專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種總生物堿的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于生物堿分離純化
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種總生物堿的制備方法。技術(shù)背景生物堿一般是指植物中的含氮的有機(jī)化合物(蛋白質(zhì)、肽類(lèi)、氨基酸除外)。生物堿是人類(lèi)研究最早的一類(lèi)天然產(chǎn)物。生物堿大都具有較強(qiáng)的活性。生物堿是天然產(chǎn)物中最為復(fù)雜和最為龐大的一類(lèi)化合物，現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的生物堿單體化合物有ioooo個(gè)以上，該類(lèi)化合物廣泛分布于紅豆衫屬、爭(zhēng)>屬、云杉屬、油衫屬、麻黃屬、三尖衫屬以及百合科、石蒜科和百部科、毛茛科、木蘭科、小檗科、防己科、馬兜鈴科、罌粟科、番茄枝科、蕓香科、龍膽科、夾竹桃科、馬錢(qián)科、萏草科、茄科、紫草科和菊科植物中。對(duì)生物堿的研究仍然是天然產(chǎn)物研究的熱點(diǎn)之一。生物堿在藥物中的應(yīng)用分為2種形式一是分離得到生物堿單體化合物作為藥物，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，在天然產(chǎn)物來(lái)源的藥物中有42.8%來(lái)源于生物堿；但是單體生物堿的活性雖然較強(qiáng)，但是其毒副作用也較大，這種用藥方法也無(wú)法與中醫(yī)理論相契合，無(wú)法發(fā)揮植物提取物中的多種生物M揮協(xié)同的作用，因而具有一定的局限性。另外一種是從植物提取分離總生物堿作為藥物，但是在目前的分離提取技術(shù)中，尚不能得到較高純度的總生物堿。雖然當(dāng)前的生物堿的提取和分離技術(shù)已經(jīng)有很多ii^，但現(xiàn)在中藥以及中成藥領(lǐng)域中的對(duì)于植物中的總生物堿仍然只能含量達(dá)到50%,目前較為成熟和通用的總生物堿準(zhǔn)備方法。不能滿(mǎn)足中藥現(xiàn)代化進(jìn)程中的安全、有效、可控的要求。當(dāng)前生物堿制備方法主要有1.有機(jī)溶劑萃取有機(jī)溶劑萃取是利用提取物中各成分在兩種互不相溶的溶刑中分配系數(shù)不同達(dá)到分離的方法，萃取時(shí)組分在兩相溶劑中的分配系數(shù)越大分離效率越高，分離效果越好。對(duì)于親脂性生物堿，利用非極性和低極性有機(jī)溶劑如苯、乙瞇、氯仿等與水進(jìn)行液液萃取；對(duì)于水溶性生物堿，利用極性較大的有機(jī)溶劑如乙酸乙酯、丁醇等與水溶液萃取。有時(shí)可用多種溶劑配置成兩相互不相溶的溶劑進(jìn)行萃取。2.色譜法，也稱(chēng)層析法，是一種物理分離方法，可以用于分離純化和鑒定中藥有效成分。色鐠法包括紙色譜、薄層色譜和柱色譜，其中常用吸附柱色謙純化生物堿成分，一般使用吸附劑為硅膠和氧化鋁。2.1硅膠柱色傳利用硅膠作為吸附劑，約90%以上的分離純化工作均可使用此法。硅膠是中性無(wú)色顆粒，性能穩(wěn)定，分離效率與其粒度、孔徑及表面積等因素有關(guān)。皿柱色諱i用范圍廣，可作為極性和非極性生物堿的純化，成本低、操作方便。2.2氧化鋁柱色謙以氧化鋁作為吸附劑的層析分離法，才艮據(jù)氧化鋁制備和處理方法差異，分為堿性、中性和酸性3種，其中堿性和中性的氧化鋁適用于分離酸性較大、活化溫度較高的生物堿類(lèi)成分。2.3離子交換樹(shù)脂離子交換樹(shù)脂主要通過(guò)靜電引力和范德華力選擇吸附，根據(jù)本身特性分為多種類(lèi)型。針對(duì)生物堿的性質(zhì)選用強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，將酸化的生物堿提取液通過(guò)樹(shù)脂，使生物堿鹽的陽(yáng)離子交換到樹(shù)脂上而與其他成分和雜質(zhì)分離。經(jīng)過(guò)離子交換后的樹(shù)脂用氨水堿化得到游離態(tài)生物堿，等樹(shù)脂晾干后根據(jù)生物堿的親脂或親水性質(zhì)用相應(yīng)的溶劑進(jìn)行提取得到總生物堿。現(xiàn)有的這些總生物堿制備的最常規(guī)方法，存在一個(gè)問(wèn)題就是產(chǎn)物得率低，雜質(zhì)含量高，往往不能通過(guò)本方法直接得到可以藥用的總生物堿。有機(jī)溶劑萃取是生物堿純化的經(jīng)典技術(shù)，應(yīng)用廣泛，具有操作簡(jiǎn)單、容易放大的優(yōu)點(diǎn)，但分離效率和純度較低，使用大量有機(jī)溶劑，操作安全性不佳。離子交換樹(shù)脂法是近來(lái)常用的總生物堿的制備方法，但是這種方法不能單獨(dú)用于總生物堿的制備效果不佳，而必須與其它方法結(jié)合才能應(yīng)用。相關(guān)的總生物堿的制備方法的專(zhuān)利文獻(xiàn)有很多CN02148608.5、CN03159674.6、CN02123967.3、CN200310103945.8、CN03118261.5、CN200310109641.2、CN200410018658.1、CN200310122686.3、CN2004100卯205.X、CN200410013988.1、CN200410065893.4、CN2O0510122258.X、CN200510077440.8、CN200510040909.0、CN200510037754.5、CN200510044345.8、CN200510032062.1、CN200510015970.X、CN200510095455.7、CN20041006147l.X。這些專(zhuān)利都是針對(duì)某一種或幾種植物的總生物堿的制備方法，沒(méi)有一種通用的總生物堿的制備方法。歸結(jié)到一點(diǎn)，目前還沒(méi)有一種廣泛適用的通用的總生物堿的制備方法。而且，雖然目前的方法可以使總生物堿的含量高于50%，但是得率低，純度也較難提髙。這都對(duì)植物中總生物堿的制備方法提出更高的要求。對(duì)于總生物堿這類(lèi)成藥幾率最大，國(guó)內(nèi)資源最為豐富的藥用資源，需要一種通用而廣泛，開(kāi)發(fā)一種具有標(biāo)桿意義的總生物堿的制備方法非常重要。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于針對(duì)目前還沒(méi)有一種廣泛適用的通用的總生物堿的制備方法而提供一種提高總生物堿含量，能夠?qū)ι飰A的提取具有通用意義的制備方法。具體而言，發(fā)明所述的總生物堿的制備方法為將植物提取物依次用弱酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂、強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂和中性氧化鋁純化得到總生物堿。上述優(yōu)選的制備方法為將植物提取物加至弱酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，用水洗脫得組分A，再用氨水洗脫得組分B,將組分A加至強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得組分C，將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化得到總生物堿。上述更優(yōu)選的制備方法為將植物提取物加至弱酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，用水洗脫得組分A,再用氨水洗脫得組分B,將組分A調(diào)pH值為1-3后加至強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得組分C,將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化得到總生物堿。上述的氨水的濃度為3-9%。上述的弱酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱選自南開(kāi)D151、南開(kāi)101型弱酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上述的強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱選自南開(kāi)001x1、南開(kāi)001x2、南開(kāi)001x3、南開(kāi)001x14.5、D151、D018、D019、D020、YWD12V和核亞?wèn)|732型強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂。上述的總生物堿的制備方法，其特征在于所述的強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱選自南開(kāi)OOlxl、南開(kāi)001x2、南開(kāi)001x3、南開(kāi)001x14.5、D151和核亞?wèn)|732型強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂。上述的植物提取物是由益母草、延胡索、百部、顛茄、北豆根、石斛、雷公藤、金果欖、天仙子、一葉萩、黃連、麻黃、防己、黃柏、鉤藤、貝母、浙貝母、喜樹(shù)果、吳茱萸、金雞納皮、檳榔、長(zhǎng)春花、苦參、山豆根、秦艽、蘿芙木、烏藥、川烏、附子、半邊蓮和白鮮皮之一用溶劑提取得到的。本發(fā)明方法針對(duì)益母草中總生物堿制備方法的摸索過(guò)程擴(kuò)展得到的。通過(guò)實(shí)驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn)將植物提取物依次用弱酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂、強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂和中性氧化鋁柱純化得到總生物堿的這種總生物堿的制備方法具有對(duì)生物堿制備的普遍意義，對(duì)其它植物中所含的總生物堿的制備也優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)。以下是針對(duì)益母草總生物堿制備方法的摸索過(guò)程1.強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂的分離效果將益母草提取物上強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，通過(guò)薄層檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂能將益母草所有的生物堿吸附在樹(shù)脂柱上，水蘇堿在吸附后用稀氨水就能解吸附，益母草堿用氨水、氫氧化鈉均不能解吸附。結(jié)論強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂不能用來(lái)富集純化益母草堿這類(lèi)生物堿，這種死吸附是藥物有效成分的不可逆的損失，這也是當(dāng)前現(xiàn)有公開(kāi)技術(shù)的最大缺陷。2.弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂的分離效果將益母草提取物上弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，通過(guò)薄層檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂能將益母草堿吸附在樹(shù)脂柱上，水蘇堿直接通過(guò)樹(shù)脂柱，益母草堿能較好的吸附在樹(shù)脂柱上，用氨水洗脫就能解吸附。因而使用弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂能解決的益母草堿類(lèi)生物堿的死吸附問(wèn)題；但又不能富集水蘇堿這類(lèi)生物堿。3.中性氧化鋁柱的分離效果將益母草提取用中性氧化鋁柱柱純化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過(guò)薄層檢驗(yàn)和外觀觀察發(fā)現(xiàn)中性氧化鋁柱對(duì)益母草堿和水蘇堿均沒(méi)有吸附，但是可以去除色素和非生物堿的雜質(zhì)。4.將益母革提取液依次用弱酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂、強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂和中性氧化鋁柱純化得到總生物堿。通過(guò)薄層檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)所得益母草總生物堿中含有益母草堿和水蘇堿兩類(lèi)生物堿，避免了兩類(lèi)生物堿在制備過(guò)程中的損失，總生物堿的含量也提高到80%以上。研究中通過(guò)采用水、酸水、有機(jī)溶劑提取法和離子交換樹(shù)脂法等方法與本發(fā)明提供方法對(duì)比發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的技術(shù)方案推廣到其它植物的總生物堿的制備時(shí)，具有大大提高生物堿含量的作用，優(yōu)于目前的總生物堿的準(zhǔn)備方法。因而本發(fā)明是一種具有普遍意義的總生物堿的制備方法。這對(duì)目前研究最為活躍，而制備方法尚存在不足的總生物堿的制備具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。具體實(shí)施方式下面用實(shí)施例進(jìn)一步描述本發(fā)明，有利于對(duì)本發(fā)明及其優(yōu)點(diǎn)、效果更好的了解，但所述實(shí)驗(yàn)例和實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不是限制本發(fā)明。實(shí)施例1-益母萆總生物械的制備取益母草300g,加水煎煮三次，第一次2小時(shí)，第二次1.5小時(shí)，第三次l小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇并濃縮至輛骨狀，加水稀釋至500ml,冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，將濾液加至南開(kāi)D151弱酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，用水洗脫得組分A，再用4-5%氨水洗脫得組分B。將組分A調(diào)pH值為3后加至D151強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得組分C，將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑即得到益母草總生物堿。實(shí)施例2-益母草總生物堿的制備取益母草300g，加水煎煮三次，第一次2小時(shí)，第二次1.5小時(shí)，第三次1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至約250ml，冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠骨狀，加水稀釋至500ml,冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，將濾液加至GDX104型大孔樹(shù)脂柱上，用水洗脫得組分A，再用50%乙醇洗脫得組分B。將組分A調(diào)pH值為1后加至D018強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得組分C,將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑即得到益母草總生物堿。實(shí)施例3-益母草總生物械的制備取益母草300g,加水煎煮三次，第一次2小時(shí)，第二次1.5小時(shí)，第三次l小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至約250ml，冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠奮狀，加水稀釋至500ml,冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，將濾液加至南開(kāi)D151弱酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，用水洗脫得組分A,再用4-5。/o氨水洗脫得組分B。將組分A調(diào)pH值為2.5后加至南開(kāi)001x1型強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得組分C,將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑即得到益母草總生物堿。實(shí)施例4-益母草總生物械的制備取益母革300g,加水煎煮三次，第一次2小時(shí)，第二次1.5小時(shí)，第三次l小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠青狀，加水稀釋至500ml,冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，將濾液加至GDX104型大孔樹(shù)脂柱上，用水洗脫得組分A，再用50%乙醇洗脫得組分B。將組分A調(diào)pH值為3后加至南開(kāi)001x2型強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得組分C，將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑即得到益母草總生物堿。實(shí)施例5-益母草總生物械的制備取益母草300g,加水煎煮三次，第一次2小時(shí)，第二次1.5小時(shí)，第三次l小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠青狀，加水稀釋至500ml，冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，將濾液加至南開(kāi)D151弱酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，用水洗脫得組分A,再用4-5乂氨水洗脫得組分B。將組分A調(diào)pH值為3后加至D151強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得組分C,將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑即得到益母草總生物堿。實(shí)施例6~白鮮皮總生物堿的制備取白鮮皮300g，加1%石克酸煎煮三次，第一次2小時(shí)，第二次1.5小時(shí)，笫三次l小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至約250ml，冷卻，加等量的水，攪勻，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收溶劑并濃縮至稠骨狀，加水稀釋至500ml,冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，將濾液加至南開(kāi)101弱酸型陽(yáng)離手交換樹(shù)脂柱上，用水洗脫得組分A，再用50%乙醇洗脫得組分B。將組分A調(diào)pH值為1后加至D018強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得組分C，將組分B和C合并用中性氣化鋁柱純化后揮去溶劑即得到白鮮皮總生物堿。實(shí)施例7-顛茄總生物械的制備取顛茄300g,加95%乙醇煎煮三次，第一次2小時(shí)，第二次1.5小時(shí)，第三次l小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的2%硫酸，攪勻，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠奮狀，加水稀釋至500ml,冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，將濾液加至南開(kāi)101型弱酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，用水洗脫得組分A，再用4-5%氨水洗脫得組分B。將組分A調(diào)pH值為2.6后加至D019強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得組分C,將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑得到總生物堿備用。實(shí)施例8-黃連總生物堿的制備將300g黃連加水浸泡30分鐘后，煎煮2次，每次2小時(shí)，合并煎液濾過(guò)得澄清液I,將澄清液I加至南開(kāi)D151弱酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，用水洗脫得組分A,再用4-5%氨水洗脫得組分B。將組分A調(diào)pH值為3.0后加至YWD12V強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得組分C,將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑得到總生物堿。實(shí)施例9-苦參總生物械的制備將300g苦參加水浸泡30分鐘后，加95%甲醇煎煮三次，第一次2小時(shí)，第二次1.5小時(shí)，第三次1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的水，攪勻，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠骨狀，加7jc^釋至500ml,冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，濾液加至南開(kāi)D151弱酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，用水洗脫得組分A,再用50%乙醇洗脫得組分B。將組分A調(diào)pH值為1.8后加至YWD12V強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得組分C,將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑得到總生物堿。實(shí)施例10-黃柏總生物堿的制備取黃柏300g，加水煎煮三次，第一次2小時(shí)，第二次1.5小時(shí)，第三次l小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至約250ml，冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠青狀，加水稀釋至500ml,冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，將濾液加至南開(kāi)101弱酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，用水洗脫得組分A，再用4-5%氨水洗脫得組分B。將組分A調(diào)pH值為2.5后加至南開(kāi)001x1型強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得組分C,將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑即得到黃柏總生物堿。實(shí)施例U—雷^S藤總生物械的制備取雷公藤300g，加水煎煮三次，第一次2小時(shí)，第二次1.5小時(shí)，第三次l小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至約250ml，冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收&酵并濃縮至稠骨狀，加水稀釋至500ml，冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，將濾液加至南開(kāi)D15i弱酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，用水洗脫得組分A，再用50%乙醇洗脫得組分B。將組分A調(diào)pH值為3后加至南開(kāi)001x2型強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得組分C,將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑即得到雷公藤總生物堿。實(shí)施例12-延胡索總生物械的制備取延胡索300g，加水煎煮三次，第一次2小時(shí)，第二次1.5小時(shí)，第三次l小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠骨狀，加水稀釋至500ml,冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，將濾液加至南開(kāi)101弱酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，用水洗脫得組分A,再用4-5%氨水洗脫得組分B。將組分A調(diào)pH值為1后加至南開(kāi)001x14.5型強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得組分C,將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑即得到延胡索總生物堿。實(shí)施例13~~防己總生物堿的制備取防己300g,加水煎煮三次，第一次2小時(shí)，第二次1.5小時(shí)，第三次1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至約250ml，冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠青狀，加水稀釋至500ml，冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，將濾液加至南開(kāi)D151弱酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，用水洗脫得組分A,再用50%乙醇洗脫得組分B。將組分A調(diào)pH值為2后加至核亞?wèn)|732型強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得組分C，將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑即得到防己總生物堿。實(shí)施例l"吳茱萸總生物堿的制備取吳茱萸300g,加水煎煮三次，第一次2小時(shí)，第二次1.5小時(shí)，第三次l小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠青狀，加水稀釋至500ml，冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，將濾液加至南開(kāi)101弱酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，用水洗脫得組分A,再用50%乙醇洗脫得組分B。將組分A調(diào)pH值為2后加至核亞?wèn)|732型強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得組分C，將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑即得到吳茱萸總生物堿。對(duì)比例1-益母草總生物堿的制備取益母草300g，加水煎煮三次，第一次2小時(shí)，第二次1.5小時(shí)，第三次l小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠骨狀，加水稀釋至500ml，冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，將濾液調(diào)pH值為l-3后加至D151強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得組分得到益母草總生物堿。對(duì)比例2-益母革總生物堿的制備取益母草300g,加水煎煮三次，第一次2小時(shí)，第二次3小時(shí)，第三次1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠青狀，加水稀釋至500ml，冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，將濾液調(diào)pH值為1-3后加至D018強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得組分得到益母草總生物堿。對(duì)比例3-益母草總生物械的制備取益母草300g，加水煎煮三次，笫一次2小時(shí)，第二次1.5小時(shí)，第三次1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至約250ml，冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇升濃縮至稠骨狀，加水彿釋至500ml，冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，將濾液調(diào)pH值為1-3后加至南開(kāi)001x1強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得組分得到益母草總生物堿。對(duì)比例4-益母草總生物堿的制備取益母草300g，加水煎煮三次，第一次2小時(shí)，第二次3小時(shí)，第三次1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至約250ml，冷卻，力n等量的乙醇，攪勾，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠骨狀，加水稀釋至500ml,冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，將濾液調(diào)pH值為1-3后加至南開(kāi)001x2強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得組分得到益母草總生物械。對(duì)比例5-益母草總生物堿的制備取益母草300g,加水煎煮三次，第一次2小時(shí)，第二次1.5小時(shí)，第三次1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠骨狀，加水稀釋至500ml，冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，將濾液加至D151強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得組分C,將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑即得到益母草總生物堿。對(duì)比例6"白鮮皮總生物堿的制備取白鮮皮300g，加1。/U克酸煎煮三次，第一次2小時(shí)，第二次1.5小時(shí)，第三次1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至約250ml，冷卻，加等量的水，攪勻，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收溶劑并濃縮至稠骨狀，加水稀釋至500ml，冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，將濾液加至D018強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得白鮮皮總生物堿。對(duì)比例7-顛茄總生物堿的制備取顛茄300g，加95%乙醇煎煮三次，第一次2小時(shí)，第二次1.5小時(shí)，第三次1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的2%>琉酸，攪勻，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠青狀，加水稀釋至500ml,冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，將濾液加至D019強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得組分C,將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑得到總生物堿備用。對(duì)比例8-黃連總生物堿的制備將300g黃連加水浸泡30分鐘后，煎煮2次，每次2小時(shí)，合并煎液濾過(guò)得濾液，將濾液加至YWD12V強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得到總生物堿。對(duì)比例9-苦參總生物堿的制備將300g苦參加水浸泡30分鐘后，加95%曱醇煎煮三次，第一次2小時(shí)，第二次1.5小時(shí)，第三次l小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的水，攪勻，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠骨狀，加水稀釋至500ml,冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，濾液加至YWD12V強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得組分C,將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑得到總生物堿。對(duì)比例10-黃柏總生物堿的制備取黃柏300g，加水煎煮三次，第一次2小時(shí)，第二次1.5小時(shí)，第三次l小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠骨狀，加水稀釋至500ml,冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，將濾液pH值為2.5后加至南開(kāi)001x1型強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得組分C，將組分c用中性氧化鋁柱純化后揮去溶刑即得到黃柏總生物堿。對(duì)比例11—雷公藤總生物堿的制備取雷公藤300g,加水煎煮三次，第一次2小時(shí)，第二次1.5小時(shí)，第三次l小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠骨狀，加水稀釋至500ml，冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，將濾液pH值為3后加至南開(kāi)001x2型強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得組分C,將組分C用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑即得到雷公藤總生物堿。對(duì)比例12-延胡索總生物堿的制備取延胡索300g,加水煎煮三次，第一次2小時(shí)，第二次1.5小時(shí)，第三次l小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠骨狀，加水稀釋至500ml,冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，將濾液調(diào)pH值為1后加至南開(kāi)001x14.5型強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得組分C,將組分C用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑即得到延胡索總生物堿。對(duì)比例13_防己總生物堿的制備取防己300g，加水煎煮三次，第一次2小時(shí)，第二次1.5小時(shí)，第三次l小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠青狀，加水稀釋至500ml,冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，將濾液調(diào)pH值為2后加至核亞?wèn)|732型強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得組分C,將組分C用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑即得到防己總生物堿。對(duì)比例14~吳茱萸總生物堿的制備取吳茱萸300g,加水煎煮三次，第一次2小時(shí)，第二次1.5小時(shí)，第三次l小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至約250ml，冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠青狀，加水稀釋至500ml,冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，將濾液調(diào)pH值為2后加至核亞?wèn)|732型強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得組分C,將組分C用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑即得到吳茱萸總生物堿。實(shí)驗(yàn)例1-本發(fā)明中實(shí)施例和對(duì)比例的益母草堿的薄層對(duì)比1-樣品實(shí)施例1-4、對(duì)比例1-4。2.實(shí)驗(yàn)方法將實(shí)施例1-4、對(duì)比例1-4和各取10g,粉碎后，裝入索氏提取器，用甲醇回流1小時(shí)后，過(guò)濾，待用。將益母草堿、水蘇堿樣品和實(shí)施例1-6曱醇溶液各自點(diǎn)在薄層板上，用乙酸乙酯-正丁醇-鹽酸(3:2:1)系統(tǒng)展開(kāi)，用珙化鉍鉀顯色。3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)市售的對(duì)比例1-4無(wú)益母草威險(xiǎn)出。而實(shí)施例1-4中含有益母草堿。4.結(jié)論本實(shí)驗(yàn)說(shuō)明，通過(guò)本發(fā)明實(shí)現(xiàn)的生物械制備方法可以避免益母草堿的損失，優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)和市售的產(chǎn)品。實(shí)賒例2-本發(fā)明中實(shí)施例與對(duì)比例的益母革堿含量的液相色謙對(duì)比1.樣品實(shí)施例1-4、對(duì)比例1-4。2.實(shí)驗(yàn)方法將實(shí)施例l-4和對(duì)比例l-4所得總生物堿，各取10g,粉碎后，裝入索氏提取器，用甲醇回流l小時(shí)后，過(guò)濾，轉(zhuǎn)入100ml容量瓶中，用甲醇定容后，待測(cè)。益母草堿檢測(cè)色鐠糾為液相色i瞽儀島津LC-20AB,檢測(cè)器SPD-M20A,色語(yǔ)柱Cis4.6x250mm5,，柱溫30°C，流動(dòng)相乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液14:86，檢測(cè)波長(zhǎng)276nm。3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果，樣品益母草堿含量(在總生物堿中的含量，％)實(shí)施例17.24%實(shí)施例25.63%實(shí)施例33.69%實(shí)施例45.89%對(duì)比例10.17%對(duì)比例20.05%對(duì)比例30.13%對(duì)比例40.25%4.結(jié)論對(duì)比例l-4是當(dāng)前對(duì)于益母草總生物堿提取分離的代表方法，通過(guò)與本發(fā)明的對(duì)比實(shí)驗(yàn)說(shuō)明，本發(fā)明實(shí)現(xiàn)的生物堿制備方法可以避免益母草堿的損失，大大保存益母草中的重要有效成分益母草堿，從而更加有效得保證藥物得質(zhì)量，是一種更加新穎和優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)的總生物堿制備方法。實(shí)驗(yàn)例3-總生物堿的與現(xiàn)有技術(shù)的對(duì)照樣品實(shí)施例5-14,對(duì)比例5-14。用下述方法測(cè)定兩種各2批的總生物堿的含量。對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取干燥至恒重的單體生物堿(各植物的代表生物堿)5mg,至于25ml容量瓶中，力口0.1mol/L的鹽酸液使溶解并稀釋到刻度，搖勻，即得。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對(duì)照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml，分別至于25ml的容量瓶中，均用0.1mol/L的鹽酸液稀釋至10ml,放置1小時(shí)，減壓濾過(guò)，在特定波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)定法精密稱(chēng)取樣品適量，至于100ml容量瓶中，加0.1mol/L鹽酸液稀釋至刻度，搖勻，再精密量取稀釋液7.0ml，置25ml燒杯中，加0.1mol/L鹽酸液稀釋至10ml，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自"置冰浴中"起，測(cè)定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出供試品溶液中的含量，計(jì)算，即得。含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表l。表1總生物堿含量測(cè)定比較<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>備具有優(yōu)于常規(guī)技術(shù)的純度，顯著提高生物堿制備在安全、可控和有效方面的需求，是一種具有普遍意義的具有創(chuàng)新意義的制備方法。權(quán)利要求1.一種總生物堿的制備方法，其特征在于所述的制備方法為將植物提取物依次用弱酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂、強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂和中性氧化鋁純化得到總生物堿。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的總生物堿的制備方法，其特征在于所述的制備方法為將植物提取物加至弱酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，用水洗脫得組分A,再用氨水洗脫得組分B,將組分A加至強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得組分C，將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化得到總生物堿。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的總生物堿的制備方法，其特征在于所述的制備方法為將植物提取物加至弱酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，用水洗脫得組分A，再用氨水洗脫得組分B,將組分A調(diào)pH值為l-3后加至強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上洗脫得組分C,將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化得到總生物堿。4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的總生物堿的制備方法，其特征在于所述的氨水的濃度為3-9%。5.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的總生物堿的制備方法，其特征在于所述的弱酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱選自南開(kāi)D151、南開(kāi)101型弱酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱。6.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的總生物堿的制備方法，其特征在于所述的強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱選自南開(kāi)001x1、南開(kāi)001x2、南開(kāi)001x3、南開(kāi)001x14.5、D151、D018、D019、D020、YWD12V或核亞?wèn)|732型強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂。7.根據(jù)權(quán)利要求1-3所述的總生物堿的制備方法，其特征在于所述的植物提取物是由益母草、延胡索、百部、顛茄、北豆根、石斛、雷公藤、金果欖、天仙子、一葉萩、黃連、麻黃、防己、黃柏、鉤藤、貝母、浙貝母、喜樹(shù)果、吳茱萸、金雞納皮、檳榔、長(zhǎng)春花、苦參、山豆根、秦艽、蘿芙木、烏藥、川烏、附子、半邊蓮和白鮮皮之一提取得到的。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種總生物堿的制備方法。本發(fā)明將植物提取物依次用弱酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂、強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂和中性氧化鋁純化得到總生物堿。通過(guò)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)的摸索，確認(rèn)本發(fā)明的制備方法對(duì)于提高總生物堿含量非常有效，是一種通用有效的總生物堿制備方法。文檔編號(hào)A61K36/489GK101244096SQ200710080239公開(kāi)日2008年8月20日申請(qǐng)日期2007年2月15日優(yōu)先權(quán)日2007年2月15日發(fā)明者魏海關(guān)申請(qǐng)人:北京天新園醫(yī)藥科技開(kāi)發(fā)有限公司