，5％吐溫-80助溶，0.5％CMC-Na混懸。給藥劑量如上所述，并以溶劑作為陽性對照組。于末次給藥后12h處死大鼠，剝離棉球，將棉球置于干燥箱中65℃，12h烘干，稱取棉球重量，減去棉球重量即為肉芽重量，所述的腫脹抑制率＝(相應組肉芽重量-陽性對照組肉芽重量)/陽性對照組肉芽重量 測量結果見下表 從上表中數據可以看出本發明所制得的化合物(9.1)、化合物(9.2)、化合物(9.4)對棉球誘導的大鼠肉芽組織增生的慢性炎癥有顯著的抑制作用，與相應的等摩爾劑量的原型甾體激素相比，抗炎效果也具有顯著差異(P<0.05)，而與中國專利ZL 97180284.X公開的采用相同的甾體激素母核的硝酸酯類NO供體型糖皮質激素相比，本發明所制得的化合物對棉球誘導的大鼠肉芽組織增生的慢性炎癥的抗炎效果也具有顯著差異(P<0.05)。
然而，對與同樣采用了呋咱類NO供體的中國專利ZL 97180284.X公開的以氫化可的松為甾體激素母核的NO供體型糖皮質激素，雖然與采用同樣摩爾劑量的氫化可的松的對照組4’相比，抗炎效果稍好，但并不具有統計學意義上的顯著性。
權利要求
1.如下通式(II)的化合物
A—L—X
其中A為甾體激素殘基，具有如下結構，
其中在1-2位是雙鍵，A與L相連的位置是通過A中的R”上的羥基，也可以通過17位上的羥基相連，
其中，取代通式中所述的CH基中的H或CH2中的二個氫H2的取代基可如下
在2位，可以是F，Cl，Br
在3位，可以是，CO(酮基)，—O—CH2—CH2—Cl，OH
在4-5位，可以是雙鍵；
在5-6位，可以是雙鍵；
在6位，可以是Cl，F，CH3，—CHO；
在7位，可以是Cl，Br
在9位可以是Cl，F
在11位，可以是OH，CO，Cl；
在16位可以是CH3，OH，＝CH2
在17位，可以是OH，CH3，OCO(O)x(CH2)yCH3，或
即糠?；?br> 其中x為0或1的整數，y是0至4的整數，
在16-17位置，可以是下述基團；
其中，R2和R3可以相同或不同，并可以為氫或1至8個碳的飽和或不飽和烴基，可以為直鏈、支鏈，或環；
R和R’可以相同或不同，并且可以為氫或具有1至4個碳原子的直鏈或直鏈烷基；
A為皮質甾類基團殘基，橋基團L可以與R”或17位上的羥基以酯鍵的形式相連
所述的R”是CO(CR4R5)O—T1，或CO(CR4R5)—T2
T1是H，CO(O)x1(CH2)y1CH3或T2是H或Cl，其中x1為0或1的整數，y1是0至4的整數
當R”是所述的殘基所在時，為CO(CR4R5)O—，通過其中的羰基與17位相連，氧與橋基團L相連；
所述的殘基還可以在17位，為—O—，
二價橋基團L選自
—(CO)Ob1(CR’4R’5)na(CO)(R7))—
其中，na為0至4的整數，b1為0至1的整數，R4、R’4或R’5、R5相等或彼此不同并選自H，具有1至8個碳原子的飽和或不飽和烴基，可以為直鏈、支鏈或環，優選na＝2，b1為0，R4＝R5＝R’4＝R’5＝H；
R7選自下列基團中的一種
—O(R8)O—，R8為C1～C4的亞烷基
—O(CH2)2O(CH2)2O—，—NHCH2CH2O—，或者
—OCH2C(Ph)O—，—O(CH2)2C(Ph)O—，Ph代表苯基；
—X是釋放一氧化氮的功能基團，選自
R6為C1～C8的飽和或不飽和的烴基。
2.如權利要求1所述的式(II)化合物，優選通過A中的R”上的羥基相連。
3.如權利要求1或2所述的式(II)化合物，其特征是R和R’均為—CH3。
4.如權利要求1或3中任一所述的化合物，在16-17位置的下述基團
其R2為H，R3為正丙基、環己基。
5.如權利要求1至4中任一所述的式(II)化合物中釋放一氧化氮的功能基團，其特征是所述的R6優選含有苯環的取代基。
6.如權利要求1至5中任一所述的式(II)化合物，其特征在于甾體殘基A的H，H2，R1，R2，R3具有下面所列的化合物所定義的結構；布地奈德、環索奈德、阿氯米松、阿爾孕酮、倍氯米松、倍他米松、氯潑尼松、氯倍他索、氯倍他松、氯可托龍、氯波尼醇、地夫可特、地奈德、去羥米松、地塞米松、二氟拉松、二氟可龍、二氟潑尼酯、氟氯奈德、氟米松、氟尼縮松、氟輕松、丁基氟可丁、氟可龍、氟米龍、氟培龍醋酸酯、氟潑尼定醋酸酯、氟潑尼松龍、氟氫縮松、哈西奈德、鹵倍他索丙酸酯、鹵米松、鹵潑尼松醋酸酯、氫可他酯、氯替潑諾、甲羥松、甲潑尼松、甲波尼松龍、莫米松糠酸酯、帕拉米松、潑尼卡酯、潑尼松龍、波尼松龍25—二乙基氨基醋酸酯、、潑尼松、強的松龍戊酸酯、波尼立定、利美索龍、曲安西龍、曲安奈德、21—乙酰氧基孕烯諾龍、可的伐唑、安西奈德、氟替卡松丙酸酯、馬潑尼酮、替可的松、曲安西龍六縮丙酮。
7.如權利要求1至6中任一所述的式(II)或其生理學上可接受的鹽或溶劑合物在生產治療炎癥性、變應性或過敏性疾病的藥物中的應用。
8.一種藥用組合物，包括權利要求1至7中任一所述的式(II)化合物或其生理學上可接受鹽或溶劑合物和至少一種藥學上的載體。
9.一種制備如權利要求1至7中任一所述的式(II)化合物的方法包括如下步驟
1)將作為皮質激素殘基A所代表的皮質激素即A—H(1)在有機溶劑中與?；瘎┒狒?2)反應得到中間體(3)
2)中間體(3)再和NO供體(8)經酯化反應生成目標產物相應的一氧化氮供體型糖皮質激素式(II)化合物
3)以R6—SH(4)為起始原料，與氯乙酸縮和、經過過氧化氫氧化、再與硝酸作用、再和H—R7—H(5)反應得到NO供體(8)。
10.權利要求1至7中任一所述的項式(II)化合物或其生理學上可接受的鹽或溶劑合物在生產治療炎性、變應性或過敏性疾病中的劑量以皮質激素殘基A所代表的皮質激素A—H計為0.001mg-5mg/kg/天。
全文摘要
本發明提供了一種一氧化氮供體型糖皮質激素，為如下通式的化合物(II)或其酯或鹽A-L-X，其中A為甾體激素殘基，橋基團L可以與R”或17位上的羥基以酯鍵的形式相連，二價橋基團L選自-(CO)Ob1(C R’4R’5)na(CO)(R7))-，其中，na為0至4的整數，b1為0至1的整數，R4、R’4或R’5、R5相等或彼此不同并選自H，具有1至8個碳原子的飽和或不飽和烴基，可以為直鏈、支鏈或環，優選na＝2，b1為0，R4＝R5＝R’4＝R’5＝H；本發明還提供了該化合物或其生理上可接受的鹽或溶劑合物在生產治療炎性、變應性或過敏性疾病的藥物中的應用。
文檔編號A61K31/58GK101397328SQ20071005979
公開日2009年4月1日 申請日期2007年9月27日 優先權日2007年9月27日
發明者盧彥昌, 靜 李, 陳立營, 松 陳 申請人:天津藥業研究院有限公司