專利名稱：：胸腺五肽鼻噴霧劑，其制備方法及應用的制作方法
技術領域：
：本發明涉及一種胸腺五肽的鼻內給藥的藥物制劑及其制備工藝，還涉及該制劑用于18歲以上的慢性乙型肝炎患者、各種原發性或繼發性T細胞缺陷病、某些自身免疫性疾病(如類風濕性關節炎、系統性紅斑狼瘡等)、各種細胞免疫功能低下的疾病、腫瘤的輔助治療。
背景技術：
："胸腺生成素n"是從胸腺激素中分離出來的單一多肽化合物，由49個氨基酸組成，而其中由5個氨基酸組成的肽鏈片段，有著與"腺生成素n〃相同的全部生理功能，所以就把這個五肽片段稱為〃胸腺五肽〃(Thymopentin)。胸腺五肽為雙向免疫調節劑，其藥理作用大致為誘導T細胞分化、促進T淋巴細胞亞群發育、成熟并活化的功能，并能調節T淋巴細胞亞群的比例，使其趨于正常。在機體中，胸腺五肽通過提高cAMP水平，促進T細胞分化，并與T細胞特異受體結合，使細胞內GMP水平提高，從而誘發一系列胞內反應，起到調節機體免疫功能的作用。胸腺五肽無任何毒副作用和不良反應，國內外均已完成了大量的"胸腺五肽"臨床試驗。病人經胸腺五肽治療后，經血液學，臨床生化學、尿分析等各項檢查指標均未發現有任何與"胸腺五肽"相關的不良變化或毒副作用。常規心電圖、血壓、眼科、聽力檢查也未發現有任何與"胸腺五肽"相關的不良變化或副作用。常規臨床觀察中，除少量發生在停藥后癥狀消失的輕微嗜睡、倦怠外，也無任何不良反應，國外報道至少50例病人長期用藥達卜2年，均無與"胸腺五肽"相關的不良反應，并且與十余類常用藥物共同使用亦無發現任何相互抵觸。同時，胸腺五肽分子較小，易于化學合成，成本較低，純度高，不含有大分子蛋白質。胸腺肽五肽適用于免疫缺陷癥如病毒、霉菌感染等以及藥物引起的免疫功能失調癥，用于再生障礙性貧血、血小板減少癥、急慢性病毒肝炎、系統性紅斑狼瘡、肺結核神經根炎，骨髓炎、類風濕性關節炎、流行性腦脊髓膜炎、慢性支氣管炎、支氣管哮喘、多發性節腫、慢性腸道感染、多發性關節炎伴尿道炎、口腔粘膜扁平苔癬、小兒癲癇、老年性早衰、婦女更年期綜合癥。隨著人們對"非典"認識的不斷提高，健康和免疫能力的概念得到了普及宣傳，人們丌始關注自己的免疫功能，關注自身的健康，在國家的倡導下，自動的加入了全民健身的運動當中。人們盼望能夠使用提高自身免疫功能的特效藥物的心理日趨迫切。綜上所述，胸腺肽五肽在臨床上顯示了良好的雙向免疫調節的作用，是一種成功的免疫調節劑。目前市場上已有劑型為胸腺五肽注射液、注射用胸腺五肽，醫生和患者在使用這些劑型時帶來了不少麻煩，如醫生在使用之前器具的消毒、患者要忍受注射疼痛、注射部位感染等。本發明根據胸腺五肽的特點，制備一種鼻內給藥的制劑，同時經過配方的探索，找到一種優良的配方組成，從而開辟了一條新的給藥途徑，該制劑不僅使用方便、同時減輕了病人使用時的痛苦，大大增加了病人用藥的順從性，更易被廣大患者所接受
發明內容-本發明提供一種胸腺五肽鼻內給藥的制劑，該制劑包括活性成分胸腺五肽和必要的輔料成分。本發明的鼻內給藥的制劑可以是滴劑，也可以是噴劑，本發明優選鼻噴霧劑。本發明結合胸腺五肽的特點，選擇了以下輔料成滲透壓調節劑、吸收促進劑、穩定劑、緩沖劑、防腐劑和抗氧化劑。其中滲透壓調節劑選自氯化鈉、葡萄糖、甘油、甘露醇、山梨醇、氯化鈉、硼酸、葡萄糖、硼砂等。吸收促進劑選自檸檬酸類、水楊酸類、萜類、精油及內酯(如簿荷腦、龍腦、桉油及川穹、小豆蔻等)等；穩定劑選自甘氨酸等20種人體氨基酸，低分子右旋糖酐、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二鈉、乙二胺四乙酸鈉鈣等；緩沖劑選自磷酸鹽、醋酸鹽、檸檬酸鹽、檸檬酸-磷酸二氫鈉、檸檬酸-磷酸氫二鈉等；防腐劑選自苯甲醇、三氯叔丁醇、硫柳汞、硝酸苯汞、苯扎氯銨、洗必泰、苯氧乙醇、尼泊金酯、山梨酸等；抗氧劑選自亞硫酸氫鈉、偏重亞硫酸鈉、半胱氨酸、谷胱氨酸、抗壞血酸等。經過大量篩選，本發明從中選出了特別優選的配方組成。其中，優選的滲透壓調節劑是氯化鈉、優選的穩定劑是乙二胺四乙酸二鈉、優選的緩沖鹽為檸檬酸-磷酸二氫鈉、優選的吸收促進劑是檸檬酸、優選的抗氧化劑是亞硫酸氫鈉、優選的抑菌劑是苯扎氯銨。另外本發明經過實驗驗證，發現本發明的制劑其PH在4.05.5之間最穩定。因此，本發明最優選的配方組成如下處方如下胸腺五肽25.0g氯化鈉7.5g檸檬酸一水化合物1.7g磷酸氫二鈉二水化合物3.0g本扎氯銨(50%):0.2g_加注射用水至:_125(MpH調至4.05.5共制得500瓶本發明的制劑的制備方法如下1、在十萬級潔凈區內稱取處方量的上述原輔料至滅菌容器中；2、加入適量注射用水后充分攪拌至完全溶解；3、用0.1M的鹽酸或氫氧化鈉調節pH值至4.0至5.0之間；4、在加注射用水至全量；5、轉移至萬級潔凈區內，經0.22um微孔濾膜精濾；并測定含量、pH值、藥液澄清度等；6、合格后進行灌裝、加泵、軋蓋并加帽；7、全檢合格后，貼簽、裝盒。本發明的制劑具有突出的穩定性。以下實驗結果可以說明本發明的優良效果我們主要考察胸腺五肽鼻噴霧劑的外觀性狀、pH值、溶液的澄清度與顏色、有關物質、含量等檢查。主要進行了影響因素試驗、加速試驗和長期試驗。影響因素試驗主要考察因素是高溫和強光照射。強光照射試驗將供試品放置于強光4500土5001x環境中10天，分別于5天、10天取樣，按穩定性重點考察項目檢測，并于O天相比較。相關數據見表l:表l強光試驗考察結果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>強光照射試驗結果表明本品在強光照射時，各指標略有變化，需遮光保存。高溫試驗將供試品放置于高溫60度環境中10天，分別于5天、IO天取樣，按穩定性重點考察項目檢測，并于O天相比較。相關數據見表2:表2高溫試驗考察結果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>高溫試驗結果表明本品在高溫環境中，其澄清度、顏色不變，pH值、有關物質、含量均略有變化，內包材與藥液的相容性較好。加速試驗將本品置于40度環境中，放置3個月，分別于O、1、2、3個月取樣，按穩定性重點考察項目進行測定。試驗結果見表3:表3加速試驗考察結果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>加速試驗結果表明本品在40度環境中，其pH值有關物質、含量均略有變化，需在陰涼處保存。本發明的配方組成是經過篩選得到的，篩選過程如下1、劑型的確定鼻內給藥能夠避免肝臟的首過效應和胃腸道的降解，提高化學藥物和肽類藥物的生物利用度，同時給藥時無痛苦，易于被患者所接受。所以我們選擇鼻黏膜給藥，制成鼻噴霧劑。2、主藥濃度的確定鼻黏膜對胸腺五肽的生物利用度(與靜脈注射相比)約在15%20%之間，而胸腺五肽的血藥濃度在O.120.24ug/ml可以發揮其正常的藥理作用；另有，我們設計的微量給藥泵為100ul/次，每次使用時左右鼻腔各給藥一次。鑒于此，我們確定其主藥濃度為20mg/ml。3、pH值的確定我們通過pH值在28范圍內取點，通過3(TC加速實驗得到藥液pH值在4.05.5范圍最為穩定，同時它與2005年版藥典規定的鼻內給藥的藥液pH值范圍一般在5.57.5之間比較接近，所以我們選擇4.05.5這個范圍。4、吸收促進劑與緩沖體系的確定有關文獻報道過，擰檬酸鹽可以促進鼻黏膜對藥物的吸收；同時檸檬酸鹽與磷酸鹽可以構成4.05.5范圍內的緩沖體系，所以我們選用檬酸鹽一磷酸鹽緩沖體系，其濃度為檸檬酸一水化合物1.36mg/ml，磷酸氫二鈉二水化合物2.4mg/ml。用高效液相色譜測定含量，同時進行輔料空白試驗，主藥與輔料無干擾。5、抑菌劑的確定我們選擇在藥用溶液中比較常用的本扎氯銨作為抑菌劑，在8mg/100ml的濃度時有較好的抑菌效果。用高效液相色譜測定含量，同時進行輔料空白試驗，主藥與輔料無干擾。6、滲透壓調節劑的確定將上述1-5篩選所得的原輔料按照制備工藝加入后，測得其滲透壓低于人體中血漿總滲量濃度(280320mOsmol/L)，則我們加入常用的滲透壓調節劑氯化鈉0.6%(w/v)，使其滲透壓濃度保持在280320m0smol/L范圍內，起到保護鼻黏膜的作用。用高效液相色譜測定含量，同時進行輔料空白試驗，主藥與輔料無干擾。7、確定處方胸腺五肽25.0g氯化鈉7.5g擰檬酸一水化合物1.7g磷酸氫二鈉二水化合物3.0g本扎氯銨(50%):0.2g_加注射用水至:_1250ml_pH調至4.05.5共制得500瓶本發明的制劑是溶液制劑，生產過程需要控制產品質量，為此本發明還提供本發明產品的質量控制方法，包括性狀，鑒別，檢査，含量測定等步驟，具體步驟見實施例2。本發明的藥物制劑，其優良的配方組成和ra范圍的選擇，使本發明制劑穩定，儲存時間長，打開蓋子后可以多次使用，使用方便，成本低廉。具體實施例方式實施例1處方如下胸腺五肽25.0g氯化鈉7.5g檸檬酸一水化合物1.7g磷酸氫二鈉二水化合物3.0g本扎氯銨(50%):0.2g_加注射用水至:_1250ml_pH調至4.05.5共制得500瓶本發明的制劑的制備方法如下1、在十萬級潔凈區內稱取處方量的上述原輔料至滅菌容器中；2、加入適量注射用水后充分攪拌至完全溶解；3、用0.1M的鹽酸或氫氧化鈉調節pH值至4.0至5.0之間；4、在加注射用水至全量；5、轉移至萬級潔凈區內，經0.22um微孔濾膜精濾；并測定含量、pH值、藥液澄清度等;6、合格后進行灌裝、加泵、軋蓋并加帽；7、全檢合格后，貼簽、裝盒。實施例2質量控制方法胸腺五肽鼻噴霧劑XiongxianwutaiBipenwujiThymopentinNasalSpray本品為胸腺五肽的水溶液。以肽含量計含胸腺五肽(CMH19N909)應為標示量的90.0110.0%。性狀本品為無色澄明液體。鑒別(1)、取本品約lmg，加水lml使溶解，加雙縮脲試劑(取硫酸銅O.15g，加酒石酸鉀鈉0.6g，加水50ml，攪拌下加入10%氫氧化鈉溶液30ml，加水100ml，即得)lml，即顯藍紫色。(2)、在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品主峰的保留時間應與對照品主峰的保留時間一致。檢查pH值取本品，依法測定(中國藥典2005年版二部附錄VIH)，pH值應為4.05.5。有關物質取本品適量，加流動相制成lml中含胸腺五肽lmg的溶液，作為供試品溶液；精密量取供試品溶液適量，用流動相稀釋成每lml中0.01mg的溶液，作為對照溶液。照含量測定項下的色譜條件試驗，取對照溶液100ul，注入液相色譜儀，調節儀器靈敏度，使主峰高為滿量程的10%~20%，再取供試品溶液100pl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主峰保留時間的2.5倍。供試品溶液色譜圖中如有雜質峰，單一最大雜質峰面積應不得過對照溶液主峰面積(2.0%),各雜質峰面積之和應不得過對照溶液主峰面積的2.5倍(5.0%)。每瓶總噴次取本品4支，分別除去帽蓋，精密稱重(W,);試噴10次后用水洗凈噴頭，充分干燥后精密稱重(W2);再連續噴射10次后用水洗凈噴頭，干燥后精密稱重(W》)；將噴霧泵撬開，棄去藥液，用水洗凈模制瓶干燥后精密稱重(W》，按下式計算每瓶總噴次，均應不少于每瓶標示總噴次。總噴次二iox(t^—wj+(w2—wg每噴主藥含量取本品1瓶，除去帽蓋，試噴數次，直至呈正常霧狀噴量后用水洗凈噴頭，取潔凈干燥的小燒杯斜扣于噴嘴上，連續噴射20次，用流動相將燒杯中的藥液定量轉移至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，照含量測定項下的方法測定，所得結果除以20，即為每噴主藥含量。每噴主藥含量應為標示量的80120%。霧滴分布取本品，依法檢查(中國藥典2005年版附錄XH)，霧滴藥物量應不少于每噴主藥含量標示量的15%。裝量取本品5支，將藥液分別用干燥并預經標化的注射器抽盡，讀出每瓶藥液的裝量，并求其平均裝量，應符合規定。微生物限度取本品，依法檢查(中國藥典2000年版二部附錄XIJ薄膜過濾法)，應符合規定。含量測定照高效液相色譜法(中國藥典現行版二部附錄VD)測定。色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑；0.05mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.0)-甲醇(90:10)為流動相；檢測波長為275nm。理論板數按胸腺五肽峰計算應不低于1200。測定法取本品5支，混勻后取lml，加入流動相稀釋制成每lml中約含胸腺五肽0.5rag的溶液，作為供試品溶液，精密量取20nl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另精密稱取經五氧化二磷千燥至恒重的胸腺五肽對照品適量，用流動相溶解并稀釋制成每lml中約含胸腺五肽0.5mg的溶液，作為對照溶液，同法測定。按外標法以峰面積計算，即得。類別免疫調節藥規格(1)2.5ml:60mg(22噴，2.4mg/噴)貯藏蔽光，陰涼處保存。有效期暫定二年權利要求1、一種胸腺五肽鼻內給藥制劑。2、權利要求l所述的制劑，其特征是，所述制劑是鼻噴霧劑，由胸腺五肽和適宜的藥用輔料組成。3、權利要求2所述的制劑、其特征是，所述藥用輔料選自滲透壓調節劑、吸收促進劑、穩定劑、緩沖劑、防腐劑和抗氧化劑。4、權利要求3所述的制劑、其特征是，其中滲透壓調節劑選自氯化鈉、葡萄糖、甘油、甘露醇、山梨醇、氯化鈉、硼酸、葡萄糖、硼砂；吸收促進劑選自檸檬酸類、水楊酸類、萜類、精油及內酯，如簿荷腦、龍腦、桉油及川穹、小豆蔻；穩定劑選自甘氨酸等20種人體氨基酸，低分子右旋糖酐、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二鈉、乙二胺四乙酸鈉鈣；緩沖劑選自磷酸鹽、醋酸鹽、檸檬酸鹽、檸檬酸-磷酸二氫鈉、檸檬酸-磷酸氫二鈉等；防腐劑選自苯甲醇、三氯叔丁醇、硫柳汞、硝酸苯汞、苯扎氯銨、洗必泰、苯氧乙醇、尼泊金酯、山梨酸；抗氧劑選自亞硫酸氫鈉、偏重亞硫酸鈉、半胱氨酸、谷胱氨酸、抗壞血酸。5、權利要求4所述的制劑，其特征是，配方組成為0.l-100mg/ml胸腺五肽、5-100mM/L檸檬酸-磷酸氫二鈉、0.001-0.5%w/v乙二胺四乙酸二鈉、0.05-1.0%w/v亞硫酸氫鈉、0-9.0%w/v氯化鈉、0.001-0.05%w/v苯扎氯銨。6、權利要求5所述的制劑，其特征是，配方組成為1-50mg/tnl胸腺五肽、5-50mM/L檸檬酸-磷酸氫二鈉、0.01-0.l%w/v乙二胺四乙酸二鈉、0.l-0.5%w/v亞硫酸氫鈉、5.0-8.0%w/v氯化鈉、0.01-0.03%w/v苯扎氯銨。7、權利要求6所述的制劑，其特征是，配方組成為20mg/ml胸腺五肽、15mM/L檸檬酸-磷酸氫二鈉、0.05%w/v乙二胺四乙酸二鈉、0.2%w/v亞硫酸氫鈉、6.0°/。w/v氯化鈉、0.016%w/v苯扎氯銨。8、權利要求1的藥物制劑的制備方法，其特征是，方法如下1)、在十萬級潔凈區內稱取處方量的上述原輔料至滅菌容器中；2)、加入適量注射用水后充分攪拌至完全溶解；3)、用0.1M的鹽酸或氫氧化鈉調節pH值至4.0至5.0之間；4)、在加注射用水至全量；5)、轉移至萬級潔凈區內，經0.22um微孔濾膜精濾；并測定含量、pH值、藥液澄清度等；6)、合格后進行灌裝、加泵、軋蓋并加帽；7)、全檢合格后，貼簽、裝盒。9、權利要求1的藥物制劑的質量控制方法，其特征是，包括對性狀進行觀察，對內容物進行鑒別，對內容物進行檢查，對含有的有效成分進行含量測定，其中'性狀本品為無色澄明液體；鑒別(1)、取本品約lmg,加水lml使溶解，加雙縮脲試劑lml，即顯藍紫色；(2)、在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品主峰的保留時間應與對照品主峰的保留時間一致；檢査pH值取本品，依中國藥典2005年版二部附錄VIH法測定，pH值為4.05.5;有關物質取本品適量，加流動相制成中含胸腺五肽lmg的溶液，作為供試品溶液；精密量取供試品溶液適量，用流動相稀釋成每lml中0.01mg的溶液，作為對照溶液；照含量測定項下的色譜條件試驗，取對照溶液100ul，注入液相色譜儀，調節儀器靈敏度，使主峰高為滿量程的10%20%，再取供試品溶液100ul，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主峰保留時間的2.5倍。供試品溶液色譜圖中如有雜質峰，單一最大雜質峰面積應不得過對照溶液主峰面積(2.0%),各雜質峰面積之和應不得過對照溶液主峰面積的2.5倍(5.0%)-，每瓶總噴次取本品4支，分別除去帽蓋，精密稱重(W,);試噴10次后用水洗凈噴頭，充分干燥后精密稱重(W》；再連續噴射10次后用水洗凈噴頭，干燥后精密稱重(W.,));將噴霧泵撬開，棄去藥液，用水洗凈模制瓶干燥后精密稱重(W4)，按下式計算每瓶總噴次，均應不少于每瓶標示總噴次；總噴次二10X(1^—W》+(W2—W3);每噴主藥含量取本品1瓶，除去帽蓋，試噴數次，直至呈正常霧狀噴量后用水洗凈噴頭，取潔凈干燥的小燒杯斜扣于噴嘴上，連續噴射20次，用流動相將燒杯中的藥液定量轉移至l0ml量瓶中，并稀釋至刻度，照含量測定項下的方法測定，所得結果除以20，即為每噴主藥含量。每噴主藥含量應為標示量的80120%;霧滴分布取本品，依中國藥典2005年版附錄XH法檢査，霧滴藥物量應不少于每噴主藥含量標示量的15%;裝量取本品5支，將藥液分別用干燥并預經標化的注射器抽盡，讀出每瓶藥液的裝量，并求其平均裝量，應符合規定；微生物限度取本品，依中國藥典2000年版二部附錄XIJ薄膜過濾法檢查，應符合規定；含量測定照中國藥典現行版二部附錄VD高效液相色譜法測定；色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0.05mol/LpH7.0磷酸鹽緩沖液甲醇=90:IO為流動相；檢測波長為275nm，理論板數按胸腺五肽峰計算應不低于1200;測定法取本品5支，混勻后取lml，加入流動相稀釋制成每lml中約含胸腺五肽0.5mg的溶液，作為供試品溶液，精密量取20wl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另精密稱取經五氧化二磷干燥至恒重的胸腺五肽對照品適量，用流動相溶解并稀釋制成每lml中約含胸腺五肽0.5mg的溶液，作為對照溶液，同法測定。按外標法以峰面積計算，即得。10、權利要求1的藥物制劑在制備治療18歲以上的慢性乙型肝炎患者、各種原發性或繼發性T細胞缺陷病、某些自身免疫性疾病、各種細胞免疫功能低下的疾病、腫瘤等疾病的藥物中的應用。全文摘要本發明涉及一種胸腺五肽鼻噴霧劑，其制備方法及應用，該制劑用于18歲以上的慢性乙型肝炎患者、各種原發性或繼發性T細胞缺陷病、某些自身免疫性疾病、各種細胞免疫功能低下的疾病、腫瘤的輔助治療，該制劑由胸腺五肽、藥用輔料和水組成，該制劑的制備方法包括配液、除菌、分裝、加塞、軋蓋和包裝等步驟，該劑型克服了多肽藥物在水溶液中不穩定的困難，很好的保持了胸腺五肽的活性、且具有非常好的穩定性；同時該劑型使用時無痛苦、極易被廣大消費者所接受。文檔編號A61P37/00GK101318011SQ200710098139公開日2008年12月10日申請日期2007年4月17日優先權日2007年4月17日發明者凌振宏,宗永斌,娟韋申請人:海南中和藥業股份有限公司